Produo e Aplicaes de Biossurfactantes

Laboratrio de Microbiologia Industrial

Prof. Dr. Jonas Contiero

TPICOS A SEREM ABORDADOS

Surfactantes Biossurfactantes Classes e Microrganismos produtores Propriedades Biossurfactantes x Surfactantes Produo de Biossurfactantes Aplicaes Pesquisas desenvolvidas e em desenvolvimento

Introduo
Surfactantes:
- compostos qumicos, utilizados em diversos setores industriais; - maioria sintetizados a partir de derivados de petrleo;
- at 1965, os surfactantes presentes nos detergentes no eram biodegradveis;

- so molculas anfipticas: uma poro hidrofbica e uma poro hidroflica. - os surfactantes diminuem a tenso superficial da gua. - aps a CMC, as molculas de surfactante, na soluo, passam a se agregar sob a forma de micelas.

Molcula anfiptica

Surfactantes
Molcula anfiptica;

Atividade de superfcie:Propriedades que os

biosurfactantes conferem:Diminuio da tenso superficial, tenso interfacial e formao de microemulses

Origem;

Biossurfactantes
Compostos de origem microbiana que exibem propriedades surfactantes, e consistem em subprodutos metablicos de bactrias, fungos e leveduras.

MOTIVAO PARA A PESQUISA

Vazamentos de petrleo

Vazamentos em postos de combustveis

Acmulo de resduos

DESAFIO
Produto de Origem Microbiana Biorremediao de Hidrocarbonetos Vantagens Ecolgicas, Sociais e Econmicas Biosurfactantes

Biossurfactantes
Definio: biotensoativos ou biosurfactantes so molculas anfipticas, com uma poro hidroflica e outra hidrofbica, com habilidade de causar emulsificao em uma mistura de gua-leo Estrutura de um biossurfactante (BOGNOLO, 1999; CAMEOTRA e MAKKAR, 1998)

Poro Hidroflica Poro Hidrofbica

Poro hidroflica: aminocidos [glutamato, aspartato,lisina, ornitina e arginina] ou peptdeos[consistindo de aminocidos hidroflicos], carboidratos, fosfato, cido carboxilico, lcool, etc. Poro hidrofbica: cidos graxos saturados ou insaturados

ar c. graxos de cadeia longa Carboidratos Aminocidos Grupo fosfato gua lcool

Classes de Biosurfactantes
cidos graxos hidroxilados e ligados por ligaes cruzadas (cido miclico) Glicolipdeos Complexo Polissacardeo-lipdeo Lipoprotenas-lipopeptideos Fosfolipdeos Superfcie celular completa

Biossurfactantes

1.2 Classes e microrganismos produtores Biotensoativo Glicolipdios Ramnolipdios Trealolipdios

Pseudomonas sp Burkholderia sp
Rhodococcus erythopolis

Microrganismo

Nocardia erythopolis Mycobacterium sp Soforolipdios Manosileritritol

Torulopsis sp Candida antartica

Fonte: DESAI e BANAT (1997 e 2000)

Biossurfactantes

1.2 Classes e microrganismos produtores

Biotensoativo Lipopeptdios e Lipoprotenas Peptidolipdio Viscosin Surfactin Acidos graxos e fosfolipdios cidos graxos Fosfolipdios Surfactantes polimricos Emulsan Manana lipdio protena Corynebacterium lepus Thiobacillus thiooxidans Anthrobacter calcoaceticus Candida tropicalis Microrganismo Bacillus lincheformis Pseudomonas fluorescens Bacillus subtilis

Liposan Candida lipolytica Fonte: DESAI e BANAT (1997 e 2000)

Tipos de biosurfactantes
Glicolipideos
Lipideos-trealose [Dissacarideo trealose ligado ao C6 e C6do cido micolico] associado a estrutura da membrana da parede de muitas espcies dos genros Mycobacterium, Nocardia e Corynebacterium . Reduo da tenso superficial para 25-30mN/m e tenso interfacial por volta de 1 mN/m

Ramnolipideos [uma ou duas molculas de ramnose ligada a uma ou duas molculas de cido -hidroxidecanoico] Produzido por Pseudomonas aeruginosa. Reduo da tenso superficial para 2530mN/m e tenso interfacial por volta de 1 mN/m

Soforolipideos [consiste de um carboidrato dimrico da soforose ligado a uma cadeia longa de cido hidroxicarboxilico]. Produtores: Torulopsis bombicola, T. petrophilum, T. apicola e Candida bogoriensis Tenso interfacial: 40-5mN/m No bom agente emulsificante

Fofolipideos e cidos graxos: Produzido por certas bactrias e

leveduras quando do crescimento sobre n-alcanos. Thiobacillus thiooxidans, Pseudomonas aeruginosa 44T1 [crescendo sobre hexadecano e leo de oliva, produz de 405-80% w/w de lipdeo

Lipopeptideo/lipoproteinas: Antibitico decapeptideo

[Gramicidina], Bacillus brevis Antibitico lipopeptideo [Polimixina], Bacillus polymixa. Inclui-se aqui tambm T. thiooxidans, produtor de cerilipina, Agrobacterium tumefaciens e Streptomyces sioyaensis

Surfactina: lipopeptideo produzido por Bacillus subtilis Esse

biosurfactante bem conhecido, podendo diminuir a tenso superficial de 72mN/m para 27,9 mN/m quando na concentrao de 0,005%. Limite de seu uso: habilidade de lisar clulas do sangue

Biosurfactante BL-86 : produzido por B. licheniformis, reduz

tenso supreficial para 27 dinas/cm e interfacial entre gua e nhexadecano para 0,36 dinas/cm

Biosurfactantes polimricos: Caracteristicas: alto massa molar, alta

viscosidade, resistncia a tenso e fora de cisalhamento Exemplos: Emulsan, produzido por Acinetobacter calcoaceticus RAG-1 No reduz a tenso apreciavelmente, mas atua como um agente emulsificante efetivo para hidrocarbonetos em gua [0,001%-0,01%]

Biodespersan: produzido por A. calcoaceticus O componente ativo

um heteropolissacardeo anionico, com massa molar de 51.400
Liposan : produzido por C. lipolytica, um emulsificador solvel em gua,

com composio de 83% de carboidrato e 17% protena. A poro carboidrato contm: glicose, galactose, galactosamina e cido galacturnico Surfactantes particulados: Acumulo de vesculas de membrana extracelular, contendo proteina, fosfolipdeos e polissacardeos. Produtores : Streptococcus, Staphylococcus aureus, Aeromonas salmonicids, etc

C H3 C H3 (C H 2 ) 9 C HOH C O C H2 O O NH NH HO C CH3 O C O HO NH C C H3 O e m u ls a n -n O O HO O C O O O (C H 2 ) 8 C HOH C H2 C O C H2 OO O

(C H 2 ) 1 2 C H3

CH2OR O OH HO ROH2 C O OH HO OH O O

CH3 CH (CH2 )15 COOH

L-Asp

D-Leu

L-Leu

O HC (CH2)9

CH3 CH CH3 O

L-Val D-Leu L-Leu L-Glu

CH2 C

surfactina

soforolipdeo

CH3
O HO O CH3 OH O HO O CH CH2 C O CH CH2 COOH ramnolipdeo (CH2)6 CH3 O (CH2)6 CH3

(CH2)n CH2O O O CO OH O OH OCH2 m + n = 27 - 31 CO CH CHOH OH (CH2)m CH3

OH (CH2)m CH3 OH CHOH CH

CH3 OH OH

(CH2)n CH3 trehalolipdeo

Estruturas qumicas de alguns biosurfactantes

Biossurfactantes

Propriedades (Desai e Banat, 1997)

Reduo das tenses superficial e interfacial

Emulsificao Solubilizao Detergncia

Biossurfactantes

Propriedades (Desai e Banat, 1997) Habilidade em formar micelas

Concentrao Micelar Crtica

CMC

Ramnolipdeos
Prop. fsicas
Solubilidade

CMC - 15-200 mg/L

T. superficial T. interfacial

[ ] biossurfactante

Formao de Micela

Formao de Micela

C.M.C. Concentrao Micelar Crtica

Biossurfactantes x Surfactantes

Aspectos Positivos
so compostos biodegradveis; no so txicos ao ambiente; possuem maior seletividade e atividade especfica; continuam ativos sob condies extremas de pH,temperatura e salinidade; so produzidos renovveis. a partir de fontes

Biossurfactantes x Surfactantes
Entrave ampla utilizao de Biossurfactantes

$
Custos de produo Seleo de linhagens altamente produtoras Uso de engenharia gentica Matria-prima de baixo custo Otimizao do processo (reatores)

Produo de Biossurfactantes Matria-prima

leo residual de fritura Efluente do processamento de batata R.do process. leo soja gua de manipueira R.do proces. leo giras. R.de refinaria de leo

Microrg.(rend. g/L)
P. aeruginosa (2,7) Bacillus subtilis P. aeruginosa (11,72) B.Subtilis (2,2 3,0) P. aeruginosa (16,0) C. antartica /C. apicola (10,5/13,4)

Resduo de destilaria
Fonte: Mukherjee et al., (2006)

P. aeruginosa (0,92)

Matria prima utilizada no LMI para produo de Biosurfactante Borra de Petrleo Elementos inorgnicos presentes na Borra

Borra de leo de Soja

Composition of fatty acids from oil refinery waste used as carbon source by P. aeruginosa LBI % (w/w) FATTY ACID COMPOSITION C16 palmitic C18 stearic C18:1 oleic C18:2 linoleic C18:3 linilenic R. OIL WASTES (SOAPSTOCK) 16.66 3.58 22.9 50.28 4.54

Nitschke et al, 2005 Biotechnology Progress

Composio do leo de fritura

Pirllo et al, 2008 Journal Applied Microbiology

Produo de Biossurfactantes Padres de Produo (Sylddatk e Wagner,

1987)

Produo associada ao crescimento; Produo sob condies limitantes de crescimento; Produo por clulas no proliferantes; Produo com adio de precursores.

BIOSSINTESE DE BIOSURFACTANTE Biossurfactante: Duas pores: hidroflica e hidrofbica Diversas vias metablicas esto envolvidas na sntese desse dois compostos, utilizando enzimas especficas. Em muitos casos a primeira enzima na via metablica do precursor nica e sofre regulao 1. De novo sntese das pores hidroflicas e hidrofbicas atravs de duas vias independentes seguida da ligao 2. De novo sntese da poro hidroflica e a sntese da poro hidrofbica dependente do substrato 3. De novo sntese da poro hidrofbica e a sntese da poro hidroflica dependente do substrato

Regulao
1. Por induo: Em geral microrganismos produzem biosurfactantes quando crescem em meios contendo substratos insolveis em gua Utilizao de indutores como longas cadeias de cidos graxos, hidrocarbonetos ou glicerdeos n meio de crescimento de T. magnoliae aumentava a produo de soforolipideos 2. Regulao catablica: Ocorre atravs da glicose ou metablitos primrios. Actinobacter calcoaceticus e A .paraffineus no produzem biosurfactante quando crescidas em cido orgnicos e glicose respectivamente. 3. Efeito da fonte de Nitrognio e ctions multivalentes. Sais de amnia e de uria tem sido citado como fonte preferida no caso de A paraffineus Em Pseudomonas aeruginosa RC-II amnia e glutamina em alta concentrao reprime a sntese de biosurfactante A limitao de ctions multivalentes tambm causa superproduo de biosurfactante em Pseudomonas spp.

Sntese de cido graxo

Gliconeognese

D-glicose cido hidroxidecanico

3;4

TDP-glicose

hidroxidecanoil--cido hidroxidecanico

TDP-Ramnose

2 RH2 3 RH3 4 RH4

L-ramnosil- hidroxidecanoil-ido hidroxidecanico

2;4

L-ramnosil-L-ramnosil- hidroxidecanoil- -cido hidroxidecanico

Produo de Biosurfactante
Produo de biosurfactante via fermentao: Dependendo da natureza do biosurfactante e do microrganismo produtor, a produo pode ocorrer como: 1. Produo associada ao crescimento Parmetros importantes: Tipo de Fonte de carbono, Tipo de adio de Nitrognio, Velocidade de agitao, transferncia de oxignio 2. Produo sob condies de crescimento limitante Quando a concentrao de Nitrognio limitante. A razo C:N no meio tem um efeito importante na produo de biosurfactante. A limitao de ctions bivalentes como Mg++, Fe++ ou Ca++ tambm favorece a formao de biosurfactante 3. Produo por Resting/no growing cells As clulas no se multiplicam, mas continuam a produo 4. Produo associada com aumento de um precursor.

Adio de precursores causa um grande aumento na produo de biosurfactante Obteno do Produto: A escolha de um mtodo para obteno de um biosurfactante depende da carga inica, solubilidade em gua, e se o produto est ligado clula ou extracelular Mtodos: Extrao por solvente: clorofrmio-metanol, diclorometano-metanol, butanol, acetato de etila, pentano e hexano. No caso de Torulopsis bombicola, T. apicola, T. petrophilum carvo adicionado ao meio fermentado livre de clula e aps filtrao o composto desorvido por acetato de etila resfriado, o qual removido sobre presso reduzida e o glicolipdeo dissolvido em etanol aquecido e cristalizado. Cristalizao: possvel colher cristais do sobrenadante de cultivo atravs da adio de cido seguido por incubao a baixa temperatura.

Precipitao : Sulfato de amnia, cido, etanol-cido actico e acetona Sulfato de amnia: Emulsan e biodispersan produzidos por Acinetobacter spp. Precipitao cida: surfactina produzida por Bacillus subtilis Acetona: biosurfactante produzidopoPseudomonas spp. No caso de produo contnua, ocorre acidificao co HCl 2N, onde protenas e lipdeos so precipitados, em seguidas o bisurfactante extrado do sobrenadante com diclorometano[surfactina]. Filtrao com fluxo tangencial tambm pode ser utilizado

Produo de Biossurfactantes Fatores que afetam a produo (Fiechter, 1992; Jo Chu Chang, 2005) Fontes de Carbono
Concentrao de Ramnolipdios (g/L)

5 4 3 2 1 0 0 20 40

2%

4%
Concentrao de Ramnolipdios (g/L)

6 5 4 3 2 1 0 0 20 40 60 80 100 120

60

80

100

120

Tempo de Fermentao (horas)

Tempo de Fermentao (horas)

Produo de Biossurfactantes Fatores que afetam a produo (Fiechter, 1992; Jo Chu Chang, 2005) Propores C/N, C/P e ctions bivalentes
C/N 13
Concentrao de Ramnolipdios (g/L)

Concentrao de Ramnolipdios (g/L)

1 20 40 60 80 100 120 0

12 10 8 6 4 2 0 0 20 40 60 80 100 120
Tempo de Fermentao (horas)

4 3 2 1 0

T e m p o d e F e rm e n ta o (h o r a s )

Concentrao de Nitrato (g/L)

14 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0

9 7 6 5 4 3 2

Concentrao de Nitrato (g/L)

C/N 23
5

14

Produo de Biossurfactantes Fatores que afetam a produo (Fiechter, 1992; Jo Chu Chang, 2005) Temperatura e pH
c/ controle
Concentrao de Ramnolipdios (g/L)

16 14 12 10
Concentrao de Ramnolipdios (g/L)

s/ controle
18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 0 20 40 60 80 100 120
Tempo de Fermentao (horas)

8 6 4 2 0 0 20 40 60 80 100 120

Tempo de Fermentao (horas)

Produo de Biossurfactantes Fatores que afetam a produo (Fiechter, 1992; Jo Chu Chang, 2005) Agitao
500 rpm
9
Concentrao Ramnolipdios (g/L)

8 7 6
Concentrao de Ramnolipdios (g/L)

800 rpm
9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 20 40 60 80 100 120

5 4 3 2 1 0 0 20 40 60 80 100 120
Tempo de Fermentao (horas)

Tempo de Fermentao (horas)

Produo de Biossurfactantes Fatores que afetam a produo (Fiechter, 1992; Jo Chu Chang, 2005) Aerao
1,0 vvm
Concentrao de Ramnolipdios (g/L)

16 14 12 10
Concentrao de Ramnolipdios (g/L)

2,0 vvm
18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 0 20 40 60 80 100 120
Tempo de Fermentao (horas)

8 6 4 2 0 0 20 40 60 80 100 120

Tempo de Fermentao (horas)

Produo de Biossurfactantes

Reduo dos custos de produo

Aumento dos rendimentos de biossurfactante

Substituio dos surfactantes qumicos por aqueles de origem biolgica

Aplicaes (Abalos et al., 2001) Aplicaes Teraputicas

Surfactina: inibio de formao de cogulos; atividade antibacteriana; antifngica; antiviral.

Aplicaes (Abalos et al., 2001) Aplicaes Teraputicas Ramnolipdios: ao zoosporicida

Fonte: Stanghellini e Maier 1997

Aplicaes (Abalos et al., 2001) Aplicaes Teraputicas

Atividade antimicrobiana de ramnolipdios

Aplicaes(Fiechter, 1992) Agricultura Utilizados em formulaes de herbicidas e pesticidas; Ramnolipdios so potenciais agentes para controle biolgico de fitopatgenos Produtos de higiene e cosmticos Utilizado em hidratantes e umectantes (produtos de maquiagem); Incorporados em produtos de limpeza.

Aplicaes(Fiechter, 1992) Indstrias de Alimentos Agentes emulsificantes no processamento de matriaprima; Auxilia na formao de consistncia textura e na solubilizao de aromas; Outras aplicaes Indstria de papel, textil, tinta (favorece a espalhabilidade e propriedades de mistura), cermica. e

Aplicaes(Mulligan, 2005)

Indstria petrolfera
Recuperao Terciria do Petrleo(MEOR); leos lubrificantes; Remoo de resduos de leo em tanques de estocagem; Processos de biorremediao e disperso nos derramamentos de leo

Remoo de metais

35

Tenso Superficial (mN/m)

30 25 20 15 10 5 0 0 15 30 45 60 75 90

T e m p o d e a q u e c im e n t o ( m in )

tenso superficial do caldo livre de clulas contendo biossurfactante produzido no cultivo da linhagem P. aeruginosa LBI em 2% (w/v) da mistura de leos usado em fritura de alimentos, submetido variao de Temperatura, pH, presso e salinidade.

Nitschke et al. (2005): P. aeruginosa LBI em 2% (w/v) de borra de leo de soja, algodo, milho, palma e babau, observaram a predominncia do mono-ramnolipdio RhaC10C10 (m/z 503) sobre o di-ramnolipdio Rha2C10C10 (m/z 649) Costa et al. (2006): P. aeruginosa LBI em 2% (w/v) de leo de babau ou de leo de cupuau, tambm observaram a predominncia do mono-ramnolipdio RhaC10C10 (m/z 503). P. aeruginosa LBI: cultivada em fontes de carbonos hidrofbicas, houve a predominncia de RhaC10C10 (m/z 503), enquanto que, quando cultivada em fontes de carbono hidroflicas como glicerol e glicose, houve a predominncia de Rha2C10C10 (m/z 649). P. aeruginosa LBI: em 2% (w/v) de n-parafina, uma fonte de carbono hidrofbica, revelou pequena predominncia de Rha2C10C10 (m/z 649) sobre RhaC10C10 (m/z 503). Alm disso, tambm foi detectada a presena dos ons minoritrios: Rha2C10C12:1 (m/z 677), Rha2C10C12:2 (m/z 675), Rha2C10C8 (m/z 621), RhaC10C12:1 (m/z 529), RhaC10C12:2 (m/z 527), e, Rha2C10 (m/z479).

Summary of the experimental results obtained in the investigation of hydrocarbon utilization by P. aeruginosa LBI:
Carbon Source (%) Kerosene (20) Diesel oil (30) Crude oil (10) Oil sludge (10) Surface Tension mN/m 32 33 36 36.3 Biomass (g/L) 2.43 5.4 2.0 4.0 final pH 6.8 8.4 7.0 6.9 Rhamnolipi d (g/L) 1.02 9.9 1.4 1.08

Rhamnolipid emulsifying activity (E24) in cell-free broth of P. aeruginosa LBI

Hydrocarbons evaluated (mL) Benzene Kerosene Diesel oil Crude oil Emulsifying activity E24(%) 100 66.7 70.6 68.7

Pirllo et al, 2008

Properties of the rhamnolipids produced by P. aeruginosa LBI

Property (Mean and standard deviation) Surface Tension (mN/m) Rhamnolipids of P. aeruginosa LBI
24.9 (SD 0.06)

Interfacial Tension (mN/m)

0.63 (SD 0.06)

Critical micelle concentration (CMC) mg/L

73.9 (SD 0.46)

Lovaglio et al, 2008

Rhamnolipids concentration (g/L)

18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 0

Batch Fed batch (in 24 hours) Fed batch (in 48 hours)

Rhamnolipid concentration (g/L)

20 18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 0 20 40 60 80 100 120

20

40

60

80

100

120

Fermentation Time (hours)

Fermentation Time (hours)

______ 1.0 vvm, 500 rpm; ______ 1.0 vvm, 800 rpm; ______ 2.0 vvm; 500 rpm; ___ + ___ 2.0 vvm, 800 rpm

Lovaglio et al, 2008

100

pH2 pH6

pH3 pH7

pH4 pH8

pH5 pH9

pH 2.0 pH 6.0

pH 3.0 pH 7.0

pH 4.0 pH 8.0

pH 5.0 pH 9.0

Atividade de Emulsificao (%)

90 80 70 60 50 0 10 20 30 40 50 60

Atividade de Emulsificao (%)

100 80 60 40 20 0 0

10

20

30

40

50

60

Tempo (min)

Tempo (min)

Atividade de emulsificao de solues 0,1% de ramnolipdios em diferentes valores de pH (2.0 9.0) utilizando como fonte hidrofbica leo de soja.

Estabilidade da emulso formada pela soluo 0,1% de ramnolipdios em diferentes valores de pH (2.0 9.0) utilizando como fonte hidrofbica o benzeno.

Tabela 1. Parmetros da produo de ramnolipdios pelos isolados LMI 6c, LMI 7a e por P. aeruginosa LBI aps 120 horas de cultivo nos diferentes resduos oleosos testados.
Microrganismos
leo soja usado

Substratos
Borra de soja Gordura de frango Gordura vegetal

Parmetros

LBI

1,69 5,09 32,6 7,23

1,67 7,52 33,2 7,72

1,67 3,9 32,3 8,46

1,85 1,71 35 8,64

Protena (g/l) RL1 (g/l) TS2 (mN/m) pH

LMI 6c

1,62 6,1 31 5,7

1,57 9,69 31,9 7,01

0,73 3,04 34 8,43

1,44 2,03 35 8,25

Protena (g/l) RL (g/l) TS (mN/m) pH

LMI 7a

2,1 7,73 34 8,22

1,86 7,49 31,9 7,03

2,74 4,88 34,1 8,31

2,07 1,87 35 8,5

Protena (g/l) RL (g/l) TS (mN/m) pH

1RL

: ramnolipdeos

2TS:

tenso superficial

Cinc. Tecnol. Aliment.,2008

Borra de soja
100 90

leo usado
LMI 6c LMI 7a

Atividade emulsificante (E24%)

80 70 60 50 40 30 20 10 0 Soja Querosene Benzeno Soja Querosene Benzeno

Atividade emulsificante dos biotensoativos produzidos pelos isolados LMI 6c e LMI 7a em borra de soja e leo usado a frente a leo de soja, querosene e benzeno. Cinc. Tecnol. Aliment.,2008

Wettability of aqueous rhamnolipids solutions produced by Pseudomonas aeruginosa LBI. Costa et al, 2008 Journal of surfactants and detergents
Table1- Contact angles () of pure water on the PCL, PVC, PCL-PVC, PET and glass surfaces.

Contact angles () Solution S.T. (mN m-1) Water 72.2 PCL 76.2 0.7 PVC 87.2 0.8 PVC-PCL 68.6 0.5 PET 74.2 1.1 Glass 7.5 1.7

Medida de ngulo de contato para blenda de PVC-PCL

Biosurfactant Production by P. aeruginosa LBI Growing on Different Carbon Sources and Predominant Rhamnolipid as Determined by ESI(-)-MS Analysis

PERSPECTIVAS
Muitas Aplicaes Industriais Especificidade Biodegradabilidade Baixa toxicidade Ao em condies extremas

Biossurfactante Altos Custos METAS Utilizao de substratos mais baratos Mtodos eficientes de purificao Engenharia gentica

Metodologia
Tenso superficial (Tensimetro K6)

Metodologia
ndice de emulsificao
Emulso formada (cm) Altura total (cm)
Sobrenadante + Hidrocarboneto (1:1)

Agitao em vortex (2 min)

aps 24h repouso

X 100

Estabilidade do biossurfactante
temperatura salinidade
sobrenadante

presso pH

tenso superficial

Recuperao dos Ramnolipdios Para obteno do ramnolipdio utilizou-se o mtodo de recuperao por coluna de adsoro (ABALOS et al., 2001), o caldo de cultivo foi centrifugado a 12.000 rpm durante 20 minutos, o sobrenadante foi acidificado a pH 2,0 com H2SO4 concentrado e mantido sob refrigerao durante 12 horas. Em seguida este caldo foi centrifugado a 10.000 rpm e o precipitado foi ressuspenso em gua destilada e eludo em coluna de adsoro contendo resina de poliestireno Amberlite XAD-2 (Supelco), como descrito por Reiling et al. (1986).

Tenso Interfacial Mediu-se a tenso interfacial entre soluo 0,1% (p/v) de ramnolipdios e hexadecano, utilizando-se o tensimetro Krss K6

Concentrao Micelar Crtica (CMC) A concentrao micelar crtica (CMC) foi determinada medindo-se a tenso superficial de solues de ramnolipdios em diferentes concentraes, variando de 0,0001 mg/L a 1000mg/L. A leitura da tenso superficial de cada soluo foi feita atravs de um tensimetro Krss K6.

Equipe
Prof. Dr. Jonas Contiero Supervisor do LMI Siddhartha Georges V. A O Costa Doutorado Direto Fapesp Roberta Barros Lovaglio - Doutorado Fapesp Tulio de Luca Cappeline Bolsista PIBIC/CNPq Joyce Domingos Ferrari Aluna da Engenharia Ambiental Colaborao: Profa. Dra. Lireny A G. Gonalves Departamento de Tecnologia de Alimentos Unicamp Profa. Dra.Marcia Nitschke Instituto de Qumica de So Carlos - Usp Prof. Dr. Marcos N. Eberlin e Renato Haddad Laboratrio Thomson de Espectrometria de Massa I.Q./Unicamp Dr. Franois Lepine Institute Armand Frappier- Laval/Quebec Dr. Rudolf Hausmann Universidade de Karlsruhe/Alemanha