Universidade Federal do Recncavo da Bahia Centro de Cincias Agrrias Ambientais e Biolgicas CCA 005 Tcnicas Laboratoriais em Microbiologia Agrcola

RELATRIO DE AULA # 1 ISOLAMENTO DE BACTRIAS FIXADORAS DE NITROGNIO DE VIDA LIVRE

Zayda Piedad Morales Moreira

Adailson Feitoza

Cruz das Almas BA Setembro 2012

1. Introduo

O nitrognio em geral considerado como um dos principais nutrientes limitantes no crescimento das plantas. O processo biolgico responsvel pela reduo molecular do nitrognio em amonaco referido como fixao do nitrognio. Uma grande diversidade de bactrias fixadoras de nitrognio tem a capacidade para colonizar a rizosfera e interagir com as plantas (FRANCHE et al.,2009). Proliferao de bactrias no solo aderente superfcie da raiz foi descoberto no final do sculo XIX, ao mesmo tempo, como a descoberta de fixao de nitrognio (ROVIRA, 1991). Fixao de nitrognio uma funo essencial na biosfera. semelhante e, talvez, o segundo em importncia para a fotossntese. Da mesma forma, mas na fotossntese fixao do carbono da atmsfera. O carbono da fotossntese principalmente necessrio para o crescimento da planta, no caso de culturas agrcolas. Em segundo lugar se precisa do nitrognio, em simbiose a planta no precisa tomar o nitrognio do solo como normalmente acontece, a planta (HERNNDEZ, 2002). A propriedade de fixao de nitrognio em simbiose dentro de ndulos de plantas vasculares encontra-se em dois grupos principais de bactrias que no filogeneticamente relacionado: Rizbios que se associam essencialmente com leguminosas (SPRENT, 2001) e Frankia que se associam com um espectro mais amplo de plantas de oito famlias (VESSEY et al., 2004). Outro grupo importante de fixao de nitrognio so as cianobactrias, encontradas em associao com uma grande variedade de plantas superiores e inferiores, fungos e algas (MEEKS e ELHAI, 2002). A importncia da fixao biolgica de nitrognio decorre no s da sua contribuio para a nutrio das plantas, mas tambm contraria o uso excessivo de fertilizantes nitrogenados que so adicionados aos cultivos (HERNNDEZ, 2002). As bactrias fixadoras de nitrognio produzem tambm grande diversidade de estruturas qumicas dos exopolissacardeos (EPS) denominados biopolmeros que fornecem uma alternativa vlida para a substituio das gomas comumente usadas na indstria de alimentos, por meio do desenvolvimento de produtos com propriedades praticamente idnticas ou com melhores caractersticas reolgicas, que podem ser usados para novas aplicaes (farmacutica, petrleo, cosmticos, txtil, indstria de tintas e produtos agrcolas) (BOMFETI et al.,2011)

2. Objetivos 2.1. Objetivo Geral Isolar y quantificar bactrias fixadoras de nitrognio de vida livre. 2.2. Objetivos Especficos Discutir a importncia da utilizao de um meio especfico seletivo para o isolamento das bactrias fixadoras de nitrognio.

3. Material e Mtodos 1) Coletou-se amostra de solo da rizosfera de gramneas. 2) No laboratrio pesou-se 10g de solo e dissolveu-se em 90mL de soluo salina 0.85% NaCl. 3) Durante 1 hora deixou-se agitar a soluo a 120 RPM e temperatura ambiente em um agitador horizontal IKA KS 4000 ic control. 4) Transcorrida a hora fizeram-se diluies seriadas (100L -900 L) at . 5) Em Placas de Petri com meio de cultura Dygs transferiu-se 100 L das diluies , com 3 repeties de cada uma. Com ajuda de uma ala de Drigalski distribuiu-se a mostra na placa. Na Tabela 1. Apresenta-se a composio do meio Dygs. 6) Incubou-se a 28C. Tabela 1. Composio do meio Dygs Reativo Gligose cido Mlico Peptona Bacteriolgica Extrato de levedura KHPO MgSO.7H0 cido Glutmico g/L 2 2 1,5

2 0,5 0,5 1,5

*pH- 6,5, 1L de H0(Dobereiner et al., 1995)

4. Resultados Presentou-se crescimento em todas as placas exceto numa placa da diluio . Na Tabela 2.apresenta-se o antes mencionado. Tabela 2. Crescimento de microrganismos em meio Dygs isolados da rizosfera de gramneas depois de 7 dias. Diluio Repetio 1 Crescimento: Bactrias y fungos Crescimento: Bactrias y fungos Crescimento: Bactrias Crescimento: Bactrias Crescimento: Bactrias Crescimento: Bactrias Crescimento: Bactrias e fungos Crescimento: Bactrias Ausncia de Crescimento

Repetio 2

Repetio 3

5. Discusso A utilizao do meio de cultura sem nitrognio (Dygs) vai garantir que os microrganismos que apresentem crescimento tenham a capacidade de fixar nitrognio. Para determinar se as bactrias geradas nesta prtica so realmente fixadoras de nitrognio necessrio mltiplos replicaes no meio carente desse para ter a certeza de que so diazotrficas. Os fungos que apresentaram crescimento nesta prtica provavelmente sejam produto da m manipulao das amostras (contaminao). Geralmente tambm se faz a replicao das bactrias em meio semi-slido para isolar as bactrias microaeroflicas (BALDANI et al., 1996).

6. Consideraes Finais Para o isolamento de bactrias fixadoras de nitrognio imprescindvel a utilizao do meio de cultura sem nitrognio.

7. Referncia Bibliogrfica

BALDANI, V.; BALDANI, J.; DBEREINER, J. Meios de cultura especficos para isolamento de bactrias endofticas que fixam N Atmosfrico.Comunicado Tcnico . EMBRAPA.N12. 1996

BOMFETI, C.; FLORENTINO, L.; GUIMARES, A.; CARDOSO, P.;GUERREIRO, M; DE SOUZA, F. Exopolysaccharides produced by the symbiotic nitrogen-fixing bacteria of leguminosae. Rev. Bras. Cinc. Solo vol.35 no.3 .2011 DBEREINER, J.; BALDANI, V.L.D.; BALDANI, J.I. Como isolar e identificar bactrias diazotrficas de plantas no-leguminosas. Braslia: Embrapa-SPI; Itagua: Embrapa-CNPAB, 1995. 60p. FRANCHE, C.; LINDSTRM, K.; ELMERICH, C. Nitrogen-fixing bacteria associated with leguminous and non-leguminous plants. Plant Soil. 321:3559, 2009. HERNNDEZ, G. La importancia del nitrgeno en la productividad de la bisfera. (CIFN-UNAM).Hypatia. N6. 2002. MEEKS, J.; ELHAI, J. Regulation of cellular differentiation in filamentous cyanobacteria in free-living and plant-associated symbiotic growth states. Microbiol Mol Biol Rev 66:94121 doi:10.1128/MMBR.66.1.94-121.2002 ROVIRA, A. Rhizosphere research, 85 years of progress and frustration. Keister DL, Cregan PB (eds) .The rhizosphere and plant growth. Kluwer Academic.1991.313p SPRENT, J .Nodulation in legumes. Royal Botanic Gardens, Kew. 2001