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Detecção de Identificação de Bactérias de Importância Médica
Detecção de Identificação de Bactérias de Importância Médica
MANUAL DE MICROBIOLOGIA
CLNICA PARA O CONTROLE
DE INFECO RELACIONADA
ASSISTNCIA SADE
Mdulo 6: Deteco e identificao e
bactrias de importncia mdica
Redao:
Ana Carolina Ramos Moreno- Universidade de So Paulo(USP)-SP
Ana Luiza de Mattos Guaraldi- Universidade do Estado do Rio de
Janeiro(UERJ)-RJ
Angela Von Nowakonski- Universidade de Campinas (UNICAMP)-SP
Carla Taddei de Castro Neves- Universidade de So Paulo(USP)-SP
Carlos Emilio Levy- Universidade de Campinas (UNICAMP)-SP
Doroti de Oliveira Garcia- Instituto Adolfo Lutz (IAL)-SP
Elsa Masae Mamizuka-Universidade de So Paulo(USP)-SP
John Anthony McCulloch- Universidade de So Paulo(USP)-SP
Lycia M. Jenne Mimica- Santa Casa de So Paulo-SP
Marina Baquerizo Martinez- - Universidade de So Paulo(USP)-SP
Tnia Mara Ibelli Vaz- Instituto Adolfo Lutz (IAL) -SP.
Reviso tcnica Anvisa:
Andr Anderson Carvalho
Fabiana Cristina de Sousa
Heiko Thereza Santana
Magda Machado de Miranda
Suzie Marie Gomes
Projeto Grfico e Diagramao
All Type Assessoria Editorial Ltda
Ficha Catalogrfica
Brasil. Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria
Manual de Microbiologia Clnica para o Controle de Infeco Relacionada Assistncia Sade. Mdulo
6 : Deteco e identificao de bactrias de importncia mdica /Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria.
Braslia: Anvisa, 2013.
149p..: il.9 volumes
ISBN
1. Infeco Hospitalar Controle. 2. Infeco em Servios de Sade. 3. Microbiologia Clnica. 4. Vigilncia
Sanitria em Servios de Sade. 5. Resistncia microbiana. I. Ttulo.
Sumrio
Captulo 1: Estafilococos, Estreptococos, Enterococos e outros. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7
1.1 Introduo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8
1.2 Identificao de estafilococos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
1.3 Identificao dos staphylococcus aureus. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14
Captulo 2: Neisserias. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23
2.1 Introduo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24
2.2 Isolamento. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26
2.3 Transporte e semeadura do material. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 28
2.4 Bacterioscopia e identificao. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 30
Captulo 3: Enterobactrias . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35
3.1 Introduo: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36
3.2 Tipos de testes utilizados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37
3.3 Etapas da identificao de enterobactrias. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 41
3.4 Identificao das enterobactrias de importncia clnica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 44
3.5 Identificao sorolgica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 54
Captulo 4: Bastonetes Gram-Negativos No Fermentadores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59
4.1 Introduo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 60
4.2 Semeadura, leitura e interpretao das provas de identificao utilizadas na
triagem inicial. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 61
4.3 Testes necessrios para a identificao bioqumica dos BNFs aps a triagem
inicial. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 63
4.4 Procedimentos para a identificao bioqumica dos BNFs. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 65
Captulo 5: Bacilos Curvos ou Espiralados e outros Relacionados de Importncia
Clnica. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75
5.1 Introduo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 76
5.2 Campylobacter. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 78
5.3 Vibrios, aeromonas e plesiomonas. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 79
Captulo 6: Bacilos Gram Positivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 83
6.1 Introduo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 84
6.2 Orientao geral para a identificao de BGPs. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 84
6.3 Corineformes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87
6.4 Bacilos gram positivos regulares. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95
6.6 Bacilos gram positivos anaerbios que devem ser diferenciados. . . . . . . . . . . . . . . . . . 97
6.7 Bacilos esporulados aerbios e anaerbios facultativos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 98
Apresentao
A resistncia microbiana um grave problema mundial, estando associada ao aumento do
tempo de internao, dos custos do tratamento e das taxas de morbidade e mortalidade dos
pacientes. O uso indiscriminado e incorreto dos antimicrobianos na comunidade e no ambiente hospitalar reconhecidamente um importante fator de risco para o aparecimento e a
disseminao da resistncia microbiana.
Nesse contexto, insere-se o Laboratrio de Microbiologia, que tem como objetivo no apenas apontar o responsvel por um determinado estado infeccioso, mas tambm indicar,
atravs do monitoramento de populaes microbianas, qual o perfil dos micro-organismos
que esto interagindo com o organismo humano, possibilitando a indicao de tratamentos mais adequados. Para o desempenho satisfatrio dessa funo, fundamental que os
laboratrios de microbiologia possuam estrutura capaz de estabelecer informaes sobre
a melhor amostra biolgica, reconhecer a microbiota e os contaminantes, identificar micro-organismos associados infeco ou com propsitos epidemiolgicos, obter resultados
rpidos em casos de emergncia, realizar o transporte rpido das amostras e manter uma
educao contnua em relao aos aspectos da infeco relacionada assistncia sade.
Tendo em vista esses aspectos e considerando que a microbiologia um campo muito dinmico, a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria Anvisa, em cooperao com a Organizao Pan-Americana da Sade OPAS, prope a terceira reviso do Manual de Procedimentos
Bsicos em Microbiologia Clnica para o Controle de Infeco Relacionada Assistncia
Sade, buscando atualizar informaes nos temas considerados essenciais e contando com
um seleto e conceituado corpo editorial. O manual composto por nove mdulos, a saber:
Mdulo 1 Biossegurana e manuteno de equipamentos em laboratrio de microbiologia clnica; Mdulo 2 Controle externo da qualidade; Mdulo 3 Principais Sndromes Infecciosas; Mdulo 4 Procedimentos laboratoriais: da requisio do exame anlise microbiolgica e laudo final; Mdulo 5 Tecnologias em Servios de Sade: descrio dos meios
de cultura empregados nos exames microbiolgicos; Mdulo 6 Deteco e identificao
de bactrias de importncia mdica; Mdulo 7 Deteco e identificao de micobactrias
de importncia mdica; Mdulo 8 Deteco e identificao de fungos de importncia mdica e Mdulo 9 Infeces virais.
A Anvisa e a OPAS esperam com essa publicao contribuir para que os laboratrios de microbiologia possam assimilar e alcanar novos nveis de complexidade laboratorial, atendendo s
exigncias e caractersticas prprias de cada unidade hospitalar, alm de subsidiar a adoo
de procedimentos bsicos padronizados nesses servios.
OPAS/OMS Anvisa/MS 5
Captulo 1:
Estafilococos, Estreptococos, Enterococos e outros
1.1 Introduo
1.1.1
Staphylococcus aureus
Os Estafilococos so cocos Gram positivos no esporulados que mais resistem no meio ambiente. Podem sobreviver por meses em amostras clnicas
secas, so relativamente resistentes ao calor e podem tolerar uma concentrao aumentada de sal. No entanto, apesar dos antimicrobianos existentes, da
melhora das condies sanitrias e das medidas de controle de infeco hospitalar, esse micro-organismo continua a ser um dos mais importantes patgenos para o homem. Indivduos sadios so colonizados intermitentemente
por Staphylococcus aureus desde a amamentao, e podem albergar o micro-organismo na nasofaringe, ocasionalmente na pele e raramente na vagina. A
partir desses stios, o S. aureus pode contaminar a pele e membranas mucosas
do paciente, objetos inanimados ou outros pacientes por contato direto ou
por aerossol, ocasionando infeces letais por conta dos fatores de virulncia ou atravs de resistncia aos antimicrobianos atualmente utilizados. J foram descritos no Brasil casos de infeces causadas por Staphylococcus aureus
com sensibilidade reduzida aos antibiticos mais potentes como a Vancomicina, e relatos da capacidade que os Staphylococcus coagulase negativa tm
de desenvolver resistncia. Recentemente tem sido relatada a emergncia de
Staphylococcus aureus associado a infeces na comunidade com resistncia
a oxacilina, (ORSA-AC), porm sensvel maioria das classes de antibiticos,
exceto a beta-lactmicos, representados por penicilinas e cefalosporinas, contrapondo ao ORSA hospitalar que multirresistente. Tal emergncia vem preocupando, pois essas linhagens so conhecidas por apresentarem fatores de
virulncia como a citotoxina, denominada leucocidina de Panton Valentine,
associados principalmente a leses de pele e mucosas e s pneumonias necrotizantes graves. Esse tipo de pneumonia caracteriza-se por quadros clnicos
graves com infiltrado alveolar multilobar, diferente de pneumonias hospitalares que evoluem para empiema. A mortalidade muito mais elevada nos
casos de pneumonia necrotizante e o achado de acometimento bilateral do
parnquima, associado hemorragia necrotizante comum nesses casos. Alguns autores tm notado uma substituio das linhagens hospitalares tradicionais por essa linhagem ORSA-AC. A emergncia de ORSA-AC foi observada
em vrios pases por mtodos moleculares que possibilitou a identificao do
ORSA-AC, por meio da caracterizao do gene mecA, como cassete cromossmico tipo IV ou SCCmec tipo IV, devido ao seu baixo peso molecular com
taxa de replicao mais rpida, conferindo vantagens de disseminao dessas
linhagens. Recente estudo realizado em nosso meio mostrou que os fatores
de risco relacionados com a aquisio de ORSA-AC foram crianas menores
de um ano, menor nmero de doenas de base e menor frequncia de uso de
antibiticos e realizao de procedimentos cirrgicos (Marques 2007).
8 OPAS/OMS Anvisa/MS
1.1.2
1.1.3
Estreptococos e Enterococos
Os estreptococos foram os maiores causadores de infeco hospitalar na
era pr-antibitica, causando surtos de infeco e morte de purperas. Apesar de no serem atualmente uma importante causa de infeco hospitalar,
provocam, no entanto, doenas muito graves e muitas vezes letais, mesmo
em pacientes imunocompetentes, sendo importante o rpido diagnstico
desse agente. J os enterococos apresentam importncia crescente como
causadores de infeco hospitalar, pelo aparecimento de resistncia quase
total aos antibiticos tradicionalmente utilizados para tratamento dessas infeces. Os Enterococos mais comumente isolados so: Enterococcus faecalis
OPAS/OMS Anvisa/MS 9
(90% dos casos) e Enterococcus faecium, com grande capacidade de colonizao de pacientes e de contaminarem superfcies ou equipamentos utilizados
em hospitais. Possuem sensibilidade ou resistncia varivel aos antibiticos
chamados glicopeptdios como a vancomicina e teicoplanina. O emprego de
muitos antibiticos ou classes de antibiticos tem sido associado infeco
ou colonizao por enterococos resistentes a vancomicina ERV em estudos clnicos, incluindo cefalosporinas de espectro ampliado e agentes com
potente atividade contra bactrias anaerbias. Enterococcus resistentes
vancomicina (ERV) so um problema global e tm sido isolados com alta frequncia nos hospitais brasileiros. A maioria dos ERV so E. faecium fentipo
VanA (EVRFM), porm existe um clone especfico de E. faecalis fentipo VanA
(EVRFS) que tem se disseminado rapidamente em vrios hospitais do pas.
Fatores de virulncia de E. faecalis e E. faecium que influenciam na relao
parasita/hospedeiro tm sido descritos.
Existem, atualmente, cepas comensais naturalmente resistentes a vancomicina e que podem ser isoladas de pacientes internados, porm excepcionalmente capazes de causar surtos, mas que devem ser corretamente identificadas.
1.1.4
Identificao preliminar
A identificao dos estreptococos e estafilococos baseada na morfologia
que apresentam em meios lquidos, sendo o estreptococo uma cadeia normalmente longa e os estafilococos mostrando-se em forma de cocos aos pares, em cachos de uva ou agrupados.
A identificao presuntiva comea com a inoculao primria na placa de
gar sangue de carneiro que deve ser incubada em 5% de tenso de CO2 (mtodo da vela ou estufa de CO2). As colnias de estafilococos so geralmente
maiores, convexas, de colorao variando do branco-porcelana a amarelo
podendo apresentar hemlise ou no. Note-se que o desenvolvimento da
cor amarelada no S.aureus ocorre somente aps incubao prolongada (72
horas), temperatura ambiente. As colnias de estreptococos tendem a ser
menores (puntiformes), e com halos de hemlise total ou parcial (beta e alfa
hemlise). A diferenciao entre os estreptococos e os estafilococos se d,
seguramente, pela prova da catalase.
A) Prova da catalase
Com a ala bacteriolgica ou com um palito coleta-se o centro de uma
colnia suspeita e esfrega-se em uma lamina de vidro. Colocar sobre esse
esfregao uma gota de gua oxigenada a 3% e observar a formao de
bolhas. Para a famlia Staphylococcaceae (estafilococos) a prova geral-
10 OPAS/OMS Anvisa/MS
Coagulase
xylose e/ou
- arabinose
+ S.caprae
sacarose
+,
S. xylosus
+
trealose
maltose
+
manitol
+
ornitina
uria
S.lugdunensis
+ S.cohnii subsp.
urealyticum
+ S.capitis
- uria
+manitol
hemlise
- S.shleiferi subsp.
urealyticum
nitrato
S. simulans
+
maltose
S. simulans
+ uria
- S.cohnii subsp.
cohnii
+
uria
Crescimento
anaerbio em
thioglicolato
+ S.epidermidis
Crescimento
- anaerbio em
thioglicolato
+
resistncia
novobiocina
S.warneri
S. haemolyticus
+
S.saprophyticus
- resistncia
novobiocina
S.hominis subs.
hominis
+
S.hominis subs.
novobiosepticus
+ S.saprophyticus
S.hominis
subsp. hominis
resistncia
novobiocina
- S.warneri
+
S.warneri
S.haemolyticus
OPAS/OMS Anvisa/MS 11
1.1.5
Catalase negativos
Staphylococcus spp.
Enterococcus spp.
Micrococcus spp.
Streptococcus spp.
Planococcus spp.
Aerococcus spp.
Stomatococcus spp.
Lactococcus spp.,
Stomatococcus spp.
Catalase
Motilidade
NaCl 5%
Oxidase
Aerbio estrito
Ttrade
Staphylococcus
neg
neg
no
varivel
Planococcus
neg
varivel
Micrococcus
neg
varivel
varivel
Enterococcus
neg
varivel
neg
no
no
Streptococcus
neg
neg
varivel
neg
no
no
Aerococcus
neg
neg
neg
no
Stomatococcus
varivel
neg
neg
neg
no
varivel
* aderente ao meio
Cocos Gram positivo, Catalase negativa, Motilidade Negativa 1
Gnero
NaCl 5%
Vancomicina
PYR
Bile Esculina
Ttrade
Enterococcus
varivel
no
Streptococcus
neg
sensvel
neg2
neg3
no
Aerococcus
sensvel
varivel
varivel
varivel
Leuconostoc
varivel
resistente
neg
varivel
no
Pediococcus
varivel
resistente
neg
varivel
Gemella
neg
sensvel
neg
no
Stomatococcus
neg
sensvel
varivel
12 OPAS/OMS Anvisa/MS
Gnero
Motilidade
NaCl 6,5%
Oxidase
Catalase
Staphylococcus
Negativo
Positivo
Negativo
Positivo
Macrococcus
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Planococcus
Positivo
Positivo
Negativo
Positivo
Alloiococcus
Negativo
Positivo
Negativo
Varivel
Rothia mucilaginosa
Negativo
Negativo
Negativo
Varivel
Micrococcus
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
Kocuria kristinae
Negativo
Positivo
Positivo
Positivo
* OBs. Apenas S. aureus subsp. anaerobius e S. saccharolyticus so catalase negativos, os demais so positivos
Identificao das espcies de Staphylococcus de maior importncia clnica
Espcie
DNAse
PYR
Novobiocina
Ureia
Polimixina
Outras
S. aureus
neg
sensvel
varivel
resistente
pig.amarelo
S. epidermidis
neg
neg
sensvel
resistente
S. lugdunensis
neg
sensvel
varivel
varivel
Ornitina +
S. haemolyticus
neg
sensvel
neg
sensvel
Ornitina neg
S. saprophyticus
neg
neg
resistente
sensvel
isolado em
urina
S. schleiferi
neg
sensvel
neg
sensvel
Sacarose neg
S. intermedius
sensvel
sensvel
S. hyicus
neg
sensvel
varivel
resistente
OPAS/OMS Anvisa/MS 13
Existem cerca de 31 espcies de Staphylococcus coagulase negativa conhecidas, das quais as mais frequentes so:
Staphylococcus epidermidis - causador de infeces de cateteres e prteses e o mais frequente micro-organismo encontrado em hemoculturas.
Staphylococcus saprophyticus - causador de infeco urinria em mulheres
jovens.
Staphylococcus haemolyticus - importante devido resistncia aumentada aos antimicrobianos, e por ser comumente confundido com o S. aureus, pois apresenta hemlise na placa de gar sangue de carneiro.
1.2.2
1.2.3
Espcies
Trealose
Urease
Novobiocina
S. epidermidis
Negativo
Positivo
Sensvel
S. haemolyticus
Positivo
Negativo
Sensvel
S. saprophyticus
Positivo
Positivo
Resistente
14 OPAS/OMS Anvisa/MS
No se pode executar esse teste a partir de um gar com grande concentrao de sal como gar manitol.
1.3.2
1.3.3
Teste da DNAse
Esse teste consiste na inoculao de colnias em meio contendo DNA, (DNAse test gar) obtido comercialmente.
O meio adicionado com corante demonstra uma melhor facilidade na leitura, e permite o repique da amostra positiva para o teste de sensibilidade aos
antimicrobianos, evitando que se retorne placa original onde nem sempre
as colnias esto bem isoladas.
1.3.4
Teste da endonuclease
Teste da endonuclease termoestvel efetuado no mesmo meio de DNA.
Ferver o caldo de cultura com a bactria suspeita por 15 minutos.
Fazer pequenos orifcios no meio (em placa) utilizando canudos de refrigerante.
Colocar ao meio de DNA gotas de caldo de cultura turvo com a colnia
suspeita.
A leitura do teste semelhante ao da DNAse.
OPAS/OMS Anvisa/MS 15
Note que esse mtodo pode ser efetuado a partir de caldo de hemocultura
em que foi observado o crescimento de cocos Gram positivos agrupados.
1.3.5
1.3.6
1.3.7
1.3.8
1.3.9
Teste da bacitracina
importante notar que as identificaes devem ser feitas em gar sangue
sem tenso de CO2 ou os resultados podem ser conflitantes.
Semear meia placa de gar sangue com o estreptococo a ser identificado,
como para um antibiograma.
Colocar o disco de bacitracina 0,004 UI como indicado.
16 OPAS/OMS Anvisa/MS
dos enterococos, e mais especfico que o teste da Bacitracina na caracterizao presuntiva dos estreptococos beta hemolticos do grupo A,
tendo a vantagem de ser mais rpido.
Em qualquer dos dois casos, o PYR constitui uma alternativa importante para esclarecer testes duvidosos. Na impossibilidade da realizao
de testes sorolgicos de confirmao, reforar o valor dos testes presuntivos clssicos de identificao do Streptococcus pyogenes.
Sensibilidade
Bacitracina
CAMP teste.
Hidrlise do Hipurato
SXT
Bile esculina.
Tolerncia
NaCl 6,5%
S. pyogenes
sensvel
negativo
negativo (R)
negativo
S. agalactiae
resistente
positivos
negativo (R)
negativo
Enterococcus sp
resistente
negativo
negativo (R)
positivos
Estreptococo No
A, B ou D.
resistente
negativo
positivos (S)
negativo
18 OPAS/OMS Anvisa/MS
Bile esculina
Pneumococo
positivo
negativo
negativo
Enterococos
negativo
negativo
positivo
Grupo viridans
negativo
negativo
negativo
Streptococcus
negativo
positivo
negativo
OPAS/OMS Anvisa/MS 19
C) Placa:
Inocular gotas de desoxicolato de sdio a 2% sobre as colnias suspeitas.
Incubar a 35C por 30 minutos.
As colnias positivas iro desaparecer por lise bacteriana.
Suspeitar da presena de variante nutricional de Streptococcus desses
micro-organismos quando o Gram de amostras positivas de hemocultura
obtidas em meios comerciais mostram cocos em cadeias que no crescem no subcultivo em gar sangue, ento deve-se proceder dessa forma:
Semear o repique em gar sangue.
Fazer estrias perpendiculares ao sentido da semeadura com Staphylococcus aureus, como para a identificao presuntiva de Haemophilus
influenzae.
Incubar a 35C em atmosfera com CO2.
Identificao dos enterococos mais importantes clnicamente
Espcie
Arabinose
Sorbitol
Crescimento
Telurito 0,04%
Motilidade
Pigmento
Vancomicina
E. faecalis
negativo
positivo
positivo
negativo
negativo
varivel
E. faecium
positivo
varivel
negativo
negativo
negativo
varivel
E. casseliflavus
positivo
varivel
negativo
positivo
positivo
resistente
E. gallinarum
positivo
negativo
negativo
positivo
negativo
resistente
20 OPAS/OMS Anvisa/MS
Referncias
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por Staphylococcus aureus portador de SCCmec tipoIV. Dissertao de mestradoFMUSP.2007,66p. Ref. Terasawa, L.B.- Caracterizao da resistncia oxacilina em
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de mestrado-UFP,2006, 109p
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HEIKENS, E. et al. Comparison of genotypic and phenotypic methods for species level
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RICE, L. B.- Antimicrobial Resistance in Gram-Positive Bactria- The American Journal of
Medicine Vol 119 (6A), S11S19, 2006.
OPAS/OMS Anvisa/MS 21
Captulo 2:
Neisserias
Captulo 2: Neisserias
2.1 Introduo
O gnero Neisseria formado por bactrias aerbias, imveis e no esporuladas. As
neisserias so diplococos Gram negativos, cuja caracterstica peculiar a unio de
seus lados adjacentes. Na rotina, costuma-se comparar essa morfologia a dois gros
de feijo ou rins unidos
. Apenas a espcie N. elongata difere dessa morfologia,
sendo diplobacilos ou diplococo- bacilo. A maioria das espcies de Neisseria pode
habitar as mucosas de animais e seres humanos de forma comensal. O crescimento
timo se d em ambientes midos com temperatura entre 35 a 37C (temperatura do
corpo humano).
Todas as Neisserias so micro-organismos fastidiosos, oxidase positiva e a maioria so
catalase positiva (com exceo de Neisseria elongata e Kingella denitrificans). Elas utilizam os carboidratos por via oxidativa, com pouca produo de cido. O meio de
cultura mais utilizado para verificar a oxidao dos carboidratos o CTA (Cistyne Tripticase gar), com o indicador de pH vermelho de fenol. Para evitar reaes duvidosas
na hora da identificao de Neisseria, recomenda-se utilizar uma grande quantidade
de inculo para que, assim, haja uma maior produo de cidos.
As diferentes espcies de Neisseria, incluindo N. meningitidis e N. gonorrhoeae, so
analisadas junto com as espcies Moraxella catarrhalis, Moraxella spp. e Kingella spp
por suas caractersticas morfolgicas, cocos ou cocides Gram negativos, e pela possibilidade de haver confuso durante a identificao.
MOT
AS
DNAse
CTA Gli
OF Gli
OXI
Morfol
CAT
Bactria
2.1.1
Neisseria
meningitidis
diplococo
no cresce
neg
neg
Neisseria
gonorrhoeae
diplococo
no cresce
neg
neg
neg
Neisseria spp.
diplococo/
bacilo
varivel
varivel
(oxidativo)
varivel
neg
neg
Moraxella
catarrhalis
diplococo
inerte
neg
neg
Kingella spp.
cocobacilo
neg
fermentador
neg
varivel
Moraxella spp.
cocobacilo
inerte
neg
neg
neg
24 OPAS/OMS Anvisa/MS
Neisseria gonorrhoeae
O ser humano o hospedeiro natural de Neisseria gonorrhoeae e a doena causada por esse micro-organismo denomina-se gonorria. A gonorria,
considerada uma doena sexualmente transmissvel, transmitida entre os
seres humanos atravs do contato ntimo das mucosas. N. gonorrhoeae pode
infectar a uretra, a vagina e o nus e pode se propagar para as articulaes.
Principalmente as mulheres podem ser portadoras assintomticas por anos,
j no homem encontra-se apenas uma taxa de 1 a 5% de portadores. N. gonorrhoeae sempre considerada patognica, o que indica a necessidade de
tratamento. A transmisso para o recm-nascido pode ocorrer durante o
parto.
No homem, N. gonorrhoeae causa uretrite e est relacionada a complicaes
como epididimite, prostatite e estenose uretral. O perodo de incubao da
bactria pode ser de um a sete dias. Na mulher, esse micro-organismo causa
corrimento vaginal, endocervicite, uretrite, abscesso vestibular, salpingooforite e doena inflamatria plvica. A mudana do microambiente vaginal
inibe o crescimento de bactrias produtoras de cido, como Lactobacillus,
que fazem parte da microbiota feminina. O pH vaginal torna-se menos cido
e uma variedade de organismos , ento, capaz de proliferar, o que acarreta
infeces secundrias. N. gonorrhoeae pode ser isolada tambm na mucosa
oral e anal. Em recm-nascidos pode causar uma conjuntivite denominada
oftalmia neonatorum. A doena sistmica disseminada pode ocorrer em 1 a
3% dos pacientes infectados, principalmente em assintomticos, e caracterizada por febre, tremores, leses cutneas e artrite de extremidades. As
leses cutneas so do tipo mculo-pustulares ou hemorrgicas, com centro
de necrose. Ocorre artrite sptica, com 50% de positividade de isolamento.
Pode ocorrer meningite e endocardite.
2.1.3
Neisseria meningitidis
N. meningitidis o agente etiolgico da enfermidade meningoccica, mais
comumente chamada de bacteremia e meningite meningoccica. Essas
duas sndromes clnicas podem aparecer simultaneamente, entretanto, a
presena apenas da meningite mais frequente. N. meningitidis tambm
pode causar infeco sistmica grave, com coagulao intravascular disseminada (CIVD) e elevada mortalidade, conjuntivite, artrite sptica, pericardite purulenta, sinusite, otite e pneumonia. Esse micro-organismo pode ser
isolado das mucosas de 5 a 15% de indivduos sos por perodos de semanas
a meses. A transmisso se faz por vias areas (aerossis) ou contato com secrees respiratrias de portadores assintomticos.
OPAS/OMS Anvisa/MS 25
Captulo 2: Neisserias
2.2 Isolamento
2.2.1
Neisseria gonorrhoeae
Para o diagnstico de N. gonorrhoeae, o stio apropriado para a coleta do
material clnico depende da idade, sexo e prticas sexuais do indivduo, alm
dos sintomas clnicos da infeco. O instrumento que ser utilizado para fazer a coleta pode ser lubrificado apenas com gua morna. Outros tipos de
lubrificantes podem ser txicos para a bactria. O material pode ser coletado
com swab ou ala bacteriolgica, o que depende do material. Sempre que
26 OPAS/OMS Anvisa/MS
Neisseria meningitidis
O meningococo isolado mais prontamente quando o material clnico obtido antes do incio da antibioticoterapia e quando rapidamente transportado ao laboratrio, protegido de ambientes secos e temperaturas extremas,
especialmente frias. O stio apropriado para a coleta do material clnico depende do indivduo e dos sintomas clnicos da infeco. Sempre que possvel
coletar material para cultura e bacterioscopia.
OPAS/OMS Anvisa/MS 27
Captulo 2: Neisserias
2.2.4
28 OPAS/OMS Anvisa/MS
2.3.1
Neisseria gonorrhoeae
O gonococo muito sensvel a temperatura e atmosfera de CO2 e, frequentemente, um pequeno nmero de organismos est presente no material clnico. Quando a amostra enviada ao laboratrio, ela precisa ser transportada
de maneira a preservar a viabilidade do micro-organismo.
Recomendaes:
2.3.2
Neisseria meningitidis
N. meningitidis no to fastidiosa quanto a N. gonorrhoeae. O material clnico, aps coletado, deve ser transportado ao laboratrio clnico rapidamente,
protegido de ambientes secos e variaes de temperatura, especialmente
frias.
Recomendaes:
Captulo 2: Neisserias
2.3.3
Moraxella catarrhalis
A) Recomenda-se:
M. catarrhalis tolera a temperatura ambiente, ou seja, no to sensvel a variaes de temperatura como as Neisserias.
Possui um bom crescimento em gar sangue de carneiro 5% e gar
chocolate. Uma boa porcentagem de M. catarrhalis cresce em gar seletivo.
Incubar as placas a 35C em ambiente aerbio ou em atmosfera de 5 a
7% CO2.
Material estril ou com pouca microbiota (LCR, sinovial, sangue, bipsia, conjuntiva, nasofaringe) pode ser semeado em meio no seletivo.
30 OPAS/OMS Anvisa/MS
2.4.1
Identificao
A anlise macroscpica das colnias bacterianas revela informaes que so
importantes no processo de identificao do micro-organismo. Cada espcie possui caractersticas que, muitas vezes, lhe peculiar, tais com tamanho,
forma, cor, aspecto, entre outros.
N. gonorrhoeae produz em gar chocolate vrios tipos de colnias. A colnia
tpica pequena, brilhante e convexa. So menores do que as de neisserias
saprfitas cuja cor pode variar de cinza a amarelo. A colnia de M. catarrhalis
de cor cinza rseo-acinzentado, comumente frivel, saindo inteira quando
removida com a ala bacteriolgica. As colnias de N. meningitidis so maiores que as colnias de gonococos, brilhantes e convexas. Os subtipos A e C
capsuladas podem apresentar-se mucides.
Para o diagnstico da gonorria, existem no comrcio recursos como ELISA,
sondas genticas de acido nuclico, PCR e suas variantes, que possuem elevado custo e so indicados em caso de levantamentos epidemiolgicos ou
quando no se dispe dos recursos tradicionais de identificao. Os testes
imunolgicos no substituem a cultura bacteriana e a bacterioscopia.
Para LCR, outros fludos estreis e at mesmo a urina, a caracterizao de
Neisseria meningitidis pode ser feita pela tcnica de aglutinao com partculas de ltex. Esse mtodo rpido, possui boa sensibilidade, especificidade e permite a tipagem dos sorogrupos de N. meningitidis mais prevalentes
em meningites. Uma vantagem do mtodo imunolgico sua positividade
nos casos de cultura negativa por uso prvio de antimicrobianos, sendo, no
entanto, de custo elevado. Para o tipo B, alguns produtos oferecem testes
para afastar reao cruzada com E. coli. A reao negativa no exclui o diagnstico, que deve ser sempre avaliado juntamente com a bacterioscopia e a
cultura.
2.4.2
Bacteriologia
A identificao de N. meningitidis e N. gonorrhoeae pode ser realizada de
duas formas: presuntiva e confirmatria.
OPAS/OMS Anvisa/MS 31
Captulo 2: Neisserias
Fazer a colorao de Gram das colnias isoladas para confirmar a presena de diplococos Gram negativos.
Fazer o teste de oxidase das colnias sugestivas.
Deve-se procurar afastar outros gneros de bactrias como Acinetobacter
spp., Kingella spp. e Moraxella spp. que so morfologicamente parecidos.
Um recurso prtico para evitar erros de identificao de Acinetobacter
spp. e Kingella spp. com Neisseria :
Semear a colnia suspeita em gar chocolate.
Colocar um disco de penicilina de 10 UI.
Aps 24 horas fazer um Gram das colnias que crescerem prximas
zona de inibio.
Se permanecerem cocides, com aspecto de neisserias, confirma-se o isolamento; caso tenham adquirido a forma de bacilos longos, o isolado no
de Neisseria.
Outro passo importante verificar a capacidade de crescimento em meios
pobres como o gar nutriente ou a necessidade de crescimento em meio
rico (gar chocolate suplementado).
deteco da acidez produzida pela bactria, o que pode dificultar a identificao. Recomenda-se enviar a cepa isolada rapidamente ao Laboratrio de
Referncia para confirmao.
2.4.3
A. Nute.
35C
N. gonorrhoeae
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
N. meningitidis
neg
neg
neg
neg
neg
Outras
neisserias
neg
varivel
varivel
varivel
varivel
varivel
M. catarrhalis
neg
neg
neg
neg
neg
Kingella spp.
neg
neg
neg
neg
neg
Bactria
DNAse
Gli
MAL
LAC
SAC
FRU
OPAS/OMS Anvisa/MS 33
Captulo 2: Neisserias
Referncias
FORBES, B.A., SAHM, D.F., WEISSFELD, A.S. Bailey & Scotts Diagnostic Microbiology. 12th ed.
St.Louis. Mosby Elsevier, 2007, 1031p.
WINN,J Jr, ALLEN, S, JANDA, W.M., KONEMAN, E, PROCOP, G, SCHRENKENBERGER, P.C.
WOODS, G. KONEMAN - Color Atlas and Textbook OF Diagnostic Microbiology. 6th Ed.
Lippincott Williams & Wilkins, 2006, 1535p.
MC FADDIN, J.F. Biochemical tests for identification of medical bacteria. Baltimore. Ed.
William & Wilkins Co., 2000.
MURRAY, P. R. et al. Manual of Clnical Microbiology. 9th ed. Washington DC. American
Society for Microbiology ASM Press 2007., 2256p
34 OPAS/OMS Anvisa/MS
Captulo 3:
Enterobactrias
Captulo 3: Enterobactrias
3.1 Introduo:
A famlia Enterobacteriaceae constituda por um grande grupo de bacilos Gram negativos, classificados atualmente em 44 gneros, 176 espcies e quatro grupos entricos ainda no nomeados. As enterobactrias esto amplamente distribudas na natureza e so encontradas no solo, gua, frutas, vegetais e produtos de origem animal,
como a carne e ovos. Sua ecologia varivel, bem como seu potencial patognico
para o homem, animais e vegetais.
A) Caracterizao da famlia Enterobacteriaceae:
So bacilos Gram negativos, no esporulados, com motilidade varivel. Crescem na presena ou ausncia de oxignio. Crescem bem nos meios comuns de
cultura e nos meios seletivos para enterobactrias como o gar Mac Conkey.
Fermentam a glicose com ou sem a formao de gs. A maioria catalase positiva, exceto a Shigella dysenteriae. A maioria oxidase negativa, exceto Plesiomonas, gnero recentemente incorporado na classificao da famlia Enterobacteriaceae e Aeromonas sp (muito semelhante a E. coli). A maioria reduz o
nitrato a nitrito.
B) Importncia clnica:
As enterobactrias representam 80% ou mais de todos os Gram negativos de
importncia clnica isolados na rotina microbiolgica. Muitas espcies de enterobactrias so patognicas para o homem causando vrios tipos de doenas.
Essas incluem doenas diarreicas, infeces em feridas e queimaduras, infeco
no trato urinrio e respiratrio, septicemia e meningite, sendo responsveis por
cerca de 70% das infeces urinrias e 50% das septicemias.
Algumas espcies so consideradas enteropatognicas, por causarem preferencialmente infeces gastrointestinais, normalmente transmitidas por gua
ou alimentos contaminados. So considerados enteropatgenos clssicos os
diferentes sorotipos de Salmonella, Shigella spp, categorias diarreiognicas de
E. coli e Yersinia enterocolitica. Alguns desses podem, ainda, estar associados a
infeces extraintestinais.
C) Infeces hospitalares e na comunidade:
Infeces hospitalares: Nas infeces hospitalares, os gneros e espcies predominantemente isolados, representando 99% das enterobactrias de importncia clnica, so: Escherichia coli, Salmonella spp, Klebsiella spp, Enterobacter
spp, Serratia marcescens, Proteus spp, Morganella morgannii, Citrobacter spp, e
Providencia spp.
Infeces na comunidade: As infeces na comunidade so frequentemente
causadas pelos enteropatgenos clssicos, associados s doenas transmitidas
36 OPAS/OMS Anvisa/MS
Citrobacter koseri
Enterobacter aerogenes
Shigella spp
Klebsiella pneumoniae
Enterobacter cloacae
Salmonella typhi
Klebsiella oxytoca
Enterobacter sakazaki
Salmonella spp
Providencia spp
Pantoea agglomerans
Citrobacter freundii
Serratia spp
Yersinia enterocolitica
Proteus mirabilis
Proteus vulgaris
Morganella morganii
produo de gs (CO2)
fermentao da lactose
utilizao de citrato
motilidade
produo de indol
oxidase
produo de urease
descarboxilao da lisina
Captulo 3: Enterobactrias
38 OPAS/OMS Anvisa/MS
de indol. O meio deve ser inoculado com uma picada profunda, at o final do
tubo, e posteriormente, aps a picada, estria-se a superfcie, na fase superior.
Baseado nestas provas possvel identificar as seguintes bactrias: E. coli,
Shigella (indol positiva), Shigella (indol negativa), Enterobacter aerogenes,
Klebsiella pneumoniae, Klebsiella spp (sacarose negativa), Enterobacter cloacae, Providencia spp (ureia positiva) ou Morganella morganii, Providencia spp
(ureia negativa), Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Salmonella spp, Salmonella
typhi, Citrobacter freundii, Serratia marcescens (necessita provas complementares), Vibrio cholerae, Vibrio spp (oxidase positiva) e alguns bacilos no fermentadores.
Por se tratar de um meio presuntivo, provas complementares devem ser realizadas sempre que necessrio, especialmente a utilizao do citrato em
meio Citrato de Simmons, a DNAse, oxidase e a fermentao da lactose.
A) Variantes do meio IAL:
Tubo 1 - meio de Rugai sem sacarose provas: fenilalanina, fermentao da
glicose, gs, H 2 S, ureia
Tubo 2 MIO (Motilidade Indol Ornitina)
Tubo 3 lisina
Tubo 4 citrato
Tubo 5 rhamnose
Conjunto EPM/MiLi/Citrato - Trata-se praticamente da mesma combinao
de reaes do meio IAL ou Rugai & Arajo (modificado por Pessoa & Silva),
separados em 2 tubos, passando a verificao do indol da tampa do IAL, para
o meio MILi aps adio do reativo de Kovacs.
B) Tubo EPM:
Fermentao da glicose, produo de gs, H2S, ureia, fenilalanina; inocular picando at o fundo e semear na superfcie, incubar com a tampa
frouxa 24 horas/35oC.
Tabela 3 Interpretao do Meio EPM
Base
Superfcie
Produo de gs
Produo de H2S
Hidrlise da Ureia
Desaminao do Triptofano
OPAS/OMS Anvisa/MS 39
Captulo 3: Enterobactrias
C) Tubo MILi:
Fazer picada central apenas incubar 24hs/35oC.
Motilidade bactrias mveis crescem alm da picada turvando o
meio, enquanto as imveis crescem apenas na linha de picada.
descarboxilao da lisina - lisina positivo o meio torna-se roxo, na prova negativa o meio permanece amarelado nos 2/3 inferiores.
Aps a leitura da lisina adicionar 3 gotas de reativo de Kovacs para o
teste de indol - a formao de um anel rosa na superfcie do meio indica positividade para o indol.
D) Citrato:
Inocular a superfcie e incubar 24hs/35oC.
A prova positiva evidenciada pelo aparecimento de colorao azul
na superfcie.
Meio Trplice Acar Ferro (TSI) - Considerado o mais clssico dos sistemas de identificao, necessita de provas adicionais, mas tem a vantagem
de ser de mais fcil interpretao. Abaixo ser descrito em detalhes e ser
a base da identificao de enterobactrias.
Acurcia da identificao - Qualquer sistema de testes existentes no comrcio, com leitura manual ou automatizada tem limitaes no nmero
de provas e de discriminao dos diferentes gneros e espcies de enterobactrias, de modo que a maioria dos esquemas trabalha com um
mximo de 80% de acerto.
40 OPAS/OMS Anvisa/MS
necessrio destacar que padres no usuais podem ocorrer e que o microbiologista deve estar atento para analisar cepas que possam ter importncia
clnica e epidemiolgica ou encaminh-las a Laboratrios de Referncia. Antes, no entanto, deve certificar-se da pureza da cultura e que o padro no
usual no se deve a cultura mista de bactrias.
O meio de TSI inclinado em bico de flauta, de cor vermelho cereja e deve ser
inoculado por picada central at o fundo, seguido de espalhamento na superfcie e incubao durante 18-24h a 35oC.
Tabela 4 Provas do Meio de TSI
Prpura/amarelo (pice prpura e base amarela) =fermentao apenas da glicose (lactose e sacarose
negativos)
Amarelo/amarelo (pice e base amarelas) = fermentao da glicose + lactose e/ou sacarose (2 ou 3
acares)
Presena de gs (CO2) = bolhas ou meio fragmentado
H2S positivo= presena de precipitado negro
Base
H2S
Gs
Vermelho
Vermelho
Neg
Neg
Vermelho
Vermelho
Neg
Neg
Amarelo
Vermelho
Neg
Neg
Vermelho
Amarelo
Neg
Amarelo
Amarelo
Neg
Enterobactria
Amarelo
Amarelo
Pos
Neg. = negativo
v. = varivel
Captulo 3: Enterobactrias
3.3.2
Captulo 3: Enterobactrias
Consideraes
a) Valores positivos ou negativos referem-se a 80% ou mais de definio;
para saber o real percentual de provas positivas ou negativas consultar a
tabela geral.
b) PB (padro bioqumico) = probabilidade terica da bactria em questo
apresentar o padro bioqumico analisado (os testes considerados so indicados pelo sinal). Exemplo: PB para Proteus vulgaris em relao s provas, H2S +(98%) FA +(95%) Indol + (98%) (multiplicar os percentuais de
ocorrncia) = 92%.
c) Quando o PB baixo significa ter outro padro mais frequente.
d) Os padres bioqumicos pouco frequentes tero menor probabilidade de
isolamento.
e) No aplicado quando se considera gnero pois envolve vrias espcies
com diferentes padres de testes (ex: Salmonella spp).
f ) Valores seguidos do sinal positivo (+) ou negativo (-) significa o percentual de cepas com resultado do teste positivo ou negativo. Ex: Lisina 75%+
= 75% das cepas so lisina positivas.
g) V = valores >20% e <80% de reaes positivas ou negativas; essas provas
podem ser teis para diferenciar duas espcies ou dois gneros quando
a reao s ocorre para uma delas. Ex.: ureia em relao a E. coli e Citrobacter. E. coli negativa e Citrobacter varivel. Se a reao encontrada for
positiva, exclui-se E. coli. Pela importncia clnica e epidemiolgica, padres no comuns de Yersinia e Salmonella spp foram considerados, pois
na prtica a motilidade pode ser duvidosa e o H2S pode ser falso negativo.
h) As provas destacadas com fundo cinza tm a finalidade de facilitar a busca de provas-chave na diferenciao bacteriana.
i) Recomenda-se de rotina utilizar as provas do nvel 1 que, para a maioria
das bactrias da rotina, permite uma caracterizao adequada. Quando
houver necessidade (provas no conclusivas, fins epidemiolgicos, etc)
usar as provas de nvel 2.
Lac MC= lactose em Mc Conkey
44 OPAS/OMS Anvisa/MS
fenilalanina
indol
motilidade
Citrato
DNAse
Tabela
5.1
5.2
5.3a
5.3b
5.4
5.5
5.6
5.8a
5.8b
5.7
Proteus vulgaris
PB 92%
Indol neg
Proteus mirabilis
PB 94%
Indol neg
Citrato +
Ureia v
Providencia spp
PB 88%
Citrato neg
Ureia +
Morganella morganii
PB72%
Citrato neg
Ureia +
P. penneri
PB 69%
Citrato v
Ureia neg
Enterobacter spp
PB <16%
Citrato
Motilidade
urease
lisina
lac (MC)
PB
Citrobacter freundii
78%+
89%+
neg
25%
edwarsiella tarda
neg
neg
neg
99%
b) Indol negativo
Bactria/Provas
urease
citrato
lisina
Motilidade
gs
sorotipagem
PB
Salmonella spp
neg
S. typhi
neg
neg
neg
97%
S. gallinarum/S. pullorum
neg
neg
neg
90%
C. freundii
neg
neg
52%
OPAS/OMS Anvisa/MS 45
Captulo 3: Enterobactrias
citrato
urease
lisina
lactose
gs
sorotipagem
PB
Y. enterocolitica
neg
75%+
neg
neg
neg
+Yersinia
50%
Shigella spp
neg
neg
neg
neg
neg
+Shigella
50%
Klebsiella oxytoca
No
99%
neg
neg
75%neg
neg
Invasora2
80%
citrato
urease
lisina
lactose
gs
neg
neg
neg
neg
neg
PB
97%
urease
citrato
lisina
gs
lactose
comentrio
PB
Shigella spp
(colnia pequena)
neg
neg
neg
neg
neg
sorotipagem
50%
Klebsiella pneumoniae 1
pos
pos
pos
pos
pos
colonia mucide
100%
Yersinia enterocolitica 2
75%+
neg
neg
neg
neg
sorotipagem
50%
P. agglomerans 3
neg
neg
neg
9,6%
1- cepas isoladas do trato respiratrio superior, especialmente nariz podem ser ureia negativas e bioquimicamente pouco
ativas (citrato V, lisina V), denominadas K.ozaenae e K.rhinoscleromatis
2- motilidade(+) temperatura ambiente
3- pode ocorrer falsa motilidade negativa em meio semi-slido e positiva em caldo
Tabela 6.7 H2S negativo, FA negativo, Indol negativo, Motilidade positiva, Citrato negativo
Bact/Provas
lisina
lactose
sorotipagem
PB
Hafnia alvei
neg
negativa
7%6
Salmonella choleraesuis
neg
37%
Salmonella paratyphi A
neg
neg
90%
P. agglomerans
neg
negativa
25%
46 OPAS/OMS Anvisa/MS
Tabela 6.8 H2S negativo, FA negativo, Indol negativo, Motilidade positiva, Citrato negativo
DNAse/gelatinase negativos
Bactria/Provas
lisina
urease
lactose
gs
Sorotip
PB
Enterobacter aerogenes
pos
neg
pos
++
neg
95%
Enterobacter cloacae
neg
pos
++
neg
95%
Salmonella typhi
pos
neg
neg
neg
12%
pig. verm.
PB
lisina
urease
lactose
gs
Serratia marcescens
pos
85% neg
neg
55% pos
95%
Serratia liquefaciens
pos
neg
90% neg
75% pos
neg
76%
Serratia rubidae1
55% pos
neg
pos
70% neg
85%
1- raramente isolada
fenilalanina
indol
motilidade
citrato
DNAse
tabela
6.1a
6.1b
6.2a
6.2b
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.9
6.10
6.8
OPAS/OMS Anvisa/MS 47
Captulo 3: Enterobactrias
ornitina
sacarose
PB
Proteus vulgaris
neg
92%
Morganella morganii
neg
20%
b) Indol negativos
ornitina
citrato
PB
Proteus mirabilis
V (65%+)
94%
Proteus penneri
neg
neg
30%
urease
citrato
sacarose
ornitina
Proteus penneri
neg
neg
Morganella morganii
neg
neg
P. agglomerans
neg
75%+
neg
Enterobacter sakazaki
neg
b) Indol positivo
Bactria/Provas
Citrato
Morganella morganii
neg
Providencia spp
citrato
urease
lisina
ornitina
lactose
sacarose
Citrobacter freundii
78% +
44% +
neg
neg
78 %+
89%+
Edwarsiella tarda
neg
neg
neg
neg
48 OPAS/OMS Anvisa/MS
Lisina
citrato
Ureia
ornitina
Motilidade
arabinose
Gs
Sorotip
S. paratyphi A
neg
neg
neg
C. freundii
neg
78%+
44+
neg
89%+
89%+
neg
Salmonella spp
neg
S. typhi
neg
neg
neg
neg
neg
S. choleraesuis
25%+
neg
neg
S. gallinarum
neg
neg
neg
neg
neg
S. pullorum
neg
neg
neg
Outras Salmonellas
neg
PYR
Glicerol
Fenilalanina
Salmonella spp
neg
neg
neg
Citrobacter spp
neg
Proteus spp
neg
Tabela 7.5 H2S negativo, Fenilalanina negativo, Indol positivo, Motilidade negativa
Bactria/Provas
citrato
ureia
lisina
ornitina
lactose
gs
sorotip
PB
Y. enterocolitica1
neg
75%
+
neg
neg
neg
50%
Shigella spp
neg
neg
neg
neg
neg
neg
50%
Klebsiella oxytoca
neg
++
NI
99%
neg
neg
40%+
20%+
25%+
neg
Invasora2
80%
Tabela 7.6 H2S negativo, Fenilalanina negativo, Indol positivo, motilidade positiva
Bactria/Provas
citrato
ureia
lisina
ornitina
lactose
gs
PB
E. coli
neg
neg
90%+
65 +
97%
C. diversus (koseri) 1
75%+
neg
50%+
97%
Citrobacter amalonaticus1
85%+
neg
35%+
97%
Yersinia enterocolitica2
neg
75%+
neg
neg
neg
vide 2
Pantoea agglomerans
50%+
20%+
neg
neg
40%+
20%+
16%
Aeromonas spp3
neg
+4
neg
Captulo 3: Enterobactrias
Tabela 7.7 H2S negativo, Fenilalanina negativo, Indol negativo, Motilidade negativa
Bactria/Provas
Ureia
citrato
Lisina
gs
lactose
comentrio
PB
Shigella spp
(colnia pequena)
neg
nega
neg
neg
neg
Sorotipagem
positiva
50%
Klebsiella pneumoniae
Colnia
Mucide
100%
Klebsiella spp 1
neg
Mucide
Citrobacter freundii
78%+
neg
78%+
11% motilidade
negativa
16%
Yersinia enterocoltica 2
75%+
neg
neg
neg
neg
Sorotipagem
positiva
50%
Pantoea agglomerans 3
neg
neg
neg
15% motilidade
negativa
9,6%
1- cepas isoladas do trato respiratrio superior, especialmente nariz podem ser ureia negativas e bioquimicamente pouco
ativas (citrato V, lisina V), denominadas K.ozaenae e K.rhinoscleromatis
2- motilidade(+) temperatura ambiente
3- pode ocorrer falsa motilidade (negativa em meio semi-slido e positiva em caldo)
Tabela 7.8 H2S negativo, Fenilalanina neg, Indol negativo, Motilidade +, Citrato neg
Bactria/Provas
Lisina
Ornitina
Lactose
Urease
Arabinose
Sorologia
Hafnia alvei
neg
neg
neg
Salmonella typhi 1
neg
neg
neg
neg
S. choleraesuis
neg
neg
neg
Y. enterocolitica 2
neg
neg
75%+
S. paratyphi A
neg
neg
neg
Pantoea agglomerans
neg
neg
40%+
20%+
neg
1- H2S pode ser positivo no TSI com 48h 2- motilidade negativa a 35oC e positiva a 25oC
50 OPAS/OMS Anvisa/MS
PB
76%
vide 2
25%
Tabela 7.9 Tabela fracionada - H2S negativo, FA varivel, Indol negativo, Motilidade
Positiva, Citrato positivo
Dnase e Gelatina negativos
a) Lisina negativa, Ornitina negativa e fenil negativo
Bactria/Provas
Citrobacter
freundii
Arginina
Gs
Esculina
67%+
neg
neg
neg
60%+
E. agglomerans
Ureia
Fenil
Malonato
Esculina
ocorrncia
Enterobacter
cloacae
65%+
neg
75%+
30%+
comum
Enterobacter
sakazaki
neg
50%+
18%+
raro
Ureia
Lactose
E. aerogenes
neg
Enterobacter gergoviae
55%+
Ureia
Fenil
Lisina
Arginina
Ornitina
Malonato
Gs
Lactose
Esculina
Bactria/Provas
Tabela 7.10 Tabela completa - H2S negativo, FA varivel, Indol neg., Motilidade positiva,
Citrato positivo, Dnase e Gelatina negativos
C. freundii
44%+
67%+
11%+
89%+
78%+
E. aerogenes
2%+
98%+
98%+
95%+
100%+
95%+
98%+
E. cloacae
65%+
97%+
96%+
75%+
100%+
93%+
30%+
E. agglomerans
20%+
20%+
65%+
20%+
40%+
60%+
E. gergoviae
93%+
90%+
100%+
96%+
98%+
55%+
97%+
E. sakazakii
1%+
50%+
99%+
91%+
18%+
98%+
99%+
100%+
OPAS/OMS Anvisa/MS 51
Captulo 3: Enterobactrias
Tabela 7.11 H2S neg., Fenilalanina neg., Indol neg., Motilidade positivo, Citrato positivo,
Dnase e Gelatina (positivas)
Bactria/Provas
Lisina
Ornitina
L-arabinose
Malonato
Motilidade
Lactose
Serratia marcescens
99% +
99% +
Neg
Neg
Pos
Neg
S. marcescens biog 1
55% +
65% +
Neg
Neg
Neg
Neg
Serratia liquefaciens
95% +
95% +
Pos
Neg
Pos
Neg
Serratia rubidae
55% +
neg
Pos
Pos
Pos
Pos
Citrobacter freundii
33
78
78
44
67
89
99
99
75
80
99
95
100
95
85
85
95
95
99
100
100
100
98
Enterobacter aerogenes
95
98
98
97
Enterobacter cloacae
100
65
97
96
95
Enterobacter gergoviae
99
93
90
100
90
Enterobacter sakazakii
11
99
50
99
91
96
Escherichia coli
98
90
17
65
95
80
40
20
Shigella dysenteriae
45
Shigella flexneri
50
Shigella boydii
25
10
Shigella sonnei
98
Hafnia alvei
10
100
98
85
Klebsiella pneumoniae
98
95
98
Klebsiella oxytoca
99
95
90
99
Klebsiella ozaenae
30
10
40
Klebsiella rhinoscleromatis
95
20
95
95
95
Pantoea agglomerans
20
50
20
20
85
Proteus mirabilis
65
98
98
98
99
95
Proteus vulgaris
98
15
95
95
99
95
Proteus penneri
30
100
99
85
Providencia rettgeri
99
95
90
98
94
Providencia stuartii
98
93
30
95
85
Providencia alcalifaciens
99
90
90
96
Salmonella spp
95
95
98
70
97
95
Salmonell typhi
97
98
97
Citrobacter amalonaticus
Edwarsiella tarda
52 OPAS/OMS Anvisa/MS
Bactria/Provas
Salmonella cholerasuis
25
50
95
55
100
95
Salmonella paratyphi A
10
15
95
95
Salmonella gallinarum
100
90
10
95
Salmonella pullorum
90
100
10
95
Salmonella outras
90
100
99
70
99
99
Serratia marcescens
98
15
99
99
97
30
55
65
14
Serratia liquefaciens
90
95
95
95
Serratia rubidae
95
55
85
50
75
95
Gs glicose
lactose
Yersinia enterocolitica
Bactria/Provas
gelatina
Malonato
sacarose
esculina
DNAse
Citrobacter freundii
11
89
78
89
95
98
50
40
Citrobacter amalonaticus
97
35
Edwarsiella tarda
100
Enterobacter aerogenes
95
100
95
100
98
Enterobacter cloacae
75
100
93
97
30
Enterobacter gergoviae
96
98
55
98
97
Enterobacter sakazakii
18
98
99
100
100
Escherichia coli
95
95
50
35
25
15
Shigella dysenteriae
Shigella flexneri
Shigella boydii
Shigella sonnei
Hafnia alvei
50
98
10
Klebsiella pneumoniae
93
97
98
99
99
Klebsiella oxytoca
95
97
100
100
100
Klebsiella ozaenae
50
30
20
80
Klebsiella rhinoscleromatis
95
75
60
99
Pantoea agglomerans
65
20
40
75
60
Proteus mirabilis
90
90
15
50
Proteus vulgaris
91
85
97
50
80
Proteus penneri
50
45
100
40
Providencia rettgeri
10
15
35
Providencia stuartii
50
10
Providencia alcalifaciens
85
15
Salmonella spp
90
Salmonell typhi
OPAS/OMS Anvisa/MS 53
Captulo 3: Enterobactrias
Bactria/Provas
gelatina
Malonato
Gs glicose
lactose
sacarose
esculina
DNAse
Salmonella cholerasuis
95
Salmonella paratyphi A
99
Salmonella gallinarum
10
Salmonella pullorum
90
Salmonella outras
100
0 ou 15
Serratia marcescens
90
55
99
95
98
30
100
90
82
Serratia liquefaciens
90
75
10
98
97
85
Serratia rubidae
90
94
30
100
99
94
99
95
25
Yersinia enterocolitica
Identificao de Salmonella:
No gnero Salmonella existe uma grande quantidade de sorotipos, que no
so mais considerados como espcies, e sua identificao sorolgica completa e detalhada uma tarefa restrita aos denominados Laboratrios de
Referncia. Para identificao rotineira no laboratrio clnico, utiliza-se basicamente trs antisoros:
a) Anti-Salmonella polivalente somtico (Grupos A,B,C,D,E)
b) Anti-Salmonella somtico, Grupo D (S. typhi)
c) Anti-Salmonella, anti Vi
Quando o denominado antgeno de virulncia (Vi) est presente, poder
bloquear a aglutinao do antgeno somtico do grupo D (Salmonella typhi).
Desse modo, a suspenso dever ser aquecida em banho-maria fervente e
testada novamente com os trs anti-soros citados, dando o resultado abaixo
no caso de Salmonella typhi.
A partir de uma reao positiva feita apenas com o antgeno somtico polivalente, existe condio de confirmar a amostra como sendo do gnero Salmonella, sem especificar o sorotipo ou sorovar.
Anti-soros
Antgeno vivo
Antgeno aquecido
Grupo D somtico
Anti Vi
OPAS/OMS Anvisa/MS 55
Captulo 3: Enterobactrias
A identificao at sorotipos poder ser feita com auxlio dos soros flagelares
(a, b, c, d, i, 1, 2, 5), e atravs de sua utilizao possvel identificar as seguintes amostras:
Grupo Sorolgico
Sorotipos
Grupo O2 (A)
Salmonella Paratyphi A
Grupo O4 (B)
Grupo O7 (C1)
Grupo O5 (D1)
Salmonella Typhi
3.5.2
Identificao de Shigella:
O gnero Shigella est constitudo de apenas quatro sorogrupos, que so identificados sorologicamente, de maneira simplificada, com a utilizao de anti-soros polivalentes. Excepcionalmente, utiliza-se apenas o antisoro monovalente de Shigella dysenteriae tipo 1 (bacilo de Shiga), por ser o mais patognico.
Grupo Sorolgico
Espcie Bacteriana
Sorotipos
- Grupo A
Shigella dysenteriae
13 sorotipos
- Grupo B
Shigella flexneri
6 sorotipos
- Grupo C
Shigella boydii
18 sorotipos
- Grupo D
Shigella sonnei
1 sorotipo
As culturas suspeitas devero ser testadas, primeiro com os soros contra Shigella flexneri e Shigella sonnei, que representam mais de 95% das amostras
de Shigella isoladas em nosso meio. Caso no haja aglutinao, prosseguir
com os outros soros.
No ocorrendo aglutinao, possvel que a cultura seja rica em antgenos
de superfcie que geralmente impedem o contato do soro com o antgeno
somtico O. Esses antgenos devem ser destrudos pelo aquecimento da suspenso bacteriana por 15 minutos em banho-maria fervente, procedimento
que pode ser adotado como de rotina na sorologia desse gnero.
3.5.3
56 OPAS/OMS Anvisa/MS
OPAS/OMS Anvisa/MS 57
Captulo 3: Enterobactrias
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Bergeys manual of Systematic Bacteriology Garrity, George M.Boone, David R.; Castenholz,
Richard W. (Eds.)Second edition Springer 721p.
58 OPAS/OMS Anvisa/MS
Captulo 4:
Bastonetes Gram-Negativos No Fermentadores
4.1 Introduo
Os bacilos Gram negativos classificados como no fermentadores (BNFs) so micro-organismos aerbios, no esporulados, que se caracterizam por serem incapazes de
utilizar carboidratos como fonte de energia atravs de fermentao, degradando-os
pela via oxidativa.
A identificao dos BNFs sempre foi um desafio para os laboratrios de rotina em
microbiologia,considerando que a maioria deles no realiza esse tipo de identificao, ou o faz de maneira elementar em virtude da pouca incidncia em amostras ambulatoriais, assim como pela complexidade e elevado custo dos esquemas completos
de identificao.
A caracterizao desse grupo de bactrias de grande importncia nos casos de infeco hospitalar. Pseudomonas aeruginosa e Acinetobacter baumannii na atualidade
esto entre as bactrias mais isoladas em hemoculturas e amostras do trato respiratrio de grandes hospitais. No entanto, os demais BNFs representam um percentual
pequeno de isolamentos, quando comparados com outros agentes etiolgicos, mas
alguns deles apresentam resistncia elevada a vrios antibiticos (complexo B. cepacia e S. maltophilia) e so capazes de causar infeces graves. Essas bactrias colonizam e causam infeces oportunistas, em especial em pacientes graves oriundos
de CTI e submetidos a procedimentos invasivos. Muito h por se conhecer sobre a
importncia clinica, caracterizao laboratorial, taxonomia, sensibilidade a drogas e
patogenicidade desse grupo de micro-organismos, sendo importante classific-los
em nvel de gnero e espcie.
O nmero de bactrias no fermentadoras conhecidas muito grande. Foram selecionadas aquelas atualmente consideradas de maior importncia clnica (*) e as demais para diagnstico diferencial entre si.
4.1.1
Acinetobacter spp*
Alcaligenes spp*
Achromobacter spp
Bordetella bronchyseptica
Methylobacterium spp
Moraxella spp*
Pseudomonas aeruginosa*
Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas luteola
Pseudomonas oryzihabitans
Pseudomanas putida
Pseudomonas stutzeri
Burkholderia pseudomallei*
Roseomonas spp
Stenotrophomonas spp*
Shewanella spp
60 OPAS/OMS Anvisa/MS
4.1.2
4.1.3
Testes necessrios para triagem inicial para identificao de rotina dos BNFs
Tubo com TSI (trplice aucar ferro)
Tubo de TSA (tripticase soja agar)*1 inclinado
Disco de oxidase ou reativo de oxidase
Caldo TSB (tripticase soja caldo) para motilidade em lmina
Colorao de Gram
Semeadura em placa de gar MacConkey
*1 - ou outro meio similar, sem adio de corantes para verificar pigmento e manter
o inculo.
Semear uma nica colnia nos meios TSI, TSA e TSB e incubar a 30C por 1624 horas. Realizar colorao de Gram, oxidase, motilidade em lmina a fresco, semear em placa de gar MacConkey*2 e observar o crescimento a 30C
por 24-72 horas, pois alguns BNFs crescem lentamente.
*2 ou considerar o crescimento no primo isolamento, quando utilizado o
gar MacConkey.
OPAS/OMS Anvisa/MS 61
A cor violeta forte aparece rapidamente. Complexo Burkholderia cepacia e Stenotrophomonas maltophilia podem dar reao fraca ou lenta, em alguns casos aps 30
segundos.
Reativo de Oxidase
Umedecer um papel de filtro, colocado no interior de uma placa de Petri, com soluo de oxalato de p-aminodimetilanilina a 1%*.
Esfregar uma alada da massa bacteriana (a partir do TSA) no papel de filtro umedecido, utilizando ala de platina ou descartvel.
A leitura feita em 15 a 30 segundos.
A cor prpura forte aparece rapidamente nas amostras oxidase positiva. Complexo
Burkholderia cepacia e Stenotrophomonas maltophilia podem dar reao fraca ou lenta, em alguns casos aps 30 segundos.
*Preparar a soluo e aliquotar em pequenas fraes. Conservar a -20C. Descongelar
apenas no momento do uso.
Caldo TSB - Motilidade
Colocar uma gota do caldo com crescimento bacteriano (16-24 horas a 30C) sobre
uma lmina nova.
Cobrir a gota com uma lamnula e levar ao microscpio. Observar com aumento de
400 x.
Motilidade Positiva: presena de bactrias cruzando o campo em diferentes direes
ou girando em torno dela mesma.
Motilidade Negativa: movimentos vibratrios fracos.
Movimento Browniano: Quando o movimento de todas as bactrias numa mesma
direo, provavelmente o movimento do lquido entre a lmina e a lamnula.
Obs: Verificar a motilidade em temperaturas de 37C e 20C (ambiente).
62 OPAS/OMS Anvisa/MS
Gram
Observar a colorao, morfologia e a disposio das clulas bacterianas.
Grupamento inicial para a identificao dos bacilos gram negativos no fermentadores mais
frequentemente isolados e de importncia clnica
GNERO
MORFOLOGIA CELULAR
OXIDASE
MOTILIDADE/TIPO
Cresc. em gar
MacConkey
OF GLICOSE
Pseudomonas
Bacilar
+a
+/polar
O/I
Alcaligenes/
Achromobacter
Bacilar
+/peritrqueo
O/I ou A
Burkholderia
Bacilar
+ lento
+/polar
Stenotrophomonas
Bacilar
+ lento
+/polar
O/I
Acinetobacter
Coco bacilarCocide
aos pares
neg
neg
O/I
Moraxella
Cocobacilar
neg
Elizabethkingia/
Chryseobacterium
Bacilar (pleomrfico)
neg
Observaes:
Produo de H2S em TSI se positivo: suspeita de Shevanella spp.
Colnias bem rugosas, amarelas, oxidase negativa, mveis suspeita de Pseudomonas oryzihabitans e P. luteola
Para visualizao de flagelos vide colorao especfica no final desse captulo.
No caso de identificaes duvidosas, rever:
Motilidade: comum falso negativo; repetir com caldo incubando 6 horas.
Oxidase: reaes duvidosas repetir com repique novo.
Disco de PYR
Disco de Polimixina
Disco de Imipenem
Placa de DNAse
OPAS/OMS Anvisa/MS 63
SEMEADURAS
LEITURA E INTERPRETAO
Tubo de OF
glicose (com e
sem vaselina)
Utilizar um volume da
suspenso bacteriana
suficiente para deixar o
fragmento imerso.
Placa de DNAse
Ureia
Citrato
64 OPAS/OMS Anvisa/MS
PROVAS
SEMEADURAS
LEITURA E INTERPRETAO
Tubo de caldo
indol
Inocular 3 gotas da
suspenso bacteriana no
caldo
Discos de
polimixina e
imipenem
Disco de PYR
Tabela 1
motilidade positiva:
Tabela 3 ou 4
Tabela 2
Tabela 4
Tabela 6
Tabela8
Tabela 9
OPAS/OMS Anvisa/MS 65
Observaes:
Lisina e ornitina podem ser negativas em 24h e positivar com 48-72h. Rever quando
houver duas reaes positivas, pois raramente ocorrem.
Caldo NaCl 6,5% pode turvar mas no virar o indicador no caso de Alcaligenes (OF glicose
alcalino).
4.4.2
Tabela 1 Coco-bacilos ou cocos Gram-negativo aos pares, NF, Oxidase negativa e Motilidade negativa
Microrganismosa
Cresc.
44C
OF-G
Citrato
Gelatina
Hemliseb
A. baumannii/A.
genoespcie 13TU
neg
neg
A. calcoaceticus/A.
genoespcie 3
neg
neg
neg
A. haemolyticus
I/O
neg
A. lwoffii
neg
neg
neg
neg
Complexo
A.baumannii A.
calcoaceticus
Tabela 2 Cocos Gram-negativo (NF), Oxidase positivo, Motilidade negativa, OF-G inerte
Micro-organismos
Urease
Gelatina
DNAse
Moraxella catarrhalis
neg
neg
neg
Moraxella canis
neg
neg
Psychrobacter phenylpyruvicus/
Oligella ureolytica
positivo
neg
neg
Moraxella lacunata
neg
pos
neg
neg
Moraxella spp.*
neg
neg
neg
Tabela 3 Bacilos Gram-negativo (BNF), Oxidase negativa, Motilidade positiva, OF-G oxidativo Lisina negativa
Micro-organismos
Lisina
Arginina
DNAse
Pol
Pseudomonas luteola
Neg
Neg
Pseudomonas
oryzihabitans
Neg
neg
Neg
neg negativo
Pol polimixina
66 OPAS/OMS Anvisa/MS
IPM imipenem
S- sensvel
IPM
Caractersticas da colnia
R - resistente
Tabela 4 Bacilos Gram-negativo (BNF), Oxidase negativa ou positiva lenta, Motilidade positiva, a OF-G oxidativo ou inerte, Lisina positiva
Micro-organismos
Caractersticas da
colnia
Oxidase
Lisina
Arginina
DNAse
Pol
IPM
Complexo
Burkholderia
cepacia
+ lenta
maioria
+
neg
neg
Cremosa, lisa,
algumas com
pigmento bem
amarelo em TSI b
Stenotrophomonas
maltophilia
neg/
+ lenta
93% +
neg
Esculina
PYR
neg
neg
neg
Complexo B. cepacia
S. maltophilia
Pseudomonas luteola
Pseudomonas oryzihabitans
neg= negativo
v= varivel
Tabela 5 Oxidase positiva, motilidade negativa e OF-G oxidativo, bacilos (BNF) com pigmento amarelo e crescimento em gar MacConkey varivel
Micro-organismos
Indol
DNAse
Pol
Ureia
Elizabethkingia meningoseptica
neg
Chryseobacterium indologenes
neg
neg
Sphingomonas sppa
neg
neg
neg
Sphingobacterium sppb
neg
motilidade ocorre a 18-22C, mas no a 37C; a reao de oxidase geralmente lenta, raramente negativa
S. multivorum, S. spiritivorum e S. thalpophilum
neg negativo
v varivel
s sensvel
r - resistente
OPAS/OMS Anvisa/MS 67
Lisina
Arginina
NaCl
6%
Gelatina
Cresc.
a 42C
Caractersticas
da colnia
A. xylosoxidans
neg
13% +
69% +
neg
84% +
No pigmentadas,
lisas, semelhantes
ao Acinetobacter
P. aeruginosa
neg
82% +
Pigmentos
P. fluorescens
neg
neg
Pigmentos
P. putida
neg
neg
neg
Pigmentos
P. stutzeri
neg
neg
neg
Burkholderia
pseudomallei
neg
Complexo B. cepacia
80% +
neg
83% +
pegmento
amarelo (v)
Sphingomonas sppa
neg
neg
neg
neg
neg
pegmento
amarelo
Shevanela spp
neg
neg
pegmento
amarelado
Micro-organismos
Seca
Esculina
PYR
piocianina
(P)
pioverdina ou
fluorescena(F)
Colorao flagelos*
A. xilosoxidans
subsp. xylosoxidans
neg
neg
neg
Peritrqueo
P. aeruginosa
neg
65% +
Polar (1)
P. fluorescens
neg
neg
96% +
Polar (>1)
P. putida
neg
neg
neg
93% +
Polar (>1)
P. stutzeri
neg
neg
neg
neg
Polar (1)
neg
neg
neg
Polar ( 2)
Complexo B. cepacia
neg
neg
neg
Polar ( 2)
Sphingomonas spp
25% +
neg
neg
Polar (1-2)
neg
neg
neg
Polar (1-2)
B. pseudomallei
a
Shewanella spp
Tabela 7 BNF, Oxidase, Motilidade e DNAse positivas, com H2S no TSI, OF-G varivel
Micro-organismos
Shewanella putrefaciens
Shewanella algae
Ornitina
NaCl 6,5%
NaCl 0%
43% +
neg
neg
68 OPAS/OMS Anvisa/MS
positiva
Complexo B. cepacia
Polimixina R
Negativa
arginina
positiva
negativa
polimixina
polimixina
crescimento 42C
B. pseudomallei
esculina
Complexo
B. cepacia
positiva
negativa
positiva
negativa
PYR
S. paucimobilis
negativa
DNAse
positiva
positiva
negativa
negativa
P. stutzeri
(colnia seca)
positiva
P. putida
positiva
P. aeruginosa
S.putrefaciens
TSI= H2S +
Gelatina
Produo de
pigmentos
P. fluorescens
negativa
Colorao de flagelos
Peritrqueo
Polar
P. aeruginosa
OPAS/OMS Anvisa/MS 69
Micro-organismos
Ureia
NaCl
6,5%
DNAse
Gelatina
PYR
Colorao de
flagelosa
Achromobacter denitrificans
neg
75% neg
neg
neg
Peritriqueo
Alcaligenes faecalis
neg
neg
78%neg
neg
Peritrqueo
Bordetella bronchiseptica
++
+b
neg
neg
neg
Peritrqueo
S. maltophilia c
neg
78% neg
93% +
neg
Polar (> 2)
provas complementares | turva o meio, mas no muda a cor do indicador | - raramente pode ser oxidase positiva
b
Morfologia
Urease
Cresc em
gar Mac
Conkey
Cresc.
a 42C
Caractersticas
das colnias
Methylobacterium
spp
Bacilos
23% +
neg
neg
Roseomonas spp*
Cocobacilos
Colnias
mucides rosadas
Microorganismos
Cresc. a
44C
Citrato
Malonato
Gelatina
Hemlise em
gar sangue
A. baumannii/A.
genoespcie 13TU
neg
neg
A. calcoaceticus/A.
genoespcie 3
neg
neg
neg
I/O
neg
neg
neg
neg
neg
neg
neg
I/O
neg
Micro-organismos
Complexo A.
baumannii
A. calcoaceticus
A. haemolyticus
A. lwoffii
Acinetobacter spp
70 OPAS/OMS Anvisa/MS
Oxidase
OF-G
IPM
POL
Esculina
DNAse
Lisina
Arginina
Cr 42C
P. luteola
neg
neg
neg
94% +
P.oryzihabitans
neg
neg
neg
neg
14% +
33% +
S. maltophilia
neg/+ lenta
85% o
39% +
93% +
neg
48% +
Complexo B. cepacia
neg/+ lenta
63% +
neg
80% +
neg
83% +
IPM= imipenem | POL= polimixina | neg= negativo | O= oxidativo | S= sensvel | R= resistente | V= varivel
* - pode ser positiva a 20C
Bacilos Gram-negativos (BNF), Oxidase positiva, Motilidade negativa, OF-G oxidativo, crescimento
em gar MacConkey varivel
Micro-organismos
Motilidade
OF-G
Ureia
Indol
DNAse
POL
Elizabethkingia. meningoseptica
neg
o lento
neg
C. indologenes
neg
o lento
neg
neg
Sphingomonas spp
neg*
neg
neg
neg
Sphingobacterium spp
neg
neg
Ureia
Gelatina
Cresc em gar
MacConkey
DNase
M. catarrhalis
neg
o lento
neg
M. canis
neg
o lento
Psychrobacter phenylpyruvica/
Oligella ureolytica
neg
neg
M. lacunata
neg
neg
neg
neg
neg
neg
Bacilos Gram-negativos (BNFs), Oxidase positiva, Motilidade positiva e OF-G inerte ou alcalino,
crescimento em gar MacConkey positivo
Micro-organismos
Citrato
Reduo
Nitrato
Nitrato/
gs
Cresc a
42C
Colorao de
flagelos
Bacilo
neg
Peritriqueo
Achromobacter piechaudiia
Bacilo
neg
neg
Peritriqueo
Alcaligenes faecalis
Bacilo
neg
neg
neg
Peritriqueo
B. bronchisepticaa
cocobacilo
++
neg
Peritriqueo
Comamonas spp
Bacilo
neg
neg
Polar (> 2)
P.pseudoalcaligenesb
Bacilo
neg
neg
neg
Polar (1)
Bacilo
neg
54% +
neg
neg
Polar (1)
P. alcaligenes
b
Ureia
Achromobacter denitrificansa
Morfologia
OF-G alcalino
OF-G inerte
OPAS/OMS Anvisa/MS 71
Cresc a
42C
Gelatina
Esculina
A. xilosoxidans subsp
xylosoxidans
84% +
neg
neg
neg
Peritrqueo
P. aeruginosa
82% +
neg
neg
Polar (1)
P. fluorescens
neg
neg
neg
Polar (>1)
P. mendocina (rara)
neg
neg
neg
Polar (1)
P. putida
neg
neg
neg
neg
Polar (>1)
P. stutzeri
69 %
+
neg
neg
neg
neg
Polar (1)
Sphingomonas spp
neg
neg
neg
nt
nt
Polar (1-2)
Complexo B. cepacia
neg
Polar
B. pseudomallei
neg
Polar (2)
S. putrefaciens
neg
neg
neg
Polar (1-2)
Micro-organismos
POL
Lisina
Arginina
Colorao de
flagelos
NT= no testado (no citado na literatura) | V= varivel | neg= negativo | MC= gar MacConkey | POL= polimixina
Bacilos Gram-negativos (BNFs), oxidase positiva, OF-G varivel, ureia positiva, com pigmento rosa
Micro-organismos
Motilidade
Cresc em gar
MacConkey
Morfologia
Cresc a
42C
Methylobacterium
spp
Bacilo
neg
Neg
Roseomonas spp
Cocobacilo
Colnias mucides,
rosadas, cocobacilos
0,3 g
OPAS/OMS Anvisa/MS 73
Referncias
CLARK, W. A. A simplified Leifson flagella stain. J Clin Microbiol. 3: 632-634, 1976.
HUGH, R. & LEIFSOn, E. The taxonomic significance of fermentative versus oxidative
metabolism of carbohydrates by various gram negative bacteria. J Bacteriol 66: 24-26, 1953.
KONEMAN, E.W., ALLEN, S.D., JANDA, W.M., Screckenberger, P.C., Winn, W.C. Diagnostic
Microbiology 6a ed., 2006.
LAFFINEUR, K, JANSSENS, M., CHARLIER, J., AVESANI, V., WAUTERS, G., DELME. Biochemical
ans susceptibility tets useful for identification of nonfermenting Gram-negative rods. J. Clin.
Microbiol., 40(3):1085-1087, 2002.
MACFADDIN, J.F. Biochemical Tests for Identification of medical Bacteria. Third ed..
Lippincott Williams& Williams PA USA, 912 p, 2000.
MURRAY, P. R. et all. Manual of Clnical Microbiology..American Society for Microbiology. 9th
ed., 2007.
74 OPAS/OMS Anvisa/MS
Captulo 5:
Bacilos Curvos ou Espiralados e outros Relacionados de
Importncia Clnica
5.1 Introduo
Esse captulo apresenta os principais bacilos curvos ou espiralados de importncia
clnica, relacionados s principais patologias, fontes de infeco e recursos diagnsticos para sua caracterizao. Por se tratar de agentes raros, com exceo dos Campylobacter spp., no sero abordados em profundidade, devendo o microbiologista encaminhar a cepa isolada para Laboratrio de Referncia ou consult-lo sobre recursos
disponveis para tentativa de isolamento.
5.1.1
Agente
Doena
Reservatrio
Transmisso
Arcobacter spp.
Bacteremia,
gastroenterite,
endocardite e peritonite
Alimentos 1, fecal-oral.
Borrelia burgdorferi
Doena de Lime
Roedores
Carrapatos
Borrelia recurrentis
Febre recorrente
epidmica
Humanos
Sarna (P.humanus)
Campylobacter coli/
jejuni
Gastroenterite
Carnes contaminadas
(frango), leite e gua
Alimentos 1, fecal-oral
Campylobacter fetus
Bacteremia, infeco
extraintestinal
Humanos
Fecal-oral
Helicobacter pylori
Alimentos 1, Fecal-oral
Helicobacter spp.
Gastroenterite,
bacteremia, etc.
Animais domsticos,
humanos.
Fecal-oral, alimentos
Leptospira spp.
Leptospirose
Alimentos-gua 2
Treponema pallidum
Sfilis
Humanos
Sexual,
transplacentria
Vibrio spp.
Clera, gastroenterite
Alimentos, gua
Alimentos 1, fecal-oral
76 OPAS/OMS Anvisa/MS
5.1.2
Agente
Recursos diagnsticos
Testes *
Arcobacter spp
B. burgdorferi
(doena de
Lyme)
Borrelia spp.
Campylobacter
coli e C. jejuni
Microscopia: bacilos finos e curvos, fracamente corados por Gram (Gram negativo).
Cultura: cresce a 37 e 42C em ambiente de microaerofilia, em meio
seletivo como Campy-CVA.
Ensaio Molecular: PCR utilizando iniciadores especficos.
C. fetus
Helicobacter
pylori
Leptospira spp.
Treponema
pallidum
OPAS/OMS Anvisa/MS 77
5.2 Campylobacter
Em caso de gastroenterite, as fezes so preferencialmente coletadas para isolamento
de espcies de Campylobacter, porm, swabs retais tambm so aceitveis para cultura.
As amostras devem ser enviadas rapidamente ao laboratrio ou em meio de transporte
de Cary-Blair semi-slido. Em amostras de sangue colhidas em meios convencionais,
essas podem suportar o crescimento do C. fetus que a espcie que causa com maior
frequncia infeces extraintestinais.
A colorao de Gram deve usar no lugar da safranina a carbol-fucsina ou fucsina bsica a 0,1% durante 2 minutos. Exame de fezes costuma revelar presena de leuccitos,
mas a ausncia no contraindica a cultura ou a suspeita diagnstica. O Gram das fezes tem sensibilidade entre 70 a 90% e elevada especificidade.
A maioria das espcies de Campylobacter exige microaerofilia contendo cerca de 5%
de O2, 10% de CO2 e 85% de N2, obtidos com geradores especficos e no apenas com
vela. Para aumentar a chance de isolamento em fezes recomenda-se a filtrao das
fezes em filtro de acetato de celulose >0,45 m. Vrios so os meios de cultura especficos para coprocultura por serem seletivos, sendo na atualidade os mais recomendados o gar Carvo Desoxicolato Cefoperazona, o meio Campy CVA (Cefoperazona,
Vancomicina e Anfotericina) e o meio de Karmali (base de Columbia gar, carvo ativado e suplemento de antibiticos).
Amostras de hemocultura devem ser repicadas em meios no seletivos com geradores para microaerofilia. Fazer o teste de crescimento a 25, 37 e 42oC (todos
crescem a 37oC). No exame direto em gota direto no microscpio entre lmina e
lamnula pode-se observar a motilidade tipo hlice em movimento.
As provas de crescimento devem ser feitas em gar Mueller Hinton com 5% de sangue de carneiro em microaerofilia. O teste de sensibilidade ao cido nalidxico e cefalotina pode ser feito em qualquer meio no seletivo e ser considerado sensvel
presena de qualquer tamanho de halo.
78 OPAS/OMS Anvisa/MS
Catalase
Cresc.
15oC
H2S-TSI
Cresc.
25oC
Cresc.
42oC
Mac
Conkey
cido
Nalidixico
Cefalotina
C. jejuni
neg
neg
neg
neg
sensvel
ou
resistente
resistente
C. coli
neg
neg
neg
neg
sensvel
resistente
C. fetus
neg
neg
neg
neg
sensvel
ou
resistente
sensvel
Campylobacter
spp.
varivel
neg
neg
neg
sensvel
ou
resistente
sensvel
Arcobacter
neg
varivel
varivel
sensvel
varivel
* C. lari = resistente
Isolamento de bactria Gram negativa fermentadora da glicose (TSI fermentador) e oxidase positiva.
Materiais clnicos que podem, eventualmente, ser associados com maior frequncia de isolamentos de Vibrios, Aeromonas e Plesiomonas.
Principais bactrias fermentadoras da glicose, oxidase positiva e sua associao com diferentes
quadros clnicos:
Bactria
Diarreia
Sepse
Outros
V. cholerae
V. parahaemolyticus
frequente
pouco comum
Raro
Raro
P. shigeloides
frequente
Raro
frequente
Raro
A. hydrophila
frequente
frequente
frequente
frequente
A. caviae
frequente
Raro
frequente
frequente
A. veronii
frequente
Raro
frequente
frequente
5.3.1
Vibrio
As espcies do Gnero Vibrio so bacilos curvos ou s vezes retos, longos,
anaerbios facultativos, mveis, fermentadores da glicose, em geral sem
produzir gs, e oxidase positivas. Alm do Vibrio cholerae, existem mais de 10
espcies patognicas para o ser humano. Algumas espcies podem causar
gastroenterite, outras infeces cutneas e bacteremias.
OPAS/OMS Anvisa/MS 79
Aeromonas e plesiomonas
Vivem em ambientes aquticos em todas as partes do mundo. Podem ser encontradas em gua de fonte, gua de lagos, guas poludas, etc. Plesiomonas
preferem guas tropicais e no marinhas, sendo a Aeromonas mais tolerante
s diferentes condies ambientais. Aeromonas tm sido isoladas em carnes,
meio ambiente aqutico e produtos do mar, e suas diferentes espcies causam doenas no s no homem como em animais, peixes, rpteis, cobras e
pssaros.
Em nossa experincia comum o isolamento de Aeromonas em abscesso
ps-picada de cobra, lquido biliar em pacientes com colicistite, diarreia, sepse (em pacientes com doena heptica crnica) e abscessos cutneos ps-
80 OPAS/OMS Anvisa/MS
-acidentes (corto-contusos) em lagos, tanques, etc. A chance de detectar Aeromonas e Plesiomonas depende da adoo do procedimento em se fazer o
teste da oxidase em bactrias com caractersticas de Escherichia coli lactose
negativa.
As principais caractersticas das Aeromonas so: lactose negativa, H2S negativo, fenilalanina negativa, indol positivo, motilidade positiva, e crescem
bem em meios ricos e seletivos, como gar Mac Conkey e gar Salmonella-Shigella.
Principais provas diferenciais entre Aeromonas spp., E. coli e Citrobacter spp.
Bactria
Citrato
Ureia
H2S
Lisina
Lactose
Gs
E. coli
Neg
Neg
Neg
Varivel
Citrobacter spp.
Varivel
Neg
Varivel
Varivel
Aeromonas spp
Varivel
Neg
Neg
Neg
Varivel
V. cholerae
Outros vibrios
Aeromonas spp.
Plesiomonas spp.
Neg
Neg
Neg
Oxidase
DNAse
Neg
Indol
LIS
ARG
ORN
ARA
LAC
SAC
ESC
HEM
A. hydrophila
A. caviae
Varivel Neg
A. sobria
A. veronii
A. jandaei
A. schubertii
Neg
P. shigelloides
Positivo Neg
Neg
Neg
Positivo Neg
Positivo Neg
Neg
Neg
Neg
Neg
Neg
Positivo
Neg
Neg
Neg
Neg
Varivel
Neg
Neg
Neg
Neg
Positivo
LIS = lisina ARG = arginina ORN = orninina ARA = arabinose LAC = lactose SAC = sacarose
ESC = esculina HEM * = hemlise/sangue carneiro
OPAS/OMS Anvisa/MS 81
Referncias
WINN,J Jr, ALLEN, S, JANDA, W.M., KONEMAN, E, PROCOP, G, SCHRENKENBERGER, P.C.
WOODS, G. KONEMAN - Color Atlas and Textbook OF Diagnostic Microbiology. 6th Ed.
Lippincott Williams & Wilkins, 2006, 1535p.
MC FADDIN, J.F. Biochemical tests for identification of medical bacteria. Baltimore. Ed.
William & Wilkins Co., 2000.
MURRAY, P. R. ET AL. MANUAL OF CLNICAL MICROBIOLOGY. 9th ed. Washington DC.
American Society for Microbiology ASM Press 2007., 2256p
82 OPAS/OMS Anvisa/MS
Captulo 6:
Bacilos Gram Positivos
6.1 Introduo
Esse captulo aborda diversos aspectos prticos para identificao dos seguintes gneros de Bacilos Gram positivos (BGPs) de importncia clnica:
Irregulares (Corineformes)
Regulares
Erysipelothrix, Listeria
Esporulados
Bacillus
Ramificados (Actinomicetos)
Alguns BGPs que so citados no texto para fins de diagnstico diferencial e foram
abordados detalhadamente em outros captulos incluem as micobactrias e os anaerbios estritos e/ou facultativos pertencentes aos gneros Actinomyces, Bifidobacterium, Clostridium, Eubacterium, Lactobacillus, Mobilluncus, Propionibacterium.
84 OPAS/OMS Anvisa/MS
OPAS/OMS Anvisa/MS 85
Quadros clnicos
Arcanobacterium
Bacillus
Cellulosimicrobium
Corynebacterium
Erysipelothrix
Gardnerella
Lactobacillus
Leifsonia
Listeria
Nocardia
Oerskovia
Rhodococcus
Rothia
Turicella
Streptomyces
6.2.1
Bactria
Actinomyces
Arcanobacterium
Bacillus
Cellulosimicrobium
Corynebacterium
Observaes
Alguns aerotolerantes
Pleomrfico
Mobilidade V
Penetrao no gar
Pleomrfico; imvel
Crescimento de 5 a 42oC;
Erysipelothrix
alfa
pH 6,7 a 9,2; H2S positivo
Gardnerella
beta**
Gram-lbil
Listeria
beta
+
Mobilidade a 25-28 oC
Hifas; crescimento em
Nocardia
+
+
+
lisozima
Oerskovia
v
+
Penetrao no gar
Propionibacterium
+
v
Alguns aerotolerantes
Formas cocoides;
Rhodococcus
+
v
+
pigmento coral
Rothia
+
v
Pleomrfico
Streptomyces
+
+
Hifas
V, varivel; AAR, lcool-acido resistncia fraca ou parcial; Ramif., clulas ramificadas; *, sangue carneiro; **,
sangue de coelho ou humano a 3%
86 OPAS/OMS Anvisa/MS
Esporo
+
-
AAR*
-
Ramif.
v
v
-
Hemlise*
beta
v
v
Catalase
v
+
+
+
6.3 Corineformes
Os bastonetes gram positivos irregulares (BGPIs) ou corineformes formam um grupo
bastante heterogneo morfologicamente e com poucas caractersticas bioqumicas
em comum.
Arcanobacterium
Microbacterium
Exiguobacterium
Corynebacterium
Brevibacterium
Rothia
Leifsonia
Dermabacter
Cellulosmicrobium
Arthrobacter
Oerskovia
Gardnerella
Curtobacterium
Cellulomonas
Turicella
Nitrato
Ureia
Esculina
Glicose
Maltose
Sacarose
Manitol
Xilose
Arcanobacterium
Arthrobacter
Brevibacterium
Cellulomonas
Cellulosmicrobium
+
+
+
+
F
O
O
F
F
v
v
-
v
v
+
+
v
-
v
v
+
+
+
v
v
+
+
v
v
v
+
+
v
v
v
+
+
v
v
-
v
+
+
Corynebacterium
Dermabacter
Gardnerella
Leifsonia
+
+
+
+
F/O
F
F
O
v
v
v
-
v
+
v
v
+
+
+
v
+
+
v
v
+
v
v
v
+
v
v
+
Microbacterium
Oerskovia
v
+
F/O
F
v
v
v
+
v
-
v
+
+
+
+
+
v
+
v
-
v
+
Rothia
v F
- + - + + + +
F, fermentao; O, oxidao; +, positivo; -, negativo; v, varivel
Gnero
Catalase
Mobilidade
Metabolismo
Oxidativo/
fermentativo
Outras
OPAS/OMS Anvisa/MS 87
6.3.1
Corynebacterium
Atualmente, o gnero Corynebacterium composto de 110 espcies, sendo
aproximadamente 40 dessas consideradas de relevncia mdica. Alm das
corinebactrias produtoras de toxina, que so patgenos obrigatrios para
humanos e/ou animais (C. diphtheriae, C. ulcerans e C. pseudotuberculosis), diversas outras espcies podem fazer parte da microbiota anfibintica normal
humana e/ou atuar como patgenos oportunistas.
As infeces humanas causadas pelas corinebactrias vm adquirindo crescente importncia tanto em pases industrializados quanto em desenvolvimento, e podem levar ao bito tanto pacientes imunocomprometidos quanto imunocompetentes.
O aparecimento de amostras multirresistentes aos antimicrobianos utilizados no tratamento e o aumento do nmero de casos de infeces de origens
diversas, por vezes culminando em bito, tm contribudo para aumentar o
interesse pelas corinebactrias.
Dentre os fatores predisponentes s infeces pelas corinebactrias oportunistas destacam-se os estados de malignidade, idade avanada, transplantes,
Aids, diabetes, neutropenia, hospitalizao e/ou antibioticoterapia por perodo prolongado alm de procedimentos invasivos (cateterismo, implantes e
vlvulas). Em alguns casos, difcil a distino entre colonizao e infeco.
Embora a maioria das infeces graves por corinebactrias multiresistentes
seja atribuda ao C. jeikeium, tm sido descritos quadros de infeces por
amostras multiresistentes de outras espcies, incluindo C. urealyticum, C.
striatum, C. amycolatum, C afermentans e C. pseudodiphtheriticum, particularmente em hospitais.
Alm dos mtodos bioqumicos convencionais encontram-se comercialmente disponveis sistemas semiautomatizados de identificao. Mtodos
moleculares geralmente so utilizados em Laboratrios de Referncia.
As principais espcies de corinebactrias estabelecidas como patgenos humanos esto apresentadas no quadro a seguir.
88 OPAS/OMS Anvisa/MS
Micro-organismos
C. diphtheriae*
C. ulcerans
C. jeikeiumMR
C. urealyticumMR*
C. striatumMR*
C. amycolatumMR
C. afermentans
C. minutissimum*
C. pseudodiphtheriticum*
C. xerosis*
Catalase
Metabolismo
Oxidativo/
fermentativo
Lipofilia
Reduo
Nitrato
Hidrlise
Ureia
Hidrlise Esculina
PYZ
Glicose
Maltose
Sacarose
CAMP
C. afermentans
C. amycolatum
+
+
O
F
v
-
+
+
v
-
C. diphtheriae
C. jeikeium
C. minutissimum
C. propinquum
C. pseudodiphtheriticum
+
+
O
O
+
+
v
+
C. pseudotuberculosis
C striatum
C. ulcerans
C. urealyticum
C. xerosis
+
+
O
F
+
-
+
-
+
+
Espcies
Testes
Outros
DNAse
DNAse
Hemlise*;
- DNAse +;
Glicognio V
DNAse
- GFrutose ;
alactose +
Frutose +;
Tirosina +
- Tirosina +
- DNAse
DNAse
Rev hemlise*;
Glicognio v Tirosina +
Hemlise*;
DNAse +;
Rev
Glicognio +;
Gelatina +;
- DNAse
- DNAse
PYZ, Atividade pirazinamidsica; +, positivo; -, negativo; V, varivel; Rev, reao reversa; *, hemcias carneiro
OPAS/OMS Anvisa/MS 89
90 OPAS/OMS Anvisa/MS
Quadro clnico de
difteria clssica
A faringite produz sintomas como dor de garganta, febre baixa, tosse, fadiga,
dificuldade em deglutir e nuseas. As crianas podem ter febre alta. Os ganglios
linfticos regionais (no pescoo) ficam muito inchados. Sintomas da intoxicao
sistmica podem incluir miocardite, hipotenso, paralisia de msculos e de
nervos sensitivos.
Coleta de material
Isolamento
Bacterioscopia
Identificao
OPAS/OMS Anvisa/MS 91
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
Os micro-organismos podem ser encontrados colonizando a superfcies cutneo-mucosas dos indivduos hospitalizados e de integrantes do corpo clnico.
O isolamento de amostras pode ocorrer a partir de diversos materiais clnicos,
principalmente de feridas cirrgicas, sangue e fluido cerebrospinal.
Frequentemente ocorre transmisso nosocomial inclusive de amostras multirresistentes que apresentam sensibilidade apenas a vancomicina.
As colnias so puntiformes, branco-acinzentadas e lipoflicas (crescem em
caldo BHI apenas na presena de 1% de Tween 80); metabolismo oxidativo
glicose em base CTA (cystine trypticase gar) semi-slido; urease e esculina
negativas e PYZ-positivas.
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
92 OPAS/OMS Anvisa/MS
Micro-organismo frequentemente encontrado na microbiota de naso e orofaringe de humanos, tem sido relacionado principalmente com quadros de infeces do trato respiratrio inferior em pacientes imunocomprometidos incluindo
portadores do vrus HIV, diabetes, transplantados ou portadores de tumores
malignos, alm de doenas coronarianas, inclusive em ambiente hospitalar. O
micro-organismo tambm foi relacionado com processos infecciosos do trato
respiratrio inferior em indivduos imunocompetentes.
O estabelecimento do potencial patognico do C. pseudodiphtheriticum baseado
em critrios adotados para outros patgenos do trato respiratrio inferior.
Exibem colnias esbranquiadas e ligeiramente secas; hidrolisam a ureia e
reduzem o nitrato, mas so incapazes de produzir cidos a partir de carboidratos
comumente testados.
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
OPAS/OMS Anvisa/MS 93
6.3.1.9 C. Afermentans
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
6.3.2
Arcanobacterium haemolyticum
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
6.3.3
Gardnerella vaginalis
Caractersticas gerais
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
94 OPAS/OMS Anvisa/MS
6.3.4
Rothia dentocariosa
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
6.3.5
Oerskovia turbata
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
6.3.6
Cellulosimicrobium cellulans
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
Listeria monocytogenes
Caractersticas gerais
Importncia clnica
Importncia clnica particularmente para idosos e indivduos imunocomprometidos causando meningite, encefalite ou septicemia. Em pacientes grvidas, a
infeco pode causar amnionite, infeco do feto com aborto, parto prematuro,
meningite neonatal e sepse neonatal. Surtos epidmicos podem ocorrer e esto
geralmente relacionados com a contaminao de alimentos.
OPAS/OMS Anvisa/MS 95
Isolamento e Identificao
6.4.2
Erysipelothrix rhusiopathiae
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
96 OPAS/OMS Anvisa/MS
Gram
Catalase
Mobilidade
25C
Hemlise
CAMP
NaCl 6,5%/
Esculina
Corynebacterium
bacilos e coco-bacilos
pleomrficos
v/v
Enterococcus
cocos ou coco-bacilos em
cadeias
+/+
Erysipelothrix
rhusiopathiae1
coco-bacilos ou
filamentos longos
alfa
-/-
Kurthia2
-/-
Lactobacillus
coco-bacilos e cadeias
longas
-/-
Listeria
monocytogenes
beta
+/+
Streptococcus
beta hemolticos
cocos em cadeias
beta
-/+
-/-
1, H2S positivo; 2, glicose negativo; 3, S. agalactiae; -, negativo; +, positivo; V, varivel; Rev, reao reversa; *,
sangue de coelho ou humano a 3%
Lactobacillus
Os lactobacilos fazem parte da microbiota da boca, intestino e flora vaginal
(bacilo de Doderlein) humana. So catalase negativos, imveis e apresentam capacidade de crescer em gar sangue e gar chocolate como colnias
puntiformes. Esses micro-organismos tm sido associados frequentemente
a quadros de endocardite e bacteremia, levando a bito aproximadamente 30% dos pacientes. Casos de peritonite, abscessos e meningites tambm
tm sido relatados.
6.6.2
Mobilluncus
Anaerbios estritos, curvos, mveis encontrados no trato genital e reto de
humanos. Os micro-organismos podem ser encontrados juntamente com G.
vaginalis em pacientes com quadros de vaginose.
6.6.3
OPAS/OMS Anvisa/MS 97
Bacillus
O gnero Bacillus compreende cerca de 259 espcies de bacilos aerbios ou
anaerbios facultativos, formadores de endosporos, gram-lbeis; a maioria
catalase positiva. Todos exibem mobilidade, exceto as espcies B. anthracis
e B. mycoides.
B. anthracis, B. subtilis, B. licheniformis e B. megaterium expressam cpsula polipeptdica na presena de on bicarbonato (HCO3-) e em anaerobiose ou em
atmosfera de CO2.
As formas vegetativas so retas largas, podendo ser alongadas, dispostas
isoladamente ou em cadeias. A morfologia e a disposio intracitoplasmtica dos esporos so teis para sua classificao:
cilndricos, ovais, redondos, e riniformes
central, subterminal, terminal
dilatando ou no a clula vegetativa de origem
A maioria dos micro-organismos aerbios formadores de esporos so saprfitas amplamente distribudos na natureza. Entretanto, algumas espcies so
oportunistas e outras so patgenos obrigatrios para animais, incluindo os
humanos. Os micro-organismos do gnero Bacillus so encontrados principalmentemente no solo, gua, matria orgnica animal e vegetal, em condies ambientais bastante variadas, temperatura, umidade, salinidade e pH.
Espcie
Quadros clnicos
B. anthracis
B. cereus
B. circulans
B. coagulans
B. licheniformis
B. subtilis
B. thuringiensis
98 OPAS/OMS Anvisa/MS
Clostridium
Endosporos em aerobiose
Endosporos em aerobiose
Catalase positivos
Catalase negativos
Espcies
Mobilidade
Hemlise
Penicilina
Citrato
Lecitinase
B. anthracis
branco
acinzentado
sensvel
(+)
B. cereus
esverdeado
claro
resistente
B. mycoides
rizides/
espalhando
(+)
resistente
B. thuringiensis
esverdeado
claro
resistente
OPAS/OMS Anvisa/MS 99
Caractersticas gerais
Carbnculo, carbnculo hemtico, antraz ou ainda antrax foi no passado causa importante de mortalidade em herbvoros domsticos como vacas, cabras, ovelhas.
Atualmente as infeces de carbnculo so raras nos pases desenvolvidos, mas
no excepcionais nos subdesenvolvidos. O nmero de casos foi reduzido significativamente em decorrncia de imunizao e melhoria das condies de higiene.
Os casos humanos de carbnculo devem-se normalmente exposio a animais
infectados ou a carne ou pele infectada. As vtimas tm profisses relacionadas com
a manipulao de animais ou de produtos derivados (trabalhadores da rea rural
e veterinrios; manuseio industrial de ossos, l, crina, e outros produtos animais).
Na comunidade, o risco de infeco preocupante nas regies do globo potencialmente ameaadas por ataques biolgicos.
Importncia clnica
6.8 Actinomicetos
BGPs que apresentam como caracterstica em comum a produo de filamentos ou
hifas vegetativas, sendo que alguns tambm apresentam hifas areas, semelhanas
na composio e padro de cidos graxos de parede celular.
O gnero Oerskovia, embora apresente hifas vegetativas, foi analisado juntamente
com o grupo de micro-organismos corineformes.
Nesta oportunidade sero abordados os gneros Nocardia, Rhodococcus e Streptomyces. Dentre os demais actinomicetos raros ou de menor importncia clnica esto includos os gneros Gordonia, Tsukamurella, Actinomadura e Nocardiopsis.
Informaes importantes sobre os actinomicetos
Para a adequada caracterizao dos actinomicetos que apresentam semelhana morfolgica com os fungos, importante considerar os seguintes aspectos:
100 OPAS/OMS Anvisa/MS
Condio
AAR
fraca ou parcial
Metabolismo
glicose
Crescimento em
lisozima
Gordonia
oxidativo
Nocardia
oxidativo
Rhodococcus
oxidativo
Oerskovia
fermentativo
Rhotia
fermentativo
Streptomyces
oxidativo
Tsukamurella
oxidativo
Gnero
6.8.1
Nocardia
Caractersticas gerais
Importncia clnica
O nmero de casos de nocardioses humanas vem aumentando significativamente, especialmente entre indivduos imunocomprometidos apresentando
doena pulmonar, neoplasias, infeces pelo vrus HIV, histria prvia de alcoolismo, cirurgia, trauma, transplantes ou uso de corticosterides. O maior nmero de casos clnicos tem sido observado em pacientes adultos, predominantemente do sexo masculino (razo Masc:Fem = 3:1), a partir da terceira dcada
de vida. As manifestaes clnicas, severidade e/ou prognstico da doena so
extremamente variveis e relacionados com via de infeco e eficincia do sistema imunolgico do indivduo. Na maioria dos casos de nocardioses ocorre manifestao clnica disseminada.
Indivduos imunocomprometidos podem desenvolver doena de evoluo progressiva e doena disseminada ou pulmonar crnica, por vezes apresentando
pneumonia necrotizante e cavitao pulmonar.
As nocardioses cutneas so usualmente apresentadas em quatro formas clnicas: micetoma, infeco linfocutnea, infeco cutnea superficial (abscesso
ou celulite) e infeco cutnea secundria com doena disseminada freqentemente de carter crnico e de difcil diagnstico.
Em indivduos imunocompetentes, foram observados quadros de endocardite,
abscesso pulmonar e cerebral em adultos, alm de quadros de linfadenite
necrotizante em crianas e pneumonia em neonato.
O maior nmero de bitos ocorre em pacientes apresentando quadros de
abscesso cerebral, infeces sistmicas e pneumonias.
As nocardias so transmitidas principalmente por inalao e mais raramente
atravs de inoculao direta na pele. A doena cutnea primria pode ocorrer
a partir de feridas contaminadas com resduos do solo. Embora a doena esteja
mais relacionada distribuio comunitria, surtos nosocomiais de nocardioses
em pacientes imunocomprometidos tambm tem sido observados. No
ambiente hospitalar, parece ocorrer a disseminao bacteriana por vias areas e
transmisso pessoa a pessoa, inclusive ps-cirrgica.
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
Quando colhido o material por puno, bipsia ou mesmo swab da leso profunda, deve ser processado rapidamente; existe uma caracterstica do material
descrita como grnulos de enxofre, especialmente nos micetomas.
A bacterioscopia pode revelar bacilos irregulares com ramificaes e parcialmente ou fracamente lcool-cido resistentes pelo Ziehl ou Kinyoun. Cortes
histolgicos corados pela hematoxilina-eosina caracterizam os grnulos, mas
no os filamentos da bactria. O Gram ou a colorao de metenamina prata de
Gomori so teis.
A presena de hifas areas diferencia as nocardias dos outros gneros relacionados - Corynebacterium, Gordonia, Mycobacterium, Rhodococcus e Tsukamurella. As micobactrias de crescimento rpido podem apresentar hifas de substrato curtas ramificadas em ngulo agudo, porm sem ramificaes secundrias,
enquanto as nocardias exibem hifas complexas com ramificaes em angulo
reto e com ramificaes secundrias.
No isolamento de nocardias podem ser utilizados meios de cultivo usualmente
empregados na rotina laboratorial (gar sangue, gar chocolate, gar Sabouraud
dextrose, gar seletivo para Legionella e Lowenstein Jensen), sendo necessrio
tempo de incubao prolongado (4 a 14 dias).
Com exceo da N. asteroides, a maioria das nocardias apresenta beta-hemlise
em gar sangue de carneiro. Crescem em meio de parafina (como fonte nica
de carbono), juntamente com Rhodococcus e algumas micobactrias. Uma caracterstica importante a variedade na cor das colnias lisas ou rugosas, indo
do branco giz ao amarelo, salmo, alaranjado e violeta, dependendo da espcie,
tempo de incubao e do meio de cultivo utilizado.
O envio da amostra clnica a um Laboratrio de Referncia pode ser requerido
para a identificao da espcie.
Catalase
Cultivo
35/45oC
Lisozima
Esculina
Glicose
Galactose
Inositol
Trealose
Gelatina
Xantina
Hipoxantina
N. nova
N. farcinica
N. asteroides
salmo; laranja
N. brasiliensis
amarelo; laranja
N. otitidiscaviarium
marrom claro
Nocardia
Pigmento*
6.8.2
Streptomyces
Importncia clnica
Isolamento e Identificao
6.8.3
Rhodococcus
Importncia clnica
R. equi est relacionado com infeces em humanos, principalmente em indivduos imunocomprometidos, especialmente entre pacientes que apresentavam
sndrome da imunodeficincia adquirida (SIDA), neoplasias ou terapias imunossupressoras.
Quadros de pneumonias causados pelo R. equi podem surgir como o primeiro
sintoma de infeco pelo HIV. As manifestaes clnicas pulmonares incluem abscessos pulmonares, pneumonia piogranulomatosa e cavitao de aspecto semelhante tuberculose pulmonar, sendo comum a presena de febre, tosse e dores
no peito. Alguns autores sugerem que a deteco de infeco por R. equi deveria
ser rotineiramente utilizada como um critrio para o diagnstico de SIDA.
Outras patologias humanas, tais como malacoplaquia pulmonar, abscessos cerebrais e na tireide, mediastinite, pericardite, linfadenite, osteomielite, endoftalmite e infeco de feridas, alm de adenite retroperitoneal, com diarreia sanguinolenta e/ou abscesso no psoas, tambm podem estar associadas infeco
por R. equi.
Infeces pulmonares, associadas ou no a acometimentos extrapulmonares, so
observadas na maioria dos casos de infeco em indivduos imunocomprometidos
e imunocompetentes. Entretanto, leses exclusivamente extrapulmonares
ocorreram principalmente entre indivduos imunocompetentes.
Isolamento e Identificao
Isolamento e Identificao
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Captulo 7:
Fastidiosos
Captulo 7: Fastidiosos
7.1 Introduo
7.1.1
7.1.2
Captulo 7: Fastidiosos
Hospedeiro principal
Via de transmisso
Bordetella pertussis/parapertussis
Homem
Bartonella spp.
Gatos, humanos
infectados,outros
desconhecidos.
Brucella spp.
Mamferos domsticos
Francisella spp.
Animais silvestres
Haemophilus spp.
Homem
Legionella spp.
Meio ambiente/gua
Pasteurella spp.
Animais domsticos/silvestres
Fonte
Actinobacillus actinomycetemcomitans
Cardiobacterium hominis
Capnocytophaga spp.
Chromobacterium violaceum
gua e solo
Eikenella corrodens
Kingella spp
Streptobacillus spp.
Bactria
Material clnico
Meio especfico
Incubao
Bordetella pertussis
Swab de nasofaringe
7 dias
Bartonella spp.
5 a 15 dias
Brucella spp.
Rotina de
Hemocultura ou meio
de Castaeda
At 30 dias
Francisella spp.
Gnglios, bipsias
gar chocolate
enriquecido
7 dias
Haemophilus spp.
Sangue, LCR
gar chocolate de
cavalo
48-72 h at 7 dias
Legionella spp.
Secrees ou aspirados de
trato respiratrio inferior
7 a 14 dias
Pasteurella spp.
24 a 72 h
7.1.4
Bactrias
Oxidase
Catalase
Motilidade
gar
Sangue
Actinobacillus
actinomycetemcomitans
neg/+
fraco
neg
Bartonella spp.
neg
neg
varivel
Bordetella pertussis
varivel
neg
neg
neg
Brucella spp.
neg
Capnocytophaga spp.
neg
neg
neg
Cardiobacterium hominis
neg
neg
Chromobacterium spp
Eikenella corrodens
neg
neg
neg
fraco
neg
neg
Chocolate
+
7.2 Bartonella
A classificao taxonmica dos membros do gnero Bartonella ainda no definitiva
e agrupa as espcies B. bacilliformis, B. quintana, B. henselea, B. elizabethae e Afipia felis.
Captulo 7: Fastidiosos
B. bacilliformis - o agente etiolgico da verruga peruana (febre de Oroya), doena geograficamente restrita regio dos Andes, caracterizada por profunda anemia,
trombocitopenia, adenopatia, mialgia, delrio, coma e alta mortalidade.
B. quintana - causa de doena febril que afetou soldados na I Guerra Mundial, conhecida como febre das trincheiras, e relacionada picada por piolhos infectados e
m higiene. Caracterizada por febre e bacteremia com durao varivel. Casos associados infeco por HIV foram relatados.
B. henselae - pode causar bacteremia, principalmente em imunossuprimidos, bem
como uma sndrome conhecida como doena da arranhadura do gato. O quadro de
bacteremia caracteriza-se de forma insidiosa por fadiga, dores no corpo, perda de
peso e febre progressiva. A doena da arranhadura do gato manifesta-se inicialmente
com uma ppula ou pstula localizada cerca de uma semana aps a leso causada
pelo animal (gato ou co que arranha ou morde). Aps 1 a 7 semanas ocorre adenopatia regional. Um tero dos pacientes apresenta febre e um em seis apresenta supurao do linfonodo afetado. A maioria dos pacientes evolui sem outros sintomas.
A cura espontnea ocorre entre 2 a 4 meses do incio da infeco. B. quintanae e B.
henselae podem causar um quadro de angiomatose bacilar caracterizado por proliferao neovascular envolvendo pele, gnglios e fgado. A infeco por B. elizabethae
ainda pouco conhecida.
Afipia felis - foi considerada por vrios anos como sendo o agente etiolgico da doena da arranhadura do gato, que hoje atribuda B. henselae. Seu papel na patognese dessa doena ainda no est bem esclarecido.
Isolamento - As espcies do gnero Bartonella podem ser isoladas de hemoculturas,
leses cutneas, bipsias e gnglios.
O SPS (polianetol sulfonato) que o anticoagulante comumente usado em hemoculturas inibidor de espcies do gnero Bartonella, por isso deve-se usar outro anticoagulante.
Quando h suspeita clnica, deve-se incubar por pelo menos sete dias, at 40 dias.
Vrios meios enriquecidos podem permitir o crescimento das espcies do gnero
Bartonella. O caldo infuso corao de preparo recente, com 5-10% de sangue desfibrinado de coelho ou cavalo adequado, bem como o gar chocolate.
Essas espcies podem crescer no meio de cultura do sistema Bactec, todavia o alarme
de CO2 que indica o crescimento bacteriano pode no ser acionado. Bartonella spp.
exige atmosfera mida e temperatura de 35-37oC por 3 a 4 semanas. B. bacilliformis e
Afipia fellis crescem melhor entre 25 a 30oC.
116 OPAS/OMS Anvisa/MS
Catalase
Oxidase
Ureia
Flagelo
Motilidade
B. baciliformis
neg
neg
B. quitanae
neg
neg
neg
B. henselae
neg
neg
neg
B. elizabetae
neg
neg
neg
neg
neg
A. felis
Caractersticas gerais
O gnero Bordetella compreende as espcies B. pertussis, responsvel pela
coqueluche ou tosse comprida, e B. parapertussis, com quadro clnico semelhante ao da coqueluche, mas em geral menos severo. Ambas as espcies so exclusivamente patognicas para humanos. A B. bronchiseptica e B.
avium so bactrias comensais de mamferos e aves, causando infeces em
ces (tosse dos canis) e a B. avium causa rinotraquete em perus. So patgenos oportunistas para humanos que entram em contato com esses animais.
Foram classificadas mais recentemente como pertencentes ao gnero Bordetella as espcies B. holmesii e B. hinzii.
7.3.2
Importncia clnica
A Bordetella pertussis causa a coqueluche em crianas no vacinadas, com
quadro clnico bastante caracterstico: Perodo prodrmico que inicia 5 a 10
dias aps a aquisio do agente, com sintomas semelhantes a um resfriado
ou gripe. Essa fase altamente contagiosa e os sintomas so inespecficos.
Segue-se o perodo paroxstico, com quadro de tosse convulsiva, persistente
e caracterstica, seguida de inspirao ruidosa. Podem ser acompanhadas de
cianose e vmito e vrias complicaes, tal como convulses, insuficincia
respiratria, encefalopatia e infeces secundrias. A convalescena ocorre
cerca de quatro semanas aps incio dos primeiros sintomas.
OPAS/OMS Anvisa/MS 117
Captulo 7: Fastidiosos
7.3.3
7.3.4
Isolamento e Identificao
As espcies do gnero Bordetella so cocobacilos Gram negativos pequenos
e aerbios estritos. Na colorao de Gram, a safranina deve ser deixada por
2 minutos. Para B. pertussis e B. parapertussis os Laboratrios de Referncia
devem dispor de identificao sorolgica para acelerar a identificao.
Provas diferenciais para espcies de Bordetella
Espcies
Oxidase
Motilidade
Ureia
gar Sangue e
Chocolate
B & G ou
Regan-Lowe
Salmonella
-Shigella
B. pertussis
neg
neg
neg
+ 3-6 dias
neg
B. parapertussis
neg
neg
+ em 24h
+ 2-3 dias
neg
B. bronchiseptica
+ em 4h
+ 1-2 dias
B. avium
+2
neg
+ 1-2 dias
B. holmesii
neg
neg
neg
+ 1-2 dias
B. hinzii
varivel
+ 1-2 dias
1 - necessita de meio especfico: Bordet & Gengou (infuso de batata + glicerol + sangue de carneiro)
ou Regan Lowe. 2 - mais evidente a 25C
Importncia clnica
A brucelose pode ser contrada atravs da ingesto de leite e seus derivados
ou de carne de mamferos infectados. Profissionais como veterinrios, aougueiros ou trabalhadores rurais que manipulam carne e sangue desses animais esto sujeitos infeco. H relatos de contrao de brucelose devido
a acidentes em laboratrios que trabalham com Brucella sp. A hemocultura
exige um tempo maior do que 5 a 7 dias de incubao. importante a informao de suspeita clnica para orientar o laboratrio na pesquisa e caracterizao do agente.
7.4.2
7.4.3
Isolamento e Identificao
As espcies do gnero Brucella so aerbios OF oxidativos, crescem nos frascos de hemocultura, meio de Thayer Martin, gar sangue, gar chocolate
tendo como gar base Tripticase Soy gar ou Brucella gar, mas no cresce em Mc Conkey. O crescimento visvel em 48 a 72 horas aps inculo.
As colnias so pequenas, brancas a creme, e atravs da colorao de Gram
visualizam-se coco-bacilos bem finos e pequenos.
Espcies mais importantes so:
melitensis, abortus, suis e canis.
OPAS/OMS Anvisa/MS 119
Captulo 7: Fastidiosos
Bactria
Oxidase
Motilidade
Ureia
gar Sangue
Mac Conkey
Brucella spp.
neg
neg
Bordetella bronchiseptic
neg
Acinetobacter spp.
neg
neg
varivel
Moraxella phenylpyruvica
neg
Pasteurella spp.
neg
varivel
neg
Haemophilus influenzae
neg
varivel
neg
neg
7.5.1
Fontes de transmisso
Centenas de espcies de animais silvestres, bem como algumas espcies domsticas (incluindo ces, gatos e pssaros), podem ser portadores desse agente. Cerca de uma dezena de espcies diferentes de inseto servem de vetores. A
transmisso pode ocorrer tambm por contato direto com animais infectados
atravs de sua mordida, exposio ao sangue, carne contaminada e eventualmente gua contaminada por esses animais, e at mesmo pela inalao de
aerossis deixados pelos animais infectados.
7.5.2
Quadro clnico
A bactria extremamente infectante, sendo que o material clnico suspeito
deve ser manipulado de acordo com as prticas de biossegurana nvel 2,
mas culturas puras dessa espcie devem ser manipuladas de acordo com as
prticas de biossegurana nvel 3. A dose infecciosa de apenas 10 clulas
injetadas por via subcutnea ou 25 clulas inaladas. Logo aps a penetrao
do agente, o que ocorre em geral pela pele, aparecem sintomas semelhantes
aos da gripe: febre, tremores, cefaleia e mialgia. Aps um perodo de incubao de 2 a 10 dias, forma-se uma lcera no local de penetrao, que pode
persistir por meses. Os linfonodos que drenam a regio inicialmente afetada
ficam entumecidos e ento pode ocorrer necrose do tecido. Se a bactria
conseguir atingir a circulao sangunea, o quadro de endotoxemia tpico se
manifesta. Esses casos so pouco frequentes e ocorrem quando o inculo for
grande ou o paciente imunocomprometido. A mortalidade alcana 60%,
ocorrendo toxemia, cefaleia intensa, febre elevada e contnua, com delrios,
prostrao e choque.
A forma lcero-ganglionar ocorre em cerca de 80% dos casos relatados. A
lcera endurada, eritematosa, e de difcil cicatrizao. Outras formas relatadas so a culo-ganglionar, a ganglionar sem lcera, a pleuropulmonar e
a gastrointestinal.
7.5.3
Captulo 7: Fastidiosos
7.5.4
Isolamento e Identificao
A bacterioscopia de material clnico de leses ou bipsias raramente ajuda,
pois o micro-organismo muito pequeno e cora mal pelo mtodo de Gram,
tornando difcil a sua observao por microscopia ptica. Esse agente deve
ser considerado sempre que houver doena associada a picada de carrapato
e formao de lcera com comprometimento ganglionar. Entretanto, o diagnstico microbiolgico difcil, sendo na maioria das vezes feito com base
em testes de aglutinao em amostras pareadas colhidas com intervalo de 2
a 3 semanas e armazenadas a - 20oC.
7.6 Haemophilus sp
Diferentes espcies pertencentes ao gnero Haemophilus podem ser encontradas
como parte da microflora da nasofaringe e orofaringe em at 50% da populao. As
espcies so geralmente no capsuladas. H. influenzae pode causar vrios tipos de infeco, sendo H. influenzae do tipo b a sub-espcie mais virulenta. A partir do incio do
sculo XXI, com o aumento da vacinao contra Haemophilus influenzae, houve uma
drstica reduo na incidncia dessa bactria nas populaes vacinadas.
Doenas causadas pelo H. influenzae tipo b ocorrem principalmente na infncia, sendo
meningite, epiglotite, pericardite, pneumonia, artrite sptica, osteomielite, celulite
facial. Mais raramente, H. influenzae pode causar peritonite e infeco urinria em
crianas menores que cinco anos. As doenas causadas por cepas no b e no tipveis (em maiores de 9 anos e adultos associados a doena de base predisponente,
como neoplasia, AIDS, alcoolismo, DPOC) incluem traqueobronquite e pneumonia,
bacteremia, conjuntivite, otite (sendo a segunda espcie mais prevalente, depois do
pneumococo) e sinusite.
7.6.5
Haemophilus aphrophilus
Essa espcie faz parte da microbiota do trato respiratrio superior, especialmente em placas dentrias e no sulco gengival; pode causar endocardite e
abscesso cerebral e mais raramente meningite, pneumonia e bacteremia em
pacientes com comprometimento imunolgico. A endocardite no est necessariamente relacionada a uma leso valvular prvia, mas a associao com
embolia arterial frequente. Existem relatos tambm de isolamento em otites,
sinusites e epiglotites. Essa espcie cresce bem em gar chocolate no isolamento primrio e em gar sangue de carneiro nos subcultivos sem exigncia
de fatores X e V, mas as colnias so muito pequenas de cor amarelada, tm
cheiro de cola e necessitam de 48 a 72h para boa visualizao. Em caldo, essa
espcie tem a caracterstica de aderir-se s paredes do tubo, assim como Actinobacillus actinomycetemcomitans o faz.. No crescem em meio MacConkey.
7.6.6
Haemophilus ducreyi
o agente etiolgico do cancro mole, que uma afeco de transmisso
exclusivamente sexual, mais frequente nas regies tropicais. Caracteriza-se
por leses mltiplas (podendo ser nica) e habitualmente dolorosas. Denomina-se tambm de cancride, cancro venreo, cancro de Ducrey. O perodo
de incubao geralmente de 3 a 5 dias, podendo-se estender por at 2
semanas. O cancro mole muito mais frequente no sexo masculino. Devido
ao declnio da incidncia da infeco, contaminao das leses com flora
genital, que inibe e/ou dificulta o isolamento da espcie e ao frequente uso
prvio de antibiticos o isolamento dessa bactria difcil.
O material para o isolamento deve ser colhido de lceras genitais, removendo-se previamente a secreo superficial ou lavando-a com salina estril e
utilizando um swab. Recomenda-se semear imediatamente e fazer em paralelo um esfregao a ser observado por microscopia. Em geral de difcil
cultivo. Emprega-se gar chocolate de cavalo com base GC ou meio Mueller
Hinton. O acrscimo de vancomicina pode ajudar a inibir bactrias Gram-positivas. A colorao de Gram em esfregaos do material da base da lcera, ou
do material obtido por aspirao do bubo permite a observao de bacilos
Gram-negativos intracelulares dispostos em cadeias, geralmente paralelas,
acompanhados de cocos Gram positivos. A colocao de um disco de vancomicina pode ajudar a inibir bactrias Gram positivas. Na bacterioscopia, aparecem coco-bacilos Gram lbeis agrupados e em cadeias como cardumes.
7.6.7
Captulo 7: Fastidiosos
Em amostras de LCR, pode ser til a utilizao de tcnicas de soroaglutinao com partculas de ltex, mas a confirmao bioqumica e sorolgica em laboratrio de referncia necessria.
O antibiograma deve ser realizado em meio padronizado HTM (vide
captulo sobre meios de cultura).
Verificar hemlise em gar sangue de cavalo GLI = glicose SAC = sacarose
LAC = lactose
Obs.: Fermentao de aucares com base CTA e 1% de acar adicionado de
fator X e V (vide cap. meios de cultura); vide leitura de fatores X e V
7.6.8
Espcies
Fator X
Fator V
Hemlise *
Ureia
Indol
GLI
SAC
LAC
Catalase
H. influenzae
neg
neg
varivel
neg
neg
H. haemolyticus
neg
varivel
neg
neg
H. parainfluenzae
neg
neg
varivel
varivel
neg
varivel
H. ducreyi
neg
fraca
neg
neg
neg
neg
neg
neg
H. ducreyi
neg
neg
neg
neg
neg
neg
Fator V
Fator X
Fator V X
7.6.9
Prova do satelitismo
Semear com swab uma suspenso em salina cerca de 1 a 2 da escala MacFarland no centro de uma placa de gar sangue de carneiro.
7.7 Legionella sp
7.7.1
Importncia clnica
Pneumonia com ou sem sepsis a manifestao clnica mais importante,
podendo ocorrer tambm infeces de partes moles e sinusite. Est em geral associada a surtos cuja fonte a gua contaminada com esse agente.
Largamente distribuda na natureza em ambiente mido e gua potvel e
ocasionalmente em chuveiros. Est associada presena de outras bactrias
e amebas de vida livre na gua. A presena de bactrias do gnero Legionella
em material clnico humano est invariavelmente associada doena clnica.
7.7.2
7.7.3
Materiais recomendados
Escarro.
Aspirado traqueal e outros que nesse caso especfico esto indicados
como teis.
Lavado/escovado bronco-alveolar.
Bipsia pulmonar ou outros tecidos e aqueles obtidos em autpsia.
LCR e outros lquidos de derrame.
Urina (pesquisa de antgenos) conservar a 20oC.
Captulo 7: Fastidiosos
7.7.4
Para transporte: usar frasco estril com gua destilada estril, mas no
salina, que pode inibir o cultivo. Sempre que possvel concentrar os materiais por centrifugao, evitando formar aerossis.
Teste
Sensibilidade
Especificidade
Observao *
Cultura
70%
100%
Mtodo de escolha
55-90%
85-99%
Imunofluorescncia ndireta
70-80%
>95%
7.7.5
7.7.6
7.7.7
7.7.8
Identificao
So bacilos Gram negativos finos que se coram fracamente pela fucsina ou
safranina da colorao de Gram. Aps repiques, tornam-se filamentosos.
7.7.9
Caractersticas e procedimentos
Aerbio estrito.
No primeiro isolamento a presena de l-cistena imprescindvel.
No meio BCYEa o crescimento pode ser observado a partir do 3 ao 5 dia
a 35C.
7.8 Pasteurella SP
A infeco pelo gnero Pasteurella constitui uma zoonose, pois se trata de bactria
que faz parte da microbiota oral e do trato respiratrio superior de alguns mamferos
no humanos e aves. As diferentes espcies esto associadas a infeces em humanos relacionadas mordida dos animais descritos abaixo ou com o contato com o
sangue, carne, carcaa, ou outros materiais de animais infectados/colonizados.
A P. multocida a espcie mais comumente isolada em material clnico humano, em
geral associada mordida ou arranhadura de ces e gatos. Caracteriza-se pela formao de abscessos ou celulite e, eventualmente, osteomielite. Infeces respiratrias
podem ocorrer, incluindo pneumonia lobar, com ou sem derrame e empiema. Em pacientes imunocomprometidos, com cirrose ou neoplasias essa espcie pode causar
bacteremia e septicemia.
Captulo 7: Fastidiosos
Doenas Relacionadas
P. multocida
P. pneumotropica
P. haemolytica
P. aerogenes
7.8.1
Diagnstico de zoonoses
Para facilitar o isolamento e identificao de espcies do gnero Pasteurella,
muito importante a informao clnica, pois deve-se tambm considerar
outras zoonoses tal como brucelose, micobacterioses, tularemia, leptospirose e yersiniose.
A) Caracterizao microbiolgica
Coco-bacilo ou bacilo Gram negativo podem ser capsulados.
Anaerbio facultativo (fermentador) TSI cido/cido.
Oxidase positiva em colnias isoladas em gar sangue ou gar chocolate.
Catalase positiva.
Motilidade negativa.
Indol positivo.
Sacarose positiva.
Muitas espcies so ornitina positivas.
Todas so oxidase positiva, catalase positiva e fermentadoras da glicose.
Provas diferenciais das espcies de Pasteurella sp. de importncia clnica
Espcie
Hemlise
MacConkey
Indol
Ureia
Ornitina
OF Glicose
P. multocida
neg
neg
positivo
neg
positivo
F sem gs
P. pneumotropica
neg
positivo
positivo
positivo
F gs V
P. haemolytica
positivo
V 72%
neg
neg
F sem gs
P. aerogenes
neg
positivo
neg
positivo
F sem gs
neg
neg
positivo
positivo
positivo
F sem gs
A. actinomycetemcomitans
Cardiobacterium hominis
E. corrodens
Kingella spp.
Bactrias
Oxidase
Catalase
CO2
MacConkey
Ureia
Indol
Glic
TSI
Motil
Actinobacilus1
neg ou +
fraco
varivel
neg
neg
ac/ac
neg
Cardiobacterium
neg
neg
neg
ac/ac
neg
Eikenella
neg
neg
neg
neg
neg
alcalino
neg
Kingella
neg
neg
neg
neg
alcalino
neg
Kingella
neg2
neg
neg
neg
neg
No
cresc.
neg
Streptobacillus
neg
neg
neg
neg
neg
No
cresce
neg
Chromobacterium
varivel
neg
neg
neg
ac/ac
Captulo 7: Fastidiosos
Cardiobacterium sp
Eikenella sp
Kingella sp
Pequenos cocobacilos
Capnocytophaga sp
Streptobacillus sp
Filamentos longos
Chromobacterium sp
7.10 Capnocytophaga sp
As espcies Capnocytophaga gingivalis, C. granulosa, C. haemolitica, C. ochracea e C. sputigena fazem parte da microbiota da cavidade oral humana, enquanto outras espcies
podem ser encontradas na boca de animais domsticos. O isolamento de Capnocytophaga sp. ocorre com maior frequncia em hemoculturas, em pacientes neutropnicos com mucosite, mas esto tambm implicadas na doena periodontal juvenil (C.
gingivalis e C. ochracea), periodontite em adultos (C. sputigena) e isoladas em placas
dentais supragengivais em adultos (C. granulosa e C. haemolytica). As doenas localizadas (ceratites, abscessos e endoftalmites), bem como doenas sistmicas (septicemia,
endocardite, osteomielite), ocorrem em pacientes imunocomprometidos ou no.
7.10.1 Morfologia e cultivo
A morfologia de espcies do gnero Capnocytophaga bem caracterstica,
facilitando a sua identificao, pois lembra um Fusobacterium sp. aerotolerante. Tem as extremidades afiladas e o centro mais largo, podendo ser encurvada e eventualmente cocoide.
Para cultivo, crescem melhor com 5 a 10% de CO2 e em anaerobiose, o que
pode levar confuso com o anaerbio estrito, se no for feita a prova de
crescimento em aerobiose com CO2. Chama a ateno o fato de crescer melhor em gar sangue de carneiro que em gar chocolate sem suplemento de
vitaminas. No crescem em gar MacConkey. O crescimento pode ocorrer
em 24 a 72 h. A colnia chata e sua borda irregular; com incubao mais
longa, nota-se o espalhamento em torno da colnia, semelhante ao que
ocorre com Proteus sp, mas em escala muito reduzida, cerca de 2 a 4 mm de
dimetro. A espcie C. haemolytica apresenta um poder hemoltico discreto,
e a espcie C. ochracea tem cheiro de amndoas.
130 OPAS/OMS Anvisa/MS
7.10.2 Identificao
As Capnocytophaga sp. de origem humana so oxidase e catalase negativas,
produzem cido a partir da glicose em caldo enriquecido com soro de coelho
com inculo denso. So motilidade negativa; indol negativo; lisina, ornitina
e arginina negativas. A maioria esculina positiva (C. gingivalis varivel).
A diferenciao entre as espcies difcil. As amostras de origem animal (C.
canimorsus e C.cynodegmi) so oxidase, catalase e arginina positivas.
7.11 Eikenella sp
Tambm uma espcie que faz parte da microbiota da cavidade oral humana e pode
causar infeces periodontais, sendo encontrada na placa bacteriana subgengival
em adultos com periodontite. Isolada de material obtido do trato respiratrio inferior, abscessos de partes moles, sangue e fludos estreis infectados em casos de infeces pleuropulmonares, infeces ps-cirrgicas, artrite, meningite, endocardite
e septicemia.
7.11.1 Cultivo, bacterioscopia e identificao
anaerbio facultativo, mas cresce melhor em atmosfera com 5% de CO2,
em gar sangue e chocolate, mas no em gar MacConkey. O crescimento
lento, necessitando de 2 a 4 dias para boa visualizao das colnias. Em
cerca da metade das cepas, pode-se observar a corroso do gar, que sua
caracterstica marcante. Produz um pigmento amarelo claro e tem odor de
hipoclorito no gar sangue e gar chocolate.
Na bacterioscopia so observados bacilos delgados ou coco-bacilos Gram
negativos com extremidades arredondadas. Bioquimicamente, caracteriza-se por ser oxidase positiva, catalase negativa, motilidade negativa e ornitina positiva; provas negativas para a utilizao de carboidratos, ureia, indol e
esculina.
7.12 Kingella sp
Espcies do gnero Kingella fazem parte do trato respiratrio e genito-urinrio humanos. K. kingae a espcie mais importante e um patgeno oportunista responsvel
por casos graves de endocardite, osteomielite, septicemia, com provvel porta de
entrada em leses da mucosa da orofaringe. A doena valvular pode estar ou no
associada doena cardaca prvia. A osteomielite ocorre com maior frequncia em
crianas menores de 5 anos. Os quadros spticos podem ser semelhantes doena
meningoccica.
OPAS/OMS Anvisa/MS 131
Captulo 7: Fastidiosos
Hemlise
Indol
Ornitina
Glicose
C. hominis
neg
neg
E. corrodens
neg
neg
neg
K. kingae
neg
neg
Cardiobacterium sp faz parte da microflora do trato respiratrio humano e ocasionalmente do trato urogenital. Est associada quase exclusivamente a quadros de endocardite, precedidos de manipulao dentria.
7.13.1 Cultivo, bacterioscopia e identificao
Cresce em 3 a 5 dias em hemoculturas, mas no causa alteraes no meio
(turvao, hemlise, pelcula ou grumos). Cresce em 3 a 5 dias em 5 a 7%
de CO2, em gar sangue e gar chocolate, mas no em gar MacConkey. As
colnias so branco-amareladas e podem manifestar um pequeno espraiamento, simulando motilidade no gar como o Proteus spp., e eventualmente
pode apresentar corroso do gar.
So bacilos Gram negativos, podendo apresentar pleomorfismo com extremidades dilatadas como bulbos que podem reter corante cristal violeta da
colorao de Gram e apresentam arranjos caractersticos em agrupamentos
de rosetas e formas isoladas como gota dgua ou halteres. Deve-se observar
essas caractersticas para no confundi-los com bacilos Gram positivos.
Uma prova fundamental a pesquisa de produo de indol, que deve ser feita em caldo triptona, com inculo denso, com incubao de 48 h, e extrao
com xilol e uso do reagente de Ehrlich.
132 OPAS/OMS Anvisa/MS
Captulo 7: Fastidiosos
A) Meios de cultivo
Colher sangue para hemocultura com citrato. No devem ser usadas hemoculturas com SPS, pois esse inibidor do S. moniliformis.
Cultivar em meio bifsico TSA/TSB ou gar infuso corao ou caldo infuso
corao, suplementados com 10% de soro de cavalo ou 15% de soro de coelho, e 0,5% de extrato de levedura.
Incubar em jarra de anaerobiose ou 10% CO2 a 35-36oC e umidade.
Aps cerca de trs dias crescem colnias cinzas de 1-2 mm de dimetro, com
consistncia butirosa, podendo surgir colnias variantes com aparncia de
ovo frito como a de colnias de micoplasmas. Em caldo de cultura, crescem
em 2 a 3 dias com aparncia de bolas de plo.
As provas bioqumicas exigem a adio de soro de cavalo ou coelho para
suportar o crescimento. So oxidase, catalase, indol e ureia negativos; e positivos para esculina, H2S com a prova da tira de acetato de chumbo e hidrlise
da arginina. Acidificam lentamente a glicose em base CTA com 0,5% de soro
de cavalo.
Referncias
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ed. St.Louis. Mosby Elsevier, 2007, 1031p.
WINN,J Jr, ALLEN, S, JANDA, W.M., KONEMAN, E, PROCOP, G, SCHRENKENBERGER, 2. P.C.
WOODS, G. KONEMAN - Color Atlas and Textbook OF Diagnostic Microbiology. 6th Ed.
Lippincott Williams & Wilkins, 2006, 1535p.
MC FADDIN, J.F. Biochemical tests for identification of medical bacteria. Baltimore. Ed.
William & Wilkins Co., 2000.
Murray, P. R. et al. Manual of Clnical Microbiology. 9th ed. Washington DC. American
Society for Microbiology ASM Press 2007., 2256p
OHTSUKA, M., KIKUCHI, K., SHUNDO, K., OKADA, K., HIGASHIDE, M., SUNAKAWA, K., &
HIRAMATSU, K. (2009). Improved selective isolation of Bordetella pertussis by use of
modified cyclodextrin solid medium. Journal of Clinical Microbiology, 47(12), 4164-7.
Captulo 8:
Bactrias Anaerbias Estritas
8.1 Introduo
Bactrias anaerbias estritas so dominantes na microbiota anfibintica humana
e so isoladas de diversas infeces. Algumas dessas infeces so graves e apresentam altas taxas de morbidade e mortalidade. No com facilidade que se define
o termo anaerbio. Com finalidades prticas, podemos definir bactria anaerbia
estrita com base na quantidade de oxignio que ela pode tolerar, na exigncia de
uma tenso de oxignio reduzida e o no crescimento em superfcie de um meio de
cultura slido sob uma atmosfera de 10% de CO2 (18% de O2). O oxignio letal ao
anaerbio estrito porque na sua reduo so formadas substncias intermedirias
txicas (radical hidroxila/anion superxido/perxido de hidrognio) que so removidas, eventualmente, por enzimas da famlia das superxido desmutase e peroxidase,
presentes em quantidades variveis em algumas espcies, que assim garantem certa
tolerncia ao O2. Os anaerbios exigem, alm da excluso do O2, um ambiente com
potencial de xido-reduo (Eh) baixo que pode tambm variar em funo do pH
estabelecido. importante salientar que esse grupo de bactrias formado por espcies que variam de aerotolerantes a muito exigentes quanto ausncia de oxignio.
As mais estritas crescem em atmosferas com 0,5% de oxignio, muitas crescem em
atmosferas ao redor de 3% e algumas podem crescer ainda em concentraes de at
6% de oxignio (Tabela 1).
Tabela 1 Diferenas quanto sensibilidade ao O2 entre espcies de bactrias
% de O2 no ar atmosfrico
Espcies
0,1
0,5
1,0
3,0
6,0
10,0
C. haemolyticum
++
++
C. novyi
++
++
++
++
+,v
P. oralis
++
++
++
++
+,v
P. melaninogenica
++
++
++
++(v)
+,v
B. fragilis
++
++
++
++
+,v
F. nucleatum
++
++
++
++
++
Secreo Ftida
Infeco nas proximidades de superfcie mucosa
Tecido necrtico
Presena de gs em tecidos ou secreo
Tromboflebite sptica
Colorao negra em secreo com sangue
Infeco decorrente de mordida humana ou de animal
Presena de grnulos de enxofre nas secrees
OPAS/OMS Anvisa/MS 137
8.1.1
Fatores predisponentes
Uma variedade de condies predispe um indivduo a desenvolver infeco por anaerbios. Baixo potencial de oxi-reduo facilita o crescimento de
bactrias anaerbias. A causa clnica mais comum de diminuio do potencial redox a anxia dos tecidos resultante normalmente de leses vasculares, compresso, hipotermia, choque, edema e outras condies que levam
m perfuso.
Quanto s doenas sistmicas ou condies gerais como corticoterapia, teraputica de tumores, leucopenia, hipergamaglobulinemia, colagenoses,
diabetes, esplenectomias, embora relacionadas como predisponentes, no
h evidncia concreta de que realmente estejam associadas a maior incidncia de infeco por anaerbios.
possvel devem ser aspiradas com seringa e agulha, da qual eliminado o ar imediatamente aps a obteno da amostra. Amostras de tecido e bipsia tambm so adequadas para pesquisa de anaerbios. A coleta com swab deve ser rejeitada, quando
for inevitvel, incluir em meio semi slido. No so aceitveis para o processamento
laboratorial espcimes como urina obtida por mico espontnea, escarro expectorado, secrees vaginais e de feridas localizadas prximas a stios contaminados e
fezes, pelo fato de que a presena de micro-organismos componentes da microbiota
impossibilitam definies quanto etiologia dos processos infecciosos. Em resumo,
apenas espcimes clnicas que no estejam contaminadas com as bactrias anaerbias da microbiota so aceitveis (Tabela 2).
Tabela 2 Amostras clnicas aceitveis para isolamento de bactrias anaerbias
Local
Cabea e pescoo
Aspirados de abscessos
Bipsias de materiais cirrgicos
Swabs obtidos durante o ato cirrgico
Pulmo
Aspirado transtraqueal
Puno percutnea
Bipsias de mat. cirrgicos
Amostras de broncoscopia (protegida)
Swabs obtidos durante o ato cirrgico
Escarro expectorado
Escarro induzido
Aspirado endotraqueal
Amostras de broncoscopia no
protegida
SNC
Aspirados de abscessos
Bipsias de materiais cirrgicos
Swabs obtidos durante o ato cirrgico
Abdomem
Trato urinrio
Aspirado supra-pbico
Trato genital
feminino
Ossos e articulaes
Tecidos moles
Swabs superficiais
Intestino
Produo de anaerobiose
Existem vrios procedimentos para conseguir no laboratrio uma atmosfera
de anaerobiose adequada multiplicao das bactrias anaerbias patognicas ao ser humano. Por exemplo: o uso de tubos com meios slidos pr-reduzidos - a anaerobiose mantida dentro do tubo e os meios utilizados
so reduzidos e possuem indicadores de oxi-reduo.
O sistema mais empregado em laboratrios clnicos o sistema das jarras de
anaerobiose com geradores qumicos que permitem obter uma atmosfera
adequada para a multiplicao dessas bactrias. Existem diversos tipos de
geradores. Os mais utilizados so os que provocam o consumo do oxignio
atravs da reao desse com o H2, gerado pela presena de um haleto, formando gua. A atmosfera da jarra substituda por CO2, gerado pela presena de bicarbonato. Dentro da jarra colocada, alm dos geradores qumicos,
uma fita de papel de filtro impregnada de azul de metileno, que um indicador de anaerobiose. Quando a atmosfera do interior da jarra tem condies
adequadas de anaerobiose, a fita, inicialmente azul, alterada para branca.
Numa jarra de tamanho mdio de 2,5 litros, coloca-se aproximadamente 10
placas e vrios tubos. Nesse sistema o contedo de O2 da jarra cai a 0.4%,
em aproximadamente 1 hora e meia, de forma que as condies anaerbias
esto presentes bem antes da transformao do azul de metileno, que acontece por volta de 4-6 horas.
8.4.2
Isolamento
As amostras so semeadas em duas placas de gar preparadas com sangue
desfibrinado de carneiro em uma concentrao de 5%. As bases utilizadas
podem ser gar Brucella, gar Columbia ou gar BHI. Aos meios se adicionam tambm vitamina K e hemina bovina. Uma das placas incubada a
35-37C em atmosfera aerbia acrescida de 5% de CO2, e uma segunda
incubada a 35-37C em uma atmosfera de anaerobiose. A essa se acrescenta
hemina bovina (100 ug/ml), vitamina K (10 ug/ml) e extrato de levedura (2
mg/ml). Como meio seletivo para anaerbios Gram negativos (ASL), pode-se
utilizar uma terceira placa, cujo meio foi acrescido de canamicina e vancomicina, alm da vitamina K e hemina bovina.
Para se obter um meio mais eficaz quanto produo de pigmentos, o sangue de carneiro deve ser lisado pelo frio. Outro meio seletivo bastante utilizado o gar feniletialcool, suplementado com sangue de carneiro, hemina
e vitamina K, nas mesmas concentraes utilizadas no meio no seletivo.
Esse meio seletivo para bactrias anaerbias, pois inibe o crescimento de
bactrias facultativas tanto Gram-positivas como Gram-negativas.
ASS
+VitK
Amostra
ASL
K-V
PEA
Observao macroscpica
Colorao de Gram
resultado preliminar
Tioglicolato
Vit K
Hemina
Glicose sem indicador
AS
Cultura
Aerobiose
24 horas
Ach
ASS= gar sangue suplementado | ASL= gar sangue suplementado lisado | PEA= gar feniletilacool | AS= gar sangue |
Ach= gar chocolate
8.5.2
Rifampicin
Bile 20%
Indol
Pigmento
Bacteroides grupo
gragilis
sensvel
resistente
+/neg
neg
Prevotella sp
sensvel
resistente
neg
+/neg
Porphyromonas sp
sensvel
resistente
neg
Bacterides sp
sensvel
sensvel resistente
neg
neg
neg
F. mortiferum
resistente
sensvel
neg
neg
F. variium
resistente
sensvel
neg
Fusobacterium spp.
sensvel
sensvel
neg
neg
Para Rifampicin a Kanamicina: Sensvel = halo de inibio com 12mm ou mais de dimetro Resistente =
ausnsia de halo ou menor que 12 mm de dimetro
A diferenciao dos gneros Prevotella e Porphyromonas realizada pela capacidade de fermentar glicose que positiva para o primeiro gnero e negativa para o segundo.
Alguns sistemas comerciais manuais ou automatizados permitem fazer o
diagnstico das diferentes espcies de anaerbios utilizando numerosas
provas bioqumicas. Alguns utilizam a ao de enzimas bacterianas pr-formadas podendo fazer esse diagnstico aps 4 horas de incubao. Destes
os mais frequentemente utilizados so: API, Vitek e Microscan. Esses sistemas mais caros no so fundamentais para o diagnstico dos grupos bacterianos e para uma orientao teraputica adequada.
Em algumas infeces importante, para o diagnstico, determinar a presena de toxinas como acontece nas infeces intestinais por Clostridium difficille. Essa determinao feita com provas imunolgicas para a pesquisa
da toxina nas fezes, disponveis comercialmente.
8.6.2
Referncias
MURRAY, P.R.; BARON, E.J.; PFALLER, M.A.; TENOVER, F.C.; YOLKEN, R.H.- Manual of Clnical
Microbiology. 9th. ed., Washington, ASM Press, 2007
MANDELL, G. & BENNETT, J.; DOLIN, R.- Principles and Practice Infectious Diseases. 6th. ed.,
London, Churchill and Livingstone, 2005.
CLNICAL LABORATORY STANDARDS INSTITUTE (CLSI). 2006. Methods for Antimicrobial
Susceptibility Testing for Anaerobic Bacteria. Approved Standard. 7th edition. M11 A7.
Wayne, Pa.
OPLUSTIL C. P. ZOCCOLI C.M. TOBOUTI N.R. SINTO S.I.: Procedimentos Bsicos em
Microbiologia Clnica. 2004. 2. Edio. Sarvier SP Brasil.
ISENBERG, HD (Ed): Clnical Microbiology Procedures Handbook, 3nd edition, 2007, ASM
Press, Washington