CRESCIMENTO MICROBIANO

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Prof. IVAna

Crescimento Microbiano

CRESCIMENTO MICROBIANO:

Em microbiologia, o termo crescimento refere-se a um aumento do nmero

de clulas e no ao aumento das dimenses celulares.
Crescimento Microbiano = associado
ao crescimento de uma populao de
clulas (uma clula dar origem a duas
ao fim de um certo tempo, tempo de
gerao ou de duplicao.)

Fatores fsicos

1. TEMPERATURA:
A maioria dos microrganismos
cresce bem nas temperaturas
ideais para os seres humanos.

Temperatura de
crescimento
mnima:

Temperatura onde a
espcie capaz de
crescer

Temperatura de
crescimento tima:

onde a espcie
apresenta melhor
crescimento

Temperatura de
crescimento
mxima:

temperatura, onde
ainda possvel o
crescimento

Figura 1. Taxa de crescimento vs.

temperatura

Bactria: Bacillus cereus

Respirao: aerbico facultativo
Incubao: 1-6 horas (casos de vomito) 6-24 (casos de diarria)
Principais Alimentos Associados: arroz cozido
Observaes: produz esporos e toxinas

Bactria: Clostridium botulinum

Respirao: anaerobico
Incubao: 12-36 horas
Principais Alimentos Associados: alimentos em conservas e embutidos de carne
Observaes: produz esporos e toxinas termolbeis

Bactria: Clostridium perfringens

Respirao: anaerobico
Incubao: 10-12 horas
Principais Alimentos Associados: carnes aquecidas e reaquecidas em temperaturas inadequadas
Observaes: produz esporos e toxinas comum em alimentos servidos em escolas, hospitais e presdios
Bactria: Listeria monocytogenes
Respirao: aerobica
Incubao: 3 semanas
Principais Alimentos Associados: derivados lacteos, frutos do mar e ostras
Observaes: nao forma esporos mas resistente ao congelamento, secagem e calor

Bactria: Staphyloccus aureus

Respirao: aerbico
Incubao: 2 - 4 horas
Principais Alimentos Associados: alimentos com alto grau de manipulao que permaneam por muito tempo em
temperatura ambiente
Observaes: produz toxina termoestavel

Bactria: Streptococcus spp (grupo A e D)

Respirao: aerobico
Incubao: grupo A 1-3 dias horas, grupo D 2-36 horas
Principais Alimentos Associados: leite no pasteurizados e alimentos preparados por pessoas infectadas
Observaes: Grupo A causa faringite estreptococica, Grupo D causa a sindrome semelhante a Staphylococcus

Microrganismos so classificados em 3 grupos:

Psicrfilos:
Mesfilos:
Termfilos:
Termfilos extremos

crescem em baixas temperaturas

(-10 a 15 C)
crescem em temperaturas
moderadas (10 a 50 C)
crescem em altas temperaturas
(40 a 70 C)
Temperaturas (68 a 110 C)

Figura 2. Curva de crescimento caracterstica de diferentes microrganimos

2. pH:

Refere-se a acidez ou a
alcalinidade de uma
soluo;

Maioria dos microrganismos

cresce melhor perto da
neutralidade (pH 6,5 7,5);
Poucas bactrias so
capazes de crescer em pH
cido (como pH 4,0)

Excees:
Bactrias acidfilas: alto grau de tolerncia acidez (Thiobacillus de 0,5 a 6,0 com timo entre 2
e 3,5)
- Bactrias alcaliflicas: (Bacillus e Archaea) (pH 10 11).
Fungos - tendem a ser mais acidfilos que as bactrias (pH <5).

3. PRESSO OSMTICA
No Halfilos:
no necessitam de sal e no toleram a
presena no meio.
Halotolerantes:

no necessitam de sal mas toleram a

presena no meio.
Halfilos:
necessitam de sal em uma
concentrao moderada
Halfilos extremos:
necessitam de sal em altas
concentraes.

Figura 3. Taxa de crescimento de alguns

microrganimos vs. a concentrao de sal.

Fatores Quimicos

1. FONTES DE CARBONO, NITROGNIO, ENXOFRE E FSFORO:

CARBONO:
Essencial para a sntese de todos os compostos orgnicos necessrios
para a viabilidade celular (elemento estrutural bsico para os seres vivos)
organismos quimio-heterotrficos: obtm C a partir de materiais
orgnicos como protenas, carboidratos e lipdeos.
organismos quimioautotrficos
organismos fotoautotrficos

NITROGNIO, ENXOFRE E FSFORO:

NITROGNIO

Decomposio de
materiais orgnicos
(protenas, aminocidos)

- N, S: sntese de protenas

- N, P: sntese de DNA e
RNA, ATP
Peso seco de uma clula
bacteriana:
14 % N,
4 % S, P

Obteno de N:

utilizado para sintetizar

os grupos aminos
presentes nos
aminocidos.

Amnia (NH4 +)

Nitrato (NO3-)

Fixao de N: algumas bactrias so capazes de utilizar N gasoso

diretamente da atmosfera.
Microrganismos do solo (ex. bactrias dos gneros Rhizobium e
Bradyrhizobium) utilizam este processo para obteno de N,
tanto para elas como para as plantas que convivem
simbioticamente (algumas leguminosas soja, feijo).
Cultivo de leguminosas: > fertilidade do solo sem a necessidade
de implementao de fertilizantes qumicos

1. FONTES DE CARBONO, NITROGNIO, ENXOFRE E FSFORO:

ENXOFRE
utilizado na sntese de
aminocidos contendo S e de
vitaminas (tiamina e biotina)

FSFORO
essencial para a sntese dos
cidos nuclicos e para os
fosfolipdios componentes da
membrana celular.

2. GUA:
Essencial para os microrganismos
- Disponibilidade varivel no ambiente

Desenvolvem mecanismos para obter gua

Ambiente com < concentrao de gua:

atravs do aumento da concentrao de solutos

internos seja pelo bombeamento de ons para o
interior celular ou pela sntese de solutos
orgnicos (acares, alcois ou aminocidos).

3. OXIGNIO:

Extremamente importante no desenvolvimento microbiano

Os organismos classificados em:
1. AERBIOS

2. ANAERBIOS

Estritos (obrigados): necessitam de O2

Facultativos: no necessitam de O2 mas crescem melhor
com O2
Microaerfilo: necessitam de O2 mas em nveis menores

Aerotolerantes: no necessitam de O2 mas crescem melhor

sem O2
Estritos (obrigados): no toleram O2 (letal)

AERBIO
ESTRITOS

ANAERBIO
AERBIO
ANAERBIO
MICRO
ESTRITO FACULTATIVO AERFILO AEROTOLERANTES

alta [O2]
catalase
SOD

sem O2
ausncia:
catalase
SOD

Catalase e a
superxido
dismutase
reduzem para
H2O os
compostos
txicos.

alta e baixa
[O2]
catalase
SOD

baixa [O2]

alta e baixa
[O2]
SOD

Figura 4. Efeito do oxignio sobre o crescimento de vrios tipos de bactrias.

Meios de
cultura

meio de cultura:
material nutriente preparado no laboratrio para
o crescimento de microrganismos.
cultura:
microrganismos que crescem e se multiplicam no
meio de cultura.
meio definido:

toda a composio qumica conhecida

meio complexo:
composio qumica no conhecida (composto por
nutrientes como extrato de levedura, de carne ou
de plantas)

MEIO SELETIVO:
favorece o crescimento de uma determinada bactria de interesse, impedindo o
crescimento de outras bactrias.
ex: gar sabouraud dextrose, ph 5,6, utilizado no crescimento de fungos que
so favorecidos, em relao as bactrias, pelo baixo ph.
MEIO DIFERENCIAL:
facilita a identificao de um determinado organismo.
ex: meio gar-sangue, utilizado para a identificao de bactrias capazes de
destruir clulas sangneas (anel claro em torno da colnia).
MEIO DE ENRIQUECIMENTO:
favorece o desenvolvimento de uma populao bacteriana que esta em
desvantagem entre outras populaes.

MEIOS REDUTORES:
meios com reagentes, como o tioglicolato de sdio, que capaz de se combinar
com o oxignio dissolvido eliminando este elemento do meio de cultura
(especfico para microrganismos anaerbicos).

DIVISO
BACTERIANA:

CRESCIMENTO DAS CULTURAS BACTERIANAS

FISSO BINRIA
TEMPO DE GERAO
FASES DE CRESCIMENTO:
FASE lag
FASE log
FASE ESTACIONRIA
FASE DE MORTE
CELULAR

Figura 5. Fisso binria bacteriana.

 o tempo
necessrio
para uma
clula se
dividir (e sua
populao
dobrar de
tamanho).

tempo varia de
acordo com o
organismo;
depende das
condies ambientais
(nutricionais,
temperatura, etc);
maioria das
bactrias: 1 3 h

FASE lag:
Pouca ou ausncia de diviso celular (fase
de adaptao) - 1 hora (estado de latncia,
com intensa atividade metablica)
FASE log:
Incio do processo de diviso (perodo de
crescimento ou aumento logaritmo).
Reproduo celular extremamente ativa,
sensveis as mudanas ambientais
(* EFEITO DE ANTIBITICOS)
FASE ESTACIONRIA:
Velocidade de crescimento diminui o n de
clulas vivas = n de clulas mortas
FASE DE MORTE CELULAR:
O n de clulas mortas excede o de clulas
novas.
Figura 6. Curva de crescimento bacteriano
mostrando as 4 fases tpicas.

QUANTIFICAO DIRETA:

CONTAGEM EM PLACAS
FILTRAO
MTODO DO NMERO MAIS PROVVEL
CONTAGEM DIRETA AO MICROSCPIO

QUANTIFICAO INDIRETA:
TURBIDIMETRIA
ATIVIDADE METABLICA
PESO SECO

QUANTIFICAO DIRETA:

CONTAGEM EM PLACAS
tcnica mais utilizada na determinao do tamanho da populao
bacteriana;

VANTAGEM: qualificao de clulas viveis

DESVANTAGEM: tempo (24 h para o aparecimento das colnias)
Clculo:
n de colnias na placa x ndice de diluio da amostra = n de
bactrias/mL
DILUIO SERIADA
MTODO DE ESPALHAMENTO EM PLACA

Figura 7. Contagem em placas e diluio seriada

(2) FILTRAO

n de bactrias = pode ser utilizado o mtodo de filtrao

para a sua contagem.
concentrao de bactrias sobre a superfcie de uma membrana
de filtro de poros muito pequenos aps a passagem de um volume
de 100 mL de gua.
filtro posteriormente transferido para uma placa de Petri
contendo meio slido.

(3) O MTODO DO NMERO MAIS PROVVEL (NMP)

utilizado para microrganismos que no crescem bem em meio slido.

A) diluio a partir de um alto volume de inculo (ex. 10 mL)

B) diluio a partir de um mdio volume de inculo (ex. 1 mL)

c) diluio a partir de um baixo volume de inculo (ex. 0,1 mL)
d) contagem do n de tubos positivos

e) estimativa do n de clulas/mL de bactrias

Figura 8. Mtodo do nmero mais provvel (NMP)

Figura 8. Mtodo do nmero mais provvel (NMP)

(4) CONTAGEM DIRETA AO MICROSCPIO

um volume conhecido de suspenso bacteriana colocado em uma rea definida da lmina de
microscpio.

a amostra pode ser corada ou analisada a fresco.

utilizam cmaras de contagem
DESVANTAGENS:
no separa clulas mortas e vivas
pode haver erros de contagem
difcil contagem para bactrias mveis

Figura 9. Utilizao da cmara de contagem Petroff-Hausser.

QUANTIFICAO INDIRETA:

(1) TURBIDIMETRIA

monitoramento do
crescimento
bacteriano atravs da
turbidez
espectrofotmetro
(540 - 660 nm)

(2) ATIVIDADE
METABLICA

quantidade de um
certo produto (como
cido ou CO2)
diretamente
proporcional ao
nmero de clulas
bacterianas.

A quantidade de luz que atravessa o detector inversamente proporcional

ao n. de bactrias.
Quanto > o n. de bactrias < a quantidade de luz que transmitida
Figura 10. Determinao do n de bactrias por turbidimetria.

(3) PESO SECO

principalmente para fungos filamentosos
a) fungo removido do meio por filtrao
b) seco em dessecador
c) posterior pesagem

Agora laboratrio