INTRODUO

Um espectrofotmetro um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromtica atravs de uma soluo, e mede a quantidade de luz que foi absorvida por essa soluo (Figura 1). Usando um prisma o aparelho separa a luz em feixes com diferentes comprimentos de onda (tal como acontece no arco-ris com a separao das cores da luz branca). Pode-se assim fazer passar atravs da amostra um feixe de luz monocromtica (de um nico comprimento de onda, ou quase). O espectrofotmetro permite-nos saber que quantidade de luz absorvida a cada comprimento de onda.

Figura 1: Espectrofotmetro. Fonte: http://www.anaseca.uac.pt/pdf_bioquimica/introd_espectrof.pdf Uma parte muito importante de todos os procedimentos analticos o processo de calibrao e padronizao. A calibrao determina a relao entre a resposta analtica e a concentrao do analito. Geralmente isso realizado pelo uso de padres qumicos (SKOOG,2007). A calibrao realizada obtendo-se o sinal de resposta (absorbncia, altura do pico, rea do pico) como uma funo da concentrao conhecida do analito. Uma curva de calibrao preparada colocando-se os dados em forma de grfico ou ajustandoos por meio de uma equao matemtica adequada, como a relao linear utilizada no mtodo dos mnimos quadrados. A prxima etapa a da previso, na qual o sinal de resposta obtido para a amostra usado para prever a concentrao desconhecida do analito, a partir da curva de calibrao ou pela equao de melhor ajuste (SKOOG,2007). Dentre os mtodos usados para fazer curvas de calibrao destacam-se trs: padro externo, padro interno e adio de padro. O padro externo preparado separadamente da amostra. Essa tcnica utilizada quando no h efeitos interferentes provenientes dos componentes da

matriz presentes na soluo do analito. Ento, uma sequncia de padres externos com concentraes conhecidas que contenha o analito preparada. (Skoog, 2009) A calibrao efetuada pela obteno do sinal de resposta (absorbncia) como uma funo da concentrao conhecida do analito. Ento, construdo um grfico a partir dos dados obtidos ou a partir de uma ajuste a curva a partir de algum mtodo matemtico. Em seguida, a partir do melhor ajuste a curva de calibrao possvel obter a concentrao da amostra desconhecida. (Skoog,2009) Na adio-padro, so adicionadas quantidades conhecidas de analito na amostra desconhecida. O sinal, ento lido, e partir do seu aumento, se deduz quanto do analito estava presente na amostra original. Esse mtodo precisa de uma resposta linear para o analito. (Harris,2005) Esse mtodo usado quando a composio da amostra desconhecida ou complexa e pode afetar o sinal no equipamento. Isso pode gerar um efeito de matriz, onde mudana no sinal analtico causado por qualquer coisa presente na amostra que se difere do analito. As leituras so feitas na amostra original e nas amostras mais o padro aps as adies. (Harris,2005) No mtodo de padro interno, uma quantidade conhecida de um composto diferente do analito, adicionado amostra que se quer analisar. Ento, o sinal desse analito comparado ao sinal do padro interno para se determinar a concentrao do analito presente. Esse mtodo muito utilizado em anlises em que a leitura do equipamento varia a cada anlise, onde os fatores so difceis de controlar. (Skoog,2009) A construo da curva feita a partir da razo entre o sinal do analito e o sinal do padro interno, em funo da concentrao do analito nos padres. (Harris,2005)

2- OBJETIVO Preparar curvas analticas por diferentes mtodos e comparar o resultado obtido entre eles atravs de tratamentos matemticos.

3- MATERIAIS

3.1 Materiais e reagentes:

Permanganato de potssio Dicromato de potssio cido clordrico 1 mol/L Bales volumtricos de 100mL Balo volumtrico de 1L Esptula Bquer de 100mL Pipeta graduada de 10mL

3.2 Instrumentos: Balana analtica Espectrofotmetro de absoro molecular no UV/VI

4-RESULTADOS E DISCUSSO

A absorbncia definida pela equao

( )

onde P0 potncia radiante do feixe de luz aps ter passado pelo branco e P a potncia do mesmo aps ter passado pela amostra (SKOOG et al, 2006).Uma justificativa possvel para a concentrao negativa de KMnO 4 lida por um dos experimentadores para situao em que no inseriu a cubeta com amostra no espectrofotmetro reside no fato de que sem essa, a potncia P se torna maior que P0, fazendo com que a transmitncia (P/P0) seja menor que 1. A absorbncia, por consequncia, passa a ter valor negativo e, por avaliao da lei de Beer-Lambert, tambm a concentrao informada pelo instrumento. A adio de soluo de cido clordrico se fez necessria para que fosse minimizado o aparecimento espcies indesejveis como dixido de mangans slido e mangans(II) decorrentes de reaes devido a oxidao da gua. O dixido de mangans pode ser formado tambm pela reao do on permanganato com impurezas provenientes da gua usada no preparo das solues (SKOOG et al., 2006). Parte 1 Padronizao externa O mtodo de calibrao com padro externo um mtodo onde so preparadas solues padres de diferentes concentraes conhecidas. Submete-se essas solues a um mtodo previamente determinado onde cada uma ir gerar uma resposta diferente e a partir dessas respostas como funo das concentraes conhecidas constri-se uma curva analtica, que a construo de um grfico a partir dos dados obtidos e o ajuste dos mesmos a uma equao matemtica adequada. Essa curva usada para a determinao da concentrao do analito na amostra original atravs de uma posterior comparao com a resposta obtida pela amostra processada e analisada pelo mesmo mtodo, sendo assim possvel a quantificao do analito na amostra (HOLLER et al, 2009). Nesse experimento a amostra a ser analisada foi previamente preparada e disponibilizada durante o experimento.

Para a preparao de 100 mL de uma soluo estoque de permanganato de potssio com concentrao 0,0006 molL-1 calculou-se a massa necessria para ser pesada sabendo-se que 1 mol de KMnO4 possui 158,0339 gramas.

Pode-se observar que a massa a ser pesada muito pequena, pois existe a limitao da preciso da balana a ser utilizada. Diante disso chegou-se a concluso que para minimizar o erro associado deve-se fazer uma soluo 10 vezes mais concentrada e a partir dessa soluo, obter-se a soluo desejada atravs da diluio. Partindo-se da soluo obtida atravs da diluio calcularam-se os volumes dessa soluo necessrios para preparar solues padres de concentraes variadas de acordo com os clculos abaixo: Para o preparo de soluo padro com concentrao igual a
5 5

Para o preparo de soluo padro com concentrao igual a

5

Para o preparo de soluo padro com concentrao igual a

5

Para o preparo de soluo padro com concentrao igual a 7 7

5

Para o preparo de soluo padro com concentrao igual a

4

Os volumes calculados so razoveis de serem medidos com uma pipeta graduada. Por falta de disponibilidade de bales volumtricos de 100 mL, utilizaramse bales volumtricos de 50 mL, dessa forma os volumes calculados foram

divididos por dois ao realizar o preparo das solues. Os valores obtidos pelos clculos esto expressos na tabela abaixo:

Tabela 1 Volumes de soluo estoque a serem utilizados para o preparo de padres de concentraes pr-determinados. Concentrao da soluo Volume da soluo estoque Volume da soluo estoque padro (mol/L)
5 5 5

calculada (L)

utilizada (L)

5 4

Aps a aferio de cada um dos bales volumtricos contendo os volumes calculados da soluo estoque e o volume de 5mL de soluo de cido clordrico 1 molL-1, preparou-se uma soluo em outro balo volumtrico de 50 mL utilizando-se 4 mL da amostra previamente preparada e o mesmo volume da mesma soluo de cido clordrico utilizada no preparo dos padres e em seguida aferiu-se o volume com gua destilada. Ao comparar visualmente a tonalidade das solues padres com a tonalidade da soluo da amostra percebeu-se uma maior semelhana com a soluo padro de concentrao igual a
5

Para a construo da curva analtica desse mtodo utilizou-se um espectrofotmetro para a leitura da absoro de cada um dos padres e da amostra. Sabendo-se que o permanganato possui cor prpura e sua cor complementar o verde cuja absoro est na faixa de 500 a 560 nm escolheu-se o comprimento

de onda de 525 nm para ser utilizado na construo da curva. Os dados obtidos esto expressos na tabela abaixo:

Tabela 2 Valores das concentraes das solues padres e suas absorbncias valor da absorbncia da amostra analisada. Soluo padro analisada (mol/L) / Amostra
5 5 5

Absorbncia 0,073 0,102 0,154 0,199 0,296 0,145

5 4

Amostra

A plotagem dos dados mostrados na Tabela 2 e o ajuste linear dos mesmos podem ser visualizados na Figura 1. O ajuste da reta foi feito computacionalmente com a utilizao do programa Origin 6.1, que tambm forneceu sua equao juntamente com os valores para desvio padro e coeficiente de correlao, R. Para a equao de formato , os valores para a e b so, respectivamente,

0,0522 e 0,02053; o erro associado ao coeficiente a o erro do intercepto e o associado a b, inclinao da reta de ajuste. O coeficiente de correlao do ajuste possui valor 0,99951 e o desvio padro calculado para o ajuste de 0,00317.

Figura 1 - Ajuste linear dos dados para calibrao pelo mtodo de padronizao externa. Para o clculo da concentrao de permanganato de potssio na amostra faz-se necessrio igualar y a resposta obtida na leitura da amostra.

A concentrao do analito na soluo preparada da amostra analisada de

5

. A partir desse valor pode-se encontrar a concentrao da soluo

inicial determinando-se a quantidade de matria presente nos 50,00 mL da soluo preparada e dividindo-se essa pelo volume da alquota retirada da amostra inicial para o preparo da soluo analisada no espectrofotmetro, 4,0 mL:

Para o clculo da massa de do analito presente na amostra inicial, basta relacionar a massa molar da substncia com a concentrao encontrada, como mostrado abaixo:

Sabendo-se o valor da concentrao obtida pelo clculo e que foi preparado 1 litro da soluo, pode-se afirmar que a massa dessa substncia no medicamento pelo mtodo de calibrao por padro externo de 90 mg. Considerando o valor para massa indicado no rtulo do produto como verdadeira, 100 mg, pode-se calcular o erro relativo:

A absorbncia de uma substncia relatada pela Lei de Beer como sendo uma funo de sua concentrao, caminho tico do meio absorvente e da constante de proporcionalidade , denominada absorbncia molar (SKOOG et al, 2006). Sendo assim, para o clculo de basta isolar-se essa constante, gerando a equao:

onde A representa absorbncia, w o caminho tico em cm e x a concentrao molar da substncia. A absortividade molar pode ser estimada com base no ajuste linear j mostrado, substituindo-se na frmula acima a absorbncia A por bx, visto que a corresponde apenas ao deslocamento da origem na curva . Considerando que o caminho tico w possui 1,0 cm, a absortividade molar para o permanganato de potssio pelo mtodo de calibrao pela padronizao externa :

A Tabela 3, contendo dados relativos ANOVA (Analysis of variance) til na avaliao da significncia da regresso linear, julgada pelo valor de F; esse um indicador para probabilidade da varincia total ser atribuvel ao erro da resposta (MONTGOMERY & RUNGER, 2002). Tal conjunto de valores calculados tambm foi obtido computacionalmente ao se fazer o ajuste linear.

Tabela 3- Tabela ANOVA do ajuste linear para calibrao pelo mtodo da adio de padro. Item Modelo Erro Total g.l. 1 3 4 SQ 0,03084 3,01055E-5 0,03087 QM 0,03084 1,00352E-5 F 3073,26501

Dado que F obtido na regresso tem valor muito maior que o encontrado em uma tabela de distribuio F com =0,01 com os graus de liberdade adequados (f0.01,1,2 = 34,12), pode-se concluir que a regresso linear realizada significativa, segundo o que afirma a literatura (SKOOG et al, 2006).

Parte 2 Padro Interno A curva analtica da tcnica do padro interno foi obtida atravs dos dados da Tabela 4 exceto os dados amostrais. A soluo adicionada a cada soluo padro do analito tem o objetivo de acrescentar ao meio, o dicromato de potssio a fim de que tal espcie seja o padro interno (SKOOG et al, 2006). Tal escolha se baseia no

fato de ser parecido com o permanganato no sentido de que sob as mesmas condies tm comportamentos anlogos (VOGEL, 1979). Alm de o dicromato de potssio ser relativamente barato, acessvel comercialmente, sua soluo ser estvel indefinidamente e no reagir com o cido clordrico (SKOOG et al, 2006). Deve ser considerado que existem comprimentos de onda em que h absoro do cromato e do permanganato, portanto o dicromato de potssio no um padro interno muito adequado para a tcnica na determinao de permanganato.

Tabela 4 Absorbncias fornecidas para as solues permanganato e para as de cromato. Absorbncia para Absorbncia para = 525 nm Soluo (x 10-5 mol L-1) 1,20 2,40 4,80 7,20 12,0 Amostra Absorbncias permangabato 0,09 0,115 0,17 0,2 0,306 0,172 = 400 nm Absorbncias cromato 0,089 0,094 0,107 0,112 0,131 0,114 Razo absorbncias 1,011235955 1,223404255 1,588785047 1,785714286 2,335877863 1,50877193 das

Figura 2: Ajuste linear dos dados para calibrao pelo mtodo de padronizao interna. A Figura 2 apresenta o grfico que mostra a razo das absorbncias do permanganato pela do cromato versus a concentrao de KMnO4. O ajuste linear foi feito pela equao y = a + bx usando o software Origin 6.1. Sendo os valores fornecidos de a e b, 0,92963 0,04948 e 0,11945 0,00736 respectivamente; o erro associado a b o erro da inclinao e o erro associado a a o do intercepto. O software tambm forneceu o coeficiente de correlao, R, e o desvio padro, 0,99436 e 0,06318 respectivamente. possvel ento calcular a concentrao da amostra substituindo o valor da razo das absorbncias da amostra na equao em y e calculando o valor de x. A razo 1,50877193 est na Tabela 4 e a concentrao calculada 4,848405 x 10 -5 mol L-1. Levando em considerao que a soluo foi diluda de 8 mL para 100 mL, o clculo dado por:

Para se obter uma quantidade em relao a massa possvel usar a massa molar do KMnO4 como a seguir:
4 4 4

Calcula-se o erro considerando-se a soluo de 1 L:

A absortividade pode ser obtida pela relao da absorbncia:

Considerando o caminho tico w como 1 cm e A como bx do ajuste linear possvel obter a absortividade .

A Tabela 5, ANOVA necessria para anlise da significncia do ajuste linear que usa como indicador o valor de F. Tabela 5- Tabela ANOVA do ajuste linear para calibrao pela tcnica da padronizao interna. Item Modelo Erro Total g.l. 1 3 4 SQ 1,05202 0,01198 1,06399 QM 1,05202 0,00399 F 263,55184

Sendo que o valor de F encontrado da regresso consideravelmente maior que o valor da distribuio F para =0,01 com graus de liberdade 1 e 3 (f0.01,1,3 = 34,12) pode-se afirmar que o ajuste linear significativo (SKOOG et al, 2006).

Parte 3 Adio de Padro Para o preparo da curva analtica pelo mtodo da adio de padro, foram obtidos os dados mostrados na Tabela 6. O clculo da concentrao molar de analito adicionado para cada um dos sistemas analisados feito de maneira

convencional, calculando-se a quantidade de matria de permanganato presente no volume adicionado amostra e depois dividindo-se tal valor pelo volume do balo empregado para preparo. Vlido relatar que para ltima amostra, quando foi requisitado no roteiro da prtica o volume de 7,50 mL de soluo do padro, a adio adotada pelos experimentadores foi de 3,70 mL, visto que o balo em que foi preparada tinha metade do volume recomendado tambm no roteiro.

Tabela 6 Valores de concentrao molar de KMnO4 adicionado e absorbncia relacionada para o mtodo de calibrao por adio de padro. Concentrao molar de -5 -1 adicionado (x 10 mol L ) 0,00 1,49 2,99 4,43 KMnO4 Absorbncia para = 525 nm 0,170 0,198 0,233 0,263

A plotagem dos dados mostrados na Tabela 6 e o ajuste linear dos mesmos podem ser visualizados na Figura 3. O ajuste da reta foi feito computacionalmente com a utilizao do programa Origin 6.1, que tambm forneceu sua equao juntamente com os valores para desvio padro e coeficiente de correlao, R; Na equao de formato y= a+ bx, os valores para a e b so, respectivamente, 0,1680,001 e 0,02120,0006; o erro associado ao coeficiente a o erro do intercepto e o associado a b, inclinao da reta de ajuste. O coeficiente de correlao do ajuste possui valor 0,99915 e o desvio padro calculado para o ajuste de 0,00205.

Figura 3: Ajuste linear dos dados para calibrao pelo mtodo da adio de padro

Para o clculo da concentrao de permanganato de potssio na amostra faz-se necessrio igualar y a zero na equao de reta obtida no ajuste, visto que a calibrao por adio de padro desloca a curva que conteria a origem para esquerda; o sinal de absorbncia lido quando no h padro adicionado referente concentrao desconhecida do analito na soluo preparada da amostra. Para y = 0, x = -7,95 x 10-5 mol L-1, o que obviamente no tem sentido para uma concentrao. Entretanto, ao deslocar-se esse ponto para origem do sistema cartesiano, encontrar-se- uma concentrao de mesmo mdulo e sinal inverso ao mencionado, atribuda a concentrao do analito na soluo preparada da amostra, o que possibilita o clculo da concentrao e massa desse na amostra original. Dada concentrao na soluo preparada da amostra, 7,95 x 10-5 mol L-1, encontrase a concentrao da soluo inicial determinando-se a quantidade de matria presente nos 100,00 mL da soluo preparada e dividindo-se essa pelo volume da alquota retirada da amostra inicial para o preparo da soluo analisada no espectrofotmetro, 8,0 mL:

Para o clculo da massa de permanganato de potssio presente na amostra inicial, basta relacionar a massa molar da substncia com a concentrao encontrada, como mostrado abaixo:

4 4

O erro padro da estimativa ou desvio padro da regresso, 0,00205, quando somado ou subtrado da concentrao de KMnO4 obtida para soluo preparada de amostra no implica em alterao dos valores mostrados nos dois clculos acima, visto que a preciso de ambos limitada pela vidraria, mais especificamente pela pipeta graduada, utilizada; para concentrao molar na amostra original, o desvio padro alteraria a stima casa depois da vrgula (3 x 10-7) e para massa, a terceira (4 x 10-2). , portanto, inadequado expressar tais erros nos resultados acima. Tomada concentrao de permanganato calculada e sabendo-se do fato de que foi preparado um litro de soluo, pode-se afirmar que a massa dessa substncia no medicamento pelo mtodo de calibrao por adio de padro de 157 mg. Considerando o valor para massa indicado no rtulo do produto como verdadeira, 100 mg, pode-se calcular o erro relativo:

Considerando que o caminho tico w possui 1,0 cm, a absortividade molar para o permanganato de potssio pelo mtodo de calibrao pela adio de padro :

A Tabela 7, contendo dados relativos ANOVA til na avaliao da significncia da regresso linear, julgada pelo valor de F; tal conjunto de valores calculados tambm foi obtido computacionalmente ao se fazer o ajuste linear.

Tabela 7- Tabela ANOVA do ajuste linear para calibrao pelo mtodo da adio de padro.

Item Modelo Erro Total

g.l. 1 2 3

SQ 0,00493 8,43055E-6 0,00494

QM 0,00493 4,21527E-6

F 1169,45383

Dado que F obtido na regresso tem valor muito maior que o encontrado em uma tabela de distribuio F com =0,01 com os graus de liberdade adequados (f0.01,1,2 = 98.50), pode-se concluir que a regresso linear realizada significativa, segundo o que afirma a literatura (SKOOG et al, 2006). A comparao dos erros relativos dos mtodos de calibrao, dado que todos apresentaram regresso significativa dos dados indicada pelos altos valores de F e R, leva a crer que algum erro indeterminado ocorreu no procedimento ou clculos feitos para calibrao por adio de padro; tanto pela padronizao interna quanto pela externa, no foram obtidos desvios maiores que 10% em relao massa tida como real, e esses sempre indicaram valores menores que o esperado, o que pode ser facilmente explicvel por transferncias quantitativas de analito e amostra falhas, incompletas. Mesmo com a massa de permanganato calculada pela adio de padro sendo muito maior que a esperada, improvvel que erros aleatrios tenham ocorrido nos procedimentos realizados para tal procedimento, visto que foi o que forneceu alto coeficiente de correlao e F muito superior ao esperado mesmo com grau de significncia de 1%. Pode-se ento inferir que isso se deva a erros sistemticos causados por erros no preparo dos padres e amostra, o que pode ser uma explicao para o fato de que as amostras apresentaram respostas semelhantes para padronizao externa e interna, mas respostas aumentadas para calibrao por adio de padro (cf. tabelas). A princpio, o mtodo da calibrao por adio de padro deveria fornecer os valores mais precisos para concentrao da soluo de amostra e a massa em permanganato presente no comprimido analisado, j que um mtodo recomendvel quando efeitos de interferentes na determinao so desconhecidos como foi o caso. interessante analisar que a transmitncia calculada para os mtodos de calibrao por padronizao externa e adio de padro muito se assemelharam respectivamente 0,0205 e 0,0212 - enquanto o valor calculado para padronizao

interna, 0,1149, muito maior que os demais. Isso provavelmente justificvel pelo fato de que o cromato no um padro interno ideal para determinaes de permanganato, como j explicado anteriormente no texto. Essa tambm uma justificativa para menor coeficiente de correspondncia encontrado dentre todos os mtodos.

5- CONCLUSO Considerando recursos envolvidos para cada um dos procedimentos e a qualidade da anlise obtida, pode-se dizer que a utilizao da padronizao interna vantajosa em relao aos outros mtodos na determinao de permanganato realizada, pois forneceu maior exatido erro de 4% contra 10% da padronizao externa e 57% da adio de padro - e no to dispendiosa quanto a adio de padro. A padronizao interna, mais cara e demorada que a externa, tambm tem a vantagem de compensar erros devidos transferncias incompletas de analito, visto que a curva construda com a razo do sinal lido para o analito e o padro, o que torna vantajosa sua utilizao dado que o manuseamento das amostras e padres foi relativamente alta durante a determinao da substncia no comprimido.

6-REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS SKOOG, D. A.; WEST, D. M.; HOLLER, F. J.; CROUCH, S. R. Fundamentos de Qumica Analtica. 8ed. So Paulo: Thomson Learning, 2006. 1124 p. MONTGOMERY, D. C; RUNGER, G. C. Applied Statistics and Probability for Engineers. 3ed. New York: John Wiley & Sons, 2002. 822 p. HOLLER, F. James; SKOOG, Douglas A.; CROUCH, Stanley R. Princpios de anlise instrumental. 6ed. Porto Alegre: Bookman, 2009. 1055 p.