05/08/2012

Mtodos e Tcnicas em
Parasitologia Clnica

Habitao rstica infestada de

insetos triatomneos e habitada por
pacientes com a Doena de Chagas.

Populaes que no
dispem de gua
potvel correm alto
risco de infeces
(Foto OMS).

reas endmicas de malria

no Brasil

Causas desconhecidas e outras

6.250 (12%)
Doenas do
sistema respiratrio
2.890 (6%)

Doenas Infecciosas
e parasitrias
17.310 (33%)

A OMS mostrou que

as principais causas de
morte no mundo (1997)
eram as doenas
infecciosas e
parasitrias,
responsveis por 33% de
todos os bitos.
Vinham, em 2 lugar,
as doenas do sistema
circulatrio (29%) e, em
3, os cnceres (12%).

Importncia do diagnstico
Prevalncia significativa no mundo (OMS) NTD
Doenas Tropicais Negligenciadas

Doenas do sistema
circulatrio
15.300 (29%)

Cnceres
6.235 (12%)
Causas peri e neonatais
3.630 (7%)

Causas maternas
585 (1%)

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Expectativas do diagnstico
Mdico diagnstico acurado.

Mtodos laboratoriais

das infeces

Paciente conforto na coleta, poucas coletas.

Laboratrio custo x benefcio (baixo custo, fcil
interpretao, rapidez, simplicidade).

Exame parasitolgico do sangue

Hemoscopia

Recurso indispensvel para o diagnstico

Estudo dos parasitos

Epidemiologia

Relao parasito-hospedeiro

Critrios de cura

Exame parasitolgico do sangue

Coleta do sangue

Doenas parasitrias com estgios no

sangue.

Puno da polpa digital ou lbulo da orelha.

Malria, filariose, doena de Chagas.

Puno venosa.

Parasito vivo ou fixado e corado.

Mais indicado o uso de material fresco

mtodo executado imediatamente aps colheita de
sangue.

Exame parasitolgico do sangue

Exame parasitolgico do sangue

Exame direto

Preparao de lminas

Gota no centro da lmina coberta com lamnula.

Gota espessa

Adicionar salina ou citrato.

Parasitos escassos.

Avaliao imediata.

3 ou 4 gotas de sangue prximas espalhadas de forma

Visualizao de parasitos vivos movimentao dos

circular.

flagelos agitam hemcias. Tripanossomos

Escassez de parasitos ou pouca mobilidade

Gota estendida

preparao de lminas fixadas e coradas.

Distenso de uma gota sobre a lmina.

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Exame parasitolgico do sangue

Xenodiagnstico

Preparao de lminas
Corantes

Giemsa necessrio fixao prvia com lcool metlico.

Diagnstico de Doena de Chagas.

Mtodo introduzido por Brumpt em 1914 largamente

empregado ainda nos dias atuais no diagnstico da

Leishman no necessrio fixao com lcool

doena de Chagas.

(presente na frmula).

Xenodiagnstico

Xenodiagnstico

Multiplicao do T. cruzi no trato digestivo do

triatomneo permite sua deteco nas fezes ou na
urina dos insetos alimentados com sangue do paciente
ou de animais suspeitos.

1. Ninfas de 3o a 5o estgio
2. Ninfas em jejum alimentar de 20 a 30 dias.
3. Pequenas caixas cobertas com tela, aplicadas diretamente sobre
o hospedeiro por 30 a 60 minutos (humamos, a caixa aplicada
no antebrao).

Utilizao

de

ninfas

de

3o

5o

estgio

de

desenvolvimento, as quais so criadas em condies

4. Exame dos insetos para pesquisa do T. cruzi realizada aos 30 e

60 dias aps o repasto sangneo.

controladas em laboratrio, sendo portanto livres do

parasita.

Exame parasitolgico de fezes

Exame parasitolgico de fezes

1. Exame macroscpico verificar a consistncia das

fezes, presena de muco, sangue ou vermes adultos.

1. Mtodos

quantitativos

avaliar

intensidade

da

parasitemia.
Kato-Katz
Coprotest

2. Exame microscpico

2. Mtodos qualitativos presena de parasitas.

- ovos ou larvas de helmintos

Mtodo direto

- Cistos ou trofozotos

Mtodos de enriquecimento nmero pequeno de formas

parasitrias eliminadas.

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Exame parasitolgico de fezes

Exame parasitolgico de fezes

Escolha do mtodo:

Maioria dos pedidos no relatada a suspeita clnica:

No existe mtodo nico capaz de identificar todos os

> Realizao de um dos mtodos gerais

parasitos.
Relato de suspeita clnica:
Mtodos gerais:

> Mtodo geral e mtodo especfico devem ser realizados

1. Sedimentao espontnea (Hoffman, Pons e Janner

HPJ).
2. Centrifugao (MIFC e Coprotest).

CADASTRO DO PACIENTE:

Exame parasitolgico de fezes

- Nmero de registro de identificao do paciente gerado pelo LAB

Melhor exame:

- Nome completo do paciente;

1.

Fcil execuo

- Tipo de convnio;

2.

Menor tempo

- Idade, sexo;

3.

Identificao de maior nmero de parasitos

- Telefone e/ ou endereo do paciente;

- Nome e contato do responsvel em caso de menor de idade ou incapacitado;

Qualidade dos exames:

- Nome do solicitante;
- Data e hora do atendimento;

1.

Tcnica correta

2.

Um exame isolado negativo no deve ser conclusivo

3.

Produo de cistos, ovos ou larvas no constante e uniforme

- Horrio da coleta, quando aplicvel;

- Exames solicitados e tipo de amostra;
- Informaes adicionais: medicamento em uso
(laxantes, anticidos, ingesto de meios de contrastes)
- Data prevista para entrega do laudo;

DADOS CLNICOS

Exame parasitolgico de fezes

- Origem geogrfica do paciente;

Coleta e conservao

- Deslocamento em reas endmicas (com datas);

1.

- Antecedentes parasitrios;
- Tratamento j recebidos;

transferidas para recipiente prprio.

2.

- Resultados anteriores ( fezes hemograma );

- Suspeita clnica.

Evacuao deve ser feita em recipiente limpo e seco e as fezes

Fezes

sem

conservador

devem

ser

enviadas

ao

laboratrio

imediatamente.
3.

Coleta de amostras mltiplas dias alternados e utilizao de

conservador.

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LAUDO

Exame parasitolgico de fezes

O laudo deve conter no mnimo:
a) identificao do laboratrio;
b) endereo e telefone do laboratrio;

Conservadores:

C) identificao do RT;

Formol 10%

D) nmero de registro do RT no respectivo conselho;

MIF (mercurocromo, iodo e formol)

E) identificao do profissional que liberou o exame;

SAF- fixador usado para conservar cistos e trofozoitos.

F) nmero de registro do laboratrio no respectivo conselho;

G) nome e registro de identificao do cliente no laboratrio;

Colorao Lugol

H) data da coleta da amostra;

Iodo, iodeto de potssio e gua destilada.

i) data de emisso do laudo;

Utilizada para corar ovos, cistos e larvas.

J) nome do exame, tipo de amostra e mtodo analtico;

K) resultado do exame;
L) limitaes tcnicas da metodologia e dados para interpretao;
M) observaes pertinentes.

LAUDO

CONTROLE DE QUALIDADE

Resultado - Negativo
No material examinado, no foram encontrados ovos ou larvas de
helmintos, nem cistos ou trofozoitos de protozarios.

Controle Interno da Qualidade:

duplo cego;
amostra aleatria.

Resultado - Positivo
Presena de Ovos de Ascaris lumbricoides
Cistos de Giardia duodenalis

Controle Externo da Qualidade;

Mtodo Empregado: Direto, Lutz ou HPJ, Kato-Katz.

Devem ser documentados !!!

Observaes: coleta amostra nica

trs amostras em dias alternados.

Exame parasitolgico de fezes

Exame parasitolgico de fezes

Exame direto a fresco:

Sedimentao espontnea (Hoffman, Pons e Janer ou Lutz):

1. 2 a 3 gotas de salina em lmina.

1. 2g de fezes em um frasco Borrel e 5 mL de gua, triturar bem.

2. Tocar

comum

palito

vrios

pontos

das

fezes,

transferindo para a lmina.

2. Acrescentar mais 20 mL de gua.

3. Filtrar a suspenso em clice utilizando gaze dobrada em quatro e
lavar os detritos com mais 20 mL de gua.

3. Espalhar as fezes na lmina.

4. Completar o volume do clice (200 mL) com gua.

4. Para identificao de cistos de protozorios e larvas de

5. Deixar a suspenso em repouso de 2 a 24h.

helmintos corar com lugol.

5. Examinar a lmina com objetiva de 10X e/ou 40X.
Tcnica com baixa sensibilidade

6. Sobrenadante lmpido, colher uma amostra do sedimento

utilizando pipeta.
7. Corar a lmina com lugol e examinar em objetivas de 10X e/ou
40X.

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Exame parasitolgico de fezes

Sedimentao por centrifugao (MIFC)
1. Colher as fezes em MIF.
2. Homogeneizar bem,
3. Filtrar a suspenso em gaze dobrada em quatro.
4. Transferir 1 a 2 mL do filtrado em tubo cnico de centrifugao.
5. Adicionar 4 a 5 mL de ter sulfrico e agitar vigorosamente
(desengordurar o material).
6. Centrifugar a 1500 rpm por 1 minuto.
7. Descartar o sobrenadante.
8. Adicionar uma gota de lugol ao sedimento e recolher uma parte
para anlise em lmina e cobrir com lamnula.

Exame parasitolgico de fezes

Coprotest sedimentao por centrifugao

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Exame parasitolgico de fezes

Exame parasitolgico de fezes

Faust Centrfugo-Flutuao

Faust Centrfugo-Flutuao

1. 10 g de fezes em 20 mL de gua (homogeneizar bem).

Os cistos e alguns oocistos de protozorios e ovos leves de helmintos

2. Filtrar em gaze e transferir para um tubo de hemlise.

ficaro na pelcula superfcial.

3. Centrifugar a 2.500 rpm por 1 minuto.

4. Desprezar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em gua.
(Repetir esta operao at o sobrenadante fique claro)

Retirar com ala de platina, adicionar uma gota de lugol e analisar em

lmina.

5. Ressuspender o sedimento em soluo de sulfato de zinco a

33%. (densidade = 1,18 g/mL)
6. Centrifugar novamente.

Exame parasitolgico de fezes

Baermann-Moraes
1. Colocar 8 a 10 g de fezes em uma gaze dobrada.
2. Colocar sobre um funil fechado com um tubo de borracha.
Adicionar gua (45C) ao funil em quantidade suficiente para
entrar em contato com as fezes.
3. Deixar uma hora em repouso.
4. Recolher 5 a 7 mL de gua em tubo e centrifugara 1.000 rpm por
1 minuto.
5. Colher o sedimento sem desprezar o sobrenadante, adicionar o
lugol e examinar ao microscpio. (avaliar a presena de larvas)

Exame parasitolgico de fezes

Rugai
1. Retirar a tampa do recipiente que acondiciona as fezes e envolvlo em gaze (fazendo uma pequena trouxa).
2. Colocar o material com a abertura para baixo num clice de
sedimentao com gua aquecida (45C).
3. Deixar uma hora em repouso.
4. Colher o sedimento no fundo do clice, corar com lugol e observar
ao microscpio.

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Exame parasitolgico de fezes

Kato Katz

Exame parasitolgico de fezes

Kato Katz

1. Preparar uma soluo de verde malaquita (conservar as fezes e

clarificar as formas parasitrias).
2. Cortar papel celofane semipermevel em pedaos de 24X30mm e

5.

Aps

encher

deix-los mergulhados na soluo de verde malaquita por pelo

lmina de vidro.

menos 24 horas.

6.

3. Comprimir as fezes com um pedao de tela meilica. Nesta malha

passam ovos de helmintos e detritos menores do que eles.
4. Retirar as fezes que passaram para a parte superior da tela e

completamente

orificio,

retirar

carto,

cuidadosamente, deixando as fezes (aproximadamente 42mg) sobre a

Cobrir as fezes com a lamnula de papel celofane embebida na

soluo de verde malaquita, inverter a lmina, sobre uma folha de papel

absorvente e comprimi-la.
7. Aguardar uma a duas horas e examinar ao microscpio.

transferi-las, com o auxlio de um palito, para o orificio (6mm de

dimetro) de um carto retangular de plstico, colocado sobre uma

Exame quantitativo nmero de ovos encontrados X 23 = opg

lmina de microscopia.

Exame parasitolgico de fezes

Mtodo de Graham (fita gomada)
1. 5 a 6 cm de fita adesiva transparente com tiras de papel nas
extremidades para identificao.
2. Colocar a fita sobre o fundo de um tubo de ensaio com o lado

Diagnstico imunolgico

adesivo voltado para fora.

3. A poro aderente deve ser encostada vrias vezes mucosa da
regio perianal, e em seguida colar na lmina.
4. Examinar a lmina em microscpio.

Material deve ser colhido de manh, antes que o paciente se levante ou

realize qualquer tipo de higiene.
Indicado: Adulto e ovos de E. vermiculares e proglotes de T. saginata.

Resistncia natural

Imunidade

Mecanismos protetores passivos

Anticorpos protetores ou funcionais

Revestimento cutneo

reao com Ag parasitrio levando morte ou bloqueio do

desenvolvimento

Mucosas
Conjuntiva ocular e secreo lacrimal
Temperatura do corpo

Anticorpos no-funcionais

Tenso do O2, pH e potencial de oxi-reduo

indicam presena, mas sem capacidade de eliminao ou

controle
utilidade diagnstica !!!

Substratos para crescimento e desenvolvimento indisponveis

Ausncia de mecanismos que estimulam desencistamento, ecloso do ovo
ou desenvolvimento larvrio
Ausncia de receptores (aderncia e endocitose)

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Evaso dos parasitos ao sistema

imunolgico

Toxoplasma gondii
Aps fagocitose, impede a fuso dos lisossomos com o vacolo
de fagocitose.

Schistosoma
Mimetismo imunolgico
Superfcie externa que reveste todo o corpo do verme adulto
presena de antgenos semelhantes aos do hospedeiro
(sistema ABO)

Taquizotas

Trypanosoma cruzi
Experincia em ratos macrfagos com inumeros flagelados em
multiplicao for a dos fagossomos.

Mecanismo de escape
Descamao e renovao da membrana externa - eliminao do
complexo Ag-Ac.

Diagnstico imunolgico

Diagnstico imunolgico

A demonstrao da presena do parasito ou de seus

Detectar antgenos, anticorpos ou imunocomplexos

produtos no organismo do hospedeiro nem sempre

relacionados com a existncia da infeco parasitria.

possvel

Soluo em alguns casos - mtodos imunolgicos

Diagnstico imunolgico
Simplicidade e rapidez de execuo
Possibilidade de automao

Diagnstico imunolgico
Padronizao dos testes imunolgicos - amostras
de referncia, positivas e negativas.

Baixo custo operacional

Adequada escolha dessas amostras importante

Diagnstico diferencial

para a definio da referncia (padro ouro)

Inquritos epidemiolgicos

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Diagnstico imunolgico
Dificuldade de padronizao:
Memria imunolgica

Pacientes com a doena

Pacientes curados
Pacientes que tiveram contato com o parasito
mas no foram infectados
Pacientes vacinados

ELISA enzimaimunoensaio
Visualizar a formao do complexo imune atravs da atividade
enzimtica (peroxidade, fosfatase)
Anlise visual ou sistemas de deteco fotomtrica
Dot-Elisa Realizado em tira de nitrocelulose

Frequente semelhana entre os antgenos

constituintes dos parasitos

Western Blot
Aplicado a protenas - estas so separadas usando eletroforese em
gel de poliacrilamida, na presena do detergente SDS.

Imunofluorescncia
Formao de imunocomplexos visveis atravs da ligao com
anticorpos ligados com substncias fluorescentes (isotiocianato de
fluorescena e rodamina B)
Imunofluorescncia direta pesquisa de antgenos
Imunofluorescncia indireta pesquisa de antgenos e anticorpos, amplifica
sinal.
Leitura: microscpio de fluorescncia

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