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Universidade de Aveiro

2008
Departamento de Qumica
Joana Andreia Saraiva
Mendes
Estudo sobre a composio qumica e possveis
aplicaes do folhelho de uva






Universidade de Aveiro
2008
Departamento de Qumica
Joana Andreia Saraiva
Mendes
Estudo sobre a composio qumica e possveis
aplicaes do folhelho de uva

Dissertao apresentada Universidade de Aveiro para cumprimento dos
requisitos necessrios obteno do grau de Mestre em Materiais Derivados
de Recursos Renovveis, realizada sob a orientao cientfica do Dr. Dmitry
Victorovitch Evtyugin, Professor Associado com Agregao do Departamento
de Qumica da Universidade de Aveiro e da Dra. Lusa Paula G. O. Valente da
Cruz Lopes, Professora Adjunta do Departamento de Ambiente da Escola
Superior de Tecnologia de Viseu do Instituto Superior Politcnico de Viseu.











Aos meus pais, os meus alicerces de vida








o jri

presidente Prof. Doutor Armando Jorge Domingues Silvestre
Professor associado com Agregao do departamento de Qumica da Universidade de Aveiro


Doutor Bruno Miguel de Morais Lemos Esteves
Assistente do II trinio do departamento de Madeiras da Escola Superior de Tecnologia de Viseu
do Instituto Superior Politcnico de Viseu


Prof. Doutor Dmitry Victorovitch Evtyugin
Professor associado com Agregao do departamento de Qumica da Universidade de Aveiro


Prof. Doutora Lusa Paula G. O. Valente da Cruz Lopes
Professora adjunta do departamento de Ambiente da Escola Superior de Tecnologia de Viseu do
Instituto Superior Politcnico de Viseu









agradecimentos Gostaria de agradecer ao Dr. Dmitry Victorovitch Evtyugin e Dra. Lusa Paula
G. O. Valente da Cruz Lopes, pela orientao cientfica, pelo apoio e
especialmente pelo incentivo demonstrado ao longo deste trabalho.

Ao Grupo Tavfer pelo apoio financeiro concedido.

Snia Prozil, pela amizade de j alguns anos, obrigada por tudo, at pela
partilha de momentos menos bons, que no entanto nos fizeram crescer.

Ao Rui Domingues, pela preciosa ajuda nas anlises de GC-MS, ao Rui
Duarte, pela ajuda na medio dos ngulos de contacto, Mariana, pela ajuda
nos acares neutros.

Ana Cao, por me ter deixado invadir o laboratrio do 1 andar, pela boa
disposio e pela amizade. Vera, por ser incansvel e pela profunda
pacincia para responder s minhas questes, tenho muito gosto em ser tua
amiga. Maria Jorge, pelas palavras amigas e pela elucidao de algumas
dvidas surgidas ao longo deste trabalho. Ao grupo Path, que me foi
acolhendo na sua sanzala, pelos e-mails: Hoje h bolo! e pelos bolos. s
minhas PHAs, a Liliana e a Mnica, Andreia, Vnia, Marisa e Vera
que de uma maneira ou outra contriburam para uma estadia agradvel em
Aveiro. Assim, a todos os meus novos amigos da Universidade de Aveiro que
iluminaram os meus dias, aqui vos deixo um grande sinal de apreo.

Aos meus amigos e famlia que gostam de mim como sou e que me apoiaram
e acreditaram em mim. Principalmente matriarca da famlia, a minha av
Mablia e minha irm, por me ter dado uma jia preciosa, o meu sobrinho
Martim.

famlia Machado, por todos os momentos. Pelo carinho, pelos conselhos.

Aos Coutinhos, por me acolherem e me fazerem sentir j parte da famlia,
principalmente ao Sr. Jos Coutinho e D. Maria de Lurdes. Um muito
obrigado.

Ao Z Carlos, pelo companheirismo e compreenso, por tornar os meus dias
mais azuis, sem ti tudo isto teria sido mais difcil.

Por fim, quero deixar aqui um grande sinal de apreo aos meus pais, no
existem palavras suficientes para vos expressar a minha gratido. Amo-vos.







palavras-chave Folhelho de uva, Cutina, Tratamento oxidativo organosolv, Caracterizao
Qumica
resumo O principal objectivo deste trabalho consistiu no estudo da composio
qumica do folhelho de modo a estimar as suas possveis aplicaes,
nomeadamente, na produo de pastas e biocompsitos.
O folhelho foi caracterizado quanto ao seu teor em cinzas (7,8%), extractveis
em acetona (5,7%), diclorometano (5,5%) e gua (26,4%), protenas (18,8%),
taninos (13,8%), resduo insolvel em cido a 72 % (22,4%), celulose Krscher
e Hffer (20,8%) e hemiceluloses (24,9%).
Por anlise de acares neutros verificou-se que essencialmente constitudo
por celulose, mas tambm por mananas, arabinanas, xilanas e xiloglucanas. A
existncia de celulose foi confirmada pelas tcnicas de anlise dos acares
neutros, FTIR, RMN de
13
C CP/MAS e DRX, com um grau de cristalinidade de
66,1%.
O tratamento do folhelho com cido peractico, foi a soluo encontrada para
a obteno de pastas. A pasta obtida foi caracterizada por anlise de acares
neutros, por FTIR e por RMN de
13
C CP/MAS, concluindo-se que
essencialmente constituda por celulose e por compostos polimricos do tipo
cutina.
A cutina, isolada pela extraco da pasta com diclorometano,
essencialmente polimrica. Pela identificao dos seus compostos livres e
esterificados, foi apresentada uma hipottica estrutura, em que os seus
monmeros podero estar ligados por ligaes ster entre grupos carboxilo de
cidos gordos, grupos hidroxilo de lcoois de cadeia longa e grupos hidroxilo
de hidroxicidos.
O baixo valor de viscosidade intrnseca da pasta, o reduzido comprimento
mdio das fibras (inferior a 0,2 mm) e o carcter hidrofbico da sua superfcie
revelam que a pasta no poder ser aplicada na indstria papeleira. No
entanto, a presena de cutina permite antever a utilizao do folhelho como
matria-prima para biocompsitos, podendo at puder ser aplicado em
biomedicina.






keywords Grape skin, Cutin, Organosolv oxidative treatment, Chemical characterization
abstract The study of the grape skins chemical composition to estimate its possible
applications, particularly in the production of pulps and biocomposites, was the
main goal of this work.
Grape skins were characterized by its ashes percentage (7.8%), extractives in
acetone (5.7%), dichloromethane (5.5%) and water (26.4%), proteins (18.8%),
tannins (13.8%), 72% acid insoluble residue (22.4%), cellulose Krscher and
Hffer (20.8%) and hemicelluloses (24.9%). The use of neutral sugars analyses
verified its mainly constituted by cellulose, but also by mannans, arabinnans,
xylans and xyloglucans. The existence of cellulose was confirmed by the
neutral sugar analyses, FTIR,
13
C NMR CP/MAS and X-ray diffraction
techniques, with a crystallinity degree of 66.1%.
The treatment of grape skins with peracetic acid was the solution found to
obtain pulps. The obtained pulp was characterized by neutral sugar analyses,
FTIR
13
C NMR CP/MAS, which means that its essentially constituted by
cellulose and other cutin type polymeric compounds.
The cutin isolated by the extraction of pulp with dichloromethane is essentially
polymeric. By the identification of free and estherified compounds hypothetic
fragments was presented for the structure of the cutin, in which its monomers
can be linked together by esther linkages between fat acids carboxyl groups,
alcohol hydroxyl groups and hydroxyacids hydroxyl groups.
The low intrinsic viscosity value of the pulp, the fibbers tiny average length
(inferior to 0.2 mm) and the hydrophobic character of its surface show that the
pulp cant be applied to the paper industry. The cutin presence yet allows the
expected utilization of grape skins as raw material for biocomposits and even in
biomedicine.
i
ABREVIATURAS
AA Alcali activo
AP cido peractico
c Altura mdia de um cristalito
OCM Organizao comum do mercado
d
002
Largura a meia altura de cristalito no plano 002
DC Grau de cristalinidade corrigido
DC0 Grau de cristalinidade
DO Denominaes de origem
DRX Difraco de raios-X
DSC Calorimetria diferencial de varrimento
E Extractveis
ED Extractos em diclorometano da pasta sililados antes da metanlise
EDM Extractos em diclorometano sililados da pasta aps metanlise
E
H2O
Extractveis em gua
FTIR Espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier
GC-MS Cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massa
GPC Cromatografia de permeao por gel
I
am
Intensidade mxima da regio amorfa
I
C
Intensidade mxima do plano de difraco 002
IVV Instituto da vinha e do vinho
L Lenhina
LED Pasta livre de extractveis, aps metanlise e sililao
M
n
Massa molecular mdia em nmero
M
w
Massa molecular mdia ponderada
OIV Organizao internacional da vinha e do vinho
P Protenas
ngulo de contacto
ii

RMN
13
C de CP/MAS
Ressonncia magntica nuclear de carbono-13, de polarizao cruzada segundo
o ngulo mgico
RMN
1
H Ressonncia magntica nuclear de proto
RMN
1
H -
1
H (TOCSY) Ressonncia magntica nuclear a 2D de correlao total
S ndice de sulfureto
S/EA Sem extractveis em acetona
S/ED Sem extractveis em diclorometano
T Taninos
Tg Temperatura de transio vtrea
TGA Anlise termogravimtrica
TMS Trimetilsililado
UE Unio europeia
W Humidade
Z Cinzas


iii
NDICE
INTRODUO.............................................................................................................................. 1
CAPTULO I - REVISO BIBLIOGRFICA.............................................................................. 3
1. O SECTOR VITIVINCOLA................................................................................................. 3
1.1. O SECTOR VITIVINCOLA EM PORTUGAL............................................................................ 3
2. UVAS, A MATRIA-PRIMA DO VINHO............................................................................ 5
2.1. ENGAO........................................................................................................................... 5
2.2. BAGO............................................................................................................................... 5
2.2.1. Pelcula .................................................................................................................. 6
2.2.2. Polpa...................................................................................................................... 7
2.2.3. Grainha.................................................................................................................. 7
2.3. COMPOSIO QUMICA DA UVA........................................................................................ 7
2.3.1. Polissacardeos....................................................................................................... 8
2.3.2. Lenhina................................................................................................................. 11
2.3.3. Compostos alifticos ............................................................................................. 12
2.3.4. cidos Orgnicos.................................................................................................. 12
2.3.5. Compostos fenlicos.............................................................................................. 13
2.3.6. Aromas ................................................................................................................. 15
2.3.7. Substncias Azotadas............................................................................................ 16
2.3.8. Matrias Minerais................................................................................................. 16
2.4. PROCESSO DE VINIFICAO ............................................................................................. 17
2.4.1. Vinificao em tinto .............................................................................................. 17
2.4.2. Vinificao em branco........................................................................................... 17
3. SUBPRODUTOS DA VINIFICAO................................................................................. 18
3.1. CARACTERIZAO DOS SUBPRODUTOS DA VINIFICAO.................................................. 18
3.1.1. Folhelho ............................................................................................................... 19
4. PROCESSOS QUMICOS DE PRODUO DE PASTAS CELULSICAS..................... 20
4.1. COZIMENTO KRAFT ......................................................................................................... 20
4.1.1. Reaces da lenhina durante o cozimento kraft...................................................... 21
4.1.2. Reaces dos hidratos de carbono durante o cozimento kraft................................. 22
4.2. TRATAMENTO COM PERCIDOS........................................................................................ 22
4.2.1. Reaces de Percidos com Lenhina ..................................................................... 23
4.2.2. Reaces de Percidos com Polissacardeos ......................................................... 25
CAPTULO II - MATERIAIS E MTODOS.............................................................................. 27
1. MATERIAIS ......................................................................................................................... 27
iv

2. ANLISE QUMICA DO FOLHELHO DE UVA E DAS PASTAS.................................... 27
2.1. TEOR DE HUMIDADE ....................................................................................................... 27
2.2. CINZAS ........................................................................................................................... 27
2.3. EXTRACTVEIS ............................................................................................................... 28
2.4. EXTRACTVEIS EM GUA ................................................................................................ 28
2.4.1. Substncias solveis em gua quente e precipitadas em etanol. .............................. 28
2.5. CELULOSE KRSCHER E HFFER ..................................................................................... 29
2.6. PROTENAS ..................................................................................................................... 29
2.7. TANINOS......................................................................................................................... 29
2.8. LENHINA KLASON........................................................................................................... 30
2.9. ACARES NEUTROS ...................................................................................................... 30
2.10. ISOLAMENTO E CARACTERIZAO ESTRUTURAL DA CUTINA........................................ 31
2.10.1. Extraco.............................................................................................................. 31
2.10.2. Metanlise dos Extractos....................................................................................... 31
2.10.3. Metanlise da Pasta livre de Extractveis.............................................................. 32
2.10.4. Caracterizao Estrutural ..................................................................................... 32
2.11. ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO COM TRANSFORMADA DE FOURIER - FTIR ........ 32
2.12. ESPECTROSCOPIA DE RESSONNCIA MAGNTICA NUCLEAR DE 13C CP/MAS............... 33
2.13. ESPECTROSCOPIA DE RMN DE
1
H................................................................................ 33
2.14. ESPECTROSCOPIA DE RMN
1
H-
1
H (TOCSY)................................................................ 33
2.15. CROMATOGRAFIA DE PERMEAO EM GEL GPC....................................................... 33
2.16. DIFRACO DE RAIOS-X............................................................................................. 34
3. OBTENO DE PASTAS DE FOLHELHO DE UVA........................................................ 35
3.1. COZIMENTO KRAFT......................................................................................................... 35
3.2. TRATAMENTO COM CIDO PERACTICO........................................................................... 35
3.3. TRATAMENTO COM PERXIDO DE HIDROGNIO E MOLIBDATO DE AMNIO ....................... 36
4. ANLISE DE PASTAS......................................................................................................... 36
4.1. VISCOSIDADE INTRNSECA............................................................................................... 36
4.2. HISTOGRAMA DE FIBRAS ................................................................................................. 37
4.3. MEDIO DE NGULOS DE CONTACTO............................................................................. 37
4.4. ANLISE TRMICA.......................................................................................................... 37
4.4.1. TGA...................................................................................................................... 38
4.4.2. DSC...................................................................................................................... 38
CAPTULO III - RESULTADOS E DISCUSSO....................................................................... 39
1. ANLISE QUMICA DO FOLHELHO............................................................................... 39
1.1. CARACTERIZAO ESTRUTURAL DO FOLHELHO ............................................................... 40
1.2. RESDUO INSOLVEL EM H
2
SO
4
A72 %............................................................................ 42
1.3. POLISSACARDEOS........................................................................................................... 43
v
1.3.1. Acares Neutros.................................................................................................. 43
1.3.2. Celulose................................................................................................................ 43
1.3.3. Hemiceluloses....................................................................................................... 44
2. OBTENO E CARACTERIZAO DE PASTAS........................................................... 47
2.1. COZIMENTO KRAFT ......................................................................................................... 47
2.2. TRATAMENTO COM CIDO PERACTICO .......................................................................... 48
2.3. TRATAMENTO COM PERXIDO DE HIDROGNIO E MOLIBDATO DE AMNIO....................... 49
2.4. ANLISE QUMICA DA PASTA.......................................................................................... 50
2.4.1. Caracterizao Estrutural..................................................................................... 50
2.4.2. Acares Neutros.................................................................................................. 51
2.4.3. Caracterizao da cutina ...................................................................................... 52
2.5. VISCOSIDADE INTRNSECA .............................................................................................. 58
2.6. HISTOGRAMA DE FIBRAS................................................................................................. 59
2.7. MEDIO DE NGULOS DE CONTACTO ............................................................................ 59
2.8. ANLISE TRMICA DA PASTA E SEUS EXTRACTOS ............................................................ 60
2.8.1. TGA...................................................................................................................... 60
2.8.2. DSC...................................................................................................................... 61
CAPTULO IV - CONCLUSES E TRABALHO FUTURO..................................................... 63
1. TRABALHO FUTURO......................................................................................................... 65
CAPTULO V - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .............................................................. 67

vi

NDICE DE FIGURAS
Figura 1: Estrutura do cacho de uva [5]. _____________________________________________________5
Figura 2: Esquema de um bago [5]. _________________________________________________________6
Figura 3: Corte esquemtico do bago [5]. ____________________________________________________7
Figura 4: Estrutura da cadeia da celulose. ___________________________________________________8
Figura 5: Clula unitria da celulose I (a) projectada no plano a-c (b) [16]. _________________________9
Figura 6: Estrutura da unidade de repetio da cadeia de xiloglucana. ____________________________10
Figura 7: Estrutura da O-Acetil-4-O-Metilglucoronoxilana. _____________________________________10
Figura 8: Estruturas dos lcoois precursores da lenhina: (a) p-cumarlico, (b) coniferlico e (c) sinaplico.12
Figura 9: cido oleico. __________________________________________________________________12
Figura 10: Estrutura qumica de (a) cido tartrico, (b) cido mlico e (c) cido citrco. ______________12
Figura 11: Estrutura qumica da quercetina. _________________________________________________13
Figura 12: Estrutura da antocianidina. _____________________________________________________13
Figura 13: cidos fenlicos presentes nas uvas: (1) benzicos e (2) cinmicos [24]. __________________14
Figura 14: Estrutura da procianidina (tanino condensado) [26]. _________________________________14
Figura 15: Estruturas do (a) limoneno e do (b) cido gernico. __________________________________16
Figura 16: Clivagem de ligaes -O-4 em estruturas fenlicas eterificadas.________________________21
Figura 17: Mecanismo da reaco de stopping: formao do 1,2-enodiol (1), eliminao - hidroxilo (2),
tautomerizao (3), rearranjo benzlico para cido glucometassacarnico (4) [33].___________________22
Figura 18: Principais reaces da lenhina com percidos: (a) hidroxilao do anel aromtico, (b)
desmetilao oxidativa, (c) abertura do anel aromtico por oxidao e formao de derivados do cido
mucnico, (d) substituio de cadeia, (e) clivagem de ligaes -aril ter, (f) epoxidao. _____________24
Figura 19: Espectro de FTIR do folhelho. ___________________________________________________40
Figura 20: Espectro de RMN CP/MAS de
13
C do folhelho. ______________________________________41
Figura 21: Espectro de FTIR do resduo insolvel em H
2
SO
4
a72 %. ______________________________42
Figura 22: Espectros de RMN slido do resduo insolvel em H
2
SO
4
a72 %. ________________________42
Figura 23: Difractograma de Raios-X da celulose. ____________________________________________44
Figura 24: Curva de eluio das SSP. ______________________________________________________44
Figura 25: Espectro de RMN de
1
H das SST. _________________________________________________46
Figura 26: Espectro de RMN de correlao
1
H -
1
H (TOCSY) das SSP._____________________________46
Figura 27: Resduo resultante do cozimento kraft do folhelho. ___________________________________47
Figura 28: Fases do tratamento AP: (a) inicio (b) aps 1 estgio e (c) fim do tratamento. _____________48
Figura 29: Pelcula de pasta. _____________________________________________________________48
Figura 30: Espectros de FTIR de (a) folhelho de uva e (b) pasta. _________________________________50
Figura 31: Espectros de RMN
13
C de CP/MAS (a) folhelho de uva e (b) pasta._______________________51
Figura 32: Curva de eluio dos extractveis da pasta._________________________________________52
Figura 33: Cromatogramas totais dos extractos em diclorometano derivatizados, (a) antes e (b) aps
metanlise e (c) da pasta livre de extractos em diclorometano, aps metanlise. _____________________53
vii
Figura 34: Principais famlias de compostos existentes nos extractos da pasta, (ED) antes e (EDM) aps
metanlise, e na (LED) pasta livre de extractveis. ___________________________________________ 55
Figura 35: Espectros de massa dos derivados do cido hexadecanico: (a) TMS e (b) ster metilado. ___ 56
Figura 36: Espectro de massa do derivado TMS do cido 9,10 - hidroxioctadecanico._______________ 56
Figura 37: Espectro de massa do derivado TMS do 1-Hexacosanol. ______________________________ 57
Figura 38: Espectro de massa do derivado TMS do cido Oleanico._____________________________ 57
Figura 39: Fragmentos propostas para a estrutura da cutina. ___________________________________ 58
Figura 40: Histograma de fibras. _________________________________________________________ 59
Figura 41: Mtodo da gota sssil para calcular o ngulo de contacto. ____________________________ 60
Figura 42: Curvas da TGA da pasta (a) e dos extractveis da pasta (b). ___________________________ 60
Figura 43: Curvas de DSC da (a) pasta e dos (b) extractveis da pasta. ___________________________ 61
NDICE DE TABELAS
Tabela 1: Inventrio das Superfcies Vitcolas [4]._____________________________________________ 4
Tabela 2: Estruturas base de terpenos. _____________________________________________________ 15
Tabela 3: Composio dos subprodutos resultantes da produo de vinho [32]. ____________________ 18
Tabela 4: Composio dos bagaos [31]. ___________________________________________________ 19
Tabela 5: Composio do folhelho [31,32]. _________________________________________________ 19
Tabela 6: Termos utilizados no cozimento kraft.______________________________________________ 20
Tabela 7: Componentes das tenses superficiais de cada lquido utilizado._________________________ 37
Tabela 8: Composio qumica do folhelho de uva. ___________________________________________ 39
Tabela 9: Frequncias vibracionais e tipos de vibrao. _______________________________________ 40
Tabela 10: Sinais de RMN CP/MAS de
13
C. _________________________________________________ 41
Tabela 11: Composio mdia em monossacardeos do folhelho de uva. __________________________ 43
Tabela 12: M
w
, M
n
e a M
w
/M
n
das substncias isoladas em gua quente e precipitadas em etanol. ______ 45
Tabela 13: Acares neutros existentes nas substncias isoladas em gua quente e precipitadas em etanol. 45
Tabela 14: Condies de anlise do cozimento kraft. __________________________________________ 47
Tabela 15: Condies de anlise do tratamento com cido peractico. ____________________________ 49
Tabela 16: Composio mdia em monossacardeos da pasta relativamente ao folhelho de uva. ________ 51
Tabela 17: Compostos lipoflicos identificados nos extractos (mg de composto/kg de pasta). ___________ 54
Tabela 18: ngulo de contacto e componentes de energia de superfcie entre uma gota lquida e as
superfcies da pasta e do papel.___________________________________________________________ 60


Introduo

1
INTRODUO
O sector vitivincola tem um elevado peso na economia portuguesa, sendo
imprescindvel atingir-se um desenvolvimento equilibrado e sustentado do sector.
Face s exigncias da Unio Europeia, torna-se necessrio introduzir requisitos
ambientais mnimos para o sector, como novas solues de valorizao e de tratamento dos
subprodutos. O desenvolvimento de tecnologias j existentes, assim como a criao de
novas tecnologias de valorizao dos recursos subaproveitados, representam uma mais-
valia para as empresas do sector tanto a nvel econmico como ambiental.
O bagao, as grainhas, o folhelho, o engao, as borras e o sarro constituem os
subprodutos da vinificao. O folhelho essencialmente constitudo pelas pelculas das
uvas e foi o objecto de estudo ao longo deste trabalho
O objectivo deste trabalho consistiu no estudo da composio qumica do folhelho de
modo a estimar as suas possveis aplicaes, nomeadamente, na produo de pastas.
No captulo I, so apresentadas algumas consideraes sobre o sector vitivincola de
modo a compreender-se a importncia deste na economia e na necessidade de se encontrar
solues para um desenvolvimento sustentado. De seguida descreve-se a composio
qumica da uva, os processos de vinificao que a transformam em vinho e so igualmente
identificados e caracterizados os subprodutos resultantes. Ainda neste captulo faz-se
referncia a processos qumicos de produo de pastas celulsicas.
O material e os mtodos utilizados na anlise qumica do folhelho, na preparao e
anlise das pastas encontram-se descritos no captulo II.
No captulo III, so apresentados e discutidos os resultados obtidos no estudo da
composio qumica do folhelho e na caracterizao dos seus componentes pelas tcnicas
de FTIR, RMN
13
C de CP/MAS, RMN de
1
H, RMN
1
H-
1
H (TOCSY), DRX, e GPC.
Foram analisados os processos de obteno de pasta a partir de folhelho. O processo
escolhido foi optimizado e a pasta obtida foi examinada quanto sua viscosidade
intrnseca, dimenso das suas fibras e a sua superfcie foi analisada quanto ao seu
carcter hidrofbico/hidroflico. Foram tambm efectuadas anlises trmicas, comparando
a pasta com os extractveis em diclorometano da mesma. Neste captulo, foi ainda
efectuada a caracterizao estrutural da cutina, por GPC e por GC-MS.
Introduo

2
Por fim, no captulo IV, apresentam-se as concluses finais deste trabalho e as
perspectivas futuras.

Captulo I -Reviso Bibliogrfica

3
CAPTULO I - REVISO BIBLIOGRFICA
1. O SECTOR VITIVINCOLA
O sector vitivincola um dos sectores mais importantes da produo agrcola na
Unio Europeia, representando uma actividade econmica vital nomeadamente para o
emprego. Embora a produo de vinho varie consideravelmente de um Estado-Membro
para outro, seja em termos de dimenso dos vinhedos ou de prticas enolgicas adaptadas a
diferentes condies climticas, este sector parte integrante da cultura e do patrimnio.
A produo de vinho representou 5% do valor da produo agrcola da Unio
Europeia (UE), em 2006, correspondendo a 22% da mo-de-obra agrcola. Tendo sido
produzidos, em mdia, cerca de 185 milhes de hectolitros de vinho por ano, no valor de
15,6 mil milhes de euros, nos ltimos cinco anos. Com as tendncias actuais, o excedente
de produo vincola atingir 15% da produo anual em 2010/11 e s com a eliminao
dos excedentes, para os quais no h mercado, a UE gasta cerca de 500 milhes de euros
por ano [1].
Como forma de colmatar as falhas da anterior Organizao Comum do Mercado
(OCM) vitivincola, a Unio Europeia props uma reforma de modo a edificar uma OCM
eficaz e sustentvel. A nova OCM, que entrou em vigor em Agosto deste ano, de modo a
assegurar medidas a nvel ambiental, pretende introduzir requisitos ambientais mnimos
para o sector vitivincola, nomeadamente, ao nvel da eroso e contaminao do solo, da
utilizao de produtos fitofarmacuticos e da gesto dos resduos [2].
1.1. O Sector Vitivincola em Portugal
Em Portugal a produo de vinho especialmente importante representando cerca de
10 % da produo agrcola, segundo dados de 2006 [2]. A plena utilizao do patrimnio
vitcola nacional, bem como a melhoria da qualidade dos vinhos portugueses, atravs da
valorizao das vinhas aptas produo de vinhos de qualidade e o aumento da
competitividade das exploraes vitcolas e das empresas do sector estabelecem os
objectivos centrais da poltica vitivincola seguida pelo Governo Portugus [3].

Captulo I - Reviso Bibliogrfica

4
A superfcie vitcola nacional de cerca de 239 mil hectares, segundo a campanha da
Comisso Europeia de 01/09/2004 (Tabela 1), a que equivale uma produo de cerca de
7,2 milhes de hL de vinho, correspondente a 1 milhar de milhes de euros por ano [1,4].
Tabela 1: Inventrio das Superfcies Vitcolas [4].
Regio vitcola rea (ha)
Minho 32 881
Douro e Trs-os-Montes 68 455
Beiras 56 910
Ribatejo 20 239
Estremadura 25 339
Terras do Sado 9 042
Alentejo 21 740
Algarve 2 098
Total 236 704

Devido importncia econmica do sector vitivincola em Portugal e de modo a
alcanar um desenvolvimento equilibrado e sustentado do sector, fazendo face s
exigncias da reforma da Organizao Comum de Mercado, torna-se cada vez mais
importante encontrar novas e melhores tcnicas de valorizao e tratamento dos resduos
e/ou subprodutos vitivincolas, tentando-se assim tambm solucionar o problema dos
excedentes.
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5
2. UVAS, A MATRIA-PRIMA DO VINHO
O vinho elaborado a partir da fermentao alcolica total ou parcial de uvas
frescas, esmagadas ou no, ou de mosto de uva. As uvas so o fruto de planta herbcea
Videira, da famlia das Vitceas, pertencente s angiosprmicas (folhosas), sendo que as
apropriadas para vinificao pertencem espcie Vitis Vinfera.
As uvas esto aglomeradas em cachos e cada cacho constitudo por duas partes
distintas: o engao, parte lenhosa, e os bagos, parte carnuda.
2.1. Engao
O engao representa 3 a 9% do peso do cacho e determina a sua estrutura (Figura 1).
composto por um eixo principal, designado por rquis (ramificao mais comprida) que
est ligado ao pednculo, e por ramificaes mais curtas, pedicelos, que suportam os bagos
e lhes fornecem gua e sais minerais [5].

Figura 1: Estrutura do cacho de uva [5].
2.2. Bago
O bago de uva constitudo por um grupo de tecidos (pericarpo) que envolvem as
sementes (grainhas) e representa 91 a 97 % do peso do cacho. O pericarpo divide-se em
exocarpo (pelcula), mesocarpo (polpa) e endocarpo (Figura 2) [6].

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6
2.2.1. Pelcula
A pelcula, parte externa do bago, uma membrana heterognea e elstica que se
distende medida que o bago cresce e que se divide em: cutcula, epiderme e hipoderme
[7].

Figura 2: Esquema de um bago [5].
No decorrer da maturao e desenvolvimento da uva, a cutcula desorganiza-se e a
sua espessura diminui. A cutcula composta por cidos gordos hidroxilados (cutina) e
sobre esta encontra-se a pruna, que uma substncia cerosa, responsvel pelo aspecto
aveludado, impermeabilidade e resistncia do bago, e pela reteno de leveduras e
bactrias trazidas pelo vento e por insectos [6,8].
A pruna relativamente constante ao longo da maturao da uva e est disposta em
camadas hidrofbicas, constitudas por: cido oleanlico (maioritariamente) e compostos
orgnicos, nomeadamente lcoois gordos [7].
A epiderme constituda por uma ou duas camadas de clulas, tangencialmente
alongadas, cuja espessura varia de acordo com a variedade da uva. A hipoderme est
dividida em duas regies: a regio externa composta por clulas rectangulares e a regio
interna por clulas poligonais e onde se encontra a maior parte dos compostos fenlicos
da pelcula [6,9].
A pelcula, do ponto de vista qumico, constituda por: celulose, cidos orgnicos,
minerais, flavonides (flavonas e/ou antocianinas), aromas e taninos [10].
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7
2.2.2. Polpa
A polpa representa cerca de 85% do total do bago e composta por clulas largas e
poligonais, de parede muito delgada e desorganizada, aquando da maturao do bago.
Distinguem-se na polpa, como se apresenta na Figura 3, os feixes perifricos, que revestem
a pelcula, os feixes centrais, que alcanam as sementes e os feixes que ficam agarrados ao
receptculo e formam o pincel. As diversas zonas que constituem a polpa so delimitadas
por vasos libero-lenhosos que permitem a alimentao do bago [6,8].


Figura 3: Corte esquemtico do bago [5].
Os principais constituintes qumicos da polpa so: os acares, os cidos e
substncias azotadas e minerais [8].
2.2.3. Grainha
A grainha representa 2-5% do bago e constituda por taninos e leos. Normalmente
existem 4 grainhas por bago, mas este nmero poder variar de 0 a 9 [8].
2.3. Composio Qumica da Uva
O estudo da composio da uva de extrema complexidade. O crescimento do bago
e o seu desenvolvimento so o resultado de um longo e complexo ciclo reprodutivo, em
que o crescimento de toda a planta influencia imenso o desenvolvimento desses processos
e a composio qumica do fruto. Assim e embora, de planta para planta, se encontrem
variaes a nvel qumico, descrevem-se seguidamente, e de um modo geral, os principais
constituintes qumicos existentes.

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8
2.3.1. Polissacardeos
Os acares so compostos ternrios constitudos por carbono, hidrognio e oxignio
e contm na sua cadeia carbonada, os grupos funcionais lcool e carbonilo.
Na uva, os monossacardeos predominantes so: a glucose (sob a forma de
D-glucopiranose) e a levulose (sob a forma de D-frutofuranose). Estes acares tm uma
importncia evidente durante o processo de vinificao, uma vez que so transformados
em lcool por aco de leveduras (fermentao anaerbia) e por serem redutores, ou seja,
capazes de se oxidarem. A arabinose, a xilose, a metilpentose, a galactose e seus derivados,
so acares no fermentveis que existem em menor quantidade [8].
Os polissacardeos so polmeros formados por oses e/ou cidos urnicos unidos por
ligaes glicosdicas-O. No vinho e no mosto provm das uvas e dos microrganismos,
sendo um grupo extremamente heterogneo e complexo de compostos [11].
A celulose o polissacardeo mais abundante na natureza e est associada a outros
hidratos de carbono, como as hemiceluloses e as substncias pcticas.
2.3.1.1. Celulose
A celulose um homopolmero natural ((C
6
H
10
O
5
)
n
) formado por unidades de
-D-glucopiranose unidas por ligaes glicosdicas -(14). Duas unidades adjacentes de
glucose so ligadas por eliminao de uma molcula de gua entre os grupos hidroxilo do
carbono 1 (C1) de uma molcula e carbono 4 (C4) da outra molcula, originando a
celobiose, unidade de repetio da cadeia de celulose (Figura 4) [12].

O
O
OH
O H
O
OH
O
OH
O H
O
OH
nn

Figura 4: Estrutura da cadeia da celulose.
A configurao mais estvel da celulose na forma de cadeira com os grupos
hidroxilos em posio equatorial. Os grupos OH que se encontram em ambos os extremos
da cadeia tm comportamentos diferentes. O grupo OH do C1, um grupo aldedo
hidratado, que origina uma formao em anel por uma ligao intramolecular hemiacetal.
Assim o terminal hemiacetal do C1 tem propriedades redutoras, enquanto o grupo OH livre
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9
do C4 situado no extremo oposto da cadeia um grupo hidroxilo alcolico sem
propriedades redutoras [12].
As molculas de celulose so completamente lineares e tm uma forte tendncia para
formar ligaes de hidrognio inter e intramoleculares. As cadeias moleculares de celulose
alinham-se em paralelo e formam microfibrilas, em que regies muito ordenadas
(cristalinas) alternam com regies amorfas (menos ordenadas), sendo que o grau de
cristalinidade da celulose na madeira varia de 60 a 70 %. Os grupos hidroxilos localizados
nas regies amorfas esto acessveis e so reactivos participando facilmente em reaces
qumicas, o que no acontece com os grupos hidroxilos das regies cristalinas, que so de
difcil acesso. Como consequncia da sua estrutura fibrosa e das suas ligaes de
hidrognio, a celulose apresenta elevada resistncia hidrlise, sendo insolvel na maioria
dos solventes [13-15].
A celulose nativa em termos cristalogrficos denominada por celulose I devido
existncia de vrias formas polimrficas [12]. A celulose I obedece a um modelo de
unidade cristalina (ou clula unitria) monoclnica, que apresenta trs eixos (a, b e c) de
comprimentos diferentes e o ngulo definido por dois desses eixos diferente de 90, como
se representa na Figura 5.

(a) (b)
Figura 5: Clula unitria da celulose I (a) projectada no plano a-c (b) [16].
2.3.1.2. Hemiceluloses
As hemiceluloses so heteropolissacardeos no celulsicos lineares e/ou
ramificados. Os seus acares constituintes dividem-se maioritariamente em pentoses
(D-xilose, L-arabinose) e hexoses (D-glucose, D-galactose, D-manose), mas tambm em
cidos hexurnicos (D-glucurnico, 4-O-metil-D-glucurnico e cido D-galacturnico) e
desoxi-hesoxes (L-ramnose, L-fucose). Devido ao baixo grau de polimerizao e sua
natureza amorfa, as hemiceluloses so degradadas mais facilmente do que a celulose.
Captulo I - Reviso Bibliogrfica

10
Apesar disso, ainda necessrio um sistema enzimtico complexo para a sua degradao,
devido sua estrutura varivel e ramificada [13,17].

O
O
OH
OH
O H
O
O
OH
O H
O
OH
O
OH
O H
O
O
O
OH
O H
O
O
OH
O H
O
O
O
OH
OH
O H
O
OH
OH
O H
n

Figura 6: Estrutura da unidade de repetio da cadeia de xiloglucana.
As xiloglucanas so as hemiceluloses mais abundantes na parede celular das
pelculas da uva e so constitudas por uma cadeia de unidades de glucose unida por
ligaes -(14), com ramificaes de unidades de -xilose em O-6 (Figura 6). As
unidades de -D-xilopiranose podem ser substitudas em O-2 por unidades de -D-
galactopiranose, que por sua vez podem ser substitudas em O-2 por unidades de -L-
fucose. Normalmente, a cadeia principal da xiloglucana da uva contm 3 unidades
consecutivas de glucose substituda em O-6 por unidades de xilose e uma quarta unidade
no ramificada, sem ramificaes de galactose e de fucose [13,17].
Sendo a videira uma folhosa ainda se podem encontrar xilanas, glucomanas e
galactanas.
As xilanas so polissacardeos ramificados constitudos por uma cadeia principal de
unidades de -D-xilopiranose, unidas por ligaes -(14). Por ligaes -(12)
ligam-se ramificaes de cido 4-O-metilglucurnico cadeia principal e alguns grupos
OH dos carbonos C2 e C3 podem ser substitudos por grupos O-acetil [13,17]. Na Figura 7,
est representado um segmento de O-acetil-4-O-metilglucoronoxilana de folhosas.

O
O-Ac
OH
O O
OH
O-Ac
O O
OH
OH
O
O
OH
O-Ac
O
O
O
OH
O
O
OH
OH
COOH
OCH3

Figura 7: Estrutura da O-Acetil-4-O-Metilglucoronoxilana.
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11
As glucomananas so constitudas por uma cadeia formada por unidades de
-D-glucopiranose e -D-manopiranose, unidas por ligaes (14) [17].
As galactanas so muito ramificadas e so caracterizadas pelo seu contedo em
unidades de ramnose [17].
2.3.1.3. Substncias Pcticas
As pectinas, os cidos pcticos, as protopectinas e gomas, segundo vrios autores,
fazem parte do grupo das substncias pcticas. Os cidos pcticos so cadeias formadas,
quase exclusivamente, por unidades de cido galacturnico. As pectinas so os derivados
metilados dos cidos pcticos. Esto associadas celulose e hemicelulose [11].
As galacturonanas, as galactanas e as arabinanas, fazem parte do grupo das pectinas.
As galacturonanas existem em muitas plantas, principalmente nas pelculas dos frutos e nas
gomas. A ramnogalaturonana possui uma cadeia principal de unidades de cido
galacturnico unidas por ligaes (14), que contm unidades de ramnose em intervalos
de 8 em 8 unidades, ligadas por ligaes (12) e (14) s unidades adjacentes de
cido galacturnico. Algumas das unidades de ramnose possuem ramificaes de
galactanas. As arabinanas so constitudas maioritariamente por arabinose (90%), mas
ainda por unidades de galactose, xilose e glucose, unidas por ligaes (15) [13,17].
As substncias pcticas mais comuns nas uvas so as homogalacturonanas
(homopolmero), as ramnogalacturonanas I e as ramnogalacturonanas II (heteropolmeros)
[11].
2.3.2. Lenhina
A lenhina um polmero aromtico irregular, fortemente ramificado e constitudo
por unidades derivados de fenilpropano, substitudas por grupos hidroxilo e metoxilo, que
confere coeso estrutura fibrosa do tecido vegetal. Os diferentes tipos de ligao
(ligaes ter, ligaes carbono-carbono) entre os seus monmeros tornam a sua estrutura
extremamente complexa, que s pode ser definida pela abundncia relativa das suas
unidades constituintes: o p-hidroxifenilpropano, o guaiacilpropano e o seringilpropano
[14,15, 18-20].
Os precursores da lenhina so os lcoois p-cumarlico, coniferlico e sinaplico
(Figura 8), que diferem entre si no nmero de grupos metoxilo substituintes do anel
aromtico [18].
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12
OH
OH
1
2
3
4
5
6


OH
OH
OCH
3


OH
OH
OCH
3
H
3
CO

(a) (b) (c)
Figura 8: Estruturas dos lcoois precursores da lenhina: (a) p-cumarlico, (b) coniferlico e (c) sinaplico.
Os grupos funcionais associados lenhina so os grupos hidroxilo fenlicos e
alifticos e grupos aldedos, cetonas e metxidos. Ao contrrio da celulose, a lenhina no
pode ser despolimerizada nos seus monmeros iniciais.
2.3.3. Compostos alifticos
Neste grupo de compostos esto principalmente includos os alcanos, os lcoois de
cadeia longa e os cidos gordos livres ou esterificados.
Na uva encontram-se essencialmente cidos gordos. Os principais so os cidos:
oleico (C18, com uma dupla ligao, Figura 9) e linoleco (C18, com duas duplas ligaes)
[21].
OH
O

Figura 9: cido oleico.
2.3.4. cidos Orgnicos
Os cidos orgnicos da uva esto armazenados nos vacolos da clula, sobretudo nos
vacolos da polpa, os principais so: o cido tartrico, o cido mlico e o cido ctrico
(Figura 10) [22].
COOH
H
H
OH
O H
COOH

COOH
C
H
H
OH
H
COOH

COOH
C
O H
H
COOH
H
H
2
C COOH

(a) (b) (c)
Figura 10: Estrutura qumica de (a) cido tartrico, (b) cido mlico e (c) cido citrco.
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13
2.3.5. Compostos fenlicos
Os compostos fenlicos so um grupo de compostos aromticos com substituintes
OH, do qual fazem parte os flavonides, as antocianinas, os cidos fenlicos e taninos [9].
2.3.5.1. Flavonides e Antocianinas
Os flavonides possuem uma estrutura qumica constituda por dois anis benznicos
(A e B) ligados por um grupo pirano (anel C), sendo representados pela frmula C
6
-C
3
-C
6

[23]. Nas uvas, estes compostos encontram-se sob a forma glicosdica. Os flavonis, de
pigmentao amarela, so os mais comuns. A quercetina um pigmento encontrado tanto
nas bagas tintas como nas brancas (Figura 11) [24].

O
OH O
OH
OH
O H
OH
H
A
B
C

Figura 11: Estrutura qumica da quercetina.
As antocianinas so constitudas por dois anis benznicos unidos por um heterociclo
catinico, oxigenado e no saturado e podem estar sob a forma glicosdica (antocianinas),
mais estvel, ou sob a forma aglicone (antocianidina - Figura 12) [24].

O
+
O H
OH
R'
3
OH
R'5
OH

Figura 12: Estrutura da antocianidina.

2.3.5.2. cidos Fenlicos
Os cidos benzicos (C
6
-C
1
) e os cidos cinmicos (C
6
-C
3
), assim como os seus
respectivos derivados (Figura 13), pertencem aos cidos fenlicos [24].
Os cidos benzicos esto presentes nas uvas, maioritariamente, como combinaes
glicosdicas e como steres, os quais podem ser extrados por hidrlise cida e por
hidrlise alcalina, respectivamente. Os cidos cinmicos esto principalmente
esterificados, especialmente com o cido tartrico.
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14
COOH
R
5
R
4
R
3
R
2


R
2
R
3
R
4
R
5
COOH

(1) (2)
1 R
2
R
3
R
4
R
5
2
p-hidroxibenzico H H OH H p-cumrico
Protocatico H OH OH H Cafico
Vanlico H OCH
3
OH H Ferlico
Glico H OH OH OH -
Sirngico H OCH
3
OH OCH
3
Sinpico
Saliclico OH H H H -
Gentsico OH H H OH -
Figura 13: cidos fenlicos presentes nas uvas: (1) benzicos e (2) cinmicos [24].
2.3.5.3. Taninos
Os taninos so compostos vegetais pertencentes aos polifenis, capazes de se
co-polimerizar com protenas e polissacardeos e possuem uma massa molecular que varia
de 600 a 3500 [24].

Figura 14: Estrutura da procianidina (tanino condensado) [26].
Os taninos podem ser divididos em hidrolisveis ou condensados. Os taninos
hidrolisveis so um grupo de substncias que aps hidrlise originam acares
(principalmente glucose) e cidos glico e elgico. Os taninos condensados so formados
por policondensao dos flavonides catequina (3-flavanol) e leucoantocianidina
(3,4-flavanodiol), na Figura 14 apresenta-se a estrutura da procianidina [25].
Nas uvas apenas existem os taninos condensados, que resultam da co-polimerizao
do cido catquico com substncias glucdicas e por isso tambm denominados por taninos
catquicos [24].
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15
2.3.6. Aromas
O aroma do bago da uva provm da justaposio de diferentes compostos (lcoois,
hidrocarbonetos, aldedos e steres), mais ou menos volteis, tanto os odorferos como os
percursores de aroma que dependem de muitas variveis como da casta, do clima e do solo
onde se desenvolve. Os aromas esto localizadas nas clulas hipodrmicas, essencialmente
na pelcula, todavia em algumas castas tambm podero estar presentes na polpa e
dividem-se em: terpenides, derivados de norisoprenides, metoxipirazinas e tiis [5,8].
2.3.6.1. Terpenos e Terpenides
Os terpenos e seus derivados so uma vasta famlia de compostos presentes na
natureza, que se podem encontrar na forma livre com propriedades odorferas, ou ligada
sem propriedades odorferas [27].
Os terpenos podem ser classificados de acordo com o nmero de unidades de
isopreno: monoterpenos (2 unidades), sesquiterpenos (3 unidades), diterpenos (4 unidades),
sesterterpenos (5 unidades), triterpenos (6 unidades), tetraterpenos (8 unidades) e
politerpenos (> 8unidades), alguns dos quais representados na Tabela 2 [28].
Tabela 2: Estruturas base de terpenos.
Nome Nmeros de 5-C unidades Estrutura
Isopreno (unidade bsica) 1

Monoterpenos 2

Sesquiterpenos 3

Diterpenos 4

Triterpenos 6

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16
Os terpenides so terpenos que possuem grupos funcionais especficos, como os
grupos hidroxilo, carbonilo, carboxilo e funes ster [28].
Os monoterpenos so o grupo mais importante dos terpenos nas uvas e encontram-se
na forma de hidrocarbonetos simples como o limoneno (Figura 15 (a)) e o mirceno, de
aldedos (linalal, geranial), de lcoois (linalol, geraniol), de cidos (cidos linlico e
gernico, Figura 15 (b)) e de steres (acetato de linalil) [5, 27].

O
OH

(a) (b)
Figura 15: Estruturas do (a) limoneno e do (b) cido gernico.
2.3.7. Substncias Azotadas
O azoto exerce uma aco fundamental nos sistemas orgnicos. As substncias
azotadas so sintetizadas pelos organismos vivos, constituindo o azoto orgnico, que se
pode apresentar sob as formas: monomrica (aminocidos), polimrica (polipptidos) e
complexa (protenas) [29].
Os aminocidos so constitudos por grupos amina e carboxilo. O cido glutmico, a
arginina, a trionina e a prolina constituem 65% dos cidos aminados da uva [8].
Os polipptidos resultam da polimerizao dos aminocidos. A funo amina de uma
molcula actua sobre a funo cida da molcula vizinha, dando-se a eliminao de uma
molcula de gua que conduz formao de pontes ppticas com estrutura rgida e plana -
polimerizao por condensao.
As protenas, so cadeias de aminocidos ligadas por cadeias pptidas e como tal, a
configurao espacial das protenas determinada pela sequncia de aminocidos nas
cadeias polipptidas. Segundo Navarre, as protenas representam apenas 3% do azoto
orgnico (sob a forma de azoto amoniacal) da uva [8].
2.3.8. Matrias Minerais
As matrias minerais dizem respeito aos sais. A maior parte das substncias minerais
das uvas esto na forma de sais de potssio ou de clcio, representando, 2 a 3% do peso da
pelcula e 1 a 2% do peso da polpa [8].
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17
2.4. Processo de vinificao
A vinificao o conjunto de operaes necessrias para transformar o sumo de uva
em vinho.
Diferentes tipos de vinho correspondem a diferentes tcnicas de vinificao, que se
caracterizam de acordo com a separao dos diferentes tecidos da uva. Para evitar a
adstringncia do vinho, deve-se separar o engao do restante cacho (desengace),
nomeadamente para a obteno de vinho tinto [30].
2.4.1. Vinificao em tinto
Na vinificao em tinto, ocorre a dilacerao do bago processo de macerao ou
curtimenta, atravs de esmagadores mecnicos. A fermentao efectua-se assim, com as
pelculas em infuso no mosto, que consoante a intensidade de cor pretendida, pode ser
mais ou menos prolongada. Aps a fermentao, inicia-se a deposio de materiais, que
formam uma massa slida e heterognea, constituda por: pelculas, grainhas e
eventualmente engao, denominada de bagao, o qual separado da parte lquida o vinho
[8,30].
2.4.2. Vinificao em branco
Na vinificao em branco, no ocorre a macerao das partes slidas do cacho, mas
unicamente a fermentao do sumo de uva [8,30].
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18
3. SUBPRODUTOS DA VINIFICAO
Os subprodutos da vinificao designam os produtos resultantes das diferentes
operaes decorrentes da tecnologia de fabrico de vinho, sendo estes: bagao, folhelho,
grainhas, engao, borras e sarro, da sua industrializao podem surgir diversos produtos,
como a aguardente, o lcool etlico e o cido tartrico [31].
O aproveitamento dos subprodutos vitivincolas tem sido alvo de grande interesse
devido a importncia econmica do sector aliada aos seus problemas ambientais. Como tal
importante conhecer a contribuio e a respectiva composio destes subprodutos.
Na Tabela 3, apresentam-se os subprodutos obtidos e a composio dos mesmos de
acordo com o tipo de vinificao, tendo em conta que na produo de 100 L de vinho so
gerados subprodutos na ordem dos 31,17 kg para a vinificao em branco e 25 kg para a
vinificao em tinto [31,32].
Tabela 3: Composio dos subprodutos resultantes da produo de vinho [32].
Vinificao (kg/hL vinho)
Subprodutos
Branco Tinto
Folhelho 17 13,5
Grainha 4 4

Bagao
Engao 4 3
Borra (liquida) 6 4,4
Sarro 0,17 0,10
3.1. Caracterizao dos Subprodutos da Vinificao
O bagao da uva, sendo o principal subproduto da vinificao, toma definies
distintas segundo a tecnologia de vinificao utilizada. Assim, o bagao que provm da
laborao de uvas segundo o processo de bica aberta (fabrico de vinhos brancos ou ros)
no fermenta com os mostos e designado por bagao doce ou fresco. Por sua vez, o
bagao que provm de massas vnicas (constitudas pelas partes slidas das uvas e pelo
mosto que as embebe), que j sofreram fermentao, geralmente resultante do fabrico de
vinhos tintos, designa-se por bagao tinto ou fermentado [31].
H vrios factores que influenciam a composio qumica do bagao,
nomeadamente: a natureza das castas, o modo de vinificao, as condies atmosfricas e
o tipo de solo a que a vegetao da vinha est sujeita. O que por sua vez determinam a
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19
composio das uvas, os sistemas de conduo da vinha e o estado higinico das uvas no
momento da colheita [32].
O bagao constitudo por gua, cerca de 60%, vinho e borras (dependentes da
prensagem), lcoois, principalmente o etanol, aldedos, steres, cidos volteis, polifenis,
taninos, celulose, protenas, pectinas, sais minerais e resduos de hidratos de carbono
[31,32]. Na Tabela 4 apresentam-se alguns parmetros da composio qumica do bagao
de acordo com o processo de vinificao.
Tabela 4: Composio dos bagaos [31].
Bagao
Parmetros
Branco Tinto
Humidade (%) 55-65 50-55
Acar (g/kg) 80-110 2-4
lcool (L/100 kg) --- 2,0-4,0
Bitarbarato de potssio (g/%) 1,5-3,0 2,0-4,0
Acidez voltil (g/kg) (cido actico) --- 0,4-1,0

Este trabalho centrou-se no estudo do folhelho e como tal -lhe dada maior
importncia.
3.1.1. Folhelho
O folhelho constitudo essencialmente pelas pelculas das uvas, aps desidratao e
separao das grainhas e engao. O folhelho pode ser valorizado como adubo, para
alimentao animal e ainda como combustvel [31,32]. A composio qumica do folhelho
est apresentada na Tabela 5.
Tabela 5: Composio do folhelho [31,32].
Parmetros Composio (%)
Matrias Minerais 2,7 8,9
Matrias gordas 5,2 7,8
Protenas 10,0 15,6
Celulose 20,0 27,0
Taninos 0,2 0,6
Matrias azotadas 3,3 3,9

Captulo I - Reviso Bibliogrfica

20
4. PROCESSOS QUMICOS DE PRODUO DE PASTAS CELULSICAS
A produo de pasta envolve a separao das fibras de celulose, principalmente da
madeira, por processos qumicos, semiqumicos, quimiomecnicos ou mecnicos. Os
processos qumicos promovem a degradao e dissoluo da lenhina, de modo a preservar
o mximo possvel dos polissacardeos (celulose e hemiceluloses). Ao longo deste trabalho
foram efectuados apenas tratamentos qumicos (kraft e percido) ao folhelho para obteno
de pastas.
4.1. Cozimento kraft
O processo kraft ou processo de cozimento ao sulfato um mtodo que promove a
remoo da lenhina em meio alcalino (pH superior a 12) a 170C, utilizando um licor,
denominado de licor branco, que tm essencialmente dois constituintes base: o hidrxido
de sdio, NaOH e o sulfureto de sdio, Na
2
S. As espcies activas neste licor de cozimento
so os ies hidrxido e hidrogenossulfureto, que resultam de reaces do NaOH e Na
2
S
com a gua [33]. As reaces que traduzem os equilbrios envolvidos nos licores de
cozimento so dadas pelas equaes 1 e 2.
10
1 2
2
+ +

K OH HS O H S
1
7
2 2 2
10

+ + K OH S H O H HS
2

Um dos parmetros de controlo do cozimento a concentrao dos reagentes, em
que as quantidades de Na
2
S e NaOH so relativas quantidade de madeira (Tabela 6).
Tabela 6: Termos utilizados no cozimento kraft.
Termos Definio
Alcli activo (AA) [NaOH + Na
2
S], (g/L)
Alcli efectivo (AE) [NaOH + Na
2
S], (g/L)
Sulfidez ou ndice de sulfureto (S) [Na
2
S ]/[NaOH + Na
2
S], %
Hidromdulo V (licor, L) /m (madeira, kg)
Consistncia m (pasta seca, Kg) / m (suspenso, kg)

A possibilidade de se poder processar qualquer espcie de madeira, originando uma
pasta de elevada resistncia e o facto de se puder recuperar energia e produtos qumicos de
Captulo I -Reviso Bibliogrfica

21
maneira muito eficiente, constituem as principais vantagens deste mtodo. As
desvantagens deste processo devem-se, principalmente, aos baixos rendimentos obtidos
devido s perdas de polissacardeos e no facto do enxofre, na sua forma reduzida, provocar
emisses com odor extremamente desagradvel [34].
4.1.1. Reaces da lenhina durante o cozimento kraft
A degradao da lenhina depende da clivagem das ligaes ter (essencialmente -O-
4, Figura 16, e -O-4), uma vez que as ligaes carbono-carbono so muito estveis. A
forte nucleofilicidade do io hidrogenossulfureto facilita a deslenhificao. Os ies OH
-
e
HS
-
provocam a clivagem das ligaes ter, levando libertao de grupos hidroxilo das
unidades fenlicas e ao aumento do carcter hidroflico da lenhina. A lenhina degradada
dissolvida sob a forma de fenolatos de sdio, no licor de cozimento [33].


HOCH
2
C
OR
C
OCH
3
O
-
O H
H
OCH
3
C
H
2
COH
C
OR
C
OCH
3
O
H
H
H
2
COH
C
OR
C
OCH
3
H
O
-
H
O H
OH
-
O H
2
/

Figura 16: Clivagem de ligaes -O-4 em estruturas fenlicas eterificadas.
A degradao alcalina da lenhina, durante o cozimento kraft, tem vindo a ser
exaustivamente estudada atravs de compostos modelo, que representam vrias unidades
estruturais da lenhina, tendo sido identificadas trs possveis reaces de clivagem [35]:
1. Clivagem de ligaes -aril ter das unidades fenlicas atravs de intermedirios
de metileno quinona. Os grupos fenlicos adicionais formados nestas reaces
aumentam a solubilidade da lenhina, tornando-a mais susceptvel a outro tipo de
reaces.
2. Clivagem de ligaes -aril ter das unidades fenlicas atravs dos intermedirios
de episulfureto. Os intermedirios quinnicos reagem mais rapidamente com o
io sulfureto do que com o hidrxido. O que explica o facto de haver uma maior
degradao no cozimento kraft do que no soda, onde s existe o io hidrxido.
3. Clivagem de ligaes -aril ter das unidades no fenlicas atravs dos
intermedirios de epxido. Os grupos fenlicos so libertados nesta reaco
Captulo I - Reviso Bibliogrfica

22
levando completa separao das suas unidades vizinhas, formando-se assim
fragmentos de menor peso molecular e mais solveis, modificando a estrutura da
lenhina.
A degradao da lenhina muito mais complexa, no se baseando unicamente nas
reaces descritas anteriormente. Os rendimentos obtidos tambm so inferiores aos
esperados, devido ocorrncia de reaces de condensao em simultneo: nestas
reaces, os carboanies, formados durante a degradao da lenhina, competem com os
anies nucleoflicos (S
2-
, HS
-
e OH
-
) do licor de cozimento, principalmente com os
intermedirios metileno quinonas [35].
4.1.2. Reaces dos hidratos de carbono durante o cozimento kraft
A degradao alcalina dos polissacardeos leva a uma perda considervel de hidratos
de carbono. Logo no inicio do cozimento os grupos acetil das hemiceluloses so
hidrolisados. Nos estgios iniciais, cadeias de polissacardeos sofrem peeling primrio nos
grupos terminais redutores. Entretanto, vo-se formando novos grupos terminais como
resultado da hidrlise alcalina das ligaes glicosdicas, que ocorre a elevadas
temperaturas, levando a uma degradao adicional (peeling secundrio). Assim o teor de
celulose reduzido, mas no tanto como o teor de hemiceluloses que so degradadas em
maior escala, uma vez que so polissacardeos de estrutura amorfa e de baixo peso
molecular. A reaco de peeling finalmente interrompida pela reaco de stopping
(Figura 17) que converte os terminais redutores em grupos de cido carboxlico estveis
[33].

Figura 17: Mecanismo da reaco de stopping: formao do 1,2-enodiol (1), eliminao - hidroxilo (2),
tautomerizao (3), rearranjo benzlico para cido glucometassacarnico (4) [33].
4.2. Tratamento com percidos
Os percidos so utilizados na remoo da lenhina assim como no branqueamento de
pastas celulsicas. O mtodo mais usual para a sua preparao consiste na oxidao do
cido carboxlico correspondente com perxido de hidrognio (Equao 3). Tambm se
Captulo I -Reviso Bibliogrfica

23
podem produzir percidos pela reaco entre anidridos de cidos carboxlicos e perxido
de hidrognio, que do origem a solues anidras e de maior concentrao [36,37].
O H RCOOOH O H RCOOH
2 2 2
+ +
3

O cido peractico (AP) um dos percidos mais estudados e pode ser preparado
pela oxidao do cido actico com perxido de hidrognio. No entanto, a concentrao de
AP deve ser igual ou mesmo inferior s concentraes de cido actico e de perxido de
hidrognio, uma vez que os reagentes que no reagirem podem danificar as fibras de
celulose. Porm, se for usado cido peractico destilado a degradao das fibras evitada,
alm de se verificar uma diminuio do custo dos reagentes [38,39].
O cido peractico em soluo possui uma ligao intramolecular por pontes de
hidrognio muito forte, levando formao de um anel de 5 lados estvel e talvez por isso
possui um pKa (8,2) muito superior ao do cido actico (4,76) [37,40].
Os percidos, em soluo, so mais volteis e menos cidos do que os cidos
carboxlicos correspondentes, podendo ser separados destes e destilados aps a reaco e
reintroduzidos novamente no processo, levando a uma diminuio de custos em solventes e
consequentes benefcios ambientais. A fcil recuperao de solvente e o controlo eficiente
de poluio representam as grandes vantagens da utilizao deste tipo de processo de
produo de pasta [36].
4.2.1. Reaces de Percidos com Lenhina
A reaco mais caracterstica dos percidos a transferncia electroflica de
oxignio, em que os tomos de oxignio dos percidos so transferidos para os nuclefilos
do substrato que possuem um par de electres de ligao (equao 4) [36].

RCOOH HO H RCOOOH + +
+ +

4

O io hidroxnio, deficiente em electres reage rapidamente com os vrios locais da
lenhina ricos em electres, como as estruturas olefnicas e anis aromticos, causando a
degradao da macromolcula. de notar que, as ligaes alifticas carbono-hidrognio
tambm so hidroxiladas por percidos [36]. A oxidao de aldedos e cetonas por
percidos denominada de oxidao Baeyer-Villiger (equao 5) [36,41].

C R'
O
R
C R'
O
O R
COOH
O
R

5

Captulo I - Reviso Bibliogrfica

24
A maioria dos estudos comportamentais da lenhina com percidos foi efectuada com
cido peractico. Na Figura 18 so apresentadas as reaces mais importantes entre a
lenhina e os percidos [36].

OCH
3
O-lenh.
R
+ HO
+
OCH
3
O-lenh.
R
O H

(a)

OCH
3
OH
R
+ HO
+
O
O
R

(b)
OCH
3
O-lenh.
R
+ HO
+
COOCH
3
O
R
O
Lenh.

(c)

+ HO
+
OCH
3
O-lenh.
OH
OCH
3
O-lenh.
C OH H
H C O
+

(d)
+ H
2
O
C
OCH
3
O-lenh.
C OH H
H O
CH
3
O
+ HO
+
C
OCH
3
O-lenh.
C H
O
CH
3
O
C
OCH
3
O-lenh.
C OH H
O
O H
CH
3
O
+

(e)

C
C
C
C
O
+ HO
+

(f)
Figura 18: Principais reaces da lenhina com percidos: (a) hidroxilao do anel aromtico, (b)
desmetilao oxidativa, (c) abertura do anel aromtico por oxidao e formao de derivados do cido
mucnico, (d) substituio de cadeia, (e) clivagem de ligaes -aril ter, (f) epoxidao.
Captulo I -Reviso Bibliogrfica

25
4.2.2. Reaces de Percidos com Polissacardeos
Os grupos hidroxilo de lcoois presentes nos polissacardeos no providenciam
locais de reaco para ataques electroflicos pelo io hidroxnio, como tal os hidratos de
carbono no so extensivamente degradados durante a deslenhificao por percido. No
entanto, as ligaes oxignio-oxignio nos percidos so facilmente clivadas por reduo
de um electro levando formao de radicais. Os grupos hidroxilo alifticos podem ser
oxidados por percidos na presena de ies metlicos, que funcionam como catalisadores,
formando grupos carbonilo [36].

Captulo II - Materiais e Mtodos

27
CAPTULO II - MATERIAIS E MTODOS
Neste captulo procede-se descrio dos mtodos utilizados para a caracterizao
qumica das amostras de folhelho de uva e das pastas obtidas, assim como para a
preparao das mesmas. As metodologias usadas ao longo deste trabalho so na sua
maioria, adaptaes aos procedimentos utilizados para anlise de madeiras, de modo a
melhor se aplicarem ao material em estudo.
1. MATERIAIS
Este trabalho foi realizado com folhelho de uva, resultante de bagao fermentado,
obtido a partir da vinificao em tinto de uvas da casta Touriga Nacional. O folhelho,
cedido pela Adega Cooperativa de Silgueiros, em Outubro de 2007, foi conservado
temperatura ambiente aps ser-lhe retirada a humidade. Tendo em conta as anlises
realizadas ao longo de todo o procedimento laboratorial, utilizaram-se solventes e
reagentes, na sua maioria, comerciais de pureza analtica (p.a).
2. ANLISE QUMICA DO FOLHELHO DE UVA E DAS PASTAS
2.1. Teor de Humidade
O teor de humidade foi determinado pela secagem de cerca de 1g de folhelho, a
105C numa estufa, at peso constante. Com a obteno da massa das amostras secas, o
teor de humidade foi calculado pela equao 6.
100 1 (%)
|
|

\
|
=
inicial amostra de massa
seca amostra de massa
W
6
2.2. Cinzas
O teor de cinzas (fraco inorgnica) foi determinado pela incinerao da parte
orgnica, em que cerca de 1g de amostra de folhelho foi calcinada numa mufla a 525C,
durante 3 horas (equao 7).
100 (%) =
seca amostra de massa
cinzas de massa
Z
7

Captulo II - Materiais e Mtodos

28
2.3. Extractveis
Para a determinao do teor de extractveis e para a preparao de amostras livres de
extractveis, submeteram-se 10 g de folhelho a uma extraco Soxhlet com 200 mL de
solvente (acetona ou diclorometano), durante 4 horas, ebulio. Aps arrefecimento e
desmontagem do extractor, o solvente foi evaporado num evaporador rotativo. Finalmente,
a amostra foi colocada numa estufa a 105 C depois da eliminao do restante solvente e
possvel gua da amostra. O extracto resultante foi pesado. O teor de extractveis foi
calculado pela equao 8.
100 (%) =
seca amostra de massa
is extractve de massa
E
8

As amostras extradas (sem extractveis em acetona (s/EA) e sem extractveis em
diclorometano (s/ED)) foram secas temperatura ambiente, para posteriores anlises.
2.4. Extractveis em gua
Para a determinao de extractveis em gua, 1g de folhelho pr-extrado com
acetona foi submetido a refluxo com uma soluo de citrato de amnio (0,10g/mL),
durante 1 hora. Seguidamente, o resduo foi filtrado atravs de um filtro de porosidade G2
e lavado com gua quente. Aps a sua secagem a 105C, o resduo foi pesado. O clculo da
massa de extractveis foi obtido a partir da diferena entre a massa pesada e a massa inicial
da amostra. O valor do teor de extractveis gua foi calculado a partir da equao 9.
100 (%) = Ke
seca amostra de massa
gua em is extractve de massa
gua em is Extractve
9

2.4.1. Substncias solveis em gua quente e precipitadas em etanol.
A preparao da amostra foi efectuada a partir de 10g de folhelho foram submetidos
a uma extraco Soxhlet com acetona durante 8 horas. Seguidamente, cerca de 1 g de
extracto obtido foi sujeita a refluxo, durante 1 hora, com 50 mL de soluo de citrato de
amnio (0,10g/mL). De modo a facilitar a precipitao, acidificou-se a mistura com etanol
at pH 2,5 e conservou-se no frio. Aps 12h, o sobrenadante foi decantado e o precipitado
resultante foi lavado sucessivamente com etanol e metanol. O resduo final (SSP) foi ento
devidamente seco e analisado por RMN de
1
H e de correlao
1
H-
1
H (TOCSY), tendo
tambm sido determinados os seus aucares neutros.

Captulo II - Materiais e Mtodos

29
2.5. Celulose Krscher e Hffer
O teor de celulose foi determinado pela aplicao do mtodo de Krscher e Hffer
que consiste no tratamento das amostras com uma soluo etanlica cida, obtendo-se a
celulose como um resduo insolvel.
Cerca de 1 g de folhelho livre de extractveis (s/ED) foi sujeita a refluxo com 50 mL
de soluo de HNO
3
e etanol (1:4, v/v) durante uma hora, a 100 C. A soluo foi ento
retirada por decantao, adicionaram-se mais 50 mL da mesma soluo de HNO
3
em
etanol e procedeu-se a um novo refluxo por mais 1 hora. Este procedimento foi repetido.
Por fim, filtrou-se o resduo num cadinho de porosidade G4 e lavou-se com etanol aquoso
e com gua quente at sua neutralizao. Colocou-se o filtro G4 com celulose na estufa a
105 C at atingir um peso constante.
O teor de celulose das amostras, corrigido para o teor de extractveis, foi
determinado a partir da equao 10.
100 (%) = Ke
seca amostra de massa
celulose de massa
Celulose
10
em que, 100 ) 100 ( E Ke = ( equao 8, pgina 28)
2.6. Protenas
Para a quantificao das protenas, adicionaram-se 200 mL duma soluo de HCl
0,1N contendo 1% (m/v) de pepsina, a 5 g de folhelho livre de extractveis, num
erlenmeyer. Este erlenmeyer, devidamente fechado, foi de seguida colocado num banho de
gua a 37 C, com agitao. Aps 24 h, filtrou-se a mistura num cadinho G2 (devidamente
calibrado e pesado) e lavou-se com gua destilada quente, at pH neutro das guas de
lavagem. Por fim, determinaram-se as protenas, por diferena de massa e aps secagem na
estufa a 60 C [42].
O teor de protenas, corrigido para o teor de extractveis e cinzas, foi calculado pela
equao 11.
100 (%) = Ke
seca amostra de massa
protenas de massa
P
11
2.7. Taninos
Para a determinao de taninos, procedeu-se ao refluxo de 4 g da amostra resultante
do procedimento anterior (seco 2.6) com 200 mL de NaOH 0,1 M, durante 1 hora
ebulio, sob atmosfera de azoto. A amostra resultante foi filtrada num cadinho G4 e
Captulo II - Materiais e Mtodos

30
lavada at neutralizao. Por fim, secou-se na estufa a 70 C. O teor de taninos foi
calculado pela equao 12 e corrigido para o teor de extractveis, cinzas, protenas e
tambm para o valor de extractveis em gua quente.
O H
E Kp Ke
seca amostra de massa
taninos de massa
T
2
100 (%) =
12
em que, 100 ) 100 ( P Kp = ( equao 11) e
O H
E
2
so os extractveis em gua (equao 9).
2.8. Lenhina Klason
O teor de lenhina insolvel em cido foi determinado pela aplicao do mtodo de
Klason, segundo Tappi standard T 204 om-88, que quantifica a lenhina como resduo
slido, e calculado pela equao 13.
100 (%) = Kt Kp Ke
seca amostra de massa
lenhina de massa
L
13
em que, 100 ) 100 ( T Kt = (equao 12, pgina 30).

A uma amostra de folhelho livre de extractveis, protenas e taninos (ca. 1g)
adicionaram-se 15 mL de cido sulfrico a 72%. Aps 2h30 de reaco, com agitao
peridica e temperatura de 25C, diluiu-se a soluo com 250 mL de gua e procedeu-se
ao seu refluxo, durante 1 hora.
A soluo resultante foi filtrada atravs de um cadinho filtrante de porosidade G4,
lavando-se o resduo insolvel (lenhina) com gua quente at neutralizao das guas da
lavagem. Por fim, quantificou-se a massa da lenhina, aps secagem na estufa a 105 C.
A percentagem de lenhina insolvel foi corrigida para o teor em extractveis, cinzas,
protenas e taninos.
2.9. Acares Neutros
A quantidade relativa dos monossacardeos determinou-se por cromatografia gs-
lquido aps a hidrlise das amostras com cido sulfrico e derivatizao a acetato de
alditol. As amostras analisadas foram: o folhelho, as substncias solveis em gua quente e
precipitadas em etanol e a pasta.
Os polissacardeos foram hidrolisados por tratamento de cerca de 10 mg de amostra
com 400 L de H
2
SO
4
a 72%, a 20C durante 3 horas, aps a adio de 4,4 mL de gua
efectuou-se uma nova hidrlise a 100C durante 2h30. Arrefeceu-se o hidrolisado e
adicionaram-se 200 L de 2-desoxiglucose (20 mg/mL) como padro interno. A 1 mL
desta mistura adicionaram-se 200 L de NH
3
a 25% e 100 L de uma soluo de NH
3
a
Captulo II - Materiais e Mtodos

31
3M contendo 150 mg/mL de NaBH
4
, ocorrendo a reduo dos monossacardeos a alditis
durante 1 h a 30C. Para a decomposio do excesso de NaBH
4
, foi adicionado cido
actico glacial por 2 vezes. A acetilao dos alditis foi feita por adio de 0,45 mL de
1-metilimidazol e 3 mL de anidrido actico a 0,3 mL da mistura anterior. Esta soluo foi
mantida a 30C durante 30 minutos. Os acetatos de alditol foram de seguida extrados com
diclorometano e a fase orgnica foi lavada vrias vezes com gua. O solvente foi
evaporado sob atmosfera de azoto. A quantificao de cada monossacardeo foi feita num
cromatgrafo de gs Varian 3350, equipado com uma coluna capilar DB-225 J&W
(30 m comprimento 0,25 mm dimetro interno, com 0,15m de espessura de filme)
acoplada a um detector FID, usando N
2
como gs de arraste, aps injeco de 0,5 L de
amostra (dissolvida em 100 L de acetona). As rectas de calibrao utilizadas foram
obtidas utizando-se rectas de calibrao previamente elaboradas a partir de solues
padro. As condies cromatogrficas foram as seguintes: temperatura do injector 220C,
temperatura da coluna 220C e temperatura do detector 230C.
2.10. Isolamento e Caracterizao Estrutural da Cutina
2.10.1. Extraco
Cerca de 2 g de pasta foram submetidas a uma extraco Soxhlet com 200 mL de
diclorometano, durante 3 horas. O extracto foi quantificado aps evaporao do solvente
(equao 14).
100 (%) =
pasta de massa
ED de massa
ED
14
em que, ED so os extractveis da pasta.

2.10.2. Metanlise dos Extractos
Dissolveram-se cerca de 145 mg do extracto obtido anteriormente em 50 mL de
metanol absoluto e procedeu-se extraco, durante 2 horas, aps a adio de 40 mg de
MeONa. A soluo resultante foi acidificada (pH=6) e submetida a uma extraco lquido-
lquido com clorofrmio (3x100 mL) com adio prvia de 15 mL de gua destilada. Por
fim, a soluo combinada de clorofrmio foi filtrada sobre NaSO
4
anidro, o solvente
evaporado at sua secura e o extracto metanlico foi quantificado pela equao 15.
100 (%) =
asta p de massa
EDM de massa
EDM
15
em que, EDM so os extractveis da pasta depois da metanlise.
Captulo II - Materiais e Mtodos

32
2.10.3. Metanlise da Pasta livre de Extractveis
A mistura de 1 g de amostra de pasta livre de extractveis, 200 mL de MeOH e
0,120 g de MeONa foi sujeita a refluxo, durante 3 horas. Aps a extraco, filtrou-se a
soluo atravs de um filtro de porosidade G4 (seco e previamente pesado), adicionaram-
se 60 mL de MeOH. Procedeu-se a nova extraco durante 15 minutos e filtrou-se a
soluo sobre o filtrado anterior. Acidificou-se o filtrado, adicionaram-se 75 mL de gua
destilada e extraiu-se por 3 vezes, com 100 mL de clorofrmio. Por fim, a soluo
combinada de clorofrmio foi filtrada sobre NaSO
4
anidro, o solvente evaporado at sua
secura e o extracto metanlico foi quantificado (equao 16).
100 (%) =
pasta da massa
LED de massa
LED
16
em que, LED a amostra de pasta livre de extractos aps metanlise.

2.10.4. Caracterizao Estrutural
Cerca de 10 mg de cada extracto (antes e aps metanlise) foram dissolvidos em
250 L de piridina e os compostos contendo grupos hidroxilo e carboxilo livres foram
convertidos em teres e steres trimetilsililados (TMS), respectivamente, por adio de
250 L de BSTFA e de 50 L de trimetilclorosilano. As misturas permaneceram a 70C
durante 40 min e posteriormente foram analisadas por GC-MS.
A anlise por GC-MS foi efectuada usando um cromatgrafo Trace Gas
Chromatograph 2000 series, equipado com um espectrmetro de massa Finnigan Trace
MS, corporation, usando hlio como gs de arraste (30 mL/min), equipado com uma
coluna capilar DB-1 J&W (30 m 0,32 mm dimetro interno), 0,25 m de espessura de
filme), tendo sido usadas as seguintes condies cromatogrficas: temperatura inicial: 80C
(5 min); gradiente de temperatura: 4C/min (at 250C); temperatura final: 285C (10 min);
temperatura do injector: 290C; temperatura da linha de transferncia: 290C; razo de
split: 1/75 [43].
2.11. Espectroscopia de Infravermelho com transformada de Fourier - FTIR
As amostras de folhelho, lenhina e pasta, foram analisadas sob a forma de pastilha,
por prensagem das amostras em p com KBr. Os espectros foram realizados no modo
transmitncia, com uma resoluo de 4cm
-1
e 64 scans/min num espectrofotmetro
MATTSON 7000 com Transformada de Fourier.
Captulo II - Materiais e Mtodos

33
2.12. Espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear de 13C CP/MAS
Os espectros de RMN CP/MAS de
13
C da matria-prima, da lenhina e da pasta,
foram adquiridos a 100,6 MHz (9,4 T) num espectrmetro MSL-400 da Bruker. As
amostras foram empacotadas em rotores de 7 mm que rodaram segundo o ngulo mgico a
uma frequncia de 5,0 KHz. A durao do impulso de 90 foi de cerca de 4 s. O tempo de
contacto escolhido para a polarizao cruzada foi de 2 ms e o intervalo entre scans foi de
5 s.
2.13. Espectroscopia de RMN de
1
H
Uma alquota de substncias solveis em gua quente e precipitadas em etanol foi
dissolvida em D
2
O e o espectro de proto foi adquirido a 60C num espectrmetro Bruker
AMX 300 a 300,13 MHz utilizando as seguintes condies: tempo de relaxao 10,2 s,
pulso de 90, 400 scans e intervalos de 12 s entre os scans. Os desvios qumicos foram
referenciados relativamente ao 3-(trimetilsilil)propionato-d4 de sdio ( = 0,00).
2.14. Espectroscopia de RMN
1
H-
1
H (TOCSY)
O espectro de 2D de
1
H-
1
H TOCSY ( mix= 0,050 s) das substncias solveis em
gua quente e precipitadas em etanol foi obtido no mesmo espectrmetro referido na
seco 2.13 usando o programa MLEVST. Para a espectroscopia de 2D de
1
H-
1
H TOCSY
foi utilizada em ambas as dimenses uma largura espectral de 2185 Hz e um tempo de
relaxao de 1,5 segundos. Para cada FID foram adquiridos 128 transitrios, o tamanho da
matriz de dados foi de 1024 em t
1
por 512 em t
2
.
2.15. Cromatografia de Permeao em Gel GPC
Os peso moleculares mdios das substncias solveis em gua quente e precipitadas
em etanol e dos extractveis em diclorometano da pasta foram determinados por GPC.
A anlise por GPC de substncias solveis em gua quente e precipitadas em etanol
foi realizada em duas colunas Plaguagel-OH MIXED 8 m, 300 7,5 mm acopladas a um
aparelho PL-GPC 110 system (Polymer Laboratories Ldt., U.K.) com um detector de
ndice de refraco. O injector e as colunas foram mantidos a 36C de modo a diminuir a
viscosidade do solvente e o alargamento do pico. Foi utilizada gua ultrapura (J.T. Baker
Chem.Co.) contendo NaNO
3
(0,1 M) e NaN
3
(0,02%), como fase mvel, com um fluxo de
0,9 mL/min. Foi injectado um volume de 100 L de amostra com a concentrao de
Captulo II - Materiais e Mtodos

34
0,4-0,5% mg/mL. A coluna analtica foi calibrada com polmeros padro (pululana,
Polymer Laboratories) no intervalo de massas de 0,8 48 kDa. Obteve-se a seguinte curva
de calibrao: log M = 14,68 0,5564 t.
As substncias extractveis foram dissolvidas num pequeno volume de clorofrmio
at uma concentrao de cerca de 6 mg/mL. A anlise por GPC foi realizada no mesmo
aparelho referido anteriormente, mas usando duas colunas TOSOH 300 7 mm. As
colunas, o sistema de injeco e o detector foram mantidos a 40C durante a anlise. A
velocidade de fluxo do eluente (clorofrmio) foi de 0,7 mL/min. A coluna analtica foi
calibrada com polmeros padro (PS, Polymer Laboratories) no intervalo de massas de
580 7000 Da.
2.16. Difraco de Raios-X
O ensaio foi realizado temperatura ambiente num difractmetro Philips XPert
MPD, usando uma fonte de Cu-K (=0.154 nm) numa gama de 2 entre 2-40 e um
varrimento de 0,02/scan. O difractograma de raios-X foi obtido directamente a partir de
uma amostra de celulose previamente prensada em forma de pastilha.
O grau de cristalinidade (DC
0
) das fibras de celulose foi determinado pela
comparao entre a magnitude relativa e a difraco total das fases amorfas e cristalinas,
aps separao das mesmas (equao 17) [44].
100 (%)
+
=
am cr
cr
o
I I
I
DC
17

Onde, I
cr
a intensidade mxima do plano de difraco 002 (2 = 22) cuja reflexo
atribuda regio cristalina da celulose e I
am
a intensidade de difraco a 2 = 18, cuja
reflexo atribuda regio amorfa da celulose.
Tendo em conta a existncia de componentes no-celulsicos, o valor de DC
0
teve de
ser corrigido e assim calculou-se o grau de cristalinidade (DC) a partir da equao 18.
(

\
|
+ = 1
1
3 , 0 1 ( (%)
w
DC DC
o
18
em que, w a proporo relativa de celulose, que neste caso de 0,95.

Pela equao de Scherer (equao 19), determinou-se a largura mdia de cristalito no
plano de rede 002, d
002
[44].
2
1
2
002 002
002
cos

(
(

|
|

\
|
|

\
|
=
L
L
d
d



19
Captulo II - Materiais e Mtodos

35
Onde,
002
corresponde ao valor (em radianos) da largura a meia altura da reflexo do
plano 002;
002
o mximo da reflexo do plano 002; o comprimento de onda usado
pela fonte de raios-X (0,0154 nm);
L
um parmetro relacionado com a distoro da rede
perpendicular direco do plano 002 (0,05) e d
L
representa um parmetro relacionado
com a distncia entre os planos de rede 002 (0,395 nm).
A altura mdia de um cristalito, c, pode ser determinada pela anlise do reflexo do
plano 040 e aplicando a Lei de Bragg (equao 20).
040
2 sen d n = 20
em que n representa a ordem do feixe difractado, d o espaamento entre os planos de difraco e
040
o
ngulo correspondente ao reflexo do plano 040.

Sabendo que numa clula unitria de celulose nativa se podem identificar quatro
seces originadas pelo plano 040, a altura mdia de cristalito dada pela equao 21.
d c = 4 21

3. OBTENO DE PASTAS DE FOLHELHO DE UVA
Foram realizados vrios ensaios, com diferentes tratamentos, para a obteno de
pastas a partir de folhelho de uva.
3.1. Cozimento Kraft
O cozimento da amostra de folhelho (2 g) foi realizado a 160C, durante 1h40, com
uma soluo de licor branco com 18% de alcali activo (A.A), 28% de ndice de sulfureto
(S) e hidromdulo de 6,25. O volume de soluo no reactor foi de 12,5 mL. No final da
reaco lavou-se a pasta com sucessivas adies de gua destilada (sob vcuo), at se obter
a neutralidade do filtrado. A pasta foi conservada temperatura ambiente aps ser-lhe
retirada toda a humidade.
3.2. Tratamento com cido Peractico
Num reactor de vidro (250 mL) com controlo de temperatura e agitao mecnica,
foram adicionadas 5 g de folhelho a 40 mL de cido peractico (AP) a 5%. Ao fim de
20 minutos, temperatura de 80 C, foram adicionados mais 40 mL de AP com metade da
concentrao e submeteu-se novamente a mistura temperatura de 80 C, durante mais
10 minutos. A pasta resultante foi filtrada sob vcuo e lavada, sucessivas vezes, com gua
Captulo II - Materiais e Mtodos

36
destilada e acetona at sua neutralidade. Por fim, a pasta foi guardada no frigorfico
(+4C), para posteriores anlises.
3.3. Tratamento com Perxido de Hidrognio e Molibdato de Amnio
A uma soluo de H
2
O
2
a 5% adicionaram-se 70 mg de molibdato de amnio.
Aferiu-se o pH at 5 e a 50 mL de soluo adicionaram-se 5 g de folhelho. A reaco
ocorreu durante 1h a 80C sob agitao mecnica. De seguida procedeu-se ao
branqueamento da amostra no mesmo reactor, por tratamento com cido peractico em
2 estgios. O 1 estgio decorreu durante 15 minutos utilizando uma concentrao de AP
igual a 6,68 %, no segundo estgio a concentrao de AP utilizada foi de 3% e a reaco
ocorreu tambm durante 15 minutos. A pasta resultante foi filtrada sob vcuo e lavada,
sucessivas vezes, com gua destilada e acetona at sua neutralidade.
4. ANLISE DE PASTAS
4.1. Viscosidade Intrnseca
O estudo da viscosidade foi efectuado de acordo com o procedimento
SCAN-CM 15:88 [45], que permite calcular a viscosidade intrnseca de pastas atravs da
sua dissoluo numa soluo diluda de cupri-etilenodiamina (CED).
A viscosidade relativa (
rel
) foi calculada a partir da determinao do tempo de
escoamento (t
e
), pela equao 22.
n rel
t h = 22
em que, h representa a constante do viscosmetro.

Conhecendo o valor de
rel
obtm-se o valor do produto da viscosidade intrnseca
([]) pela concentrao da pasta (c), atravs dos valores tabelados no procedimento
SCAN-CM 15:88. Por fim, a partir da equao de Martin (equao 23), determinou-se
a [] [45].

| | | |c K
c
rel

+ =

log
1
log
23
em que, K uma constante e vale 0,13.

Captulo II - Materiais e Mtodos

37
4.2. Histograma de Fibras
O histograma de fibras foi efectuado num aparelho Fiber Quality Analyser
(OpTest, Canada) no Instituto de Investigao da Floresta e do Papel Raiz.
4.3. Medio de ngulos de Contacto
Os ngulos de contacto, da superfcie da pasta seca, foram medidos pelo mtodo da
gota sssil, para trs reagentes de teste (gua, formamida e diiodometano), num aparelho
Surface Energy Evaluation System. A equao do modelo de Owens-Wendt (equao24)
foi utilizada para o clculo das componentes polar (
P
s
) e dispersiva (
d
s
) da energia de
superfcie da pasta [46,47].
d
l
P
l P
s
d
s
d
l
d
l
P
l

+ =
|
|

\
|
+
|

\
| +
2
) cos( 1
24

Pela medio dos ngulos de contacto () e sabendo as componentes polar (
P
l
) e
dispersiva (
d
l
) das tenses superficiais de cada lquido (Tabela 7), fez-se um ajuste aos
pontos da melhor recta a partir do grfico de y ( ( ) | | ( ) | |
d
l
d
l
P
l
+ + 2 ) cos( 1 ) em
funo de x ( )
d
l
P
l
e a partir do declive e da ordenada na origem determinam-se
P
s
e
d
s
, respectivamente.
Tabela 7: Componentes das tenses superficiais de cada lquido utilizado.
Lquidos gua Formamida Diiodometano
P
l


51,0 19,0 0
d
l


21,8 39,0 50,8

4.4. Anlise Trmica
Amostras de pasta e dos seus extractos em diclorometano foram sujeitas a anlises
trmicas por anlise termogravimtrica (TGA) e por calorimetria diferencial de varrimento
(DSC).
Captulo II - Materiais e Mtodos

38
4.4.1. TGA
A anlise trmica foi efectuada utilizando cerca de 6 mg de amostra, colocada num
porta-amostras de platina. Para a aquisio do termograma utilizaram-se as seguintes
condies: velocidade de aquecimento 10C/min, intervalo de temperaturas 25 C a 600C,
atmosfera de N
2
, fluxo de 20 mL/min, num equipamento Shimadzu TGA-50.
4.4.2. DSC
Transferiu-se uma massa de cerca de 5 mg de amostra para um porta-amostras de
alumnio tendo sido utilizadas as seguintes condies de anlise: atmosfera de N
2
, fluxo de
20 mL/min, velocidade de aquecimento 10 C/min num aparelho Shimadzu DSC-50,
intervalo de temperaturas 25 C a 300 C.

Captulo III -Resultados e Discusso

39
CAPTULO III - RESULTADOS E DISCUSSO
1. ANLISE QUMICA DO FOLHELHO
De modo a analisar o folhelho de uva procedeu-se ao estudo da sua composio
qumica, nomeadamente pela determinao dos teores de cinzas, extractveis em acetona,
diclorometano e gua, protenas, taninos, resduo insolvel em H
2
SO
4
a72 %, celulose
Krscher e Hffer e hemiceluloses, em base de massa seca (Tabela 8). Numa posterior
abordagem, foi efectuada uma caracterizao dos componentes utilizando diversas
tcnicas, como: FTIR, RMN
13
C de CP/MAS, DRX, RMN de
1
H, RMN de
1
H-
1
H
(TOCSY) de correlao, GPC e GC-MS.
Tabela 8: Composio qumica do folhelho de uva.
Parmetros Teor (%)
Cinzas (sais de K, Ca e Mg) 7,8
Acetona 5,7
Diclorometano 5,5
Extractveis
gua 26,4
Protenas 18,8
Taninos 13,8
Resduo insolvel em H
2
SO
4
a 72 %

22,4
Celulose Krscher e Hffer 20,8
Hemiceluloses
#
24,9
#
o valor inclui as substncias pcticas

O folhelho foi extrado com diferentes solventes (acetona, diclorometano, gua) com
o objectivo de quantificar compostos de baixo peso molecular com diferentes polaridades.
Nos extractveis em gua, poder estar contabilizada uma fraco de hidratos de carbono.
Pela anlise elementar das cinzas verificou-se que o folhelho , em termos de contedos
catinicos, essencialmente constitudo por potssio (9140,7 mg/kg folhelho), clcio
(360,2 mg/kg de folhelho) e magnsio (79,7 mg/kg de folhelho).
de referir que o folhelho de uva tem mais de 50% de matria polimrica insolvel
em gua e solventes orgnicos (celulose e hemiceluloses), o que leva a propor a possvel
Captulo III -Resultados e Discusso

40
utilizao destes polissacardeos em novas aplicaes (como fonte de fibra para
biocompsitos ou papel). porem necessrio fazer-se uma anlise exaustiva destes
componentes para se puder sugerir alguma aplicao prtica.
1.1. Caracterizao Estrutural do Folhelho
O folhelho de uva foi caracterizado estruturalmente por espectroscopia de FTIR e por
RMN
13
C do estado slido. Na Figura 19, visualiza-se o espectro de FTIR do folhelho.
500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000
Comprimento de onda (cm
-1
)

Figura 19: Espectro de FTIR do folhelho.
Na Tabela 9 apresentam-se os grupos funcionais e as atribuies correspondentes.
Tabela 9: Frequncias vibracionais e tipos de vibrao.
Frequncia (cm
-1
) Grupo funcional Atribuio
3320 OH Extractveis, polissacardeos, lenhina
2917 a CH (CH
2
aliftica) Extractveis, polissacardeos, lenhina
2850 s CH (CH
2
aliftica) Extractveis, polissacardeos, lenhina
1729 C=O (steres) Extractveis, polissacardeos, lenhina
1643 C=C (aromtico) Extractveis, lenhina
1550 C=C (aromtico) Extractveis, lenhina
1436 CH Extractveis, polissacardeos, lenhina
1338 OH extractveis, polissacardeos
1307 C- O Polissacardeos
1263 C- O Polissacardeos
1213 C- O Polissacardeos
1159 a C-O Extractveis, polissacardeos, lenhina
1133 C- O Polissacardeos
1108 CH, C-O polissacardeos, lenhina
1068 CH, C-O polissacardeos, lenhina
904 C-H Polissacardeos
Sendo a vibrao por elongao (a: assimtrica, s: simtrica) e a vibrao por deformao.
Captulo III -Resultados e Discusso

41
Na Figura 20, apresenta-se o espectro de RMN
13
C de CP/MAS do folhelho e na
Tabela 10 os sinais correspondentes.
ppm (t1)
0 50 100 150 200

Figura 20: Espectro de RMN CP/MAS de
13
C do folhelho.
Tabela 10: Sinais de RMN CP/MAS de
13
C.
Desvio qumico (ppm) Atribuio
24-54 -(CH
2
)
n
-, extractveis, cutina
56 - (OCH3)-, hemiceluloses
62-64 C6, celulose e hemiceluloses
72-74 C2, C3, C5, celulose e hemiceluloses
83,4 C4, celulose e hemiceluloses
105 C1, celulose e hemiceluloses
145 C quaternrio, extractveis (taninos)
173 -COO-R, CH
3
-COO-, hemiceluloses
177 -COOH, hemiceluloses (cidos urnicos), compostos fenlicos

No espectro de FTIR da Figura 19, verifica-se a presena dos dois picos muito
intensos a 2917 e 2850 cm
-1
e uma banda a 1729 cm
-1
, que sugerem a presena de
compostos alifticos com funcionalidades carboxlo/ster, tais como extractveis e/ou
compostos polimricos do tipo cutina. Esta observao confirmada pelo espectro de
RMN
13
C (Figura 20) pela presena de sinais caractersticos na regio aliftica
(24-54 ppm) e na regio correspondente aos grupo carbonilo (170-180 ppm). Os sinais
entre 160-180 ppm podem ser atribudos a grupos ster alifticos presentes em compostos
como a cutina, o sinal a 177 ppm indica a presena de grupos carboxilos de cidos
urnicos [48-53].
As bandas a 1640-1430 cm
-1
so atribudas lenhina, no entanto as bandas nesta
regio esto pouco definidas e no so tpicas deste composto, no entanto dentro do mesmo
intervalo destaca-se a presena de compostos fenlicos (1300-1460 cm
-1
), como os taninos.
Captulo III -Resultados e Discusso

42
A presena de compostos aromticos, do tipo taninos, pode ainda ser confirmada pelo
espectro de RMN
13
C, uma vez que tambm no se verificam picos tpicos de compostos
aromticos na regio correspondente (100-160 ppm) do espectro [54-56].

Os polissacardeos so os componentes maioritrios do folhelho, este facto
verificado pela anlise dos espectros de FTIR (1200-950 cm
-1
) e de RMN de
13
C no estado
slido (60-105 ppm) [48-53].
1.2. Resduo Insolvel em H
2
SO
4
a72 %
A partir da anlise de lenhina pelo metdo klason, pretende-se isolar a lenhina como
resduo insolvel. O resduo obtido pelo tratamento do folhelho com H
2
SO
4
a 72 %, foi
analisado por FTIR e por RMN
13
C de CP/MAS [54-56].
500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000
Comprimento de onda (cm
-1
)

Figura 21: Espectro de FTIR do resduo insolvel em H
2
SO
4
a72 %.
As bandas na regio 1600-1430 cm
-1
, visualizadas no espectro de FTIR apresentado
na Figura 21, encontram-se pouco definidas, sendo muito diferentes das bandas relativas
lenhina nesta regio do espectro. No espectro de RMN
13
C (Figura 22) tambm no se
verificam os picos tpicos de lenhina na regio correspondente (110-160 ppm) do espectro.
ppm (t1)
0 50 100 150 200
1
7
2
,7
6
0
1
0
4
,8
3
8
8
8
,3
6
9
8
4
,0
6
3
7
2
,3
4
8
6
4
,5
5
4
6
2
,5
8
6
3
2
,8
5
1
2
9
,9
7
1
2
6
,0
7
1

Figura 22: Espectros de RMN slido do resduo insolvel em H
2
SO
4
a72 %.
Captulo III -Resultados e Discusso

43
Assim pode-se concluir a no existncia de lenhina no folhelho, uma vez que no se
observam os grupos funcionais tpicos da lenhina, referenciados na literatura [54-56].
1.3. Polissacardeos
De modo a caracterizar a fraco polissacardica do folhelho procedeu-se anlise
dos acares neutros, mediu-se o grau de cristalinidade da celulose por DRX e
posteriormente analisaram-se as hemiceluloses por anlise dos acares neutros e atravs
das tcnicas de GPC, de RMN de
1
H e de correlao
1
H -
1
H (TOCSY).
1.3.1. Acares Neutros
Analisando a Tabela 11, verifica-se que os acares predominantes no folhelho so a
glucose, a manose, a arabinose e a xilose. O que permite concluir que o folhelho alm de
ser constitudo por celulose, tambm composto por mananas, arabinanas, xilanas e
xiloglucanas.
Tabela 11: Composio mdia em monossacardeos do folhelho de uva.
Acares
Composio
% (m/m
total
)
Ramnose 2,5
Fucose 0,5
Arabinose 10,2
Xilose 9,6
Manose 10,8
Galactose 5,3
Glucose 61,1
% (m/m
total
): razo mssica entre cada monossacardeo e o total de monossacardeos.

1.3.2. Celulose
A tcnica de difraco de raios-X foi efectuada de modo a comprovar a existncia de
celulose e analisar os reflexos tpicos 002, 101 e 101.
Pela identificao dos reflexos dos diferentes planos e dos domnios amorfos e
cristalinos (Figura 23) confirma-se a presena de celulose e verifica-se que o grau de
cristalinidade da celulose (DC) de 66,1 %. A largura mdia de cristalito no plano 002
Captulo III -Resultados e Discusso

44
(d
002
) de 3,7 nm e a altura mdia de um cristalito (c) de 1,03 nm. Os mximos dos
reflexos dos planos 002 e 101 e 101 (sobrepostos) correspondem a 22,02 e 15,36,
respectivamente, que so concordantes com os valores da literatura para a celulose I
[44,57,58].

Figura 23: Difractograma de Raios-X da celulose.
1.3.3. Hemiceluloses
A caracterizao das hemiceluloses solveis em gua foi efectuada pela anlise de
substncias solveis em gua quente e precipitadas em etanol (SSP), utilizando GPC,
GC-FID, RMN de
1
H e RMN
1
H -
1
H (TOCSY) de correlao total.
A distribuio do peso molecular das SSP foi analisada por GPC. Na curva de
eluio, representada na Figura 24, verifica-se uma distribuio bimodal. O peso molecular
do pico (Mp) da 1 fraco eluda, entre 14,0 e 19,6 minutos, foi de 33100 Da e o Mp da
2 fraco eluda, entre os 19,6 e os 25,0 minutos, foi igual a 2900 Da.

Figura 24: Curva de eluio das SSP.
Captulo III -Resultados e Discusso

45
Os pesos moleculares mdios: ponderado, M
w
e em nmero, M
n
, e a
polidispersividade, M
w
/M
n
, foram determinados nos mesmos tempos de eluio calculadas
isoladamente para cada fraco estando apresentados na Tabela 12.
Tabela 12: M
w
, M
n
e a M
w
/M
n
das substncias isoladas em gua quente e precipitadas em etanol.
Picos M
w
(Da) M
n
(Da) M
w
/M
n
(Da)
1 91406 34291 2,66
2 2550 2400 1,1

Pela anlise destes dados, conclui-se que a fraco 1 corresponde a uma fraco
polissacardica com um M
w
mais elevado ou com uma estrutura mais ramificada,
relativamente 2 fraco, que leva a um volume hidrodinmico mais elevado.
Pela anlise dos acares neutros verifica-se que os acares constituintes deste
polissacardeo so a manose, a glucose, a arabinose e a galactose, com pequenas
quantidades de ramnose, xilose e fucose (Tabela 13).
Tabela 13: Acares neutros existentes nas substncias isoladas em gua quente e precipitadas em etanol.
Acares
Composio
(% m/m)
Manose 33,1
Glucose 24,7
Arabinose 17,7
Galactose 16,5
Ramnose 3,6
Xilose 3,2
Fucose 1,2

De modo a serem analisadas as caractersticas gerais deste composto foram
adquiridos espectros de RMN de
1
H e RMN de correlao
1
H-
1
H (TOCSY). Os picos das
unidades glicosdicas foram assinalados com base em dados da literatura [59-61] e esto
apresentados directamente no espectro de RMN de proto de
1
H da Figura 25.
Captulo III -Resultados e Discusso

46
ppm (t1)
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0
H-4
H-5
H-6
H-2
H-3
H-5
H-2
H-3
H-4
H-1 H-1
H-1
H-6 H-1
H-2
H-3
H-4
Rhap
Glcp
Glcp
Glcp
Galp
Galp
Manp
Manp
Manp
Araf
Araf
Araf
MAc
MAc
MAc
MAc
Ac
PI
Galp
Legenda:
Ac grupos acetil
Araf - arabinofuranose
Galp galactopiranose
Glcp glucopiranose
Manp - manopiranose
MAp manose acetilada
Rhap ramnopiranose
PI padro interno

Figura 25: Espectro de RMN de
1
H das SST.
Atravs da espectroscopia de proto correlacional (TOCSY), cujo espectro est
representado na Figura 26, foi proposto que a cadeia principal deste polissacardeo deveria
ser constituda por unidades de anidro -D-manopiranose e unidades de anidro -D-
glucopiranose ligadas entre si por ligaes glicosdicas -(14), o que se confirma pelas
atribuies de sinais apresentadas no espectro da Figura 25.
ppm (t2)
3.50 4.00 4.50 5.00
3.50
4.00
4.50
5.00
ppm (t1)

Figura 26: Espectro de RMN de correlao
1
H -
1
H (TOCSY) das SSP.
Captulo III -Resultados e Discusso

47
Esta cadeia polissacardica poder estar ramificada com resduos de galactose e
arabinose. Algumas unidades de manose na cadeia apresentam grupos acetilo na posio
C-2. No entanto, devido complexidade deste polissacardeo foi difcil elaborar a sua
estrutura exacta. Para tal ser necessrio efectuar estudos mais detalhados, como o estudo
estrutural depois do isolamento das fraces polissacardicas por GPC ou outras tcnicas
de separao, tambm se poder efectuar a hidrlise enzimtica parcial seguida de anlise
estrutural. Alem disso, tambm se pode estar perante uma mistura de vrios
polissacardeos, uma vez que podero estar presentes glucomananas e
ramnoarabinogalactanas simultaneamente. de referir que as ramnoarabinogalactanas so
constituintes de compostos pcticos e as glucomananas so hemiceluloses tpicas dos
frutos.
2. OBTENO E CARACTERIZAO DE PASTAS
O folhelho de uva foi sujeito a vrios tratamentos, o cozimento kraft e o tratamento
organosolv com cido peractico, de modo a possibilitar a sua transformao em pastas
2.1. Cozimento kraft
Para o cozimento kraft, cerca de 2 gramas de folhelho de uva foram sujeitas s
condies de anlise descritas na Tabela 14.
Tabela 14: Condies de anlise do cozimento kraft.
T (C) Tempo AA (%) S (%) Hidromdulo
(razo percido:matria-prima)
160 1h40 18 28 6,0

Aps o cozimento, obteve-se uma matria preta, em que se notavam as pelculas da
uva praticamente inalteradas, como se pode observar pela Figura 27. Embora o cozimento
tenha apresentado um rendimento na ordem dos 33 %, a amostra obtida seria de difcil
utilizao, para quaisquer fins.

Figura 27: Resduo resultante do cozimento kraft do folhelho.
Captulo III -Resultados e Discusso

48
Uma vez que a tentativa de obteno de pastas a partir do cozimento kraft no
apresentou resultados satisfatrios, decidiu-se proceder a um tratamento organosolv com
cido peractico.
2.2. Tratamento com cido Peractico
Na preparao do cido peractico, foi adicionada a mesma quantidade de volume de
anidrido actico e de perxido de hidrognio, obtendo-se o cido peractico para o
tratamento organosolv. de referir que o cido peractico tem uma pequena proporo de
H
2
O
2
livre (1,45 %).
Neste tratamento, procedeu-se a amostra a dois estgios, o primeiro de modo
ocorrncia de reaces de oxidao dos compostos aromticos e o segundo para um
branqueamento da pasta obtida, como se visualiza na Figura 28.

(a) (b) (c)
Figura 28: Fases do tratamento AP: (a) inicio (b) aps 1 estgio e (c) fim do tratamento.

Aps filtrao e lavagem, foi obtida uma pelcula de pasta de aspecto ceroso
(Figura 29).

Figura 29: Pelcula de pasta.
Ao longo de todo este trabalho, as condies do processo foram alteradas com vista
optimizao deste tratamento. Tais como: a temperatura, o tempo de tratamento, a
concentrao de percido e a carga de pasta (hidromdulo), mantendo o pH igual a 4. Na
Tabela 15, apresentam-se algumas das condies usadas no tratamento AP efectuado ao
folhelho de uva.
Captulo III -Resultados e Discusso

49
Tabela 15: Condies de anlise do tratamento com cido peractico.
Ensaio Estgio
m
folhelho
(g)
[AP]
(%)
Hidromdulo
Tempo
(min.)
m
pasta
(g)
Rendimento
(%)
1 4,7 38,52 25
1
2
4,8770
2,4 19,26 15
2,1018 43,1
1 5,5 44,60 20
2
2
4,9424
2,8 22,30 10
2,2970 46,5
1 8,8 69,70 20
3
2
5,0319
4,4 34,85 10
1,9270 38,3

No tratamento que permitiu obter um maior rendimento (46,5%) utilizou-se uma
concentrao de AP de 5,5 % no 1 estgio e no segundo de 2,8 %. O segundo estgio
funciona como branqueamento e no so necessrias concentraes to elevadas como no
1 estgio.
2.3. Tratamento com Perxido de Hidrognio e Molibdato de Amnio
No tratamento com H
2
O
2
e molibdato de amnio como catalisador submeteu-se a
amostra de folhelho a um cozimento seguido de branqueamento com cido peractico. No
cozimento, a amostra (5g) foi tratada durante 1 hora, a pH igual a 5 com 50 mL H
2
O
2
(5%)
e molibdato de amnio (0,15%), com controlo de agitao e de temperatura (80 C). Uma
vez que a pasta obtida apresentou uma colorao muito escura, foi necessrio proceder ao
branqueamento da mesma com cido peractico. De modo a obter-se um branqueamento
eficaz foi necessrio submeter-se a pasta resultante do tratamento com H
2
O
2
e molibdato
de amnio a 2 estgios, em que no 1 foi utilizada uma concentrao de AP (6,68%) duas
vezes superior ao 2 estgio. O rendimento obtido neste tratamento foi cerca de 33 %.
O tratamento do folhelho apenas com cido peractico apresentou-se como o
tratamento mais vivel, econmica e ambientalmente, para a obteno de pastas a partir do
folhelho.
As vantagens do tratamento AP em relao aos outros tratamentos so notrias no
s pela menor quantidade de reagentes necessrios (reagentes estes menos poluentes que os
utilizados nos outros tipos de tratamento) como tambm por se utilizarem temperaturas
mais baixas e menores tempos de reaco.
Captulo III -Resultados e Discusso

50
2.4. Anlise Qumica da Pasta
O folhelho submetido a um tratamento organosolv com cido peractico foi
submetido a vrias anlises. A pasta obtida foi caracterizada quanto sua anlise qumica,
foi feita a determinao da estrutura da cutina, determinou-se a viscosidade intrnseca,
analisou-se a dimenso das suas fibras, determinaram-se os ngulos de contacto e a energia
de superfcie da pelcula da pasta e efectuaram-se anlises por TGA e por DSC,
comparando a pasta com os seus extractveis.
2.4.1. Caracterizao Estrutural
A pasta de folhelho foi caracterizada por FTIR e por RMN
13
C de CP/MAS e
comparada com o folhelho, sendo possvel verificar algumas diferenas [48-56].
500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000
Comprimento de onda (cm
-1
)
(a)
(b)
500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000
Comprimento de onda (cm
-1
)
(a)
(b)

Figura 30: Espectros de FTIR de (a) folhelho de uva e (b) pasta.
Pela anlise do espectro de FTIR (Figura 30) da pasta, verifica-se que houve uma
diminuio da intensidade de sinais atribudos aos extractveis e aos polissacardeos, na
regio 1600-1200 ppm. Facto que sugere uma degradao desses compostos aquando da
preparao da pasta. No entanto, observam-se, ainda na regio referida, sinais atribudos a
compostos alifticos, embora em pequena quantidade, e nomeadamente um aumento de
intensidade dos sinais a 1730 e 1550 ppm, que indicam que a degradao destes compostos
no foi completa e/ou que estes se encontram ligados covalentemente aos componentes
estruturais, tal como sucede com os compostos polimricos do tipo cutina. Estas
observaes so confirmadas pela anlise dos espectros de RMN (Figura 31).
No espectro de RMN (Figura 31), relativo pasta, verificou-se uma degradao dos
taninos (110-160 ppm), dos cidos urnicos e das substncias pcticas (45-50 ppm e
95-100 ppm) aquando do tratamento oxidativo, concluindo-se que estes no esto presentes
Captulo III -Resultados e Discusso

51
na pasta. Verifica-se um aumento da fraco aliftica (24-54 ppm) e das fraces relativas
aos hidratos de carbono (60-105 ppm) da celulose e das hemiceluloses.
p p m ( t 1 )
0 5 0 1 0 0 1 5 0 2 0 0
(b )
(a)

Figura 31: Espectros de RMN
13
C de CP/MAS (a) folhelho de uva e (b) pasta.
Assim, comparando os espectros de FTIR (Figura 30) e de RMN (Figura 31) da pasta
comprova-se o facto de esta ser constituda maioritariamente por celulose e cutina, o que
tambm se confirma pela anlise dos acares neutros descrita abaixo.
2.4.2. Acares Neutros
Na Tabela 16, feita a comparao entre os acares existentes no folhelho e os
existentes na pasta em % (m/m
t
) (razo mssica entre cada monossacardeo e o total de
monossacardeos). Pela anlise da tabela, verifica-se uma diminuio dos teores de
ramnose e de arabinose para quantidades vestigiais. Nota-se tambm um decrscimo da
composio de manose. Estas alteraes evidentes em relao ao folhelho, revelam que
aquando da preparao da pasta ocorreu uma degradao dos materiais extractveis e/ou
das hemiceluloses e de outros resduos, concluindo-se que a pasta essencialmente
constituda por celulose e polmeros do tipo xilanas.
Tabela 16: Composio mdia em monossacardeos da pasta relativamente ao folhelho de uva.
Composio % (m/m
t
)
Acares
Folhelho Pasta
Ramnose 2,5 0,7
Fucose 0,5 0,7
Arabinose 10,2 0,9
Xilose 9,6 12,3
Manose 10,8 5,1
Galactose 5,3 5,3
Glucose 61,1 75,0
Captulo III -Resultados e Discusso

52
2.4.3. Caracterizao da cutina
A cutina, substncia associada pasta, foi isolada atravs da extraco da pasta em
diclorometano e caracterizada quanto distribuio da sua massa molecular e
identificao dos seus compostos livres e esterificados, de forma a obter a sua possvel
estrutura.
2.4.3.1. Distribuio do peso molecular dos extractos
A distribuio do peso molecular dos extractveis mostra o carcter multimodal da
amostra. De acordo com a calibrao da coluna com padres de poliestireno, os compostos
com tempo de reteno superior a 17,3 minutos podem ser atribudos aos monmeros
constituintes da cutina, os compostos eludos antes so de origem polimrica.
Sendo assim, na curva de eluio dos extractveis da pasta (Figura 32), efectuou-se
uma 1 integrao da curva entre os 12 e os 17,3 minutos, que corresponde a 72 % da rea
total. A 2 integrao ocorreu aps os 17,3 minutos com uma rea de 28 %.

Figura 32: Curva de eluio dos extractveis da pasta.
Ambas as fraces foram analisadas quanto aos pesos moleculares mdios. A fraco
polimrica (tempo de reteno entre os 12 e os 17,3 minutos) apresentou um valor de
M
w
igual a 3600 Da e M
n
igual a 2350 Da e a fraco monmerica (tempo de reteno entre
os 17,3 e os 19,4 minutos) um M
w
igual a 240 Da e M
n
igual a 230 Da.
2.4.3.2. Identificao dos compostos livres e esterificados
O tratamento com metxido de sdio em metanol absoluto (metanlise) permite
saponificar e permetilar os cidos gordos envolvidos na estrutura polimrica da cutina.
Foram analisados, por GC-MS, os compostos extrados em diclorometano da pasta
de folhelho, tal como os produtos da degradao dos mesmos aps metanlise. A pasta
livre de compostos extractveis foi tambm analisada aps metanlise.
Captulo III -Resultados e Discusso

53
Os principais compostos existentes nos extractos sililados, antes da metanlise (ED)
e nos extractos sililados, aps metanlise (EDM) da pasta e na pasta livre de extractveis,
aps metanolise e sililao (LED) esto numerados nos cromatogramas da Figura 33 e
identificados e quantificados tal como apresenta a Tabela 17. O padro interno (PI)
utilizado foi o tetracosano. Os vrios componentes foram identificados por comparao dos
seus espectros com a biblioteca Wiley-Nist (Nist MS search 2.0) e, em alguns casos, por
comparao dos padres de fragmentao com dados publicados [43,50,62-66].

RT: 15,7 - 67,2
20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
Tempo (min)
0
20
40
60
80
100
0
20
40
60
80
100
0
20
40
60
80
100
NL:
4,91E8
TIC MS ED
NL:
4,38E8
TIC MS
p1_edl
NL:
2,55E8
TIC MS
p1_sed
1
2
2
3
3
4
4
4
5
7
8
9
10
11
PI
13
16
17
19
39
37 34 33
29
28 22
5
6
9
10
11
13
17
18
39
37
33
29
28
21 1214
15
16
20
23
24
25
26
27 30
32
34
31
35
36 38
5
9
12
17
PI
18
23
22
21
25
26
27
28
29
30
32
31
39
37
33
34
35
36 38
PI
(a)
(b)
(c)

Figura 33: Cromatogramas totais dos extractos em diclorometano derivatizados, (a) antes e (b) aps
metanlise e (c) da pasta livre de extractos em diclorometano, aps metanlise.
Captulo III -Resultados e Discusso

54
A Tabela 17 apresenta a lista dos principais compostos detectados e a sua
quantificao.
Tabela 17: Compostos lipoflicos identificados nos extractos (mg de composto/kg de pasta).
Pico Composto ED EDM LED
1 cido 2-hidroxipropanco, tms ster 28,70 68,49 77,91
2 cido gordo no identificado - 124,17 179,51
3 cido Hexadecanico,ster metlico - 1681,23 96,08
4 1 - Hexadecanol, tms ter 6,56 34,75 510,38
5 cido Hexadecanico, ster tms 3428,51 1959,00 439,61
6 cido Octadecanico,ster metlico - 389,95 14,34
7 Octadec-9Z-enol, ter tms - 22,45 521,95
8 Octadecanol, ter tms 7,28 30,40 348,94
9 cido Octadecanico,ster tms 746,80 397,50 90,24
10 cido 7,8-hidroxihexadecanico, ster metlico 2,54 297,82 236,59
11 cido Eicosanico, ster metlico 78,00 226,30 0,00
12 cido Eicosanico, ster tms 188,35 95,30 11,90
13 cido 9,10-hidroxioctadecanico, ster metlico 0,76 772,56 396,20
14 cido gordo no identificado 72,69 128,14 56,48
15 cido Docosanico, ster metlico - 125,53 -
16 cido 6,7-pentadecanico, ster metlico 57,90 1238,92 772,80
17 cido 9,10-hidroxioctadecanico, tms ster 164,85 109,86 192,49
18 cido Docosanico, ster tms 317,99 165,58 37,31
19 cido 6,7-pentadecanico, tms ster 68,16 121,17 257,39
20 cido Tretracosanico, ster metlico - 113,15 2,47
21 cido Tricosanico, tms ster 106,11 150,81 143,33
22 1-Tetracosanol, ter tms 232,65 187,73 -
23 cido Tetracosanico, ster tms 602,43 308,93 9,57
24 cido Nonacosanico, ster metlico - 100,19 9,61
25 1-Hexacosanol, ter tms 1003,13 668,38 31,11
26 cido Hexacosanico, ster tms 2854,56 1282,89 37,32
27 cido Heptacosanico, ster tms 256,27 104,45 11,75
28 1-Octacosanol, ter tms 1068,16 626,89 83,47
29 cido Octacosanico, ster tms 4624,95 2142,80 143,51
30 cido Nonacosanico, ster tms 241,70 104,57 20,74
31 Triacontanol, ter tms 364,61 211,30 57,05
32 cido Triacontanico, ster tms 2648,73 1258,07 173,07
33 cido Oleanico, ster tms 7679,80 3744,29 164,31
34 Triterpenide no identificado 952,03 524,85 125,50
35 Triterpenide no identificado 444,73 231,93 91,51
36 cido Dotriacontanico, tms ster 1981,81 910,20 183,04
37 Triterpenide no identificado 712,90 330,86 34,80
38 Triterpenide no identificado 4965,80 2303,38 255,53
Total compostos mais representativos 35909,46 23294,79 5817,82
Outros/No identificados 7623,80 4179,98 5531,80
Total 43533,26 27474,78 11349,62

Os extractos em diclorometano representam cerca de 8,2 %(m/m) da pasta de
folhelho e so constitudos maioritariamente por cidos gordos e terpenides. Foram
tambm identificados hidroxicidos e lcoois alifticos de cadeia longa em menores
quantidades. Aps a metanlise, foi observado um aumento na quantidade total de
extractveis detectados por GC-MS, nomeadamente de hidroxicidos, o que parece sugerir
Captulo III -Resultados e Discusso

55
a presena de quantidades significativas de estruturas esterificadas e de elevado peso
molecular nos extractos iniciais. Na Figura 34 esto representadas as principais famlias e
as suas abundncias nos extractos em estudo.
0
20
40
60
%

(
m
/
m
)
cidos Hidroxicidos Alcois Terpenos Outros/N.I.
ED
EDM
LED

Figura 34: Principais famlias de compostos existentes nos extractos da pasta, (ED) antes e (EDM) aps
metanlise, e na (LED) pasta livre de extractveis.
Os cidos gordos so a famlia mais representativa dos extractos em diclorometano
(41,7%), em que os cidos octacosanico, hexadecanico e hexacosanico existem em
maior abundncia. Aps a metanlise, verificou-se um aumento dos cidos gordos e o
aparecimento de derivados metilados (steres metlicos dos cidos: hexadecanico,
octadecanico, eicosanico, docosanico, tetracosanico e nonacosanico), o que prova a
existncia de cidos gordos combinados no extracto inicial, alm dos existentes na forma
livre. Ao mesmo tempo, verificou-se um nmero significativo de lcoois de cadeia longa.
O que nos leva a supor que estes steres de cidos e de lcoois so constituintes de cutina
ligados por ligaes ster. de salientar o aumento significativo de hidroxicidos
especialmente do cido 7,8-hidroxihexadecanico, do cido 9,10-hidroxioctadecanico e o
do cido 6,7-hidroxipentadecanico, este facto indica a possvel existncia de ligaes
ster entre grupos hidroxilo de hidroxicidos e cidos gordos.
A presena de glicerol esterificado com cido hexadecanico (0,14%), verificada nos
ED, no tempo de reteno de 41 min. mostra uma possibilidade de ramificao na cutina
atravs de derivados de triglicerdeos.
Os cidos gordos livres, derivatizados sob a forma de steres trimetilsililados, so
facilmente identificveis devido ao seu padro de fragmentao tpico. Os sinais dos
fragmentos provenientes do grupo a m/z 73 e 75, [(CH
3
)
3
Si]
+
e [(CH
3
)
2
SiOH]
+

respectivamente, e do io [M-15]
+
do grupo TMS so bastante abundantes, existindo ainda
fragmentos importantes a m/z 117, 129, 132 e 145, como demonstrado pelo espectro de
Captulo III -Resultados e Discusso

56
massa do derivados TMS do cido hexadecanico na Figura 35 (a). Os cidos gordos sob a
forma de steres metilados, so facilmente identificados pelos sinais dos fragmentos a
m/z 74, 87 e 143, como se verifica na Figura 35 (b) para o ster metlico do cido
hexadecanico.


A
b
u
n
d

n
c
i
a

R
e
l
a
t
i
v
a

(
%
)

O
O
Si
(pr_edl) P1_EDL#1869 RT: 30,62 AV: 1
20 70 120 170 220 270 320
0
50
100
43
73
83
117
129
145
159
201
243
269
313
328
m/z


A
b
u
n
d

n
c
i
a

R
e
l
a
t
i
v
a

(
%
)

(pr_edl) P1_EDL#1315 RT: 22,44 AV: 1
O
O
(pr_edl) P1_EDL#1656 RT: 27,47 AV: 1
10 50 90 130 170 210 250
0
50
100
43
74
87
101 129
143
185
213
227
270
m/z
(a) (b)
Figura 35: Espectros de massa dos derivados do cido hexadecanico: (a) TMS e (b) ster metilado.
Nos extractos em diclorometano foram identificados alguns hidroxicidos, mas
aps a metanlise que estes ganham uma maior importncia, nos EDM atingem valores de
9,5 % e nos LED de 17,0 % de proporo mssica. A identificao dos derivados TMS
destes compostos foi baseada nos seus padres de fragmentao tpicos, alm dos picos
caractersticos dos steres dos cidos gordos trimetilsililados (m/z [M-15]
+
, 117 e 129)
estes compostos distinguem-se ainda pela presena do dois ies a m/z 204 e 217,
resultantes do rearranjo dos grupos TMS em compostos de cadeia longa e dos ies a
m/z 89 e 103, confirmando-se assim a existncia de -hidroxicidos, como o
cido 9,10hidroxioctadecanico, cujo espectro de massa do seu derivado TMS se
encontra na Figura 36.

A
b
u
n
d

n
c
i
a

R
e
l
a
t
i
v
a

(
%
)

(pr_edl) P1_EDL#2602 RT: 41,42 AV: 1
10 100 190 280 370 460
0
50
100
55
73
103
147
215
317
390
517
m/z
OTMS
OTMS
TMSO
O

Figura 36: Espectro de massa do derivado TMS do cido 9,10 - hidroxioctadecanico.
Captulo III -Resultados e Discusso

57
Os lcoois alifticos de cadeia longa representam uma pequena fraco (6,2 %) do
teor total de extractveis. Aps a metanlise dos ED, a quantidade destes compostos
aumentou ligeiramente, sendo: o 1-octacosanol e o 1-hexacosanol, os lcoois mais
abundantes. Contudo nos LED que os alcois existem em maior quantidade (13,7 %),
sobretudo devido ao 1-hexadecanol e ao 1-octadecanol. A identificao dos derivados
TMS dos lcoois alifticos teve como base o seu padro de fragmentao tpico, que
apresentam, em geral, ies intensos a m/z [M-15]
+
e 75, assim como ies a m/z 89 e
103 [(CH
3
)
3
SiOCH
2
]
+
, que permitem distingui-los dos derivados TMS dos cidos gordos
(Figura 37).

A
b
u
n
d

n
c
i
a

R
e
l
a
t
i
v
a

(
%
)

(Text File) P1_EDL#3043 RT: 47,91 AV: 1
30 140 250 360
0
50
100
75
103
180 236 297 353
439
m/z
OTMS

Figura 37: Espectro de massa do derivado TMS do 1-Hexacosanol.
Os terpenos constituem a segunda famlia mais representativa dos ED (33,9 %),
sendo o cido oleanlico (triterpenide) o mais abundante. Este triterpenide foi
identificado com base nos seus padres de fragmentao, em que os fragmentos a
m/z 600 [M]
+
, 585 [M-CH
3
]
+
, 510 [M-TMSOH]
+
, 495 [M-TMSOH-CH
3
]
+
,
482 [M-TMSOOCH]
+
, 393 [M-TMSOH-TMSOOC]
+
e 392 [M-TMSOH-TMSOOCH]
+

so os sinais mais importantes (Figura 38).

A
b
u
n
d

n
c
i
a

R
e
l
a
t
i
v
a

(
%
)

(ed) ED#3787 RT: 58,91 AV: 1
20 140 260 380 500
0
50
100
73
133
203
320
482
585
m/z
TMSO
O
OTMS

Figura 38: Espectro de massa do derivado TMS do cido Oleanico.
Captulo III -Resultados e Discusso

58
2.4.3.3. Estrutura possvel da cutina no folhelho
Os monmeros obtidos aps a despolimerizao da cutina pela metanlise mostram
que estes deveriam estar ligados por ligaes ster entre grupos carboxilo de cidos, grupos
hidroxilo de lcoois e grupos hidroxilo de hidroxicidos. Os steres de cido gordo com
glicerol podem apresentar um ponto de ramificao do polmero tal como j foi
apresentado, por alguns autores, para a suberina [50,65-67].
Na Figura 39 so apresentados fragmentos hipotticos para a estrutura da cutina
obtidos a partir das propores dos monmeros apresentados na Tabela 17.


O
O
OH
O
O
O
O
OH
O
O
O
OH
O H
O
O O
O
O
OH O
O

Figura 39: Fragmentos propostas para a estrutura da cutina.
2.5. Viscosidade Intrnseca
A viscosimetria de solues diludas uma tcnica sujeita a calibrao que permite
determinar a massa molecular mdia de um polmero, assim como obter informaes a
respeito da dimenso das suas cadeias.
Segundo a norma SCAN-CM 15:88, antes de se proceder s medies no
viscosmetro necessrio desintegrar a amostra de pasta, em gua, e, em seguida,
Captulo III -Resultados e Discusso

59
solubiliz-la em CED, sendo 30 minutos o tempo mximo indicado para cada uma destas
operaes [45].
Na determinao da viscosidade da pasta de folhelho, no foi possvel a sua
desagregao completa mesmo aps muitas horas de agitao, devido forte ligao entre
extractveis e polissacardeos, que impossibilita a desintegrao da pasta. O que justifica o
baixo valor obtido (172,6 mL/g) quando comparado com valores tpicos para pastas de
papel [45, 68].
2.6. Histograma de Fibras
Pela anlise do histograma de fibras, obteve-se um comprimento mdio de fibras
curtas de 0,70 mm, valor semelhante ao das folhosas (e.g. Eucaliptus globulus). No entanto
este no o valor verdadeiro, uma vez que o aparelho s mede comprimentos de fibras
curtas entre 0,15 e 10 mm e a percentagem de finos (0,00 0,15 mm) corresponde a
71,83 %. Como tal, pode afirmar-se que o comprimento mdio das fibras da pasta de
folhelho 0,2 mm, o que constitui uma grande parte do histograma da Figura 40.

Figura 40: Histograma de fibras.
O comprimento reduzido das fibras e o baixo valor de viscosidade reflectem a
dificuldade de drenagem deste material, concluindo-se definitivamente que este material
no ser bom para a indstria papeleira.
2.7. Medio de ngulos de Contacto
A interaco entre uma superfcie e um determinado lquido pode ser estudada
atravs da medida do ngulo de contacto (). Este definido como sendo o ngulo entre
um plano tangente a uma gota do lquido e um plano contendo a superfcie onde o lquido
se encontra depositado, conforme esquematizado na Figura 41.
Captulo III -Resultados e Discusso

60


Figura 41: Mtodo da gota sssil para calcular o ngulo de contacto.
A anlise por ngulo de contacto pode oferecer informaes importantes sobre o
comportamento hidroflico/hidrofbico de superfcies.
Tabela 18: ngulo de contacto e componentes de energia de superfcie entre uma gota lquida e as
superfcies da pasta e do papel.
Amostras

gua

()

s
d

(mJ/m
2
)

s
p

(mJ/m
2
)
Energia livre de superfcie
(mJ/m
2
)
Pelcula de Pasta 48,80 37,83 2,35 40,18
Papel 23,77 32,52 5,41 37,93

Pelos dados da Tabela 18, referentes aos ngulos de contacto das superfcies da
pelcula de pasta e do papel e componentes da energia de superfcie (polar e dispersiva),
observa-se que a pelcula da pasta apresenta uma superfcie menos polar do que a do papel,
no deixando penetrar os lquidos to facilmente, sendo por isso mais hidrofbica.
2.8. Anlise Trmica da Pasta e seus Extractos
2.8.1. TGA
A TGA determina a taxa de decomposio de substncias, pela avaliao das perdas
de massa em funo da temperatura. Os resultados obtidos para a pasta e para os
extractveis em diclorometano da pasta esto apresentados na Figura 42.
0
20
40
60
80
100
25 125 225 325 425 525 625
T (C)
P
e
r
d
a

d
e

M
a
s
s
a

(
%
)
(a)
(b)
0
20
40
60
80
100
25 125 225 325 425 525 625
T (C)
P
e
r
d
a

d
e

M
a
s
s
a

(
%
)
(a)
(b)

Figura 42: Curvas da TGA da pasta (a) e dos extractveis da pasta (b).
Captulo III -Resultados e Discusso

61
Na curva de TGA da pasta verifica-se uma curva relativa perda de gua contida na
amostra. A partir da Figura 42, pode-se ainda observar uma curva relativa aos extractveis
que apresenta uma degradao a menor temperatura (a partir de 230C) do que a pasta
(a partir de 300C). Este facto pode estar relacionado com a degradao de cidos gordos e
seus derivados, uma vez que estudos de derivados de pastas com anidridos de cidos
gordos mostram que os derivados de cidos gordos degradam-se mais rapidamente do que
os componentes da pasta [53,67,69,70].
A temperatura mxima de degradao da pasta encontra-se volta dos 345C que
tpico para estes tipos de materiais (pastas celulsicas).
2.8.2. DSC
A DSC uma tcnica de anlise que permite determinar as temperaturas onde
ocorrem transies de fase (temperatura de transio vtrea (Tg) e temperatura de fuso
(Tf)) das substncias observadas atravs da perda e/ou ganho de calor, complementando a
tcnica de termogravimetria [53,67,69,70].
As curvas de DSC para pasta e para os extractveis em diclorometano da pasta esto
apresentadas na Figura 43.
-9
-8
-7
-6
-5
-4
-3
-2
-1
0
20 60 100 140 180 220 260 300
T (C)
F
l
u
x
o

d
e

C
a
l
o
r

(
m
W
)
(a)
(b)

Figura 43: Curvas de DSC da (a) pasta e dos (b) extractveis da pasta.
Na curva DSC da pasta (Figura 43-(a)) verifica-se um desvio endotrmica que
apresenta um mnimo de 75C e mximo de 100C. O desvio endotrmico apresentado na
Curva DSC relativa aos extractveis (Figura 43-(b)) apresenta um valor prximo dos 65C.
Estes desvios so atribudos eliminao de humidade das amostras. Nota-se que esta
eliminao mais rpida para os extractveis o que se justifica pelo carcter hidrofbico
Captulo III -Resultados e Discusso

62
destes compostos. Estas observaes confirmam a perda de gua verificada nas anlises de
termogravimetria.
A curva DSC dos extractveis (Figura 43-(b)) apresenta um ligeiro desvio a 230C
(aproximadamente) que est relacionado com a decomposio trmica da amostra, devida
quebra das suas ligaes, facto confirmado por TGA, em que se verifica mesma
temperatura o inicio da degradao dos extractveis.


Captulo IV -Concluses e Trabalho Futuro

63
CAPTULO IV - CONCLUSES E TRABALHO FUTURO
A valorizao dos subprodutos da vitivinificao um assunto ainda pouco
desenvolvido, verificando-se uma enorme carncia bibliogrfica sobre ao assunto. Com
este trabalho pretendeu-se dar um contributo no desenvolvimento dessa rea que representa
uma mais-valia para as empresas do sector aliado ao interesse ambiental.
O estudo da composio qumica do folhelho foi efectuado de forma a avaliar o
potencial do mesmo como matria-prima, nomeadamente na produo de pastas e
biocompsitos.
O folhelho foi caracterizado quanto ao seu teor em cinzas (7, 8%), extractveis em
acetona (5,7 %), diclorometano (5,5 %) e gua (26,4 %), protenas (18,8 %), taninos
(13,8 %), resduo insolvel em cido a 72 % (22,4 %), celulose Krscher e Hffer (20,8 %)
e hemiceluloses (24,9 %).
O resduo insolvel em cido (lenhina Klason), foi caracterizado estruturalmente por
FTIR e por RMN CP/MAS de
13
C, no se tendo verificado as bandas e ressonncias
correspondentes lenhina, concluindo-se que esta no existe em quantidades significativas
no folhelho.
A existncia de celulose foi comprovada por anlise de acares, FTIR,
RMN
13
C CP/MAS e DRX, tendo sido obtido um grau de cristalinidade de 66,1 %,
semelhante aos valores verificados na literatura para diferentes origens vegetais, que
possuem a estrutura cristalina da celulose I.
Pela anlise dos acares neutros, comprovou-se que o folhelho essencialmente
constitudo por celulose, mas tambm por mananas, arabinanas, xilanas e xiloglucanas.
As substncias solveis em gua quente foram caracterizadas quanto distribuio
do seu peso molecular e ao seu teor em acares e analisadas por espectroscopia de proto
e de correlao. Pela anlise de GPC obteve-se uma distribuio bimodal, em que a
1 fraco eluda polissacardica com um peso molecular mdio ponderado mais elevado
ou com uma estrutura mais ramificada, do que na 2 fraco, o que origina um volume
hidrodinmico mais elevado. Os acares maioritrios presentes neste polissacardeo so a
manose, a glucose, a arabinose e a galactose, como tal verificou-se que a cadeia principal
deste polissacardeo constituda por unidades de anidro -D-manopiranose e por unidades
de anidro -D-glucopiranose ligadas entre si por ligaes glicosdicas -(14).
Captulo IV -Concluses e Trabalho Futuro

64
Para a obteno de pastas a partir do folhelho foram escolhidos dois processos: o
cozimento kraft e o tratamento oxidativo organosolv. O cozimento kraft no apresentou
resultados satisfatrios, obteve-se uma substncia escura e de difcil aplicao. Pelo
tratamento organosolv com cido peractico foi obtida uma pasta cerosa.
A pasta obtida pelo tratamento com cido peractico, foi caracterizada por FTIR e
por RMN
13
C de CP/MAS, verificando-se que o tratamento oxidativo levou degradao
de taninos e substncias pcticas, assim como de hemiceluloses. Concluindo-se que a pasta
essencialmente constituda por celulose e por compostos polimricos do tipo cutina.
A cutina isolada da pasta, por extraco com diclorometano, foi analisada quanto ao
seu peso molecular e estrutura qumica. A distribuio molecular da cutina extrada
revelou um carcter multimodal, com uma fraco monomrica (29 %) de peso molecular
mdio ponderado de 240 Da e uma fraco polimrica (71 %) de peso molecular mdio
ponderado de 3600 Da. A fraco polimrica da cutina principalmente constituda por
cidos gordos, hidroxicidos e lcoois de cadeia longa ligados entre si por ligaes ster.
Foram propostos fragmentos hipotticos da estrutura da cutina de folhelho de uva.
O baixo valor de viscosidade intrnseca da pasta, assim como o reduzido
comprimento mdio das fibras (inferior a 0,2 mm) revela que a pasta no poder ser
aplicada na indstria papeleira, uma vez que apresenta dificuldades de drenagem. Este
facto pode ser confirmado pela anlise dos ngulos de contacto, uma vez que a pasta
apresenta uma superfcie mais hidrofbica do que o papel.
As anlises trmicas efectuadas pasta e aos extractveis em diclorometano, revelam
que os extractos se degradam a menor temperatura do que as pastas, o que se justifica pelo
carcter hidrofbico destas substncias.
A pasta de folhelho foi ainda s superficialmente caracterizada, sendo necessrio um
estudo exaustivo de forma a encontrar aplicaes para este material derivado de recursos
renovveis. No entanto, a presena de cutina (substncia cerosa) permite antever a
utilizao destes compostos em biocompsitos ou mesmo em aplicaes biomdicas.
Captulo IV -Concluses e Trabalho Futuro

65
1. TRABALHO FUTURO
Este trabalho pretende proporcionar uma nova abordagem de valorizao do folhelho
de modo a contribuir para um sector vitivincola mais sustentado. No entanto, estes estudos
devero ser mais aprofundados e novas linhas de investigao devero ser desenvolvidas
de forma a avaliar todos os potenciais de aplicabilidade deste recurso renovvel,
nomeadamente:
Estudo estrutural detalhado dos polissacardeos do folhelho;
Estudo sobre o bioprocessamento de polissacardeos solveis em gua para a
produo de bioetanol;
Estudo sobre a reutilizao de cido actico;
Estudos sobre a produo de biocompsitos, biofilmes e at mesmo hidrogis
usando pasta de folhelho como matria-prima;
O estudo do potencial do folhelho no fermentado para a obteno de pastas.


Captulo V -Referncias Bibliogrficas

67
CAPTULO V - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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