Simpsio: CHUMBO E A SADE HUMANA Captulo VIII

amostras Coleta de amostras e mtodos para determinao analticos para deter minao chumbo de chumbo
Collection of samples and analytical methods for lead determination
Mrcia Andreia Mesquita Silva da Veiga

RESUMO Chumbo , frequentemente, usado como um indicador de poluio. Uma vez liberado no meio ambiente, este poluente pode seguir diferentes rotas, podendo ser convertido em espcies mais solveis, tornado-se biodisponvel. Neste artigo apresentado de forma sucinta chumbo como poluente urbano, procedimentos de amostragem (coleta de amostras), transporte, armazenamento e preservao de amostras de interesse ambiental (solos e guas) e amostras clnicas (sangue e urina). A importncia e classificao das Salas Limpas, assim como as principais tcnicas analticas para a determinao de chumbo - AAS, ICP OES e ICP-MS - tambm so abordadas. Palavras-Chave: Determinao/Chumbo. Salas Limpas. Espectrofotometria Atmica/ Tcnicas.

Chumbo: poluente urbano

Em grandes metrpoles, como a cidade de So Paulo, o desenvolvimento econmico e o crescimento populacional, permitiram que a poluio, causada principalmente por automveis e indstrias, atingisse nveis crticos. Devido a estas atividades, a concentrao de metais txicos, como chumbo, alta. possvel observar, ao sobrevoar grandes metrpoles, uma nuvem cinza, espessa e densa pairando sobre a cidade. So toneladas de substncias txicas que fazem parte da

composio do ar, de origem antropognica. Chumbo , frequentemente, usado como um indicador de poluio. Uma vez liberado no meio ambiente, este poluente pode seguir diferentes rotas, podendo ser convertido em espcies mais solveis, tornado-se biodisponvel para os seres vivos. A identificao das formas qumicas e distribuio dos metais txicos que so liberados, aprisionados ou adsorvidos nas partculas dos solos, fundamental para entender suas caractersticas qumicas e fsicas no ambiente, pois so essas caractersticas que controlam a mobilidade e biodisponibilidade.

1. Docente. Departamento de Qumica, Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras de Ribeiro Preto - USP

Correspondncia: Profa. Dra. Mrcia Andreia Mesquita Silva da Veiga Departamento de Qumica, Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras de Ribeiro Preto, Universidade de So Paulo Av. Bandeirantes, 300 Bairro Monte Alegre 14040-901 - Ribeiro Preto, SP eMAIL: mamsveiga@ffclrp.usp.br Artigo recebido em 05/10/2009 Aprovado em 08/12/2009

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Chumbo ocorre nos solos como uma mistura de compostos qumicos na fase slida, variando na morfologia e no tamanho da partcula. Estes componentes incluem fases minerais discretas, espcies coprecipitadas e adsorvidas associadas com minerais do solo ou matria orgnica, e espcie dissolvidas que podem estar complexadas com uma variedade de ligantes orgnicos e inorgnicos. A ocorrncia e a distribuio relativa de um elemento entre estas vrias fases e o solo, iro controlar as propriedades de dissoluo de um elemento e, em consequncia, sua biodisponibilidade. Com o tempo, ocorrem mudanas na distribuio de um elemento entre estas vrias fases, como resultado de desgaste qumico e fsico, processos biolgicos, infiltrao da gua e distrbios antropognicos, mudando a biodisponibilidade deste elemento. Por exemplo, se acetato de chumbo, que muito solvel, for liberado no solo, o chumbo rapidamente ir se incorporar aos minerais dos solos, e sua biodisponibilidade diminuir com o tempo. Em contraste, poucas mudanas podem acontecer na biodisponibilidade do chumbo disperso em resduos de slica fundida (devido a sua relativa insolubilidade), mesmo depois de dcadas no meio ambiente.1 Um dos maiores problemas ambientais deste ramo de cincia o chamado passivo ambiental, herana da desativao de empreendimentos industriais. Em termos gerais, a contaminao dos solos e das guas subterrneas dos mais graves passivos ambientais. O conceito de passivo ambiental utilizado para descrever o acmulo de danos ambientais ocasionados pelo fechamento de instalaes industriais que devem ser reparados a fim de que seja mantida a qualidade ambiental de um determinado local. Os solos contaminados podem apresentar risco sade pblica de vrias formas: por contato direto com a pele, por ingesto ou inaladas ao se fixar a substncias slidas, ou por causa de emisso de gases txicos; tambm podem ser transferidas para as guas subterrneas, contaminando redes de gua potvel, ou contaminando cursos de gua superficiais, sendo tambm txicos para outros seres vivos do ecossistema.2 De um modo geral, a contaminao por exposio direta se d atravs da ingesto de solos, absoro drmica, inalao de gases e inalao de partculas; a contaminao por exposio indireta se d por ingesto de vegetais contaminados e ingesto de gua (tratada ou no). Diante do exposto nos pargrafos acima, a coleta do material clnico a ser analisado, assim como os

procedimentos analticos que sero adotados na determinao de chumbo, desempenham um papel fundamental, pois vivemos em um ambiente notadamente poludo com chumbo.

Coleta de amostras
Ambientais: guas e solos Para coleta de amostras de guas naturais, a quantidade mnima requerida de 1 L, de acordo com o Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater.3 O recipiente de coleta pode ser de plstico (polietileno ou equivalente) ou de vidro, previamente lavados com soluo 1 + 1 de HNO3. A conservao feita atravs da adio de HNO3 at pH = 2; se a inteno medir chumbo dissolvido, a amostra deve ser filtrada imediatamente, seguido da adio do cido ntrico. Nestas condies estabelecidas, a amostra pode ser armazenada por at 6 meses antes da anlise que geralmente realizada por espectrometria de absoro atmica com atomizao eletrotrmica (ET AAS, do ingls, electrothermal atomic absorption spectrometry) ou por espectrometria de massa com fonte de plasma indutivamente acoplado (ICP-MS, do ingls inductively coupled plasma mass spectrometry). Quando se tratar de coleta de amostras de guas em mananciais, a coleta deve ser realizada no sentido contrrio da correnteza, com profundidade mnima de 20 cm. Para poos, o frasco de coleta deve descer preso a um cordo, permitindo que o mesmo seja submergido at o mximo de profundidade. No permitir que, no momento da descida, o frasco toque nos lados do poo. A coleta de guas em torneiras, de acordo com a Organizao Panamericana de Sade4, deve ser precedida por uma limpeza das partes internas e externas da torneira com lcool, aps sua abertura por alguns segundos. Aps este procedimento, a torneira deve ser aberta novamente e permitido escoar a gua por mais alguns segundos. Em seguida, a coleta pode ser realizada em frasco previamente descontaminado (soluo 1 + 1 HNO3) em um nvel logo acima da metade do frasco. Para solos, a coleta deve proceder de acordo com o objetivo pretendido da anlise. Geralmente, se a finalidade monitoramento ou screening, a amostra coletada no horizonte A (0 - 20 cm). Aps a coleta, as amostras devero ser secas, destorradas e penei331

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radas em malha com abertura de 2 mm para obteno de terra fina seca ao ar. O armazenamento deve ser em refrigerao. Essas amostras devem ser as mais representativas possveis do material original ou rea a ser estudada. A amostragem um ponto importante, pois pode ser realizada de trs maneiras: direcionada, sistemtica e aleatria. De acordo com a norma ISO/DIS 10381-1, na amostragem direcionada a locao dos pontos de amostragem realizada de acordo com o conhecimento j existente a respeito das fontes e vias de disseminao da contaminao, evidncias visuais de contaminao do solo ou aplicao de mtodos de screening na rea.5 Uma forma muito comum de distribuio aleatria dos pontos de amostragem o estratificado (ISO/DIS 10381-1), em que se procede a uma diviso regular da rea, distribuindo-se os pontos de forma aleatria em cada uma delas. Com esse esquema de amostragem, assegura-se que todas as subreas que compe o local investigado sero amostradas, o que pode no ocorrer em um esquema aleatrio simples.5 Uma forma de contornar os problemas da amostragem aleatria estratificada o emprego de um esquema com distribuio sistemtica dos pontos de amostragem (malha de amostragem) que, alm de evitar a coleta de amostras em pontos muito prximos, apresenta as mesmas vantagens da subdiviso da rea. Segundo a USEPA (do ingls, United States Environmental Protection Agency), a experincia e as consideraes tericas mostram que na maioria dos casos a aplicao de uma malha regular com distribuio sistemtica dos pontos de amostragem mais prticos gera um retrato detalhado da variao das propriedades do solo existentes no local. Tem como vantagem a facilidade de implantao no campo e a possibilidade de adensamento do nmero de pontos em que for necessrio, por meio de uma amostragem direcionada.5 Para a coleta de solos superficiais os equipamentos de amostragem mais comuns so: ps; trados de caneco manuais ou mecnicos; trado de rosca; trado holands; amostradores tubulares (barrilete "tubo aberto", meia-cana, tubo fechado e tubo de parede fina). Clnicas: sangue e urina Para a determinao de chumbo em sangue total, a quantidade de sangue necessria pode variar de acordo com o laboratrio - de 5 a 20 mL, adicionados de 200 L de heparina. O horrio da coleta flex332

vel, desde que tenha ocorrido exposio h pelo menos cinco dias. O recipiente usado na coleta so tubos especficos (Vacutainer) livre de metais. Se a coleta for realizada longe do laboratrio de anlise, o transporte deve ser feito sob refrigerao a 4C, e o tempo entre a coleta e o envio da amostra ao laboratrio no deve exceder 2 dias. Uma vez no laboratrio de anlise, o armazenamento destas amostras deve ser em geladeiras com temperatura entre 2 e 8C, por um perodo mximo de 5 dias. A determinao, geralmente, realizada por ET AAS ou ICP-MS.6,7 importante ter sempre em mente que no apenas o tubo, utilizado para coleta de amostra (Vacutainer) deve ter quantidade mnima de chumbo, e o local da puno (no caso de sangue) devem ser limpos previamente coleta, mas toda a manipulao pr-analtica deve ser feita em local adequado, com ponteiras, tubos e reagentes com quantidades muito baixas de metais. Para limpeza adequada para medir chumbo, tubos e ponteiras novos precisam ser submersos em cido ntrico (20-50%) 18 horas, secos a seguir em capelas de fluxo laminar (Classe 100), e depois guardados hermeticamente at o momento do uso. Normalmente mais vantajoso comprar tubos para as diluies prvias anlise tambm j livres de metais, pois h sempre risco de contaminao aleatria durante esse procedimento de limpeza dos tubos e o custo alto para essa limpeza. Outra questo a considerar o risco de acidentes durante a manipulao de cido ntrico. Os reagentes tambm precisam ser de qualidade ultrapura (por ex. os da linha Suprapure da Merck), ou ento, no caso dos cidos, devem ser bidestilados em laboratrios preparados para este procedimento e armazenados em frascos descontaminados para metais. Reagentes ultrapuros devem ser usados em conjunto com gua deionizada 18-25 Mohm.cm para limpeza final e digesto das amostras. Brancos tambm devem ser preparados para cada conjunto de amostras. Geralmente, a determinao de chumbo em amostras de urina realizada para monitorar a quantidade de chumbo excretado pelo paciente, durante o tratamento de quelao. A quantidade de urina coletada tambm pode variar de 20 a 50 mL, durante 24 horas. O recipiente para coleta pode ser de plstico e o transporte, caso a coleta no seja realizado no prprio laboratrio de anlises clnicas, deve acontecer sob refrigerao a 4C, em um perodo de tempo que no exceda um dia - o ideal que seja imediatamente. No laboratrio de anlises o armazenamento deve ser

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em geladeira com temperatura controlada entre 2 e 8C, por no mximo 3 dias. As tcnicas que figuram para seu monitoramente so: espectrofotometria de absoro molecular no ultravioleta e visvel (UV/Vis) para deteco da creatinina, ET AAS ou ICP-MS para deteco direta do chumbo. importante ressaltar que, muitas vezes, necessrio realizar uma digesto cida nas amostras clnicas, antes de analis-las diretamente por ET AAS ou ICP-MS.6,7

Salas Limpas

De acordo com a NBR 13413 (NBR 13700 Normas de Salas Limpas), sala limpa uma sala na qual o suprimento e a distribuio do ar, filtragem, materiais de construo e procedimentos de operao, visam controlar as concentraes de partculas em suspenso no ar, atendendo aos nveis apropriados de limpeza, conforme definidos pelo usurio e de acordo com as normas tcnicas vigentes.8 As salas limpas so classificadas pela pureza de seu ar. O mtodo mais facilmente conhecido e universalmente aplicado e sugerido pela Federal Standard 209, em que o nmero de partculas igual ou maior que 0,5 m so medidas em um p cbico e esta contagem usada para classificar a sala.9

de alta qualidade, na montagem e teste de giroscpios de preciso, e na montagem de mancais miniaturizados. Salas Classe 10.000 so empregadas na montagem equipamentos hidrulicos e pneumticos de preciso, vlvulas servo-controladas, dispositivos de relgios de preciso, e engrenamento de alto grau. Por fim, Salas Classe 100.000 servem para trabalhos ticos em geral, montagem de componentes eletroeletrnicos, montagem hidrulica e pneumtica. Existem dois tipos de salas limpas: as de fluxo convencional e unidirecional. Salas Limpas de fluxo convencional so tambm conhecidas com Salas Limpas de ventilao turbulenta ou no unidirecional. Sala Limpas de fluxo unidirecional so conhecidas como de fluxo laminar ou salas ultralimpas. A importncia em usar estes tipos especficos de salas reside no impacto da pesquisa desenvolvida, ou seja, em questes de sade pblica, legais e forenses, a exatido e preciso dos resultados podem nortear polticas ambientais e de sade, assim como um veredito. Se determinaes na ordem de partes por bilho ou partes por trilho so requeridas, o uso de Salas Limpas uma necessidade. No podemos esquecer tambm que, a obrigatoriedade de vestimentas adequadas nestes ambientes um ponto crtico, pois a

Classificao Federal Standard 209

10 100 10 100

1000 1000

10000 10000

100000 100000

No de partculas por p cbico com tamanho 0,5m. 1

Essa classificao atende diferentes atividades. Uma sala classe 1 usada somente para manufatura de circuitos integrados com desenvolvimento de geometrias sub-mcron. Salas Classe 10 so usadas para manufatura de semicondutores produzidos em larga escala, circuitos integrados com linhas menores que 2 micras. Salas Classe 100 so usadas quando se deseja ambientes livres de partculas (neste tipo Sala se enquadra as determinaes clnicas de Pb em material biolgico) e bactrias. empregada tambm na manufatura de produtos mdicos injetveis, em operaes de implantes ou transplantes cirrgicos, na fabricao de circuitos integrados e no isolamento de pacientes imonudeprimidos e pacientes com operaes ortopdicas. Salas Classe 1.000 tambm so empregadas em determinadas anlises inorgnicas, mas so principalmente usadas na fabricao de equipamento

quantidade microorganismos carregados pelo homem na pele da cabea, por exemplo, de 1,5 x 104 UFC/ cm2 (UFC = unidade formadora de colnia); no antebrao de 1,0 x 103 UFC/cm2; nas mos e dedos: 1,0 x 102 UFC/cm2; secreo do nariz: 107 UFC/g, no ato de espirrar: 108 UFC, no cerume dos ouvidos: 106 UFC, na saliva: 107 UFC/mL e nas fezes10: 1011 UFC/g.

Principais Tcnicas Analticas

Espectrometria de Massa com Fonte de Plasma Indutivamente Acoplado O desenvolvimento do espectrmetro de massa com fonte de plasma indutivamente acoplado, ICPMS (do ingls - inductively coupled plasma mass spectrometry) foi induzido em parte pela sua aplica333

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o nas cincias da terra. A anlise de amostras geolgicas consideradas uma das mais difceis aplicaes espectroqumicas, requer medidas exatas e precisas, como por exemplo, na datao e caracterizao de rochas e minrios. Devido ao seu potencial, ICP-MS uma das principais tcnicas analticas para a anlise na geoqumica, alm da sua aplicao na rea ambiental, clnica e alimentos; e isto se deve aos baixos limites de deteco (LDs) possveis, ampla faixa dinmica linear, rpida determinao das razes isotpicas, pequeno volume de amostra, alm, bvio, da sua capacidade multielementar. Alm disso, esta tcnica capaz de realizar uma anlise semi-quantitativa, em menos de 1 minuto. A espectrometria de massa (MS) proporcionou benefcios significativos para a espectroscopia ICP. Talvez o benefcio que recebeu a maior parte da ateno a capacidade de atingir baixos limites de deteco - cerca de 90% dos elementos podem ser determinados com LD's na faixa de 0,1 a 0,001 ng/mL em solues aquosas.11-12 A configurao do instrumento consiste em trs componentes principais: (1) um ICP de argnio convencional que opera a temperaturas de 6000 a 10000 K, (2) um espectrmetro de quadrupolo convencional, e (3) uma interface. Nestas temperaturas ( 8000 K), possveis interferncias de substncias qumicas so insignificantes (para solues inorgnicas), e essencialmente todos os tomos so ionizados em uma larga extenso.11-12 Espectrometria de Emisso ptica com Fonte de Plasma Indutivamente Acoplado Embora este tcnica no possua a mesma sensibilidade instrumental da ICP-MS, ela configura como uma tcnica bem estabelecida, capaz de fornecer anlises quantitativas multielementares, com ampla faixa dinmica de trabalho (entre ppb e ppm), para elementos com comprimentos de onda compreendidos entre 190 a 800 nm. Seu princpio se baseia no fato de que um tomo livre, no estado fundamental, pode receber energia suficiente para que seus eltrons na camada de valncia comecem a sofrer transies. Estes eltrons saltam para camadas mais externas, permanecendo por um tempo muito curto; por ser um estado pouco estvel quando retornam para a camada de menor energia, emitem um fton em especfico. Cada elemento possui seu prprio conjunto caracterstico de nveis de energia e assim, seu prprio e ni-

co conjunto de comprimento de onda de emisso e absoro. A instrumentao consiste em um ICP de argnio, a partir do qual sero emitidos os comprimentos de onda dos analitos desejados, um espectrmetro, onde ocorrer a disperso e separao do feixe de luz. Um dos detectores mais modernos para este tipo de equipamento do estado slido, conhecido como CCD (charge-coupled device). Espectrometria de Absoro Atmica O princpio fundamental da AAS envolve a medida da absoro da intensidade de radiao eletromagntica, proveniente de uma fonte de luz, por tomos gasosos no estado fundamental. Com base neste princpio, o elemento de interesse (metal, semi-metal e no-metal), no estado vapor, absorve a radiao de um comprimento de onda especfico pela transio de seus eltrons para um nvel mais energtico. Devido a isso, a AAS torna-se uma tcnica especfica, pois se utiliza de uma fonte capaz de emitir uma radiao de comprimento de onda especfico para que ocorra a transio eletrnica caracterstica do elemento de interesse. Este princpio teve origem em 1860, com o fsico Kirchhoff que estabeleceu a lei geral da Absoro e Emisso da Energia pela matria. "Todos os corpos podem absorver a radiao que eles prprios emitem". Em 1955, Alan Walsh descobriu que as maiorias dos tomos livres na chama se encontravam no estado fundamental (99%) e os restantes (1%) ionizados ou excitados. Com isso, foi possvel desenvolver o primeiro equipamento de absoro atmica. Os principais componentes de um espectrmetro de absoro atmica so: uma fonte de luz primria, sistema de atomizao (chama e forno de grafite), um monocromador para isolar o comprimento de onda especfico a ser medido, um detector para medir com exatido. Esta tcnica configura-se como uma das tcnicas atmicas mais robustas, confiveis e bem estabelecidas. Embora seja monoelementar, capaz de apresentar limites de deteco comparveis aos da ICPMS, quando usada no modo forno de grafite (ET AAS), o qual em 3 ordens de magnitude mais sensvel do que a chama (F AAS). A figura 1 mostra de maneira simplificada, os limites de deteco das trs tcnicas discutidas. Na figura 2 temos os custos envolvidos na aquisio de cada equipamento.

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Figura 1. Limites de deteco para as principais tcnicas espectroscpicas atmicas (Adaptado de 13).

Figura 2. Custos relativos para sistemas de espectroscopia atmica (valores em dlares). Adaptado de 13.

ABSTRACT The metal lead has frequently used as a sensitive pollution indicator. Once released in the environment, this pollutant can follow different ways, being converted in highly soluble species, became bioavailable. In this paper is presented in a succinct form, lead as urban pollutant, sampling procedures (collection of samples), transport, storage and preservation of environmental (soils and waters) and clinical (blood and urine) samples. The importance and classification of clean rooms, as well as the main analytical techniques for lead determination - AAS, ICP-OES and ICP-MS - are broached too. Keywords: Lead/Determination. Clean Rooms. Spectroscopy Atomic/Techniques.

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