CAPTULO 6

CINTICA DAS REAES ENZIMTICAS

6.1 Enzimas
Enzimas so catalisadores biolgicos de natureza protica, que participam das
reaes qumicas que ocorrem nas clulas vivas. Atuam acelerando uma reao
termodinamicamente possvel, sem alterar a constante de equilbrio e a energia livre da
reao. Uma das diferenas bsicas entre enzimas e catalisadores qumicos sintticos a
capacidade daquelas em catalisar reaes sob condies suaves, em solues aquosas, a
temperaturas normais, reduzindo a possibilidade de alterao de compostos sensveis ao
calor, bem como reduzindo as necessidades energticas e os efeitos da corroso do
processo.
As enzimas tm sido utilizadas pelo homem muito antes que sua funo e natureza,
ou mesmo os prprios microrganismos, fossem conhecidos. Somente aps o trabalho de
Pasteur sobre fermentao alcolica no final do sculo passado, no qual foi evidenciada a
interveno de leveduras nesse processo, que foi considerada a existncia de enzimas.
Em 1897, Bhchner extraiu enzimas de clulas vivas e demonstrou que o catalisador
poderia tambm funcionar independentemente de qualquer processo vivo. Foi demonstrada
a possibilidade de se extrair, isolar e purificar uma enzima especfica. Em 1926, Sumner
obteve sucesso no isolamento de uma enzima pura. Estudos com a enzima isolada
demonstraram que se tratava de uma protena. Com a compreenso da natureza das
enzimas e de seu potencial cataltico, sua utilizao tem aumentado bastante, em diversos
campos, tais como: produo de alimentos, cervejas, indstrias txteis, farmacuticas e na
medicina.
Ao contrrio dos catalisadores sintticos comuns, as enzimas apresentam uma
elevada especificidade em relao ao substrato e sua utilizao reduz a obteno de
subprodutos indesejveis na reao, diminuindo os custos de separao dos produtos, bem
como os problemas de tratamento de efluentes. Esse alto grau de especificidade das
enzimas, devido conformao tridimensional das mesmas, levou Emil Fisher, em 1894, a
sugerir a hiptese da chave e fechadura. Esse modelo considera que a enzima possui uma
regio, chamada stio ativo, o qual complementar em tamanho, forma e natureza qumica
molcula do substrato. Outra hiptese, a da enzima flexvel ou do encaixe induzido,

123

conhecida como hiptese de Koshland, considera que o stio ativo no precisa pr-existir
sob forma geomtrica rgida, devendo contudo existir um arranjo espacial preciso e
especfico dos resduos de aminocidos , que induzido em presena de substrato.
Tanto os catalisadores qumicos como os biolgicos perdem gradualmente sua
atividade ao participar das reaes que catalisam. As enzimas, de um modo geral, so mais
frgeis, porm temperatura ambiente, so mais ativas que os catalisadores sintticos.
A nomenclatura oficial das enzimas estipulada pela Enzyme Commission (EC)
e se baseia no tipo de reao envolvida como:
i.

Oxidoredutases:

Reaes de oxido-reduo

ii.

Transferases:

Transferncia de grupos funcionais

iii.

Hidrolases:

Reaes de hidrlise

iv.

Liases:

Adio de ligaes duplas

v.

Isomerases:

Reaes de Isomerizao

vi.

Ligases:

Formao de ligaes com quebra de ATP

Embora a nomenclatura oficial seja estabelecida pelo EC, no h uma regra

aplicada de forma consistente a todas as enzimas. A nomenclatura mais tradicional usa o
nome do substrato que a enzima decompe mais o sufixo ase. Por exemplo:
Urease: Enzima que catalisa a decomposio da uria
Protease: Enzima que catalisa a decomposio de protenas
Lipase: Enzima que catalisa a decomposio de lipdeos
Invertase: Enzima que catalisa a inverso da sacarose
A cintica enzimtica estuda os fatores que influenciam a velocidade das reaes
catalisadas por enzimas e as expresses de velocidade que descrevem matematicamente as
reaes enzimticas com o objetivo de projeto, simulao e otimizao de reatores que
utilizam enzimas, ou simplesmente para um maior entendimento de uma reao entre um
ou vrios substratos e uma enzima.
6.2 Modelos para Reaes Simples
De acordo com a hiptese da chave e fechadura, a enzima atua como catalisador
ligando-se ao substrato e formando um complexo enzima-substrato. O aspecto molecular

124

da interao entre enzima e substrato no bem compreendido ainda e esta interao varia
de um complexo para outro. Embora, o complexo enzima-substrato seja uma hiptese de
mecanismo de reao, vrios estudos usando raios-X e espectroscopia tm revelado a sua
existncia.
Segundo a hiptese, a forma de ao do complexo se d pela ligao do substrato a
uma regio especfica da enzima conhecida como stio ativo. O substrato uma molcula
pequena e se fixa em uma certa regio da molcula de enzima, que uma grande molcula.
As foras envolvidas na formao do complexo so, principalmente, as foras de van der
Waals e pontes de hidrognio, as quais so consideradas ligaes fracas.
A formao do complexo enzima-substrato representada pela seguinte reao:

E+S

ES

Nessa reao, E representa a enzima, S representa o substrato e ES, o complexo

formado.
6.2.1 Modelos Cinticos de Henri, Michaelis-Menten e Briggs & Haldane
Os modelos para reaes simples em cintica enzimtica compreendem a converso
de um nico substrato por uma enzima. O primeiro modelo matemtico de cintica de uma
reao enzimtica com um substrato simples foi desenvolvido por V.C.R. Henri em 1902.
Atravs de medidas experimentais, foi observado que:
i.

A velocidade de reao de primeira ordem em relao ao substrato a baixas

concentraes, ou seja:

r = k1.CS
(6.1)
Nessa expresso, k1 a constante de primeira ordem e CS a concentrao de substrato.
ii.

medida que se aumenta a concentrao de substrato, a ordem da reao decresce

continuamente de 1 para zero, ou seja, para altas concentraes de substrato:

125

r = ko
(6.2)
Nessa expresso, ko a constante de ordem zero.
iii.

A velocidade de reao proporcional quantidade total da enzima presente, ou

seja:

r = k.CEo
(6.3)
Nessa expresso, k a constante de primeira ordem e C Eo a concentrao de total de
enzima presente.
Com base nestas observaes, Henri props a seguinte expresso de velocidade:

r rmax

CS
K H CS

(6.4)
Nessa expresso, KH a constante cintica de Henri, ou simplesmente constante de
Henri e rmax outra constante cintica, significando a velocidade mxima de reao,
proporcional concentrao total de enzima:
rmax = k.CEo
(6.5)
O modelo cintico de Henri foi proposto com base em dados experimentais e no
foi estabelecida nenhuma explicao terica para o mecanismo da reao. Tal base terica
foi apresentada posteriormente, em 1913, por Michaelis e Menten.
Como ponto inicial, considerou-se que a enzima E e o substrato S combinam-se
para formar o complexo ES, o qual de dissocia no produto P e na enzima no combinada E.
O mecanismo pode ser representado pelas equaes estequiomtricas:

126

S+E

ES

ES k P + E
2

Michaelis e Menten consideraram rpido equilbrio entre a enzima e o substrato

para formar um complexo ES. A constante de dissociao, que o inverso da constante de
equilbrio, pode ser escrita para a primeira reao, como:

kd

k -1 C E .CS

k1
C ES

(6.6)
No mecanismo proposto, a decomposio do complexo enzima-substrato a produto
considerado irreversvel e a etapa mais lenta, isto , a etapa limitante da velocidade
global de reao. Dessa forma, a expresso de velocidade da reao enzimtica derivada
da segunda reao, considerando-a elementar, como:
r = k2.CES
(6.7)
Sendo CEo a concentrao total de enzima no sistema, ento:
CEo = CE + CES

(6.8)

Ou seja, a concentrao total de enzima no sistema igual a soma das

concentraes de enzima na forma livre (CE) ou complexada (CES).
Combinando-se as expresses (6.6) e (6.8), chega-se a:

C ES

C E o .CS
(k -1 k1 ) CS

(6.9)
Substituindo (6.9) na expresso de velocidade (6.7), chega-se a:

127

k 2 .C E o .CS
( k -1 k1 ) CS

(6.10)
Nessa expresso, o produto k2.CEo uma constante denominada velocidade mxima
de reao enzimtica ou velocidade mxima de converso do substrato (r max) e a constante
de dissociao (k-1/k1) conhecida como constante de Michaelis-Menten (K M). Dessa
forma, a expresso cintica (6.10) pode ser escrita como:
r rmax

CS
K M CS

(6.11)

Essa expresso similar expresso obtida por Henri (6.4). Entretanto, as

constantes cinticas (rmax e KM) possuem significado fsico pelo fato da expresso (6.11) ter
sido deduzida com base conceitual, enquanto a expresso de Henri foi baseada em
experimentos.
O valor de rmax influenciado apenas pela concentrao de enzima no sistema e no
sofre influncia da concentrao do substrato. O valor de K M corresponde concentrao
de substrato que fornece metade da velocidade mxima de reao. Quanto menor o valor
de KM, maior ser o deslocamento do equilbrio da primeira reao do mecanismo para a
formao do complexo enzima-substrato, favorecendo, dessa forma, a converso do
substrato. De forma contrria, quanto maior o valor de K M, mais o equilbrio se deslocar
para a esquerda, no sentido da dissociao do complexo ES. Dessa forma, quanto mais
baixo o valor de KM maior ser a afinidade da enzima com o substrato devido ao
favorecimento do aparecimento do complexo ES e sua conseqente dissociao em
produto. Quanto maior KM, menor a afinidade, ou seja, menos produto ser formado ou
menos substrato ser convertido.
A representao grfica da expresso cintica de Michaelis-Menten apresentada
na Figura 6.1.

128

Figura 6.1: Representao esquemtica da expresso cintica de Michaelis-Menten.

Atravs da anlise da expresso de Michaelis-Menten (6.11) observa-se que:
Se CS = KM r = rmax/2
Se CS >>> KM r = rmax (reao de ordem zero)
Se CS <<< KM r = (rmax/KM).CS ou r = k.CS (reao de primeira ordem)
A considerao de equilbrio muito rpido para a formao do complexo enzimasubstrato pode no ser vlida em algumas condies ou para algumas reaes. Dessa
forma, Briggs e Haldane desenvolveram um modelo cintico para degradao do substrato
utilizando o princpio do estado quase estacionrio, utilizando o mesmo mecanismo
proposto por Michaelis e Menten. Ou seja, considerou-se que o complexo formado muito
reativo e, portanto, a variao de sua concentrao em funo de tempo nula. A expresso
resultante foi a seguinte:

r rmax

CS
K B CS

(6.12)
Nessa expresso, similar de Henri e de Michaelis-Menten, rmax o produto
k2.CEo como na expresso de M-M, mas a constante KB representa a razo (k-1+ k2)/k1. A

129

diferena em relao a KM que a segunda etapa do mecanismo tambm interfere no valor

da constante.
_________________________________________________
Atividade: Obtenha a expresso cintica de Briggs e Haldane utilizando o princpio do
estado estacionrio no seguinte mecanismo:
S+E

ES

ES k P + E
2

130

_________________________________________________
6.2.2 Avaliao dos parmetros cinticos nas expresses simples
Apesar das expresses cinticas apresentadas no item anterior terem a mesma
forma hiperblica, a forma de obteno e o significado das constantes cinticas so
diferentes em cada expresso. A equao de Michaelis-Menten mais utilizada devido
sua consistncia terica e ao significado dos parmetros.
Os parmetros cinticos da expresso cintica de Michelis-Menten podem ser
obtidos a partir de experimentos em laboratrio, nos quais so obtidos dados de velocidade
de reao em funo da concentrao do substrato conforme apresentado no Captulo 4.
Deve ser enfatizado que o modelo cintico de Michaelis-Menten foi obtido para o caso de
um nico substrato transformado por uma enzima.
Obtidos os dados experimentais, deve-se escolher uma tcnica para estimativa dos
dois parmetros cinticos rmax e KM. Com os recursos computacionais atuais pode-se
utilizar um mtodo de regresso no linear e ,assim, ajustar valores dos parmetros. Outra
forma bastante utilizada a linearizao da expresso cintica. Existem trs formas
clssicas de linearizao apresentadas a seguir:
-

Linearizao de Lineweaver Burk

131

Nesse mtodo, a expresso (6.11) linearizada fica:

1
1
K 1

M
r rmax rmax CS

(6.13)
Dessa forma, plotando-se os valores experimentais recprocos (1/r) em funo de
(1/CS) pode-se obter o valor de r max pelo coeficiente linear da reta e o valor de K M atravs
do coeficiente angular, conforme apresentado na Figura 6.2. Esse mtodo de linearizao
fornece boa estimativa da velocidade mxima (rmax), mas no necessariamente de KM.

Figura 6.2: Linearizao de Lineweaver-Burk para obteno dos parmetros cinticos da

expresso cintica de Michaelis-Menten.
-

Linearizao de Eadie-Hofstee
Nesse mtodo, a expresso (6.11) linearizada fica:

r rmax K M

r
CS

(6.14)

132

Dessa forma, plotando-se os valores de velocidade de reao (r) em funo de

(r/CS) pode-se obter o valor de rmax pelo coeficiente linear da reta e o valor de KM atravs do
coeficiente angular, conforme apresentado na Figura 6.3. Esse mtodo de linearizao est
sujeito a grandes erros pelo fato da velocidade de reao estar nos dois eixos.

Figura 6.3: Linearizao de Eadie-Hofstee para obteno dos parmetros cinticos da

expresso cintica de Michaelis-Menten.
-

Linearizao de Hanes-Woolf
Nesse mtodo, a expresso (6.11) linearizada fica:

CS K M
1

CS
r
rmax rmax

(6.15)
Dessa forma, plotando-se os valores experimentais da razo entre a concentrao de
substrato e velocidade de reao (CS/r) em funo da concentrao de substrato (CS) podese obter o valor de rmax pelo coeficiente angular da reta e o valor de K M atravs do
coeficiente linear, conforme apresentado na Figura 6.4. Esse mtodo de linearizao
permite a estimativa de rmax com maior acurcia.

133

Figura 6.4: Linearizao de Hanes-Woolf para obteno dos parmetros cinticos da

expresso cintica de Michaelis-Menten.
Outra forma de determinar os parmetros cinticos da expresso de converso
enzimtica de um substrato por uma enzima integrando a expresso cintica.
_________________________________________________
Atividade: Esquematizar a forma de obteno experimental dos parmetros cinticos r max e
KM da expresso de Michaelis-Menten atravs de sua integrao. Faa a programao
completa de um experimento em laboratrio.

134

135

_________________________________________________
6.3 Modelos para Reaes Reversveis e para Reaes Envolvendo Dois Substratos
6.3.1 Reaes reversveis
Muitas reaes catalisadas por enzimas, tais como hidrlise de biopolmeros, tm o
equilbrio favorecendo fortemente a formao de produtos tal que as reaes podem ser
consideradas irreversveis sob muitas circunstncias. Em outros casos, tais como converso
de glicose a frutose pela enzima glicose isomerase, as condies de equilbrio so
freqentemente aproximadas, havendo necessidade de se considerar a reao reversa. Para
esses casos, o seguinte modelo considerado:

S+E
ES

ES
P+E

Esse modelo tem a mesma seqncia que o modelo proposto por Michaelis-Menten
exceto pelo fato de, nesse caso, h formao de ES a partir de reao de converso do
produto P por ao enzimtica.
Considerando o princpio do estado estacionrio, obtm-se que a expresso de
velocidade de degradao do substrato tem a seguinte forma:

.C rp .C
K p
S
P

r
C
Cp
1 S
K M
K P

rmax

K M

(6.16)
Nessa expresso, CP a concentrao do produto e r max, rP, KM e KP so constantes
cinticas definidas como:
rmax = k2.CEo
(6.17)

136

KM

k -1 k 2
k1

KP

k1.K M
k -2

(6.18)

(6.19)

rP

k -1.rma
k2

(6.20)
6.3.2 Reaes envolvendo 2 substratos
A grande maioria das reaes catalisadas por enzimas envolvem 2 substratos no
mnimo. Em muitas, entretanto, um dos substratos a gua, cuja concentrao
essencialmente constante e, geralmente, 1000 vezes maior que a concentrao do outro
substrato.
Em muitas reaes com dois substratos parece haver a formao de um complexo
ternrio com ambos substratos ligados enzima. Uma possvel seqncia a seguinte:

E + S1

ES1

K1

E + S2

ES2

K2

ES1 + S2

ES1S2

K12

ES2 + S1

ES1S2

K21

ES1S2 k P + E
Nesse mecanismo, K1, K2, K12 e K21 so constantes de dissociao.
Considerando equilbrio nas 4 reaes reversveis do mecanismo proposto, chega-se
a:

*
r rmax

CS1
K CS1
*
M

(6.21)

137

Nessa expresso as constantes cinticas so expressas como segue:

*
rmax

k.C Eo .CS2
K12 CS2

(6.22)

K *M

K 21.CS2 K1.K12
K12 CS2

(6.23)
No caso de reao enzimtica contendo dois substratos, se a concentrao do
substrato 2 for mantida constante e a concentrao do substrato 1 variar, a reao seguir a
equao de Michaelis-Menten. Entretanto, as constantes cinticas so dependentes da
concentrao de um dos substratos.
6.4 Modelos Considerando Inibio da Atividade Enzimtica
6.4.1 Inibio pelo substrato
Algumas vezes, quando grande quantidade de substrato est presente, a velocidade
da reao catalisada por uma enzima diminuda pelo excesso do substrato. Esse
fenmeno denominado Inibio pelo Substrato.
A relao quantitativa entre concentrao de substrato e velocidade de reao pode
ser modelada nos casos de inibio por excesso de substrato usando uma aproximao de
Michaelis-Menten:

S+E
ES + S

ES
ES2

KM (k-1/k1)
KiS (k-2/k2)

ES k E + P
3

138

Considerando equilbrio das reaes 1 e 2 ou utilizando o princpio do estado

estacionrio, chega-se seguinte expresso de velocidade representando inibio por
excesso de substrato:

r rmax

CS
K M CS

CS2
K iS

(6.24)
Este modelo foi proposto por Haldane em 1930 e sua representao grfica
apresentada na Figura 6.5. Quando a concentrao do substrato muito pequena, K iS
muito grande e o efeito da inibio no observado. Entretanto, a altas concentraes de
substrato, KiS muito pequeno e a inibio dominante.

Figura 6.5: Representao esquemtica da expresso cintica de inibio por excesso de

substrato.
_________________________________________________
Atividade: Deduzir a expresso matemtica que representa a concentrao de substrato que
resulta na mxima velocidade de reao (C S max) em sistemas nos quais ocorre inibio por
excesso de substrato. Qual a expresso da velocidade mxima quando h inibio (r*)?

139

_________________________________________________
6.4.2 Inibio por outros compostos
Certos compostos podem se ligar s enzimas e reduzir sua atividade. Esses
compostos so conhecidos como inibidores da atividade enzimtica. As inibies podem
ser reversveis ou irreversveis. Inibidores irreversveis, tais como metais pesados (cdmio,
mercrio, chumbo e outros) formam um complexo estvel com a enzima e reduzem a
atividade enzimtica. Este tipo de inibio pode ser revertido somente pelo uso de agentes
quelantes tais como EDTA e citrato. Inibidores reversveis podem se dissociar mais
facilmente da enzima aps a ligao.
Os modelos cinticos clssicos, representando reaes catalisadas por enzimas na
presena de inibidores, so apresentados a seguir.
-

Inibio competitiva
O inibidor (I) e o substrato (S) competem pelo stio ativo da enzima excludentemente.

O mecanismo proposto nesse caso o seguinte:

E+S

ES

KM

E+I

EI

KI

ES k P + E
A expresso cintica deduzida a partir do mecanismo proposto :

140

r rmax

CS

C
K M 1 I C S
KI

(6.25)
Atravs da equao (6.25), pode-se notar que, quando h inibio competitiva,
haver aumento no valor de KM enquanto que o valor de rmax no sofrer alterao. No
geral, medida que se aumenta a concentrao do inibidor, a velocidade de converso do
substrato diminuir devido ao aumento no valor de KM. Em outras palavras, a afinidade
enzima substrato diminui medida que se aumenta a concentrao do inibidor.
-

Inibio no competitiva
No caso da inibio denominada no competitiva, o inibidor e o substrato se ligam

enzima em stios diferentes. Portanto, no competem pelo mesmo stio ativo da enzima. O
complexo formado EIS, entretanto, no gera produto. O mecanismo proposto :

E+S

ES

KM

E+I

EI

KI

EI + S

EIS

KM

ES + I

EIS

KI

ES k P + E
O modelo cintico derivado desse mecanismo resulta em:

r rmax

CS

C
(K M C S ) 1 I
KI

(6.26)
No caso de inibio no competitiva haver reduo no valor da velocidade
mxima de reao (rmax) enquanto que o valor da constante de Michaelis-Menten

141

permanecer inalterada. Portanto, medida que se aumentar a concentrao do inibidor,

haver diminuio na velocidade de converso do substrato devido diminuio no valor
da velocidade mxima.
-

Inibio acompetitiva
Nesse caso de inibio, o inibidor no se liga enzima livre. Ele se ligar somente ao

complexo enzima substrato (ES) j formado. O complexo EIS formado no gera produto
de acordo com o mecanismo proposto:
E+S
ES + I

ES
ESI

KM
KI

ES k P + E
O modelo cintico resulta em:

r rmax

CS

C
K M C S . 1 I
KI

(6.27)
Nesse caso de inibio, as duas constantes cinticas so alteradas na presena do
inibidor. H diminuio nos valores de rmax e KM medida que se aumenta a concentrao
de inibidor.
-

Inibio mista
Esse tipo de inibio envolve todos os outros e representado matematicamente pela

expresso:

r rmax

CS

C
C
K M 1 I C S . 1 I
K I1
K I2

(6.28)

Nessa expresso:

142

Se KI1 for muito grande e KI2 for finito Inibio acompetitiva

Se KI1 for igual a KI2 Inibio no competitiva
Se KI2 for muito grande e KI1 for finito Inibio competitiva
Se KI1 for diferente de KI2 Inibio mista
_________________________________________________
Atividade: A partir do mecanismo proposto deduza a expresso cintica que representa a
velocidade de converso enzimtica de um substrato na presena de um inibidor.
Considere:
(a) Inibio competitiva
(b) Inibio no competitiva
(c) Inibio acompetitiva
_________________________________________________
6.5 Outros Fatores que Afetam a Velocidade das Reaes Enzimticas
Muitos outros fatores podem influenciar a atividade cataltica das enzimas,
provavelmente por afetar a estrutura ou estado qumico das enzimas. Alguns desses fatores
so
pH
Temperatura
Foras mecnicas (hidrodinmica, presso hidrosttica e tenso superficial)
Agentes qumicos (lcool, uria e H2O2)
Irradiao (luz, som, radiao ionizante)
Em geral, a soma das mudanas no ambiente da enzima deve ser relativamente pequena
ou breve, seno ocorrer desativao da enzima.
6.5.1 Influncia do pH
Uma enzima pode conter grupos positivamente ou negativamente carregados em
um dado pH. Esses grupos ionizveis so, aparentemente, parte do stio ativo. Para a
143

catlise cida ou bsica ser possvel, os grupos ionizveis no stio ativo devem possuir uma
carga particular, isto , a enzima cataliticamente ativa existe em um estado de ionizao
somente. Desse modo, a enzima cataliticamente ativa pode ser uma frao pequena ou
grande da enzima total presente, dependendo do pH.
A influncia do pH na atividade enzimtica esquematizada na Figura 6.6.
6.5.2 Influncia da temperatura
As velocidades das reaes qumicas so influenciadas pela temperatura de forma
exponencial, segundo a equao de Arrhenius. Entretanto, em cintica enzimtica, o
aumento da velocidade de reao com o aumento da temperatura ocorre para uma
determinada faixa de temperatura, atingindo um ponto timo e decrescendo devido,
principalmente, desnaturao da enzima. O efeito da temperatura sobre a atividade
enzimtica apresentado na Figura 6.7.
Para muitas protenas, a desnaturao comea a ocorrer a 45 50C e efetiva a
55C. Um mecanismo fsico para explicar este fenmeno bvio: medida que a
temperatura aumenta, os tomos na molcula de enzima obtm maior energia e maior
tendncia a se mover. Eles podem adquirir energia suficiente para sobrepujar as fracas
interaes das estruturas de protenas globulares e a desativao ocorre.

Figura 6.6: Influncia do pH sobre a atividade enzimtica.

144

Figura 6.7: Influncia da temperatura na atividade enzimtica.

6.6 Degradao e Desativao de Enzimas

A desativao de uma enzima um processo reversvel enquanto que a degradao
irreversvel. O modelo mais simples de degradao de enzimas considera que uma
enzima ativa (Ea) convertida para uma forma degradada (E d), sem funo cataltica, de
acordo com modelo de primeira ordem:
rd = kd .CEa
(6.29)
Nessa expresso, rd a velocidade de degradao da enzima e kd a constante de
degradao. Dessa forma, a concentrao de enzima ativa ir decrescer ao longo do tempo
de forma exponencial, como:

C Ea C Eao .e -k d .t
(6.30)

145

CEao a concentrao inicial de enzima ativa no sistema, ou seja, a concentrao total de

enzima com atividade cataltica.
6.7 Bibliografia Bsica
Atkinson, B. & Mavituna, F. (1987) Biochemical Engineering and Biotechnology
Handbook, Stockton Press, London.
Bailey, J.E., & Ollis, D.F. (1986) Biochemical Engineering Fundamentals. 2nd edition.
McGraw-Hill, New York.
Fogler, H.S. (1999) Elements of Chemical Reaction Engineering. 3rd edition. Prentice
Hall PTR, New Jersey.
Levenspiel, O. (1999) Chemical Engineering Reactor. 3rd edition. John Wiley & Sons,
New York.
Weber Jr, W.J & Digiano, F.A. (1996) Process Dynamics in Environmental Systems.
John Wiley & Sons, Inc., New York.

146

6.8 Problemas Propostos

P6.1

Em muitos casos de reaes catalisadas por enzimas em sistemas simples (um

substrato e uma enzima), o seguinte mecanismo proposto:

S+E
ES

ES
P+E

Considerando o princpio do estado estacionrio, demonstre que a expresso

cintica derivada desse mecanismo tem a forma:

.C rp .C
K M S K P p

r
C
Cp
1 S
K M
K P

rmax

sendo:

rmax = k2.CEo

P6.2

KM

k -1 k 2
k1

KP

k1.K M
k -2

rP

k -1.rma
k2

Em reaes enzimticas contendo dois substratos, um possvel mecanismo o

seguinte:

E + S1

ES1

K1

E + S2

ES2

K2

ES1 + S2

ES1S2

K12

ES2 + S1

ES1S2

K21

ES1S2 k P + E
K1, K2, K12 e K21 so constantes de dissociao.
Considerando equilbrio rpido nas 4 reaes reversveis do mecanismo, demonstre
que:
147

*
r rmax

CS1
K CS1
*
M

sendo:

*
rmax

P6.3

k.C Eo .CS2
K12 CS2

K *M

K 21.CS2 K1.K12
K12 CS2

O mecanismo proposto para reaes enzimticas com excesso de substrato o

seguinte:

S+E
ES + S

ES
ES2

KM
KiS

ES k E + P
3

KM e KiS so constantes de dissociao.

Demonstre que a expresso cintica que representa a inibio por excesso de
substrato escrita como:

r rmax

CS
K M CS

P6.4

CS2
K iS

(a)

Considerando equilbrio rpido nas reaes reversveis.

(b)

Considerando o princpio do estado estacionrio.

(c)

Faa uma anlise do significado das constantes rmax, KM, KiS

(d)

Compare a expresso obtida com a obtida por Michaelis-Menten.

Esquematize um experimento (ou experimentos) para estimativa das constantes

cinticas da expresso de inibio por excesso de substrato. Considere uma reao

148

enzimtica com apenas um substrato e explique detalhadamente como obter as

constantes.
P6.5

Esquematize experimentos para obteno dos parmetros cinticos dos modelos de

inibio:
(a) Competitiva
(b) No competitiva
(c) Acompetitiva
Detalhe a realizao de cada experimento e a forma de obteno dos parmetros.

P6.6

Um experimento em laboratrio foi realizado em um reator descontnuo

temperatura constante de 30oC para determinar a cintica de converso de um
substrato S por uma enzima. Os resultados de velocidade de reao em funo da
concentrao de substrato so apresentados na Tabela.

CS (g/l)
r (g/l.min)

10
0,033

20
0,050

30
0,060

40
0,067

50
0,071

60
0,075

(a) Qual o modelo cintico ou a expresso de velocidade que melhor representa os

pontos obtidos experimentalmente? Quais os valores das constantes cinticas?
(b) Outro experimento foi realizado com o mesmo substrato, mesma enzima e nas
mesmas condies operacionais. No entanto, adicionou-se um composto
reconhecidamente inibidor da atividade enzimtica com concentrao de 0,5 g/l.
Os resultados obtidos foram os seguintes:
CS (g/l)
r (g/l.min)

10
0,024

20
0,038

30
0,048

40
0,056

50
0,061

60
0,065

Comente os resultados obtidos. Qual tipo de inibio ocorreu? Estime as novas

constantes cinticas, inclusive a de inibio.
P6.7

A sacarose convertida em glicose e frutose pela ao cataltica da enzima

denominada invertase. Iniciando a reao com concentrao de sacarose (C S0) de 1

149

mmol/l e concentrao inicial de enzima (CEo) de 0,01 mmol/l, os seguintes dados

cinticos foram obtidos em reator descontnuo (batelada):
CS (mmol/l) 0,84 0,68 0,53 0,38 0,27 0,16 0,09 0,04 0,0018 0,006 0,0025
Tempo (h)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Ache a equao de velocidade que represente adequadamente a cintica dessa
reao.
P6.8

Uma enzima E catalisa a transformao de um reagente a um determinado produto

R (A R) de acordo com a seguinte expresso de velocidade:

( rA )

200.C A .C Eo
mol l. min
2 CA

Se for introduzida enzima (CEo = 0,001 mol/l) e reagente (CAo = 10 mol/l) em reator
em batelada, encontre o tempo necessrio para a concentrao do reagente cair para
0,025 mol/l.
P6.9

Uma enzima converte um determinado composto A em um produto R de acordo

com a seguinte expresso cintica:

( rA )

0,1.C A
mol l. min
1 0,5.C A

Quais os volumes necessrios para um reator tubular ideal e para um reator de

mistura perfeita para obteno de grau de converso de 95% quando alimentados
com concentrao de A de 2 mol/l e vazo de 25 l/min?

P6.10 Substrato A e enzima E alimentam um reator de mistura perfeita de 6 litros. Os

dados de operao, obtidos na entrada e sada do reator, so apresentados na Tabela:

150

CEo (mol/l)
0,02
0,01
0,001

CAo (mol/l)
0,2
0,3
0,69

CA (mol/l)
0,04
0,15
0,60

Q (l/h)
3,0
4,0
1,2

Baseado nos dados experimentais, encontre a equao de velocidade para a reao

enzimtica.
P6.11 Um determinado carboidrato A decomposto na presena de uma determinada
enzima E. Suspeita-se que o carboidrato B influencia esta decomposio de alguma
forma. Para estudar este fenmeno, forma feitos experimentos em reator contnuo
de mistura de 240 cm3 e os resultados so apresentados na Tabela:
CAo (mol/m3)
200
900
1200
700
200
900

CA (mol/ m3)
50
300
800
33,3
80
500

CBo (mol/ m3)

0
0
0
33,3
33,3
33,3

CEo (mol/ m3)

12,5
5
5
33,3
10
20

Q (cm3/min)
80
24
48
24
80
120

(a) A partir dos dados experimentais encontre a expresso de velocidade de reao;

(b) Qual o papel exercido pelo carboidrato B na reao de decomposio?
(c) Proponha um mecanismo para a reao.

151

P6.12 Um engenheiro, responsvel pela rea ambiental de uma indstria, descobriu, por
meio de um artigo em revista cientfica, que um novo processo havia sido
desenvolvido por uma Universidade para remoo de um txico presente em gua
residuria gerada pelo processo produtivo de sua indstria. Tratava-se de processo
enzimtico e foi decidido que o processo qumico, utilizado at ento na indstria,
seria substitudo por esse novo processo por motivos econmicos. O processo
qumico operava com eficincia de 80% na remoo do txico e empregava um
reator de mistura de 6000 litros. Para economia de implantao, o mesmo reator
seria empregado no novo processo s que precedido por um reator tubular. No
artigo cientfico foram obtidas as constantes cinticas para o modelo de MichaelisMenten a 25C, temperatura prxima da gua residuria da indstria. Valores de
1,8 g/l.h e 9,0 g/l foram obtidos para rmax e KM, respectivamente. Sabendo-se que a
gua residuria lanada com vazo de 15 m3/dia, que a concentrao mdia do
txico na gua residuria de 15 g/l e que a enzima pode facilmente ser obtida no
mercado, responda:
(a)

Qual dever ser o volume do reator tubular que preceder o de mistura para

obteno da converso de 80% no sistema todo (PFR + CSTR)?

(b)

A utilizao somente do reator de mistura existente seria suficiente para

obteno da eficincia desejada?

152