1 Bacteriologia Bsica I e II

Dividiremos nosso estudo sobre bacteriologia em : I-Formas Bsicas II-Colorao de Gram III-Crescimento e Morte de Clulas Bacterianas

I)

Formas bsicas :

1.esfricas - cocos 2.cilndricas - bacilos 3.espiraladas - espiroquetas

1) isolado - um par = diplococo - em "colar" = estreptococos, so muito sensveis, no se multiplicando muito em meio mais ou menos slido. - "cacho de uvas" = estafilococos - micrococos sp. = em forma de cubo ou ttrade. - Organizao decorrente da multiplicao e do grau de ligao da bactria. - De acordo com o ambiente, por exemplo, estreptococos pode virar diplococo. - Menor bactria : Mycoplasma (no possuem parede celular, s membrana celular).

2) cocobacilo = muito pequeno, no costuma se agrupar como os cocos. 80% vive isolado em "corrente" = estreptobacilos em letra chinesa = "quebrados" empaliada = um do ladinho do outro bacilos curvos = vibrio (vrgula)

3) no faz nenhum agrupamento Treponema sp = gnero muito importante pleomorfismo = bactrias que apresentam formas variveis. Bactria velha pode sofrer mudanas morfolgicas no pleomorfismo. forma de involuo

2 II) Colorao de Gram (diferencial):

1) pode ser : GRAM + GRAM processo : a) violeta de Ginciana (mnimo de 1 min) b) lugol (Iodo + Iodeto K) - mnimo 1 min c) agente diferenciador : lcool + acetona

em algumas clulas no consegue penetrar : continua azul. (B) em algumas clulas consegue penetrar retirando a colorao azul. (A) d) safranina ou fuccina diluda: contracolorao .

Bactrias A agora se coram em vermelho / rosa e com as bactrias B no acontece nada, ficam azuis.

2)

GRAM + : ficam azuis, pois no permitem a entrada do agente

diferenciador. 3) GRAM - : ficam vermelhas, pois permite entrada do agente

diferenciador.

Nota - Parede celular: camadas mltiplas externamente membrana plasmtica. Tem camada interna que composta por peptideoglicana envolta por uma camada externa (varia espessura e composio qumica). Peptideoglicana - resistncia a meios de baixa presso osmtica como a gua; suporte estrutural e mantm forma caracterstica da bactria; um acar com grupos amina sendo uma esrtutura estvel.

4) Diferenas entre as paredes da bactria GRAM + e GRAM -:

GRAM + : camada de peptideoglicana mais espessa e algumas tambm possuem uma camada de cido teicico externa camada de peptideoglicana. Nota - cido teicico : estrutura anti-gnica importante, reconhecida pelo sistema imune (induz formao de anticorpos espcie - especficos). Encontrado na camada externa da parede celular de GRAM +. Alguns polmeros de cido teicico penetram atravs da camada de peptid3oglicana, ligando-se covalentemente aos lipdeos da membrana citoplasmtica, sendo agora denominada de cido lipoteicico, outros se ligam ao cido murmico da peptideoglicana.

GRAM - : camada externa composta por lipopolissacardeos, lipopoliprotenas e fosfolipdeos. H o espao periplasmtico - entre membrana citoplasmtica e camada de peptideoglicana que em alguma sespcies contm B - lactamases (degrada penicilina ) e B - lactmicas.

GRAM - tem parede mais fina, porm mais complexa. Nas GRAM - possui endotoxinas (lipopolissacardeos). GRAM - deixa entrar agente diferenciador porque tem lipdeos. GRAM + no. Algumas bactrias so pleomrficas em relao colorao GRAM , logo se coram irregularmente. Lisozima ataca paredes de bactrias GRAM +, assim h uma forma involutiva. A lisozima se encontra nas lgrimas, suor e saliva ; rompe esqueleto da peptideoglicana, logo h uma resistncia natural do hospedeiro infeco bacteriana. Estreptococos produzem autolizinas que ficam na parede permitindo entrada de agente diferenciador bactria fica GRAM - forma de involuo. Propriedade tintorial : se GRAM + ou GRAM -. GRAM + pode se tornar GRAM - ao sofrer uma modificao em sua membrana. Bactrias tratadas com lisozima perdem sua parede, mas se forem tratadas em meio com mesma presso osmtica que se interior ficam arredondadas - esferoplastos ; protoplastos. GRAM - no pode se tornar GRAM +. Forma L : GRAM - ou GRAM + que perde sua parede. GRAM + so mais suscetveis penicilina G do que as GRAM -. Nota : protenas porinas funo importante na regulao do transporte de pequenas molculas hidroflicas para o interior da clula. Forma trmero funcionando de modo inespecfico como um canal.

I) Colorao de bacilos lcool - cido resistentes (Zichl Neilsen) 1) Mycobacterium : no se coram com GRAM ; parede diferente das GRAM + e GRAM - ; parede grossa com grande quantidade de lipdeos - cido miclico (60% da parede) ; parede impermevel. 2) Processo : Fucsina concentrada com aquecimento (mais ou menos 10 min): precisa aquecer, pois corante no entra facilmente por causa da parede grossa.

4 lcool + cido : agente diferenciador lcool - cido mais forte que lcool - acetona. Contracolorao : azul de metileno (fraco). Resultado : lcool resistentes ficam vermelhas e as outras azuis. Esquema da parede das GRAM + e GRAM - : no entra nas Mycobactrias.

GRAM +

cpsula peptideoglicana /////////////////// membrana citoplasmtica

GRAM -

camada externa (LPS) peptideoglicana Espao periplsmico //////////// membrana citoplasmtica

LPS : endotoxina ( parte integral da clula, ao contrrio das exotoxinas que so secretadas pela bactria) sendo responsvel por muitos dos sintomas das doenas (ex : choque, febre, etc)

Parede da GRAM - (sequncia de cima para baixo) : LPS (lipdeo - polissacardeo) camada Camada bilipdica externa Protenas lipo (acmulo de enzimas hidrolticas) Camada fina (2 a 8nm) de peptideoglicana Para diferenciar GRAM - : polissacardeo.

II)

Estrutura Bacteriana :

1) Membrana citoplasmtica : 4 funes : a) transporte ativo de molculas para o interior da clula / importante barreira osmtica, no permitindo transporte passivo ; b) gerao de energia por fosforilao oxidativa (substitui mitocndrias das clulas eucariticas); c) sntese de precursores para parede celular; d) secreo de enzimas e toxinas. Peptideoglicana produzido no citoplasma e transportado pela membrana.

5 Permeases : enzimas que provocam a difuso ativa de substncias contra um gradiente de concentrao. 2) Estruturas internas : 2.1) Ncleo : DNA agrupado e disperso o citoplasma. No h ncleo e sim nucleide sem membrana. Mesossomo : invaginao da membrana citoplasmtica que atua como a origem do septo transverso na diviso celular bacteriana e tambm como o stio de ligao do DNA.

2.2) Ribossomo : Stio para sntese de protenas Dispersos no citoplasma Formados de DNA + protenas Tem tamanho e composio qumica diferente dos humanos

2.3) Cromatforos : s nas fotossintticas ; lipdeos + protenas

2.4) Incluses citoplasmticas : Material de acmulo, de reserva Acmulos de acares em forma de glicognio e amido Enxofre : bactria o oxida para produo de energia bactrias sulfaradas lipdeos : visvel no microscpio de fase fosfato inorgnico = granulao metacromtica (cora de uma cor e estrutura se cora de uma cor diferente) Corynibacterium

3) Estruturas de fixao: pelas quais as bactrias se fixam em uma superfcie. Existem bactrias que no se fixam em clulas humanas.

3.1) Glicoclix: Promove agregao entre as bactrias sendo uma massa de filamentos de polissacardeos que fica ao redor da bactria revestindo-a secretadas pelas mesmas. Slime : principalmente GRAM -, tem mais polissacardeos S : principalmente GRAM +, tem mais polipeptdeo

3.2) Fmbrias: Pequenos filamentos que ficam ao redor das GRAM No esto relacionadas com a locomoo Aumentam capacidade de fixao, sendo assim fatores de virulncia

3.3) Pili: Plural de pilus Principalmente em GRAM Pilus de fertilidade ou fmbria sexual = forma ligao entre o macho e a fmea durante a conjugao Faz ligao de bactrias a receptores especficos na superfcie de clulas humanas Compostos por subunidades de protenas - pilina - em forma helicoidal

3.4) Fibrilas: Em GRAM + Em algumas servem com formas de fixao Formadas por cido teicico

2) Cpsula: Camada gelatinosa densa e viscosa que envolve toda bactria Formada por polissacardeos e polipeptdeos Importante fator de virulncia, pois limita capacidade do fagcito em fagocitar a bactria Aumenta capacidade da bactria em propagar doenas No feita normalmente, dependendo das condies ambientais Identificao especfica pode ser feita utilizando-se um anticorpo contra o polissacardeo capsular "reao de Quellung"

3) Esporos: Forma de resistncia da bactria em condies adversas Dois gneros de bastonetes GRAM + produzem : Bacillus (antrax) e Clostridium (ttano e botulismo)

7 Na esporulao ocorre a condensao do material gentico em uma cpsula srie de camadas protetoras esporulao faz com que haja perpetuao da espcie esporo contm DNA bacteriano, pequena poro de citoplasma, peptideoglicana, muito pouca gua, capa espessa (extrema resistncia ao calor, desidratao, radiao e subst6ancias qumicas) pode permanecer quiescente durante anos at encontrar um ambiente favorvel (gua e nutrientes) onde sofrer ao de enzimas especficas dando origem uma bactria metabolicamente ativa e capaz de se reproduzir devido alta resist6encia ao calor e substncias qumicas, a esterilizao no pode ser feita por fervura simples. Deve-se fazer por 30 minutos em vapor sob presso a 121C (autoclavao)

4) Flagelo: Apndices longos e normalmente curvo fazendo movimento em chicote Tipos relacionados localizao na bactria : a) Flagelo polar - em um polo da clula; nico ou em conjunto / b) Flagelo ao redor da clula = pertriqueo (no gnero Proteus) Formado por subunidades de protenas - flagelina, semelhante miosina muscular sua alterao conformacional provoca o movimento Nas Salmonella sp, por ex, h sua identificao em laboratrios clnicos por anticorpos especficos dirigidos contra protenas falgelares caracterstica anti-gnica

5) Filamento axial: estrutura de locomoo interna, envolvendo o corpo da bactria por dentro; tem movimento em espiral

6) Corpo basal: estrutura que fixa os flagelos nos envoltrios externos da bactria

I) Metabolismo Bacteriano : 1) Obteno de energia : Fonte de energia Luz Fototrpicas Fonte de C reaes de oxidorreduo Quimiotrficas fonte de C

8 CO2 compostos orgnicos CO2 compostos orgnicos

fotolitotrficas fotoautotrfica

fotoorganotrficas fotoheterotrfica

quimiolitotrfica quimioautotrfica

quimioorganotrficas quimioheterotrfica

Pratrficas : metabolismo defeituoso, se der C orgnico no consegue sintetizar todos os compostos. S consegue viver na clula hospedeira. Ex : clasmdeos, requtsea.

1.1) Respirao aerbica 1.2) Respirao anaerbica 1.3) Fermentao Quimiotrficas

No so processos exclusivos! No existem bactrias que s fermentam Todas quimiotrficas respiram

Diferenas entre fermentao e respirao Na respirao : hidrognios e eltrons transportados por receptores inorgnicos. Se receptor for O2 aerbica, se no for anaerbica. No existe bactria que faz respirao aerbica e anaerbica Na fermentao : com receptores orgnicos

Produto final : 1.1) mais rentvel que a anerbica 1.3) menos rentvel dos 3 processos composto inicial : piruvato

Fermentao alcolica : produto final - lcool etlico ; no to importante para as bactrias e sim para as leveduras Fermentao ltica : Streptococos - bactria de interesse mdico Fermentao propinica : produto final - cido propinico. Ex : Corinibacterium / Propionibacterium = fazem tambm respirao anaerbica

9 Fermentao butrica : produto final - cido butrico, lcool butrico e cido Bhidroxibutrico = tambm realizam respirao anerbica Fermentao butilenogliclica : Enterobacter / butilenoglicol Fermentao acidamista : produtos finais - cido actico, lcool etlico, cido succnico

Nota : * hidrolases - molculas grandes se transformam em monmeros. * autolizinas esto normalmente inibidas, a penicilina destri inibidores das autolizinas, logo a parede destruda.

2) Enzimas bacterianas: Classificao : A. extracelulares B. ectocelulares C. endocelulares

A. catalase : protege bactrias contra ao da H2O2 produzida na fagocitose coagulase : fibrinognio, fibrina penicilase : age sobre penicilina

B. agem na membrana (permeabilidade seletiva) nos processos respiratrios e na sntese de parede

C. fazem sntese de grnulos de reserva, enzimas envolvidas no catabolismo

enzimas de constituio: produo permanente, reguladas pelo PH, concentrao do substrato, etc... enzimas de induo: s quando h necessidade ; reguladas pela sua sntese atravs do status do gene (se est ou no ativado). So ativados pelos operons. Produto final inibe ativador dos operons, "desligando" assim o gene

3) Consumo de energia : Biossntese Locomoo Transporte ativo

10 Produo de calor Somente os processos de biossntese de parede e grnulos de reserva so diferentes das clulas eucariticas II) Nutrio Bacteriana : 1) gua : 85% de uma bactria faz termorregulao mantendo a temperatura constante e mantm presso osmtica nutrientes precisam estar dissolvidos em gua para serem absorvidos bactria lcool-cido resitentes resistem dessecao. Ex : Micobacterium (bacilo de Kock = causador da tuberculose = Mycobacterium tuberculoses - parede lipdica espessa impede sada de gua, podendo ser transmitido pelo ar) 2) Bactrias fotossintticas: absorve energia solar pela clorofila ou rodopsina (pigmento vermelho). Reao endergnica: absorve energia da clorofila que absorveu da luz solar 3) Bactrias quimiossintticas: energia vem da oxidao de substratos 4) Paratrficas: Ex - Mycobacterium leprae , Kiccketsia prowazeku (peste negra), Chlamydia trachomatis. Sobrevivem somente dentro de clulas vivas. 5) Fontes de carbono: existem bactrias que alm do CO2 (compostos inorgnicos) precisam de compostos orgnicos. Ex:Neisseria gononholae 6) Fontes de nitrognio: grande maioria utiliza amnia 7) ons inorgnicos essenciais: Enxofre necessrio em grande quantidade para fazer aminocido NaCl geralmente em 0,9%, mas existem bactrias halfilas facultativas 2 - 15% NaCl e bactrias halfilas extremas 30% NaCl - Ex : Staphylococcus aureus (causam intoxicao alimentar) 8) Fatores de crescimento: alimentos vitaminas , principalmente complexo 7) Bactrias aerbicas : Estritas: precisam de O2, pois seu sistema de gerao de ATP dependente de O2 como aceptor de hidrognio. Microaerfilas: precisam de O2, s que no na concentrao atmosfrica. Tm catalase, mas no tm superxido desmutase . Nota : catalase e superxido desmutase so as enzimas utilizadas no aproveitamento do O2.

11 Superxido desmutase : 2 O2 + 2 H+ Catalase : 2 H2O2 2 H2O + O2 H2O2 + O2

10) Bactria anaerbicas: Estritas : algumas suportam a presena de O2, mas no se multiplicam. Outras morrem rapidamente. No tem superxido desmutase e catalase. Aceptor final uma substncia inorgnica. Ex :Clostridium sp (ttano) Facultativas : fermentao quando h ausncia de O2 suficiente ( importantes, pois diminuem o PH impedindo instalaio de outras bactrias / tem bastante na flora intestinal e vagina da mulher adulta) e respirao aerbica na presena de O2.

11) Meios de cultura: quanto ao estado fsico: lquido, slido (hoje : gar / vantagem : colnias isoladas), semi-slido (gar em menor concentrao)/ vantagem : saber se bactria tem mobilidade ou no. Quanto concentrao: gar chocolate mais sangue aquecido para quebrar molculas (mais fcil para as bactrias se proliferarem).

12) Meio seletivo: algumas bactrias morrem e outras no. H uma seleo. Meio diferencial : bactrias se apresentam com cores diferentes.

13) Condies de cultivo: Ph adequado temperatura tempo de incubao atmosfera de O2 adequado Nota : bactrias so rpidas para proliferar, mais demorada : bacilo da lepra (14 dias para 1 dar 2). III) Crescimento e morte de clulas bacterianas: Bactrias se reproduzem por fisso binria / bipartio / cissiparidade na qual uma clula parenteral origina duas clulas filhas crescimento exponencial (crescimento logartimica).

12 Tempo de duplicao: Ex - 20 min para e.coli e 24 h Mycobacterium tuberculosis. O tempo de duplicao varia com a espcie, quantidade de nutientes, temperatura, PH e outros fatores ambientais. Contagem do nmero total de bactrias: placa de Petroff = cmara de contagem n de bactrias/ml ou mm3. Tambm uas-se contadores eletrnicos que contam n de bactrias/ml atravs da captao de sua movimentao. Contagem do n de bactrias viveis: mais usada. Usa-se para fazer soro, vacinas, exames, em alimentao. Tcnica mais utilizada : diluio em placas diluies sucessivas da suspenso - me coloca-se em estufas cada bactria vai produzir uma colnia conta-se n de colnias diludas e compara com suspenso - me. Alas calibradas: para exame de urina / ala com volume conhecido, espalha em placa, conta n de colnias no dia seguinte Tcnicas para grande volume e pequeno n de bactrias : filtrao / membranas filtrantes : sistema fechado; bactrias ficam retidas no filtro e sero colocadas no meio de cultura para posterior contagem de bactrias vivas por quantidade total de gua que passou pelo filtro. Nmero mais provvel : NMP para contagem de poucas bactrias. Srie de 3 ou 5 tubos contendo mesmo volume com um indicador de crescimento... depois conta em quantos tubos houve crescimento e compara-se com tabela de NMP. Usado em controles da populao bacteriana de alimentos, cosmticos, etc ...

curva de crescimento bacteriano : ciclo apresenta 4 fases principais log do n bact. 1: fase lag ou de espera 2: fase exponencial 3: fase estacionria 4: fase de degradao tempo

13 1: metabolismo altssimo, mas sem diviso celular. Durao depende do meio de cultura. 2: rpida diviso celular, bactria vai crescer em PG. uma reta cuja inclinao vai depender da velocidade de diviso das bactrias. (penicilina atua nessa fase, pois h produo de peptideoglicana). 3: ocorre quando h carncia de nutrientes. Nmero de mortes se iguala ao nmero de clulas novas produzidas, resultando em uma situao de equilbrio na populao. 4: declnio no n de clulas viveis. Nmero de catablitos aumenta at provocar morte de todas clulas. Nota : Quimiostato - aparelho no qual nutrientes esto sendo acrescidos e os produtos da degradao removidos. Assim, clulas podem permanecer na fase exponencial e no entrar na fase estacionria.

Morte: perda irreversvel da capacidade de reproduo. Avaliao da morte = usa-se um agente bactericida.

I) Ao de agentes fsicos sobre os microrganismos:

1) Conceitos : Desinfetante: desinfeco = morte de muitos, mas no de todos os microrganismos. Os desinfetantes variam em relao danificao dos tecidos : fenol - objetos inanimados / etanol e iodo - superfcies cut6aneas. Anti-sptico: subst6ancia qumica utilizada para matar microrganismos da superfcie da pele e mucosas. Ex : mertiolate; PUP - Iodo (polevidine). Sanitizao : tcnicas de evitar comprometimento na sade pblica. Utilizado para utenslios pblicos, lugares, ... Esterilizao: eliminao de um determinado material de todos os microrganismos, inclusive os esporos de bactrias que so altamente resistentes. Normalmente utilizada por autoclavao : exposio ao vapor a 121C por um perodo de 15 min. Solues intravenosas esterelizadas por filtrao e instrumentos cirrgicos por exposio ao xido de etileno (podem ser danificados por calor mido). Agente bactericida /fungicida / vivicida = substncias microbicidas : matam micrbios.

14 Bacteriostticos / virostticos / fungistticos = substncias microstticas, s param crescimento. (ex : maioria dos antibiticos ). Antibiticos = drogas produzidas por microrganismos (penicilina). Quimioterpicos : drogas de origem botnica ou sinttica = sulfa. Quimioterpicos _ antibiticos = agentes antimicrobianos : tm toxidez seletiva maior que o desinfetante, mas ainda provocam inmeros efeitos colaterais. Maioria so mcrostticos, ou seja, agem em fases do metabolismo. Assepsia : aus6encia de micrbios / precisa de procedimentos trabalhosos / usam quase todas as substncias anteriormente descritas (por ltimo : antimicrobianos).

2) Agentes fsicos:

2.1) Calor mido: Denatura protena e funde lipdeo. muito mais eficiente que o calor seco, mais microbicida. Tem alto calor latente (demora para esquentar e esfriar - conserva melhor o calor) Alto poder de penetrao e faz pontes de hidrognio com protena denaturada impedindo-a de voltar ao normal. O calor mido utiliza temperaturas mais baixas que o seco. Tcnicas utilizadas:

fervura simples: esporos resistem essa fervura. Mata maior parte das formas Autoclavao: mata todos os micrbios / fervura a mais de 100C/ aumenta-se a

vegetativas dos micrbios.

presso e eleva-se a temperatura at 121C por 30 min - mata tudo (EX :Clostridium botulinum - em formas de esporos resistem de 3 a 5 h de fervura a 100C. Produz toxina que inibe liberao de acetilcolina)

Autoclave em material cirrgico : no pode por em lata, pois ter calor seco em

121C o que no suficiente, deve-se embrulhar em um pano e depois guardar em um forno para manter o processo.

Pasteurizao : aquecimento a 62C por 30 min, seguido por um resfriamento

rpido. Pasteurizao rpida - HTSH = 72C por 15 segundos - no esteriliza o leite. VHT - 135-145C por 1 a 2 seg e depois resfriamento em 5 seg em temperatura ambiente para manter propriedades organolpticas.

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Tindalizao : Tindal achou forma de eliminar esporos s fervendo. Caldo com

esporos eram fervidos durante 3 dias seguidos por 30 minutos. Mata formas vegetativas e esporos que passam a formas vegetativas. Usada para solues que no suportam a temperatura do autoclave. No h certeza de esterilizao, s a autoclavao tem essa certeza.

2.2) Calor seco: Chama direta e forno e Pasteur Chama direta / flambagem : usada para desprezar materiais descartveis para no haver contaminao do ambiente (incineradores de hospitais muito limitada de esterilizao. Forno de Pasteur : temperatura tem que ser maior que o autoclave, pois no h penetrao da gua / 170-180 1,5 a 2 h para esterelizar material (so embrulhados em papis resistentes) / material cirrgico dentro de latas fechadas tem corte diminudo, existem tcnicas que preservam mais a meia vida do instrumento. Nota 1 : morte trmica - TRD (tempo de reduo decimal) = morte de 90% da populao em 10 min. Usado para esterelizar determinadas solues. Nota 2 : solues injetveis no podem Ter pirognios endgenos. uma tcnica

3) Frio: No eficiente No permite multiplicao das bactrias Alguns autores acham que submetidas ao frio lento formam-se cristais que perfurariam a membrana das bactrias. Congelamento rpido : tcnica de liofilizao - usada principalmente na preservao de vacinas.

se usa nitrognio lquido (-196C) sublimao em auto-vcuo - fica somente o "esqueleto"da bactria / quando for

usar s acrescentar mesmo volume de gua que foi retirado. Nota 1 : Bacilo cereus do arroz - causa intoxicao / arroz deve ser guardado na geladeira. Nota 2 : toxiinfeco - ingere-se bactria que dentro do organismo produzir toxinas.

1) Radiao:

16 Existem 2 tipos: Ultravioleta (A) Ionizante (B) (A) melhor atividade antimicrobiana na faixa de 250-260nm no tem muito poder de penetrao, barrado pelo vidro. desinfetante. No desinfetante, pois bactrias possuem tcnicas de correo das mutaes causadas. Principal mecanismo de ao : sobre o DNA formando dmeros de timina adjacentes / quebra pontes de hidrognio e promove ligaes covalentes entre timinas adjacentes. Assim, a replicao de DNA inibida fazendo com que o organismo no possa mais crescer. Mecanismos de reparo : Fotorreativao - correo mais rpida, ocorre em presena de luz visvel que ativa enzimas que realiza os cortes de todos os dmeros. Reativao no escuro - mais lento que a fotorreativao, mas to eficiente quanto / usa 4 enzimas (1- corte, 2-ampliao do vo, 3-cpia do certo, 4- junta/liga pontas).

(B) Raio X (0,1 a 10 nm) e Raio gama (0,001 a 0,1 nm) : ordem de grandeza semelhantes. Tem diferena na origem Raio X : vem do bombardeamento de elemento (movimento dos eltrons entre as camadas liberam R-X). Raio gama : emisso radioativa nuclear - vem da desintegrao dos ncleos instveis. Ioniza tudo que v pela frente : "arranca"elrtons. Ioniza a gua que 85% do bactria. Tem ao instantnea ao contrrio da ultravioleta. Dependendo da concentrao esterelizante. Os materiais que recebem Raio gama no retm radiao, pois ao instantnea. Alimento tem 30% de reduo do seu estrago.

2) Vibraes snicas: no muito eficiente. Faz molculas vibrarem podendo quebrlas. Utilizao : obteno de pedaos de bactrias em pesquisas.

3) Filtrao: Tipos de filtro : porcelana porosa

17 Vidro sintetizado Celulose (mais usado / filtro milliporo)

Filtros HEPA (alta eficcia) : para manter ambientes livres de micrbios como salas de cirurgia e salas de computador (no pode ter poeira). um filtro de celulose com vrias dobras - no h turbilhonamento doar, este deve seguir um fluxo laminar. Se ocorrer turbilhonamento a poeira pode ser levantada.

I)

Ao de agentes qumicos sobre os microrganismos:

1) Mecanismos bsicos de ao denaturao de protenas solubilizao de lipdeos 2) Fenis denaturam protenas e causam danos membrana. Hexaclorofeno : foi muito utilizado em pastas de dente, mas foi abandonado por ser cancergeno. Cresol um derivado do fenol : o ingrediente ativo do Lisofrmio. Eugenol : desinfeta buraco de crie / no anti-sptico / se encostar na gengiva arde. Fenol um padro para seus derivados = coeficiente fenlico. Ex: mertiolate - CF = 0,5. Assim, tem metade da ao do fenol / fraco.

1) Oxidantes:

Cloro: um desinfetante largamente utilizado para purificar o abastecimento de gua e para o tratamento de piscinas. O cloro em gua d hipoclorito (gua sanitria) usado com desinfetante em casas e hospitais. Oxignio mais eletronegativo que o cloro, por isso rouba eltrons deste formando gua e ction clornio (potente oxidante). A concentrao de cloro ativo que se deve usar de 0,5% para ser eficiente. Mata atravs de ligaes cruzadas nos grupamentos sulfidrlicos essenciais das enzimas formando pontes dissulfeto inativas.

Gluconato de clorhexidina : anti-sptico usado para lavar as mos no hospital.

18 Iodo : tambm inativa as enzimas que contm pontes dissulfeto e se liga especificamente a resduos de tirosina nas protenas. o melhor anti-sptico cutneo utilizado. Tem duas formas : tintura de iodo (iodo a 2% mais KI em etanol- lcool iodado) = prepara pele antes da retirada de sangue / deve ser retirado com lcool ; DUP -I = polivinilpirolidona + iodo / menos irritante / tem um pouco de ao detergente / preparar pele antes de uam cirurgia

Hipoclorito de sdio (lquido) / hipoclorito de clcio(slido) - em piscinas (cloro gasoso tem aplicao complicada).

gua oxigenada boa em tecidos necrosados, pois hemcias possuem catalase liberando O2.

Esterilizao por plasma de H2O2 (soluo aquosa de H2O2 50%) = o mais moderno desinfetante de materiais (no explosivo, mais barato, no resulta em resduos txicos, aumenta durabilidade dos materiais, rapidez).

xido de etileno : vai ser substitudo pelo plasma. Tempo de durao : 20 a 36 h ( 55C) contra 75 min do plasma.

2) Alquilante:

Radical alquila (radicais orgnicos de cadeia aberta).

xido de etileno quando utilizado em material anteriormente bombardeado por Raio gama formava cloridrinas cancergenas - um crime. Acrescenta radical alquila. Altamente explosivo, irritante e cancergeno. Acaba com ptes de hidrognio.

Formol : substituio dos radicais -SH e -NH por CH3. Denatura protena - quebra pte de H. Faz alquilao.

B-propiolactona : acrescenta radical propila. Processo muito longo (20 a 36h).

19 Glutaraldedo 2% : no explosivo. Usado por oftalmologistas e em hospitais para esterelizao de equipamentos de terapia respiratria. 10 min = desinfeco / 3-10h esterelizao. Muito mais eficaz que o formaldedo.

3) Alcois: Principalmente desorganiza membrana lipdica, mas tambm denatura. Para sua atividade mxima requer presena de gua (maior poder de penetrao). O isoproplco o melhor, mas muito caro, por isso usa-se o etlico que no to eficiente, sendo ento um potencializador de outras substncias.

4) Metais pesados: Mercrio / prata : melhores atividades antimicrobianas entre os metais pesados e so os mais utilizados. O mertiolate um pssimo anti-sptico, o mercrio cromo tambm, mas este secativo ao contrrio do primeiro. Se ligam aos radicais -SH retirando H, mas essa uma reao reversvel. Nitrato de prata usado para preveno da oftalmia gonoccica de neonatos que provocada pela Neisseria gononhocar. Sulfadiazina de prata usada para a preveno de infeco em queimaduras.

Detergentes : agem principalmente nos lipdeos da membrana. Contm uma poro hidrofbica e uma poro hidroflica que pode ser um ction ou um nion. So surfactantes ativos. Cloreto de benzalcnio = usado no lugar do mertiolate ; um etergente catinico. Conservantes de alimentos : tolerados por ns e diminuem a contaminao.

Sal - em alta concentrao conservante / desidrata bactria.

Acar - cicatrizao de feridas cirrgicas (no irritante e fonte de energia para as clulas do local). Tambm desidrata.

I) Gentica e Variao Bacteriana: 1) Introduo: Em colnias existem os monomorfistas = mesmas bactrias tm sempre as mesmas caractersticas, j que a reproduo por diviso binria. Mas tambm existem algumas

20 bactrias que apresentam caractersticas diferentes, isso pode acontecer atravs de 2 mecanismos variao fenotpica, variao genotpica

Variao fenotpica:

fentipo - aquilo que se manifesta. No ocorre alterao gentica, as variaes ocorrem em funo do meio

ambiente. Assim, cessado o estmulo, a bactria volta a ser o que era antes.

Exemplo 1 : produo de cpsulas por Klebsiella pneumoniae (bacilo GRAM -

com cpsula) cessada por falta de acar no meio, mas no param multiplicao.

Exemplo 2 : raas de Corynibacterium dihteriae produzem toxinas o tempo

todo, mas em presena de Fe 2+ h inibio.

Exemplo 3 : Proteus spp so extremamente mveis (flagelos) o que dificulta o

se isolamento e posterior estudo. Ento, usa-se formol para inibir o crescimento de flagelo ou usa-se anticorpos contra os flagelos.

Variao genotpica:

no reversvel. Bactrias so haplides, sendo o cromossomo bacteriano nico e circular

formado por dupla fita de DNA espalhado no citoplasma (sem carioteca).

Normalmente duplicao de DNA sincrnico com a diviso celular. Plasmdeos de DNA, podendo estar presentes ou no, dando novas

caractersticas s bactrias que os possuem. Bem menores que os cromossomos. So capazes de se duplicar independentemente do cromosssoma bacteriano.

Plasmdeo F : d capacidade de fazer trocas genticas por conjugao entre

bactrias. Bactria com plasmdeo F faz ponte citoplasmtica (fimbria sexual) com outra bactria e passa uma cpia do plasmdeo. Alguns se integram no cromossomo, mas muito raro. Plasmdeo + cromossomo - h passagem somente de genes, pois a fimbria quebra logo.

Plasmdeo R : (R= resistncia) tem genes que promovem resistncia a

antimicrobianos. Age como o F.

Plasmdeo bacteriocinognio : produzem bactericinas que matam outras

bactrias. Ex : S.coli - colicina ; Pseudomonas - piocinas. Mecanismo para elas prevalecerem no ambiente.

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Transposons : pedaos lineares pequenos de DNA que se movem de um stio

para outro no DNA celular ou entre o DNA de bactrias, de plasmdeos e de bacterifagos. So denominados de "genes saltadores". No so capazes de se duplicar independentemente. Codificam enzimas relacionadas resistncia a drogas e podem causar mutaes. Em sua terminao possuem sequncias palindromicas.

Prfago : so vrus temperados que infectam bactrias, mas que no causam sua

lise (morte). Se inserem no cromossomo ou via plasmdeo. Se multiplica normalmente com a bactria, mas para manter sua espcie ele de vez em quando entra em um ciclo ltico (ciclo lisognico ).

Mutao espontnea : se d por tautomerizao das bases do DNA.

Tautomerizao da timina da forma cetnica para a enlica (muda adenina para guanina = erro de replicao). Pode haver tautomerizao induzida atravs e anlogos de timina que causaro um maior enolizao e maior porcentagem de erros na replicao. Pode ser ou no compatvel com a vida.

Transferncia de material gentico entre as bactrias : pode ocorrer de 3 formas -

conjugao, transduo e transformao. Conjugao : cruzamento entre duas bactrias durante a qual o DNA transferido da clula doadora para a receptora e controlado pelo plasmdeo F que carrega os genes que codificam as protenas necessrias conjugao (mais importante - pilina = pilus sexual).

Transformao: transferncia do DNA por si de uma clula para outra. Raro in

vivo. Pode ocorrer das seguintes formas : pode-se extrair DNA de um tipo de bactria e introduzi-lo em uma bactria geneticamente diferente ; ou uma bactria que foi morta pode liberar seu contedo gentico e este ser captado por outra bactria. Ex :Streptococos pneumoniae - mistura das que no fazem cpsula com extrato das que fazem... resultado : as que no faziam passam a fazer.

Transduo: um bacterifago ao fazer sua cpsula no interior da bactria pode

juntar ao seu material gentico pedaos do material gentico da bactria. Assim, quando for infectar outra bactria trar para dentro dela material gentico de outra clula bacteriana. a transferncia de DNA atravs de vrus bacterianos. Pode ser de dois tipos : generalizado (vrus carrega um segmento de qualquer regio do cromossomo bacteriano) e especializado (maioria dos fagos temperados possuem stios especficos de integrao do DNA bacteriano. Assim, os genes celulares transduzidos so geralmente especficos para aquele vrus).

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Converso fgica : DNA do fago d capacidade da bactria de produzir coisas.

Ex : Clostridium botulinum (toxina botulnica), Corynebacterium diphteridae (toxina diftrica), Streptococos pyogenius (toxina eritrognica).

Presso seletiva : uso indiscriminado de antibiticos causa uma enorme seleo.

Em hospitais a seleo gravssima. Com a parada do uso prolongado de antibiticos, poderia-se selecionar as bactrias sensveis por falta de uso dos genes de resistncia, mas isso vai contra interesses econmicos das indstrias farmacuticas.