Enzimas

Cinética enzimática Carlos Hotta

Como estudamos enzimas?
• Podemos estudar uma enzima pela sua
estrutura
• Podemos estudar uma enzima através de
seu funcionamento
Cinética enzimática é o
estudo das taxas na quais
reações enzimáticas ocorrem
Por quê estudar cinética
enzimática?
• Comparar as características de enzimas
diferentes que catalisem a mesma reação

• Comparar a atividade de uma enzima ao

catalisar substratos diferentes

• Descrever o modo de ação de inibidores

Como estudar cinética
enzimática?

• Michaelis e Menten
descreveram
matematicamente o
comportamento das
enzimas

Leonor Michaelis Maud Menten

Qual é o melhor momento de
se estudar uma enzima?

Com o uso do
00

substrato na reação,
a velocidade começa
a diminuir até chegar
a zero
Qual é o melhor momento de
se estudar uma enzima?

O início da reação, quando o

substrato não é limitante, é o
melhor momento para se estudar
as reações enzimáticas
A velocidade de reação (v0) é medida
enquanto menos de 5% do substrato é
utilizado e a [P] é baixa. Assume-se que
[ES] está em steady-state
Qual é a melhor maneira de se
estudar uma enzima?
A maneira mais simples de se caracterizar a
cinética de uma enzima é medir como a sua
velocidade inicial (V0) varia em relação à
concentração de substrato
Uma curva hiperbólica é
geralmente encontrada ao se
plotar V0 x [S]

Esta curva é descrita pela equação de Michaelis-Menten

A equação de Michaelis-Menten
assume que:

v1 v2
E+S ES E+P
v-1 v-2
1. Estamos medindo v0 (ES está em steady-state)
2. v-2 é desprezível (v-2 = 0)
3. K-1 >>>>> K2
A equação de Michaelis-Menten
assume que:
v1 v2
E+S ES E+P
v-1 v-2

4. S >>>>> P de modo que v1 não seja

limitante
5. v1 <<<<< v2
6. [Etotal] = [E] + [ES]
Quando [S] é muito maior que o
Km...
Quando [S] é igual a Km...
A equação de Michaelis-Menten:

Se [S] >>>> KM, então v0 = Vmax

Se [S] = KM, então v0 = Vmax/2

KM é a concentração de substrato onde

obtemos metade da velocidade máxima
KM e Vmax são parâmetros que
descrevem o comportamento
das enzimas

• KM é inversamente
proporcional à
afinidade que uma
enzima tem a um
substrato
• Vmax depende da [E]
no experimento
A constante catalítica (Kcat) equivale ao
número de moléculas que um centro
ativo consegue converter por segundo

Kcat = Vmax/[Etotal]
A relação Kcat/KM indica a eficiência
catalítica de uma enzima e indica se
o fator limitante em uma reação é
quantidade de substrato ou a
velocidade de formação de P
Um Kcat/KM na ordem de 108 a 109 M-1
s-1 indica que a enzima é
“cineticamente perfeita”

A SOD tem sítios ativos carregados eletricamente que atraem

os substratos de cargas opostas

Mas isso não quer dizer que essas enzimas são as mais
rápidas possíveis...
RESUMO DA AULA
• Estudamos enzimas caracterizando-se a sua
cinética enzimática
• Para se estudar a cinética enzimática,
medimos a velocidade inicial da reação em
diferentes concentrações de substrato
• O V0 x [S] de algumas enzimas segue a
equação de Michaelis-Menten
• Enzimas michaelianas possuem dois
parâmetros importantes: KM e Vmax