Conquistas feitas em goiaba por cultura de tecidos A eficiente regenerao de plantas a partir da clula, tecido, e cultura de rgos reconhecida

a como prrequisito para a aplicao das mais modernas abordagens genticas e biotecnolgica para melhoria de produtos agrcolas (Litz e Gray 1992). Vrios trabalhadores reconheceram que os dois padres de diferenciao in vitro, ou seja, organognese e embriognese somticas so processos muito diferentes (Christianson 1987; Litz e Gray, 1992). Regenerao bemsucedida de plantas de cultura de tecidos oferece excelentes oportunidades para a melhoria da goiaba. Um relatrio sobre alguns aspectos morfolgicos e culturais do crescimento in vitro tecido do mesocarpo de goiabeira foi talvez o primeiro a tentar manipular o tecido somtico (Schroeder 1961) desta fruteira importante (Jaiswal e Amin, 1992). No entanto, nos ltimos anos, vrios relatrios tm sido publicados na regenerao de goiaba por organognese e embriognese somtica (Tabelas 1, 2). Problemas associados micro propagao da goiaba e suas solues prticas Morfognese a partir de explantes derivados de rvores maduras de grande valor comercial porque pode ser aplicado em direto na melhoria da cultivar. No entanto, existem vrios problemas associado com a cultura in vitro de explantes obtidos a partir de rvores adultas de goiabeira, como browning (marrom) ou escurecimento mdio e / ou explantes devido

lixiviao de compostos fenlicos, contaminao microbiana, e recalcitrncia do tecido in vitro etc. Alta exsudao fenlica durante a exciso de plantas, escurecimento explante, descolorao mdio e crescimento lento tornaram a resposta uma provocao para os trabalhadores que lidam com espcies lenhosas de vrias rvores, incluindo goiaba. Escurecimento (Browning) de meios ocorrido como resultado da oxidao de polifenis exsudada a partir de explantes (Rout et al. 2000). A fim de reduzir exsudao fenlica, Amin e Jaiswal (1987, 1988) sugeriram o prtratamento de explantes com solues antioxidantes. Os explantes foram agitados durante 30-40 min em 0,5% (w / v) soluo de polivinilpolipirrolidona (PVPP) contendo 2% de sacarose, seguido por imerso em uma soluo antioxidante (75 mg de cido ctrico e 50 mg de cido ascrbico l-1 de gua) aps a esterilizao da superfcie dos explantes. Alm, 2-3 alteraes de meio para os primeiros 10-15 dias eram essenciais para Papadatau et al. (1990) exploraram o potencial morfognico de explantes de pices caulinares exceto de mudas cultivadas em um cmara de crescimento. Escurecimento do meio e necrose de explantes no foram observados por Papadatau et al. (1990). Este , provavelmente, porque as mudas jovens no sintetizam quantidades mais elevadas de compostos fenlicos, quando cultivadas em um crescimento cmara (Chandra et al, 2005b.). A contaminao microbiana um dos mais importantes fatores limitantes para a iniciao da cultura usando partes vegetativas (Krishna e Singh

2007). A contaminao microbiana pode resultar na morte das culturas, retardo de crescimento, necrose e potencial morfognico alterada, tais como reduzida taxas de multiplicao e enraizamento (George 1993). Acosta et al. (2002) identificaram vrios contaminantes microbianos /patgenos, ou seja, Alternaria, Aspergillus, Cladosporium,Colletotrichum, Curvularia, Fusarium, Nigrospora, Penicillium,e Trichoderma, durante o cultivo in vitro da goiabeira cv.Enana Roja cubana e todos os patgenos, com exceo Nigrospora,foram detectados durante o estabelecimento in vitro de segmentos nodais. Eles observaram que aproximadamente 50% do patgenos foram eliminados por 10 min a exposio a 3% hipoclorito ou a utilizao de 0,05 e 0,1% de HgCl2. Ali et al. (2007) observado que as sementes de goiaba 67-95% estavam contaminadas por bactrias e fungos, utilizando mtodos de cultura de tecidos normais. Eles recomendaram a aplicao de HCl 10% para 24-72 h seguido por um tratamento de 30 min com lixvia a 10% (NaOCl) para sementes de goiaba para reduzir a carga de contaminao. Recalcitrncia do tecido outro grande problema para a iniciao cultura usando partes de plantas maduras (Krishna e Singh 2007). No caso de goiaba, as plantas doadoras podem ser regenerao limitada e bem-sucedida foi observada principalmente a partir de explantes de plntulas (Loh e Rao, 1989; Papadatau et ai. 1990; Yasseen et al. 1995; Fuenmayor e Montero 1997; Singh et al. 2002; Shah et al. 2008). A seleo de explantes em um estgio especfico sensvel de uma rvore ciclo

madura de vida de grande importncia para superar a recalcitrncia (Benson 2000; Krishna e Singh 2007). Novo crescimento vegetativo que ocorre a partir da base do caule principal (ramificaes) serve como uma fonte confivel de ponta de rebento e segmentos nodal para cultura de tecidos de goiaba (Amin e Jaiswal 1987; Jaiswal e Amin, 1987; Singh et al. 2004). Organognese Organognese envolve brotaes adventcias e axilar produo. Organognese compreende a formao de estrutura unipolar (meristemas de raiz ou outro broto) de cale ou diretamente a partir de tecidos organizados (Singh et ai. 2004). Em goiaba, organogenese foi induzida in vitro a partir de ambos explantes maduros de rvores (Amin e Jaiswal 1987, 1988; Jaiswal Amin e 1987) e explantes de plntulas (Loh e Rao, 1989; Papadatau et al. 1990; Yasseen et al. 1995; Fuenmayor e Montero 1997; Singh et al. 2002; Shah et al. 2008). Fatores que controlam a organognese em goiaba Sucesso de regenerao in vitro depende do controle de morfognese, que influenciada por vrios fatores, a saber, os tipos de tecido ou de explantes, a composio do meio, reguladores de crescimento de plantas (PGRS), aditivos de mdia, meio ambiente, cultura etc. Micropropagao de sucesso, especialmente para difcil e espcies recalcitrantes, principalmente dependente da qualidade de explantes e da resposta de explantes essencialmente determinada pelo

gentipo estado, fisiolgica do tecido, e poca do ano quando os explantes so coletadas e cultivadas (Giri et al., 2004). Amin e Jaiswal (1987, 1988) tm compararam as respostas de segmentos nodais de rvore madura e segmentos nodais retirados de ramos in vitro proliferaram. O desempenho do segmento nodal tomado a partir in vitro proliferou brotos foi maior em comparao com a obtida a partir de maduro rvore. A provvel razo para uma melhor resposta do in vitro nodal segmentos como sugerido por Amin e Jaiswal (1987) o ausncia de perodo de latncia entre explantar e adaptao de explantes para em condies in vitro. Sobrevivncia e resposta de crescimento de pontas dos rebentos no eram to satisfatrio como aqueles de segmentos nodais (Amin e Jaiswal 1987). A maior capacidade de resposta segmentos de nodais mais as pontas dos rebentos pode ser atribuda ausncia de dominncia apical e a presena de gemas axilares em um estgio mais avanado de desenvolvimento (Amin e Jaiswal 1987). Numerosos estudos tm abordado o efeito da estao no estabelecimento da cultura em goiaba (Amin e Jaiswal 1987; Meira et al. 2005; Singh et al. 2005). O mnimo exsudao fenlico e contaminao da cultura, e a mximo sobrevivncia e proliferao de ramos foram obtidos a partir de explantes colhidas entre abril e junho (Amin e Jaiswal 1987). Ali et al. (2003) desenvolveram um protocolo para a regenerao de goiaba usando duas fontes diferentes de explante, isto , casa de vegetao de plantas (GHRP) e in vitro colhidas gemas axilares (IVDs). O maior nmero de

brotos e comparativamente melhor crescimento da parte area foi observado com IVDs. Em cultura de tecidos vegetais exigncia nutricional, para melhor crescimento de um tecido in vitro pode variar com as espcies (Bhojwani e Razdan 1996). Da, a composies mdia desempenha um papel-chave na morfognese e respostas de explantes. No caso de goiaba, uns nmeros de meios de comunicao foram utilizados para a iniciao da cultura durante a organogenese. Mas, sobretudo meio MS (Murashige e Skoog 1962) foi utilizado para a multiplicao da parte area (Tabela 1). Em um estudo separado, Singh et al. (2002) relataram o uso de meio MS com sais de grandes reduzida para uma meia-fora para a multiplicao rebento na cv. Allahabad safeda. Em alguns estudos, outros meios tambm tm sido utilizados para a tima morfognese (Papadatau et al 1990;. Meghwal et al 2003). Antes de explorar a cultura de tecidos de plantas para fins comerciais fins, informaes detalhadas sobre a exigncia de PGRs necessrio, e tornou-se uma necessidade para padronizar quando se trata de espcies de rvores. Os nveis e os tipos de PGRs includo no meio de cultura em grande parte determinar o sucesso do trabalho de cultura de tecidos. Iniciaes de Raiz e broto esto bem regulamentadas pelas concentraes relativas de auxina e citocinina no meio (Rout et ai. 2000). Os nveis de citocinina mostraram ser mais crtica para a multiplicao de muitas rvores de frutas tropicais. BAP foi citocinina mais comum usado para propagao da goiabeira (Amin e Jaiswal 1987, 1988; Loh e Rao, 1989;

Papadatau et al. 1990; Yasseen et al. 1995; Ali et al. 2003). Superioridade de BAP para induo rebento pode ser atribuda capacidade dos tecidos da planta para metabolizar BAP mais prontamente do que outros reguladores de crescimento sintticos ou capacidade de BAP para induzir a produo de hormnios naturais, como zeatina dentro do tecido (Malik et ai. 2005). Singh et al.(2002) foram capazes de levar multiplicao das brotaes em cv.Allahabad safeda aps o tratamento com TDZ e ANA. Outros aditivos que promovam o crescimento mdio incluindo sacarose (Amin e Jaiswal 1989a) e sulfato de adenina (Singh et ai. 2002) tiveram tambm efeito significativo sobre a parte area multiplicao e alongamento. Agar mais freqentemente utilizado como um agente de gelificao devido s suas caractersticas desejveis tal como clareza, a estabilidade, e a sua inrcia (Pati et al. 2006). Agar minimiza a perda de gua e nutrientes permitem boa difuso (Amin e Jaiswal 1989a). Para qualquer protocolo de micro propagao, enraizamento de sucesso de micro estacas um pr-requisito para facilitar o seu estabelecimento no solo (Pati et al. de 2006). Iniciao raiz tem sido incentivada em goiaba, incorporando o IBA sozinho ou com a combinao de NAA (Tabela 1), embora Loh e Rao (1989) foram capazes de estimular o enraizamento apenas em MS meio basal. Relativamente baixas concentraes de sal em meio so conhecidos por aumentar a enraizamento de micro estacas. Vrios estudos sobre a goiaba indicam que metade da fora-meio MS foi adequado

para induo de razes. O carvo ativado, muitas vezes utilizado em cultura de tecidos de plantas para melhorar o crescimento celular e diferenciao, sozinho ou seqencialmente aps uma induo de auxina de enraizamento de micro propagadas brotos (Thomas 2008). Enraizamento de brotos de goiaba tambm foi promovido pela adio de carvo ativado (Amin e Jaiswal 1987; Yasseen et al. 1995; Singh et al. 2002). Floroglucinol foi encontrado para inibir o enraizamento in vitro de brotos de goiaba e esta inibio foi mais evidente quando foi utilizado em combinao com auxinas (Amin e Jaiswal 1989b).

Embriognese somtica A embriognese somtica o processo pelo qual somtica clulas, em condies indutivas, gerar embriognica clulas, que sofrem uma srie de morfolgica e bioalteraes qumicas, resultando na formao de somtica embries (Zimmerman 1993 ; Komamine et al. 2005). A embriognese somtica desempenha um papel importante na clonal propagao. Quando integrado com melhoramento convencional programas e tcnicas moleculares e celulares biolgicas, embriognese somtica fornece uma ferramenta valiosa para melhorar a o ritmo de melhoramento gentico da cultura comercial espcies (Stasolla e Yeung 2003 ). Em comparao com organognese, embriognese somtica fornece um ideal processo experimental para investigao de diferenciao plantas , bem como um mecanismo para a expresso de totipotncia em clulas vegetais (Litz e Gray 1992). Muitos trabalhadores tm enfatizado embriogenese somtica como um mtodo preferido para o melhoramento gentico e multiplicao de valioso germoplasma de um nmero de plantas perenes lenhosas (Gupta e Durzan 1987 ; Raj Bhansali 1990 ; Litz e Gray 1992). Em goiaba, esforos considerveis tm sido feitos regenerao in vitro via embriognese somtica (Akhtar 1997 ; Akhtar et ai. 2000 ; Chandra et al. 2004 , 2005a ;Jaiswal e Jaiswal 2005 ;. Biswas et al 2007 ; Kosky et al.2005 ; Rai et al. 2.007).Embries zigticos imaturos tm sido utilizados como os explantes primrios para a induo de embriognese somtica pela maioria dos trabalhadores. Explantes Outros tais como folha, n, entren, ptala, e mesocarpo tm tambm foram testados, mas no conseguiu induzir embries somticos exceto mesocarpo com algum sucesso (Biswas et al. 2005 ; Chandra et

al. 2004 , 2005a). Embries zigticos imaturos provaram ser um tecido regenervel eficaz para o muitos espcies tropicais frutferas recalcitrantes. Embries zigticos so constitudos por PEDCs (preembriogenicas determinadas clulas), em que, as clulas ter a competncia embriogenico e pode ser facilmente induzida a seguir as vias embriognicas (Sharp et al. 1980). Desenvolvimento de diferentes fases de embries somticos sobre embrio zigtico e germinao de induo somtica de embries de goiaba so apresentados na Fig. 2 . Induo de embriognese somtica Induo de embriognese somtica em goiabeira foi afetada por natureza de explantes, idade fisiolgica dos explantes,durao do tratamento de 2, cido 4-diclorofenoxiactico (2, 4-D) para explante, um efeito interativo de 2, 4-D e sacarose, PGRs diferentes e suas combinaes, e gentipo (Akhtar et al. 2000 ; Jaiswal et al. 2005 ; Rai et al. 2007 ). Exigncia de auxina PGRs ou outros, para o incio do embriognese somtica largamente determinado pela estgio de desenvolvimento do tecido explante. O incio de a via embriognica se restringe apenas a certos clulas responsivas no explante primrio que tm a potencial para ativar os genes envolvidos na gerao de clulas embrionrias. A competncia para embriognicas induo pode ser o resultado de variando sensibilidade auxina para estas clulas (Dudits et al. 1995 ;. Arnold et al 2002). Rai et ai. ( 2007 ) observou os embries zigticos obtidas a partir de 10 semanas de idade frutos tm a capacidade mxima para induzir embries somticos em goiaba cv. Banarasi local. Isto provavelmente devido sua favorvel fisiolgica make-up em essa fase de desenvolvimento. Do mesmo modo, mesocarpo explante obtido de frutos

imaturos tem comparativamente melhor capacidade para induzir a embries somticos do que aqueles obtidos de frutos maduros na cv. Sardar (Chandra et al. 2.004 ). A fim de aperfeioar a induo de embries somticos em goiaba, um nmero de meios de comunicao esto sendo utilizados. No entanto, a maioria dos casos de sucesso recomendado o uso de MS mdio ou derivados (Chandra et al. de 2004 ; Kosky et al. 2005 ; Rai et al. 2007 ). Ao contrrio, Biswas et al.( 2005 ) no obtiveram embries somticos em MS B5, ou N6 meios de cultura, assim, eles usaram um GSEM modificado (goiaba somtica mdio embriogenese) para a induo de embriognese somtica. Alm disso, todos os acima dito meios tm nveis elevados de sais de amnia e nitrato, que desempenhado um papel-chave na induo de embriogenese somtica (Akhtar et ai. 2000 ). Nitrognio sob a forma de aminocido tal como L-Glutamina e compostos orgnicos tais como cido ascrbico tem sido eficaz na induo de somtica embriognese em goiaba (Chandra et al. 2004 ; Kosky et al. 2005 ; Biswas et al. 2005 ). A importncia da reduo nitrognio , em certos aminocidos, orgnico, e inorgnico nutrientes foi revisto em outras espcies de frutas tropicais por Akhtar et ai. ( 2000 ). PGRs desempenhar um papel importante na induo de calos nem o crescimento desorganizado ou polarizada crescimento levando a embriognese somtica (Arnold et al. 2002 ; Rai et al. 2007 ). Auxina, particularmente 2, 4-D necessria para a induo de embriogenese somtica em goiaba (Chandra et al. 2004 ; Kosky et al. 2005 ; Rai et al. 2007 ). Diferentes auxinas (IAA, IBA e NAA) e cito- cininas (BAP, Kin e TDZ), sozinhos ou em combinao com 2, 4-D tm sido mostrados para ser menos eficaz do que 2, 4-D sozinho para a induo de embriogenese somtica (Akhtar et al. 2000 ; Jaiswal et al. 2.005 ). Ao contrrio, Biswas

et al. ( 2005 ), obtido embries somticos em IAA contendo mdio. A durao da exposio de explante a um crescimento regulador um fator importante para a induo e desenvolvimento de embries somticos. Na maioria dos casos, auxina necessria apenas para induo de embriognese somtica e subseqentemente inibitria para o desenvolvimento de somtica embries. Rai et al. ( 2007 ) Examinaram o tratamento de embrio zigtico durante 8 dias, com 2, 4-D e observou-se que este foi eficaz para a induo de embries somticos- gnese. Tratamento contnuo por 60 dias permitiu diferenciao de embries somticos somente at estgio inferior. Vrias fontes de carbono foram testados em embrio zigtico explantes para induo de embries somticos (Akhtar et al. 2000 ). O raciocnio por trs dessas experincias reside no fato de que a planta no pode usar ou metabolizar todas as fontes de carbono efetivamente, e, assim, eles poderiam ser um fator limitante para induo e no desenvolvimento de embries somticos. Sacarose foi mostrado para suportar somtica induo de embries e adio de sacarose de 5-6% em mdia foi encontrada para melhor induo de embriognese somtica (Kosky et al. 2005 ; Rai et al. 2007 ). Induo somtica de embries em goiaba dificultada pela presena de maltose, glicose, lactose, frutose, sorbitol, manitol e no meio (Akhtar et ai. 2000 ). O estado fsico (semi-slido ou lquido) e fora de meio de muitas vezes importante para a induo e manuteno de embries somticos em vrias frutas tropicais espcies, incluindo manga (Ara et al. 2000 , 2004 ). Em caso de goiaba, fora total semislido (solidificado por 0,8% (w / v) meio de Agar) foi adequado para a resposta embriogenico, enquanto que em meio lquido muito reduzido nvel de induo foi obtido (Akhtar et ai. 2000 ).

A germinao de embries somticos e desenvolvimento de plntulas A germinao de embries somticos e crescimento da regenerao- plantas classificadas depende das condies previstas no anterior estgios, quando embries somticos amadurecer. Em alguns casos, a pr- germinao cocious de embries somticos ocorre (Arnold et al. 2002 ; Jimenez 2005 ). Por conseguinte, a fim de desenvolver plantas normais a partir de embries somticos, uma disseco dos fatores crticos que possam contribuir para a germinao de embries somticos necessria. Em alguns casos, somtica embries se desenvolvem em plantas em meio de cultura sem PGRs, considerando que existem outros casos onde auxina ou citocinina estimula a germinao ou um meio basal alterado era necessrio (Jimenez 2005 ). Em goiaba, baixando o fora mdia e concentrao de sacarose era necessrio para a germinao de embries somticos. Germinao de sementes de embries somticos maduros foi conseguida em garsolidificou metade da fora-meio MS contendo 3% de sacarose (Rai et al. 2007 ). Kosky et al. ( 2005 ) defendeu o uso de lquido mdio e adio de BAP, Biobras-6 (brassinoesteride analgico), e 2% de sacarose em meio de germinao de embries somticos. Produo de sementes sintticas A encapsulao de embries somticos ou no-embriogenico propgulos vegetativos para a produo de sementes sintticas pode eventualmente, ser utilizados como meios de armazenamento de germoplasma e transporte de elite do germoplasma (Krishna e Singh 2007 ). A goiaba uma polinizao cruzada e propagada vegetativamente (Doijode 2001). Portanto, um candidato particularmente adequado para a tecnologia de sementes sintticas. Regenerao de plntulas com xito a partir de embries somticos encapsulados de goiaba foi relatado por Akhtar (1997), Biswas et ai. (2007), Rai e Jaiswal (2008), e Rai et al. (2008a).

Embries somticos foi torpedo fase encapsulado em 2% alginato de sdio e 100 mM de cloreto de clcio e cultivados em meio apropriado para a regenerao de plantas (Akhtar 1997). Converso de plntulas mximas de embries somticos encapsulados foi obtida sobre o crescimento regulador livre fora total mdio MS. Recentemente, Rai et ai. (2008b, c) Tambm empregue o encapsulamento de propgulos vegetativos (pices e segmentos nodais) para o desenvolvimento de sementes sintticas em goiaba. A combinao de alginato de sdio 3% e cloreto de clcio 100 mM foram a mais adequada para a formao de sementes ideais sintticos. Converso das plntulas encapsuladas mximo de brotos foi conseguida em meio MS lquido (Rai et al. 2008b). Converso das plntulas tambm foi afetada pela fora mdia e concentraes de sacarose em meio. Estes encapsulado propgulos vegetativos pode ser potencialmente utilizado em curto armazenamento a longo prazo e intercmbio de germoplasma de elite do gentipo goiaba (Rai et al. 2008b , c ). No armazenamento in vitro de sementes sintticas Duas abordagens diferentes tm sido aplicadas para o armazenamento de sementes sintticas de goiaba utilizando de crescimento lento procedimento (Rai et ai. 2008a, b). (1) Transferir o somtico encapsulado embries para o meio MS fora completa contendo ABA (1 l mg -1) De sacarose ou de 9% antes da cultura em germinao meio regulador de crescimento (livre- completa-fora MS mdio? 3% de sacarose) resultou em armazenamento prolongado de at a 60 dias (Rai et al. 2008a). A supresso temporria de germinao de embries somticos encapsulados pela ABA ou sacarose, oferece a possibilidade de conservao da elite gentipo de goiaba por curto perodo. (2) brotos encapsulados dicas podem ser armazenados a baixa temperatura (4 C) ou sala temperatura sob meio de crescimento

mnimo (sacarose falta mdia) para dias diferentes (Rai et al. 2008b). Os resultados revelaram que o armazenamento de encapsulados brotos sob meio de crescimento mnimo era melhor do que o armazenamento a baixa temperatura (4 C) para a conservao de goiaba. A seleo in vitro Desenvolvimento de variantes melhoradas obtido por meio de tcnica in vitro presso de seleo recomendado para aumento da diversidade gentica, tanto qualitativa e quantitativamente caracteres hereditrios, tais como biticos e abiticos tolerncia ao estresse, qualidade dos frutos e produtividade, etc. A cultura in vitro de clulas de plantas, tecidos ou rgos em meio contendo agente seletivo oferece a oportunidade de se regenerar e selecionar plantas com caractersticas desejveis. A tcnica tem sido utilizada de forma eficaz para induzir a tolerncia que inclui o uso de alguns agentes seletivos que permitam a sobrevivncia e crescimento preferencial de fentipos desejados (Purohit et al. 1998 ). Para criar variabilidade gentica para selecionando rolamento cedo, curta semeado estatura e menos Os mutantes de goiaba, mutagnese in vitro seguido por micro- propagao atravs pontas dos rebentos foi realizada por Zamir et al. ( 2003 ). Brotos foram irradiadas com raios gama em 15-90 Gy, utilizando 60 Co fonte de clulas gama e cultivadas em Meio MS contendo 3,0% de sacarose, BAP e L Glutamina. A sensibilidade radiao foi avaliada pela determinao o percentual de sobrevivncia atirar ponta e disparar proliferao. No entanto, a recuperao de variantes desejados ainda est faltando. Conquistas feitas em goiabeira atravs molecular abordagens Abordagens moleculares so teis para a caracterizao do diversidade gentica entre as cultivares ou espcies diferentes, para identificar genes de interesse comercial e melhoria atravs da tecnologia de transformao

gentica. Alguns dos importantes conquistas obtidas no goiaba atravs molecular abordagens so apresentados na Tabela 3. Identificaes clonais so tradicionalmente baseada em vrios caracteres morfolgicos, no entanto, morfolgica caracters podem no ser confiveis para discriminar entre estreitamente relacionados com gentipos de goiaba (Chandra et al. 2005b). A maior parte do, cultivadas em escala comercial so plntulas selees nas cultivares bem conhecidas dos pais (Jaiswal Amin e 1992). A estreita relao gentica entre cultivares, mutaes somticas, e mudanas devido ambiental alteraes podem criar problemas na correta identificao de germoplasma. (Nos ltimos anos, diferente marcadores molecular RAPD, RFLP, AFLP, SSRs, ISSR, VNTRs) tm sido empregadas para as investigaes de origens e cultivar relaes taxonmicas de vrias espcies vegetais. deteco de variao gentica tambm importante para a micropropagao e in vitro conservao de germoplasma para eliminar indesejvel variaes somaclonais. Em goiaba, recentemente, alguns relatrios tm sido feitas sobre a avaliao da diversidade gentica utilizando Polimrfico amplificado ao acaso de DNA (RAPD) (Dahiya et al. 2002 ; Prakash et al. 2002 ; Chen et al. 2007 ; Feria-Romero et al. 2.009 ). Isolamento de qualidade adequada de DNA genomico para utilizao na PCR tecnologia baseada em marcador de DNA enfrenta problemas graves devido presena de inibidores tais como polissacardeos, que inibem a enzimtica Processamento de ADN ou de compostos fenlicos como inibidores da PCR reaes (Prakash et al., 2002). O modificado bem estabelecida CTAB protocolo (Porebski et al. 1997 Prakash et al. (2002) Analisaram diversidade molecular de 41 diferentes gentipos de goiaba coletados a partir de diferentes partes da ndia usando RAPD

marcadores. Os autores sugeriram que a base gentica de Indiano goiaba pode ser classificado como de baixa a moderada diversidade e vrios cultivares sem sementes triplides de goiaba no so geneticamente idnticos e tm origens independentes. Dahiya et al. (2002 ) tambm tentaram determinar a relao gentica em 13 cultivares do norte da ndia de goiaba utilizando marcadores RAPD. Chen et ai. ( 2007 ) Utilizando marcadores RAPD tambm tentou deter- relao filogentica mina em 18 cultivares de Taiwan. Para alm da caracterizao e avaliao da qumica diversidade, FeriaRomero et al. ( 2009 ) utilizado amplifiRAPD cao mtodo para identificar marcadores moleculares associados com a acumulao de quercetina elevada nas folhas de goiaba rvores, selecionados a partir de quatro agronmico diferente mexicano regies. Simple Sequence Repeats(SSRs), tambm conhecido como marcadores microssatlites tm sido amplamente utilizados na planta estudos genmico, e so relatados para ser mais varivel do que RFLPs e RAPDs (Krishna e Singh 2007 ). Marcadores microssatlites para estudo da diversidade gentica em goiabeira foram desenvolvido utilizando uma biblioteca genmica enriquecido para (GA) e n (GT) repete dinucleotidicos N e 23 loci nucleares SSR foram escolhido para avaliar a diversidade em trs espcies de goiaba (Risterucci et al. 2005). HernandezDelgado et al. ( 2007 ) estudaram o comprimento de fragmentos amplificados polimorfismo anlise (AFLP) de relao gentica entre 48 cultivares de goiabeira cultivadas em diferentes partes do Mxico. A transformao gentica abre a oportunidade para manipulao gentica de plantas a nvel celular e fornece os meios para modificar as caractersticas nicas de horticultura sem alterar significativamente outros aspectos do fentipo (Singh et al. 2004 ; Krishna e Singh 2007 ). O alvo principal das tcnicas de transferncia de

genes produzir variedades melhoradas atravs da incorporao de horticulturagenes estruturalmente importantes em cultivares existentes (Silva et al. 2004 ). As rvores de fruta so considerados recalcitrante-material para estudos de transformao gentica e da principal impedimento para a transformao gentica a regenerao transformada de plntulas. Escolha de explantes possuindo competncia para a transformao e regenerao uma fator crucial. Neste sentido, tcnicas de cultura de tecidos eficientes se a base para estudos de transformao gentica (Giri et al. 2004 ). A regenerao bem-sucedida de organismos geneticamente plantas transformadas foi conseguido em vrios tropical fruta espcies de plantas (Gomez-Lim e Litz 2004 ). Um engenharia Agrobacterium tumefaciens cepa LBA 4404 (Abrigando vetor binrio pBI121 ter selecionvel marca- ERS (nptII e GUS) com CaMV gene promotor 35S) tem foi utilizado para transformao de goiaba (Biswas et al. 2007 ). Recentemente trabalho, preliminar sobre gentica transfor- informaes de goiaba com genes de resistncia a frio (CBF1, CBF2 e CBF3) tambm demonstrada por Biswas et al. ( 2005 , 2007 ), no entanto, regenerao completa de transformada plantas no pde ser alcanado. O desenvolvimento da tecnologia de DNA recombinante tem no s extremamente impactado em nossa compreenso do gene estruturas, funes e regulamentos, mas tambm muito clonagem de genes facilitada, caracterizao, e sua expresso em espcies alvo. Goiaba, foi identificada como uma fonte particularmente rica de liase de hidroperxido (HPL) atividade. HPL catalisa a clivagem de 13 - e 9-hidroperxidos de cido linolico e linolnico em C voltil 6 - Ou C 9 -Aldedos e C 12 - Ou C 9 D xidos, respectivamente (Kim e Grosch 1981 ). O C 6 e C 9 compostos volteis tm um valor comercial na

produo de sabor natural em a indstria alimentar, e so potencialmente importante na planta defesa contra patgenos (Croft et al. 1.993 ). O HPL enzima purificada a partir de frutos de goiaba foi clonado por poli- reao em cadeia polimerase com 3 0 e 5 0 amplificao rpida de extremidades de DNAc (Tijet et al. 2000 ). A seqncia mostra aproximadamente 60-70% de identidade de 13-conhecido ligao hidroperxido. O cDNA foi expressa em Escherichia coli. Consideraes finais e perspectivas futuras Nas ltimos 2-3 dcadas, o progresso encorajador tem sido feitas sobre a propagao in vitro de goiaba via organognese e embriognese somtica por manipulao de meios de crescimento e condies de cultura, assim como por testando uma variedade de fontes de explante. No entanto, alguns dos problemas antigos como a goiaba doena murcha, curto vida de prateleira de frutas, e sensibilidade ao estresse abitico requer ateno urgente dos investigadores. No h necessidade de explorao de ferramentas modernas de biotecnologia na melhoria da goiaba. Um aumento em estudos de transformao gentica destinada a melhorar as caractersticas visuais e crescimento das plantas tem sido dificultada pela eficincia de transformao de baixa e dependncia gentipo de protocolos. Como resultado, goiaba estudos de regenerao mais uma vez emergiu como uma complemento essencial de estudos de transformao. Desde sistema de transformao gentica para a goiaba ainda no est bem desenvolvida, os esforos tm de ser feitos para desenvolver uma eficiente sistema de transformao para a goiaba. Para a insero exemplo, de genes que controlam a biossntese de etileno pode ser til na aumento da vida til de frutos de goiaba. Transformao de genes que codificam enzimas hidrolticas tais como

quitinase e glucanase (que pode degradar a parede da clula fungica) poderia tambm ser benfica no desenvolvimento da planta resistente murcha de goiaba (Chandra et al. 2005b ). Tais esforos, em ltima anlise fornecer os avanos mais rpidos na goiaba.