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Para reduzir a possibilidade de uma substncia desencadear uma resposta txica, o organismo apresenta mecanismos de defesa que buscam diminuir a quantidade da mesma, que chega de forma ativa ao tecido alvo assim como, diminuir o tempo de permanncia desta em seu stio de ao. Para isso, necessrio diminuir a difusibilidade do toxicante e aumentar a velocidade de sua excreo. A propriedade fsica que facilita a absoro de muitos xenobiticos atravs da pele, pulmes e trato gastrintestinal denominada lipofilicidade - constitui um obstculo sua eliminao, porque as substncias lipoflicas podem ser reabsorvidas e tendem a se acumular no organismo. Os compostos hidroflicos, por sua vez, apresentam absoro mais precria, porm, so facilmente excretados pelos rins. Conseqentemente, a eliminao de um xenobitico, freqentemente, depende de sua converso para compostos hidrossolveis atravs de um processo conhecido como biotransformao, o qual catalisado por enzimas presentes no fgado e em outros tecidos. Assim, se uma substncia lipoflica, que se difunde rapidamente, for transformada em um composto mais polar, tem-se uma reduo na velocidade de difuso e um aumento da solubilidade em gua, o que facilita sua excreo urinria. Por exemplo, a destoxificao do benzeno, que apresenta uma solubilidade de 1g em 1.500 mL de gua, consiste em sua oxidao a fenol, que 100 vezes mais hidrossolvel. A posterior sulfatao do fenol produz um composto que possui uma solubilidade em gua de 1g em 3 mL. Como resultado dessas duas reaes, obtm-se uma substncia que 500 vezes mais hidrossolvel do que o xenobitico original (benzeno) e que, portanto, ser muito mais facilmente excretada pela urina. A biotransformao pode ser, ento, compreendida como um conjunto de alteraes qumicas (ou estruturais) que as substncias sofrem no organismo, geralmente, ocasionadas por processos enzimticos, com o objetivo de formar derivados mais polares e mais hidrossolveis. Embora existam autores que consideram a biotransformao como um dos processos de eliminao, esse passo da toxicocintica ser abordado, aqui, separadamente. Mecanismos de biotransformao A biotransformao pode ocorrer atravs de dois mecanismos:

mecanismo de ativao ou bioativao - que produz metablitos com atividade igual ou maior do que o precursor. Ex.: a piridina biotransformada no on Nmetil piridnico que tem toxicidade cinco vezes maior que o precursor. O mesmo ocorre com o inseticida paration que biotransformado em paraoxon, composto responsvel pela ao txica do praguicida;

mecanismo de desativao - quando o produto resultante menos txico que o precursor.

comum encontrar-se na literatura cientfica, os termos metabolizao e destoxificao como sinnimos de biotransformao. Hoje, no entanto, utiliza-se o termo metabolismo para descrever o comportamento geral das substncias (endgenas e exgenas) no organismo, o que inclui absoro, distribuio, biotransformao e eliminao. Esse termo comumente usado para se referir biotransformao o que compreensvel, visto que os produtos da biotransformao de xenobiticos so conhecidos metablitos. Entretanto, a destoxificao no sinnimo de biotransformao. Isto porque, destoxificao significa diminuio de toxicidade e nem todas as reaes de biotransformao, como citado acima, produziro metablitos menos txicos ou ativos que o seu precursor. Stios de biotransformao A biotransformao pode ocorrer em qualquer rgo ou tecido orgnico como, por exemplo, no intestino, rins, pulmes, pele, testculos, placenta, etc. No entanto, a grande maioria das substncias, sejam elas endgenas ou exgenas so biotransformadas no fgado. O fgado o maior rgo do corpo humano com diversas e vitais funes, destacando-se entre elas, as transformaes de xenobiticos e nutrientes. Por ser o stio primrio para a biotransformao, o fgado potencialmente vulnervel ao txica de um xenobitico que sofre bioativao. A biotransformao efetuada, geralmente por enzimas, principalmente, aquelas existentes nos chamados microssomas hepticos (pequenas vesculas presentes no retculo endoplasmtico) e na frao solvel do citoplasma (citosol). As mitocndrias, ncleos e lisossomas possuem menor capacidade de biotransformao. Assim, as reaes de biotransformao so referidas, freqentemente, como microssmicas ou citoslicas, de acordo com as localizaes subcelulares das enzimas envolvidas. Fases da biotransformao As reaes de biotransformao so categorizadas, no somente pela natureza da reao envolvida (oxidao, reduo, etc.), mas, tambm pela seqncia normal com que elas ocorrem. Essas reaes catalizadas pelas enzimas biotransformadoras de xenobiticos so classificadas em reaes de fase I (ou pr-sintticas) e reaes de fase II (sintticas ou de conjugao). A fase I compreende um conjunto de reaes de oxidao, reduo e hidrlise que preparam os toxicantes para as reaes da fase II. Essas reaes, geralmente, modificam a estrutura qumica da substncia mediante adio de um grupo funcional (-OH, -NH2, SH, ou -COOH), o que resulta em um pequeno aumento de hidrofilicidade. As reaes de biotransformao de fase II, tambm chamadas de reaes de conjugao, incluem glicuronidao, sulfonao (mais conhecida como sulfatao), acetilao, metilao, conjugao com glutationa e conjugao com aminocidos. Os substratos endgenos dessas reaes interagem com grupos funcionais presentes na molcula do xenobitico

ou que foram introduzidos ou expostos durante a fase I. Na maioria das reaes de conjugao formam-se compostos altamente polarizados e hidrossolveis que so prontamente excretados pelos rins. As substncias que possuem grupos funcionais hidroflicos sofrem conjugao direta, com formao de produtos facilmente excretveis. Entretanto, para os compostos lipossolveis, pouco polares, tem-se sempre as reaes pr-sintticas como condio para posterior conjugao. Portanto, a velocidade de excreo do agente txico est relacionada com sua estrutura qumica. Um bom exemplo o fenol que excretado aps conjugao direta, enquanto a biotransformao do benzeno requer ambas as reaes, ou seja, ele inicialmente biotransformado em fenol pela introduo de um grupo hidroxila (-OH) durante a fase I (oxidao) e, o fenol formado, ento conjugado por uma reao de fase II (sulfatao) em fenil sulfato. Reaes de fase I 1. Oxidao A oxidao uma reao qumica na qual o substrato perde eltrons. A reao por adio de oxignio foi a primeira a ser descoberta e, por essa razo, recebeu essa denominao. Como exemplo de reaes por adio de oxignio destacam-se a hidroxilao, epoxidao e sulfoxidao. Entretanto, muitas reaes de oxidao no envolvem oxignio. A mais simples delas a desidrogenao que consiste na remoo de hidrognio da molcula. A maioria dessas reaes so evidenciadas pelo nome da reao ou enzima envolvida. Por exemplo: desidrogenao alcolica, hidroxilao aromtica, desaminao, desalquilao, dessulfurao, entre outras. O principal sistema enzimtico responsvel pela oxidao de xenobiticos o Citocromo P450. Esta enzima uma hemoprotena, com o tomo de ferro em seu ncleo, chamado de P450 porque, em sua forma reduzida est ligado ao monxido de carbono, e tem um pico de absorbncia no comprimento de onda de 450nm. O Cit P450 parece estar localizado nas camadas profundas na membrana do retculo endotelial liso, mais especificamente, nos microssomos hepticos. Esta enzima a oxidase terminal do sistema de oxidases mistas que recebe os eltrons provenientes de outras fases da reao, se reduz e se liga ao oxignio e ao toxicante, promovendo de fato a oxidao do composto. Outras enzimas esto presentes nos microssomos hepticos e, embora menos conhecidas e importantes que o Cit P450 podem tambm biotransformar xenobiticos. o caso, por exemplo, do citocromo b5, que est localizado fora das membranas do retculo endoplasmtico. 2. Reduo Essa uma reao qumica atravs da qual o substrato ganha eltrons. So catalisadas por redutases microssmicas e citoslicas e pelas bactrias intestinais. As reaes de reduo podem ocorrer atravs da formao de duplas ligaes nitrognio-nitrognio (azo-reduo) em grupos nitro (NO2). Nesses casos, os compostos amino formados so oxidados e formam metablitos txicos. Assim, as reaes de reduo, freqentemente resultam na ativao do xenobitico em vez de destoxificao. A natureza dessas

reaes tambm evidenciada pela sua denominao, como por exemplo, azo-reduo, desalogenao redutora, reduo de carbonila entre outras. A reduo pode ser efetuada enzimaticamente, envolvendo enzimas microssmicas ou no. A enzima Cit P450 redutase, NADPH dependente, localizada fora da membrana do REL, responsvel pela reduo de uma srie de produtos.

3. Hidrlise uma reao na qual a adio de uma molcula de gua separa o toxicante em dois fragmentos ou molculas menores. O grupo hidroxila (-OH) incorporado em um fragmento e o hidrognio no outro. Certos xenobiticos so lisados antes de sofrerem outras reaes de biotransformao. A mais comum destas reaes a hidrlise de steres, embora amidas, nitrilas e hidrazidas, tambm possam ser hidrolizadas. A hidrlise de steres (R-COOR) feita pelas enzimas denominadas esterases, que podem ser de origem microssmica ou no. Geralmente essas esterases no possuem uma boa especificidade, ou seja, uma esterase pode, alm de hidrolisar steres, provocar a quebra de acetanilidas, amidas e outros derivados da anilina.

Reaes de fase II Um fator importante na toxicidade de um xenobitico a sua capacidade de ser excretado, e parece que os rins dos vertebrados constitudo de maneira e excretar eletrlitos mais facilmente que no eletrlitos. Assim, quanto mais ionizado estiver um cido orgnico no pH do meio, mais rapidamente ele ser excretado pelos rins. A ionizao, por sua vez, depende do chamado momento dipolo (ou grau de polaridade), ou seja, da distncia entre o centro geomtrico de todas as cargas positivas e de todas as cargas negativas. claro que molculas com momento dipolo baixo (carga positiva perto da carga negativa) tero uma simetria maior e, portanto, uma ionizao mais difcil. J molculas com grandes dipolos (ou seja, molculas onde as cargas positivas e negativas esto distantes) tero uma menor simetria e, conseqentemente, maior ionizao. Nas reaes de conjugao, os xenobiticos, provenientes ou no da fase pr-sinttica, ligam-se a substratos endgenos do organismo formando metablitos com tamanho molecular elevado e, conseqentemente, mais excretveis e menos txicos. Ou seja, na conjugao observa-se: aumento do tamanho maior polaridade maior ionizao maior excreo menor toxicidade. Os principais compostos endgenos envolvidos nas reaes de conjugao so:

Aminocidos e seus derivados, tais como a glicina e cistena Carboidratos e seus derivados, especialmente o cido glicurnico Conjugao com compostos simples como, por exemplo, sulfato e acetato

O composto endgeno envolvido na conjugao est, geralmente, na sua forma ativa, ou seja, ligado a uma coenzima da qual transferido para o xenobitico. As enzimas

envolvidas incluem a coenzima A, onde est ligado o acetato ou outros cidos graxos de cadeia curta, a adenosina ou fosfoadenosina fosfato (PAP) onde est ligado o sulfato, metionina e etionina e a uridina difosfato (UDP) onde se liga o cido glicurnico e a glicose. As conjugaes mais freqentes so aquelas feitas com cido glicurnico e com o sulfato. 1. Conjugao com cido glicurnico O cido glicurnico um derivado 6-carboxil da glicose, formado durante o metabolismo desse acar. Sua forma forma ativa, o cido uridino difosfato glicurnico (UDPGA) formado enzimaticamente na frao solvel do fgado. Esta forma ativa doa o cido glicurnico para se conjugar com o xenobitico e esta reao catalisada pela transglicuronilase ou glicuroniltransferase, presente na frao microssmica heptica. Os conjugados glicurnicos ou glicurondios so muito polares e, portanto, facilmente excretados do organismo. Em relao s substncias endgenas, so poucas aquelas capazes de sofrerem conjugao glicurnica. Exemplo: tiroxina e bilirrubina. como se o organismo tivesse guardado este tipo de conjugao para a biotransformao de xenobiticos. 2. Conjugao com sulfato Este tipo de conjugao quase to comum quanto a anterior. Os produtos da conjugao com sulfatos so sais de sulfatos cidos (SO3) ou de sulfamatos (NHSO3), que, em pH fisiolgico so totalmente ionizados e rapidamente excretados pelos rins. Os ons sulfatos presentes no organismo tambm tero que ser ativados para se conjugarem com os xenobiticos. Esta ativao envolve o uso de ATP e feita pelas enzimas ATP-sulfato-adenil-transferase e ATP-adenil-sulfato-3-fosfotransferase. Forma-se, ento, o PAPS (3-fosfoadenosina-5-fosfossulfato), que a forma ativa do sulfato, presente na frao microssmica heptica e que sob ao da sulfoquinase cede o sulfato ao xenobitico, formando o conjugado. 3. Conjugao com aminocidos A reao consiste na formao de uma ligao peptdica entre o grupo amino de um aminocido, geralmente, a glicina, e o grupo carbonila do xenobitico. Para que essa reao ocorra, indispensvel que o toxicante possua um grupo carboxila. Os compostos formados so excretado na urina porque o sistema de transporte do rim reconhece o aminocido. 4. Conjugao com glutationa Nessa reao, a glutationa (GSH), atravs de seu grupo sulfidrila (nucleoflico), une-se a um carbono eletroflico do toxicante. A reao catalisada pela enzima glutationa-Stransferase que tem como cofator o prpio glutation. A glutationa um tripeptdio (cido glutmico-glicina-cistena). O conjugado formado se rompe nos rins produzindo o Cis-derivado, que se acetila para produzir um conjugado do cido mercaptrico que excretado pela urina. Essa reao importante na destoxificao de epxidos e perxidos. A glutationa-S-transferase encontra-se em clulas de muitos tecidos do organismo. Se essa reao diminui significativamente os nveis celulares de glutationa,

o organismo pode sofrer danos considerveis devido peroxidao lipdica ou por outros tipos de agresso qumica. 5. Metilao Tem papel de menor importncia na biotransformao de xenobiticos, exceto na destoxificao do arsnico. Os compostos inorgnicos do arsnico transformam-se em metablitos mono e dimetilados, que so menos txicos. A reao consiste na transferncia de um grupo metila (-CH3) a um grupo funcional hidroxila, amina ou sulfidrila, catalisada pelas metiltransferases e o composto doador de grupos metila a SAM (S-adenosil-metionina). A metilao uma reao importante na transformao de compostos endgenos e participa da biossntese de vrios aminocidos e esterides, assim com na metilao do DNA. Enquanto as reaes de fase I ativam grupos funcionais, a metilao os mascara, impedindo que participem das reaes de fase II e, portanto, se o xenobitico metilado, sua taxa de eliminao diminui.

Fatores que modificam a biotransformao A eficincia dos processos de biotransformao depende de vrios fatores que incluem dose e freqncia de exposio, espcie, idade, gnero, variabilidade gentica, estado nutricional, estado patolgico e a exposio a outros agentes que podem inibir ou induzir as enzimas biotransformadoras de xenobiticos. Dose e freqncia da exposio - a dose geralmente altera a via de biotransformao. Certas enzimas possuem elevada afinidade, mas baixa capacidade para biotransformar substncias exgenas. Por isso, sero rapidamente saturadas quando doses elevadas do agente txico so administradas e outras vias secundrias passam a ter um papel mais importante. Exemplo: cerca de 90% do acetaminofeno (paracetamol), em doses baixas (15 mg/Kg), biotransformado atravs da conjugao com sulfato. Em doses elevadas (300 mg/kg), apenas 43% ser excretado como tal, passando a serem significativas as excrees como glicurondio e cido mercaptrico (conjugao com glutationa). Em relao freqncia, esta pode levar a uma sensibilizao ou induo de receptores enzimticos, aumentando a biotransformao. Espcie as diferenas interespecficas na capacidade de biotransformao de substncias qumicas so bem conhecidas e constituem, normalmente, a base da toxicidade seletiva, utilizada para o desenvolvimento dos testes de segurana de medicamentos realizados em animais. Variabilidade gentica a capacidade biotransformadora varia amplamente de um indivduo para outro em funo de diferenas genticas. Por exemplo, a reao de acetilao da isoniazida em humanos particularmente influenciada por fatores genticos. Algumas pessoas conseguem acetilar essa substncia rapidamente, enquanto outras, o fazem lentamente. Gnero - para algumas substncias, existem diferenas entre as respostas txicas em animais machos e fmeas. Estudos realizados em ratos demonstraram que as fmeas so mais suscetveis a uma dose de hexobarbital do que os machos (elas dormem por um tempo maior). Esse fato explicado pela menor capacidade do fgado das fmeas de

biotransformar xenobiticos, tornando-as mais suscetveis ao da maioria dos agentes txicos. A menor atividade heptica em fmeas, no entanto, diminuir a ao de substncias que so biotransformadas pelo mecanismo de bioativao (ex.: o tetracloreto de carbono e halotano). Acredita-se que as diferenas entre os gneros sejam causadas pelos hormnios sexuais, tendo em vista que, ao se administrar testosterona s fmeas, ocorre aumento na capacidade de biotransformao e com a castrao de machos h uma diminuio dessa capacidade. A influncia do sexo sobre a biotransformao tambm pode ser observada em processos que ocorrem em outros rgos como, por exemplo, nos rins. Ex.: animais machos so mais suscetveis ao txica do clorofrmio, provavelmente, por biotransformar mais rapidamente este solvente, originando o fosgnio, metablito intermedirio ativo. Embora essas diferenas sejam mais pronunciadas em ratos, outras espcies, entre elas o homem, tambm apresentam estas modificaes (ex.: nicotina, cido acetilsaliclico, heparina, etc.). Idade - com relao idade, tanto os animais jovens, quanto os velhos, apresentam menor capacidade de biotransformar xenobiticos e, conseqentemente, so mais suscetveis aos seus efeitos txicos. Geralmente, o Cit P450 dos recm-nascidos tem apenas 20% a 50% da atividade observada em adultos. Em relao aos idosos, no s a atividade diminuda do Cit P450, mas tambm outros fatores, tais como menor fluxo sangneo e menor eficincia no sistema da excreo renal e biliar, contribuem para a menor biotransformao dos xenobiticos. Dieta e estado nutricional - o estado nutricional bastante importante para a biotransformao pois pode alterar a atividade do Cit P450 (oxidase ou redutase). As deficincias em vitaminas, especialmente, a C, E e do complexo B, reduzem a velocidade de biotransformao. Elas esto direta ou indiretamente envolvidas na regulao do Cit P450. Alm disso, suas deficincias podem alterar a energia e o estado redox das clulas, diminuindo a produo de cofatores necessrios para a fase de conjugao. Dietas pobres em protenas diminuem a sntese enzimtica e, conseqentemente, a biotransformao e, dessa forma, podem aumentar a toxicidade de substncias ativas, mas, podem tambm reduzir o potencial txico daqueles agentes que necessitam de biotransformao prvia para se tornarem ativos. Estado patolgico muitas patologias podem alterar a capacidade individual de biotransformao de xenobiticos, em particular, as doenas hepticas como cirrose, ictercia obstrutiva, carcinomas e hepatite, devido a uma reduo drstica das atividades enzimticas do fgado. Distrbios cardiovasculares, que acarretam diminuio do fluxo sangneo, modificam igualmente a biotransformao e a depurao dos agentes txicos. Inibio e induo enzimtica - o sistema enzimtico Cit P450 influenciado por uma srie de substncias, que podem induzir ou inibir a sua atividade, alterando a biotransformao de determinados compostos. Por exemplo, a fenilbutazona (antiinflamatrio e antireumtico) e o cloranfenicol podem inibir a biotransformao enzimtica da tolbutamida, medicamento hipoglicemiante. Com isto, uma dose teraputica desse medicamento poder causar graves crises de hipoglicemia, devido diminuio excessiva de glicose no sangue. A inibio enzimtica envolve mecanismos diversos, desde a inibio da sntese protica at a competio entre os substratos pelos centros ativos comuns das enzimas. Ao contrrio, o fenobarbital e o lcool so

exemplos de indutores enzimticos, que aumentam a concentrao do Cit P450 e, conseqentemente, a biotransformao de vrias substncias e a sua prpria, o que pode resultar em tolerncia farmacocintica.