Gerncia de Ensino Policial Tcnico-Cientfico

PROGRAMA DE ENSINO DE DISCIPLINA

CURSO DE FORMAO DE PERITOS CRIMINAIS
1 Semestre de 2012
DOCENTE(S) RESPONSVEL(EIS):
Qum. Ms. Dndo. Rodrigo Irani Medeiros

Disciplina: Laboratrio Qumico Toxicologia Forense

Noes bsicas de Mtodos Cromatogrficos e de Toxicologia

CROMATOGRAFIA
um mtodo fsico-qumico de separao dos componentes de uma
mistura. Baseia-se nas diferentes distribuies desses componentes em duas
fases: Uma fase estacionria (que permanece parada) e uma fase mvel (que se
movimenta no sistema). Durante a passagem da fase mvel os componentes
sero seletivamente arrastados por ela e ao mesmo tempo retidos pela fase
estacionria, ocasionando diferentes migraes e diferentes posies dos
componentes da mistura.
CROMATOGRAFIA DE CAMADA DELGADA (CCD)
Consiste na separao dos componentes de uma mistura atravs da
migrao diferencial desses componentes quando arrastados pela fase mvel
(solvente) sobre uma camada delgada de adsorvente. Oferece separao em
breve espao de tempo, verstil, apresenta grande reprodutibilidade, de fcil
execuo. Por todas estas vantagens, indispensvel em laboratrios que
realizam anlise de substncias orgnicas e organometlicas. mais usada na
separao de substncias hidrofbicas.
Classificao: de acordo com o mecanismo de separao esta cromatografia
classificada, de um modo geral, como sendo uma cromatografia de ADSORO.
De acordo com o estado fsico das duas fases tambm classificada como uma
cromatografia lquida-slida.
Mecanismo de separao dos componentes: est fundamentado no fenmeno de
ADSORO, que o depsito ou a reteno seletiva de substncias sobre a
superfcie de slidos finamente divididos, por efeitos de foras eletrostticas. Os
adsorventes mais usados so: a slica (SiO 2 ) e a alumina (Al2O3). A slica um

slido, altamente poroso, e um dos adsorventes mais utilizados em

cromatografia. Existem vrios tipos no mercado. Alguns tipos Merck: slica G apresenta em sua composio substncias aglutinantes (10 a 15% de gesso ou 1
a 3% de amido) com o objetivo de fixar o adsorvente sobre a placa de vidro; slica
H- no contm aglutinantes. usada em cromatografia de coluna; slica Fcontm substncia fluorescentes; slica P- para uso em camadas Preparativas.
Preparao das placas: para a preparao das placas deve-se primeiramente
assegurar a completa limpeza das mesmas. A quantidade de adsorvente
(espessura da camada) deve ser de: 0,3 a 0,5mm - qualitativa; 0,6 a 1,0 ou 3,0mm
- preparativa. A relao quantidade de amostra/espessura da camada de
adsorvente importante. Como suporte para a camada de adsorvente podemos
utilizar placas de vidro de tamanhos variados: 2,5x7,5cm; 10,0x20,0cm;
20,0x20,0cm.
Existem vrias formas de se preparar uma placa cromatogrfica, sendo a
mais usada a que utiliza espalhadores do adsorvente. Faz-se uma suspenso do
adsorvente com um solvente adequado e mantendo-se a placa na horizontal,
transfere-se a suspenso para a superfcie da placa, espalhando-se de maneira
bem uniforme. Deixa-se em repouso por alguns minutos e ento faz-se a ativao
das placas. A ativao consiste em deixar a camada de adsorvente seca (livre do
solvente usado na suspenso). O tempo e a temperatura para isso dependem do
adsorvente e da atividade desejada. A camada de slica ativada deixando-se as
placas na estufa (105 - 110C) por 30 - 60. Para conserv-las secas as mesmas
devem ser guardadas em dessecadores.
Fase mvel: o solvente ou mistura de solventes tem papel fundamental na
separao de misturas. Entende-se que existe uma competio entre as
molculas da fase mvel e da amostra, pela superfcie do adsorvente. Portanto, a
escolha da fase mvel tem que considerar a natureza qumica das substncias a
serem separadas e a polaridade da fase mvel. Deve-se tomar como base a srie
eluotrpica dos solventes (solventes em ordem de polaridade). O poder de
eluio est diretamente relacionado com a polaridade. Srie eluotrpica (no final).
Aplicao das amostras na cromatografia: em geral usam-se solues de 0,1 a
1,0%. Pode-se utilizar micropipetas ou microseringas, que permitem determinar a
quantidade de substncias colocada nas placas. Quando no exigida a
quantidade de amostra pode-se usar capilares de vidro. As gotas devem ser
aplicadas 1,5 a 1,0cm acima da borda inferior da placa (ponto de partida).
Reveladores cromatogrficos: so agentes fsicos (ultravioleta, por exemplo) ou
qumicos (vapores de iodo, H2SO4, por exemplo) que tornam visveis as
substncias separadas.
Constantes cromatogrficas: so caractersticas reproduzveis em um dado
sistema cromatogrfico. Por exemplo Rf (Rate of flow) que a relao de
deslocamento dados pela relao de deslocamento do soluto pelo deslocamento
do solvente.

Srie eluotrpica
- pentano
- ter de petrleo
- ciclohexano
- benzeno
- clorofrmio
- ter etlico
- acetato de etila
- acetona
- propanol
- etanol
- metanol
- gua

aumento da polaridade

CROMATOGRAFIA EM COLUNA
Os mtodos cromatogrficos lquido-slido (adsoro) podem ser realizados
numa coluna recheada com um slido (fase estacionria) e uma fase mvel
lquida, onde a adsoro ocorrer entre as superfcies das fases mvel e
estacionria. Dependendo do tamanho da coluna usada, facilmente aplicada
para fins preparativos, devendo ser monitorada, principalmente por cromatografia
em camada delgada.
Separao de pigmentos vegetais
Amostra: Preparar a amostra, fervendo 50g de folhas de espinafre, das quais
foram removidas as nervuras centrais, em 100 mL de gua destilada, por 1-2
minutos. Resfriar rapidamente e decantar o lquido. Secar as folhas com papel
absorvente e coloc-las em um almofariz com uma mistura de ter de petrleo
(30-60 oC) e acetona (80:20), triturando para obter uma soluo verde que
decantada em um tubo de ensaio.
Utilizar ter de petrleo (30-60oC) e acetona como fases mveis, alumina
(malha de 200-400) como fase estacionria e uma coluna de vidro, de
aproximadamente 0,5 x 15 cm, provida de torneira.
Preparao da coluna: Quanto mais uniforme for o enchimento da coluna maior
ser a sua eficincia. Durante o enchimento o ar pode ficar retido entre as
partculas, para evitar que isso ocorra deve-se agitar o adsorvente num frasco,
com a fase mvel, at a constituio de uma pasta, a qual ser colocada dentro da
coluna, j contendo 1/3 da fase mvel. Nesta operao acompanhada por
vibrao da coluna e, deixando o material assentar gradualmente, obtm-se uma
razovel homogeneidade no enchimento. Deve-se evitar deixar a coluna secar

durante o enchimento ou a eluio, porque aparecem rachaduras na coluna, o que

prejudicar a separao cromatogrfica.
A coluna, de altura de aproximadamente 6 cm, poder ser preenchida com
uma suspenso de alumina 2g em ter de petrleo.
Pode ser utilizada para extrao de cocana em amostra complexa.
Noes bsicas de Instrumental para Cromatografia Gasosa:
1

6
Observao:
em vermelho:
temperatura
controlada

5
3

1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso.

2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra.
3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna.
4 - Detector.
5 - Eletrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal.
6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador).

Noes tericas de Toxicologia

CONCEITOS BSICOS

1) TOXICOLOGIA
A toxicologia se ocupa da natureza e dos mecanismos das leses txicas e
da avaliao quantitativa do espectro das alteraes biolgicas produzidos pela
exposio aos agentes qumicos.
a cincia que tem como objeto de estudo o efeito adverso de substncias
qumicas sobre os organismos vivos, com a finalidade principal de prevenir o
aparecimento deste efeito, ou seja, estabelecer o uso seguro destas substncias
qumicas.
A toxicologia se apoia, ento, em 3 elementos bsicos:
1) o agente qumico (AQ) capaz de produzir um efeito;

2) o sistema biolgico (SB) com o qual o AQ ir interagir para produzir o

efeito;
3) o efeito resultante que dever ser adverso (ou txico) para o SB.

2) REAS DA TOXICOLOGIA
A toxicologia uma cincia multidisciplinar, que abrange uma vasta rea de
conhecimento, relacionando-se estritamente com diversas outras cincias, pois
sem os conhecimentos interrelacionados, dificilmente poder atingir seus
objetivos: prevenir, diagnosticar e tratar.
A toxicologia desenvolvida por especialistas com diferentes formaes
profissionais, oferecendo cada um contribuies especficas em uma ou mais
reas de atividade permitindo assim, o aperfeioamento dos conhecimentos e o
desenvolvimento das reas de atuao.
No mbito da toxicologia, distinguem-se vrias reas, de acordo com a
natureza do agente ou a maneira como este alcana o organismo. Destacam-se
entre outras:
Toxicologia ambiental: que estuda os efeitos nocivos produzidos pela interao
dos contaminantes qumicos ambientais com os organismos humanos.
Toxicologia ocupacional: que estuda os efeitos nocivos produzidos pela
interao dos contaminantes do ambiente de trabalho, com o indivduo exposto e
o impacto sobre sua sade.
Toxicologia de alimentos: que estuda os efeitos adversos produzidos por
agentes qumicos presentes nos alimentos, sejam estes contaminantes ou de
origem natural. a rea da toxicologia que estabelece as condies nas quais os
alimentos podem ser ingeridos sem causar danos sade.
Toxicologia de medicamentos: que estuda os efeitos nocivos produzidos pela
interao dos medicamentos com o organismo decorrentes do uso inadequado ou
da suscetibilidade individual.
Toxicologia social: estuda os efeitos nocivos dos agentes qumicos usados pelo
homem em sua vida de sociedade, seja sob o aspecto individual, social (de
relao) ou legal.

3) AGENTE TXICO (AT)

qualquer substncia qumica que interagindo com o organismo capaz de
produzir um efeito txico, seja este uma alterao funcional ou morte. A maioria
das substncias qumicas, consideradas como agentes txicos, so substncias
exgenas conhecidas como xenobiticos.
3.1) Classificao dos agentes txicos

Os AT podem ser classificados de diversas maneiras dependendo dos

critrios utilizados. A seguir so apresentadas classificaes quanto s
caractersticas fsicas e qumicas, e quanto ao tipo de ao txica.
3.1.1) Quanto s caractersticas fsicas:
Gases: so fludos sem forma, que permanecem no estado gasoso em
condies normais de presso e temperatura.
Ex.: CO, NO e NO2, O3 etc.
Vapores: so as formas gasosas de substncias normalmente slidas ou
lquidas nas condies ambientais
Ex: vapores resultantes da volatilizao de solventes orgnicos como benzeno,
tolueno, xileno etc.
Partculas ou aerodispersides: partculas de tamanho microscpico, em
estado slido ou lquido
Ex: poeiras e fumos; neblinas e nvoas
3.1.2) Quanto s caractersticas qumicas:
Esta classificao se baseia na estrutura qumica das substncias que mais se
destacam quanto ao interesse toxicolgicos
Ex: Halogneos; Produtos alcalinos; Hidrocarbonetos alifticos; Hidrocarbonetos
aromticos; Metais; outros
3.1.3) Quanto ao tipo de ao txica (ou rgo onde atuam):
Nefrotxico; Neurotxico; Hepatotxico; Outros

4) TOXICIDADE
a capacidade, inerente a um agente qumico, de produzir danos aos
organismos vivos, em condies padronizadas de uso. Uma substncia muito
txica causar dano a um organismo se for administrada em quantidades muito
pequenas, enquanto que uma substncia de baixa toxicidade somente produzir
efeito quando a quantidade administrada for muito grande.
O conhecimento da toxicidade das substncias qumicas se obtm atravs
de experimentos em laboratrio utilizando animais. Os mtodos so empregados
com todo rigor cientfico com a finalidade de fornecer informaes relativas aos
efeitos txicos e principalmente para avaliar riscos que podem ser extrapolados ao
homem.
Os agentes qumicos podem ser classificados, segundo HODGES &
HAGGARD, em 6 classes de toxicidade, de acordo com os valores de DL50
(Tabela I ). Esta classificao utilizada para consultas rpidas, qualitativas, com
finalidade de obter informaes relativas toxicidade intrnseca das substncias.
A falha desta classificao est no fato dela se basear apenas na toxicidade
intrnseca da substncia que um parmetro extremamente varivel, sendo

influenciado por uma srie de fatores, relacionados principalmente ao agente

qumico, organismo e exposio.
Em situaes prticas no se deve conhecer somente a toxicidade das
substncias, representadas geralmente pela DL50, pois to importante como
conhecer a toxicidade dos agentes qumicos, conhecer e saber avaliar o risco
txico de uma substncia qumica.
Tabela I : Classificao Quanto ao Grau de Toxicidade

Categoria de Toxicidade
Extremamente txico
Altamente txico
Moderadamente txico
Ligeiramente txico
Praticamente no txico
Relativamente atxico

DL 50 Rata (via Oral)

< 1mg/kg
1-50 mg/kg
50-500 mg/kg
0,5-5 g/kg
5-15 g/kg
> 15 g/kg

4.1) Fatores que influem na toxicidade

4.1.1) Fatores ligados ao agente qumico
Propriedade fsico-qumica (solubilidade, grau de ionizao, coeficiente de
partio leo/gua, pka, tamanho molecular, estado fsico, etc.);
Impurezas e contaminantes;
Fatores envolvidos na formulao (veculo, adjuvantes).
4.1.2) Fatores relacionados com o organismo
Espcie, linhagem, fatores genticos;
Fatores imunolgicos, estado nutricional, dieta;
Sexo, estado hormonal, idade, peso corpreo;
Estado emocional, estado patolgico.
4.1.3) Fatores relacionados com a exposio
Via de introduo;
Dose ou concentrao;
Freqncia.
4.1.4) Fatores relacionados com o ambiente
Temperatura, presso;
Radiaes;
Outros (luz, umidade, etc.).

5) RISCO E SEGURANA
O risco associado uma substncia qumica se define como a
probabilidade de que uma substncia produza um efeito adverso, um dano, sob
condies especficas de uso.

Nem sempre a substncia de maior toxicidade a de maior risco, ou seja,

de maior perigo para o homem. Dependendo das condies de uso, uma
substncia classificada como muito txica (elevada toxicidade intrnseca) pode ser
menos perigosa do que uma pouco txica. Existindo um risco associado ao uso
de uma substncia qumica, h a necessidade de estabelecer condies de
segurana. Portanto define-se como segurana, a certeza prtica de que no
resultar efeitos adversos para um indivduo exposto a uma determinada
substncia em quantidade e forma recomendada de uso. Ou seja, quando fala-se
em risco e segurana, significa a possibilidade ou no da ocorrncia de uma
situao adversa.
Um problema srio, no entanto, estabelecer o que um risco aceitvel no
uso de substncia qumica. Esta deciso bastante complexa e envolve o binmio
risco-benefcio, ou seja, altos riscos podem ser aceitveis no uso das chamadas
life saving drugs, ou seja, os frmacos essenciais vida e no serem aceitveis
no uso de aditivos de alimentos, por exemplo.
Na utilizao das substncias qumicas para diversos fins, alguns fatores
devem ser considerados na determinao de um risco aceitvel:
Necessidade do uso da substncia;
Disponibilidade e a adequao de outras substncias alternativas para o uso
correspondente;
Efeitos sobre a qualidade do ambiente e conservao dos recursos naturais;
Consideraes sobre o trabalho (no caso dela ser usada nvel ocupacional);
Avaliao antecipada de seu uso pblico (ou seja, o que ela poder causar
sobre a populao em geral, onde existe por exemplo: crianas, velhos,
doentes, etc.);
Consideraes econmicas.

6) INTOXICAO
um conjunto de efeitos nocivos representado pelos sinais e sintomas que
revelam o desequilbrio orgnico produzido pela interao do agente qumico com
o sistema biolgico. Corresponde ao estado patolgico provocado pelo agente
txico, em decorrncia de sua interao com o organismo.
Logicamente, o efeito txico s ser produzido, se a interao com o
receptor biolgico apropriado ocorrer em dose e tempo suficientes para quebrar a
homeostasia do organismo. Existem, ento, na grande maioria das vezes, uma
srie de processos envolvidos, desde o contato do agente txico com o
organismo, at o sintoma clnico que revela esta interao. Isto permite dividir a
intoxicao em 4 fases distintas, a saber:
Fase de Exposio: corresponde ao contato do agente txico com o organismo.
Representa a disponibilidade qumica das substncias qumicas e passveis de
serem introduzidas no organismo.
Fase Toxicocintica: consiste no movimento do AT dentro do organismo.
formada pelos processos de absoro, distribuio, armazenamento e eliminao

(biotransformao e excreo). Todos esses processos envolvem reaes mtuas

entre o agente txico e o organismo, conduzindo disponibilidade biolgica.
Fase Toxicodinmica: corresponde ao do AT no organismo. Atingindo o alvo,
o agente qumico ou seu produto de biotransformao interage biolgicamente
causando alteraes morfolgicas e funcionais, produzindo danos.
Fase Clnica: corresponde manifestao clnica dos efeitos resultantes da ao
txica. o aparecimento de sinais e sintomas que caracterizam o efeito txico e
evidenciam a presena do fenmeno da intoxicao.

7) DISTINO ENTRE EFEITOS ADVERSOS E NO ADVERSOS

O efeito adverso ou anormal com freqncia definido em relao
medio que est fora da amplitude normal. A amplitude normal, por sua vez,
se define com base nos valores mdios que se tem observado num grupo de
indivduos presumivelmente sos. No entanto praticamente impossvel, numa
populao geral, definir valores normais, onde se inclui grupos que pode ser
especialmente sensveis aos fatores ambientais, em especial as pessoas muito
jovens e muito idosas, as afetadas por alguma enfermidade e as expostas a outros
agentes txicos e tenses.
Por isso tm-se procurado formular critrios para determinar efeitos
adversos baseados em consideraes biolgicas e no somente em diferenas
estatisticamente significativas em relao a uma populao controle.
Sendo assim o efeito no adverso aquele que no reduz a capacidade
funcional nem a capacidade para compensar tenses adicionais. So reversveis
logo aps cessar a exposio, sem diminuio detectvel da capacidade do
organismo para manter a homeostase, e no realam a suscetibilidade aos efeitos
de outras influncias ambientais.
Por outro lado, se pode deduzir que os efeitos adversos so alteraes
biolgicas que:
Ocorrem com uma exposio intermitente ou continuada e que do lugar
diminuio da capacidade funcional ( determinada por parmetros anatmicos,
fisiolgicos e bioqumicos ou de comportamento) ou uma diminuio da
capacidade para compensar tenses adicionais;
So reversveis durante a exposio ou logo cessada esta, quando tais
alteraes causam diminuies detectveis da capacidade do organismo para
manter a homeostase; e
Realam a suscetibilidade do organismo aos fatores nocivos de outras
influncias ambientais.

8) EFEITOS TXICOS
So os efeitos adversos causados por substncias qumicas. Assim, todo o
efeito txico indesejvel e nocivo. Mas nem todos efeitos indesejveis so
txicos.

8.1) Classificao dos efeitos txicos

8.1.1) Efeito idiossincrtico
As reaes idiossincrticas correspondem s respostas quantitativamente
anormais a certos agentes txicos, provocados por alteraes genticas. O
indivduo pode ter uma resposta adversa com doses baixas (no-txicas) ou ento
ter uma resposta extremamente intensa com doses mais elevadas. Exemplo:
sensibilidade anormal aos nitritos e outros agentes metemoglobinizantes, devido
a deficincia, de origem gentica, na NADH-metemoglobina redutase.
8.1.2) Efeito alrgico
Reaes alrgicas ou alergia qumica so reaes adversas que ocorrem
somente aps uma prvia sensibilizao do organismo ao AT, ou a um produto
quimicamente semelhante.
Na primeira exposio, a substncia age como um hapteno promovendo a
formao dos anticorpos, que em 2 ou 3 semanas esto em concentraes
suficientes para produzir reaes alrgicas em exposies subsequentes.
Alguns autores no concordam que as alergias qumicas sejam efeitos
txicos, j que elas no obedecem ou apresentam uma relao dose-resposta
(elas no so dose dependente). Entretanto, como a alergia qumica um efeito
indesejvel e adverso ao organismo, pode ser reconhecido como efeito txico.
8.1.3) Efeito imediato, crnico e retardado
Efeitos Imediatos ou agudos so aqueles que aparecem imediatamente aps
uma exposio aguda, ou seja, exposio nica ou que ocorre, no mximo, em
24 horas. Em geral so efeitos intensamente graves.
Efeitos crnicos so aqueles resultantes de uma exposio crnica, ou seja,
exposio a pequenas doses, durante vrios meses ou anos. O efeito crnico
pode advir de dois mecanismos:
(a) Somatria ou Acmulo do Agente Txico no Organismo : a velocidade de
eliminao menor que a de absoro, assim ao longo da exposio o AT vai
sendo somado no organismo, at alcanar um nvel txico.
(b) Somatria de Efeitos: ocorre quando o dano causado irreversvel e,
portanto, vai sendo aumentado a cada exposio, at atingir um nvel detectvel;
ou, ento, quando o dano reversvel, mas o tempo entre cada exposio
insuficiente para que o organismo se recupere totalmente.
Efeitos retardado s so aqueles que s ocorrem aps um perodo de latncia,
mesmo quando j no mais existe a exposio. Exemplo: efeitos
carcinognicos que tm uma latncia a 20-30 anos.
8.1.4) Efeitos reversveis e irreversveis
A manifestao de um ou outro efeito vai depender, principalmente, da
capacidade do tecido lesado em se recuperar. Assim, leses hepticas so
geralmente reversveis, j que este tecido tem grande capacidade de regenerao,
enquanto as leses no sistema nervoso central (SNC) so geralmente
irreversveis, uma vez que as clulas nervosas so pouco renovadas.

8.1.5) Efeitos locais e sistmicos

O efeito local refere-se quele que ocorre no local do primeiro contato entre
o AT e o organismo. J o sistmico exige uma absoro e distribuio da
substncia, de modo a atingir o stio de ao, onde se encontra o receptor
biolgico. Existem substncias que apresentam os dois tipos de efeitos. (ex.:
Benzeno, chumbo tetraetila, etc.).

8.1.6) Efeitos resultantes da interao de agentes qumicos

O termo interao entre substncias qumicas utilizado todas as vezes em
que uma substncia altera o efeito de outra. A interao pode ocorrer durante a
fase de exposio, toxicocintica ou toxicodinmica. Como conseqncia destas
interaes podem resultar diferentes tipos de efeitos:
Adio: aquele produzido quando o efeito final de 2 ou mais agentes
quantitativamente igual soma dos efeitos produzidos individualmente.
Ex.: Chumbo e arsnio atuando a nvel da biossntese do heme (aumento da
excreo urinria da coproporfirina).
Sinergismo: Ocorre quando o efeito de 2 ou mais agentes qumicos
combinados, maior do que a soma dos efeitos individuais.
Ex.: A hepatotoxicidade, resultante da interao entre tetracloreto de carbono e
lcool muito maior do que aquela produzida pela soma das duas aes em
separado, uma vez que o etanol inibi a biotransformao do solvente clorado.
Potenciao: Ocorre quando um agente txico tem seu efeito aumentado por
atuar simultaneamente, com um agente no txico
Ex.: O isopropanol, que no hepatotxico, aumenta excessivamente a
hepatotoxicidade do tetracloreto de carbono.
Antagonismo: Ocorre quando dois agentes qumicos interferem um com a
ao do outro, diminuindo o efeito final. , geralmente, um efeito desejvel em
toxicologia, j que o dano resultante (se houver) menor que aquele causado
pelas substncias separadamente. Existem vrios tipos de antagonismo:
(a) Antagonismo qumico: (tambm chamado neutralizao) ocorre
quando o antagonista reage quimicamente com o agonista, inativando-o. Este tipo
de antagonismo tem um papel muito importante no tratamento das intoxicaes.
Ex.: Agentes quelantes como o EDTA, BAL e penicilamina, que seqestram
metais (As, Hg, Pb, etc.) Diminuindo suas aes txicas.
(b) Antagonismo funcional: ocorre quando dois agentes produzem efeitos
contrrios em um mesmo sistema biolgico atuando em receptores diferentes. Ex.:
Barbitricos que diminuem a presso sangnea, interagindo com a norepinefrina,
que produz hipertenso.
(c)Antagonismo no-competitivo, metablico ou farmacocintico:
quando um frmaco altera a cintica do outro no organismo, de modo que menos
AT alcance o stio de ao ou permanea menos tempo agindo. Ex.: Bicarbonato
de sdio que aumenta a secreo urinria dos barbitricos; fenobarbital que
aumenta a biotransformao do tolueno, diminuindo sua ao txica.
(d)Antagonismo competitivo, no-metablico ou farmacodinmico:
ocorre quando os dois frmacos atuam sobre o mesmo receptor biolgico, um

antagonizando o efeito do outro. So os chamados bloqueadores e este conceito

usado, com vantagens, no tratamento clnico das intoxicaes. Ex.: Naloxone, no
tratamento da intoxicao com opiceos. Atropina no tratamento da intoxicao
por organofosforado ou carbamato.
AVALIAO TOXICOLGICA

Todas as substncias qumicas so txicas em certas condies de

exposio. No entanto, para toda substncia deve haver alguma condio de
exposio que seja segura no que se refere Sade Humana, com a possvel
exceo dos agentes carcinognicos e mutagnicos. Ou seja, condies de
exposio nas quais as substncias qumicas sejam mantidas abaixo dos nveis
mximo permitido. E quando no for possvel definir um limite mximo permitido,
deve-se evitar a exposio.
Os dados sobre seres humanos relativos toxicidade das substncias
qumicas, obviamente so mais pertinentes para avaliao da segurana que os
dados obtidos em animais experimentais. No entanto, as exposies controladas
de seres humanos substncias perigosas ou potencialmente perigosas vm-se
restringidas por consideraes ticas e por isso necessrio confiar na
informao obtida por mtodos clnicos e epidemiolgicos. Todavia, quando esta
informao no disponvel, como ocorre com substncias qumicas novas,
devem-se obter dados somente mediante os testes de toxicidade realizados com
animais.
O grau de confiabilidade com o qual pode-se estimar os riscos para sade
humana baseado nos testes de toxicidade em animais depende da qualidade dos
dados, assim como da quantidade e tipos dos testes realizados.

1) CONCEITO
A avaliao toxicolgica compreende a anlise de dados toxicolgicos de
uma substncia qumica com o objetivo de classific-la em categorias
toxicolgicas, e ao mesmo tempo, fornecer informaes respeito da forma
correta e segura de uso, bem como medidas de preveno e tratamento.

2) PRIORIDADES NA SELEO DE SUBSTNCIAS QUE SE SUBMETERO

AOS TESTES TOXICOLGICOS
A princpio, todas as substncias qumicas novas devem se submeter a
uma avaliao de seguridade antes de sua fabricao e venda. Entretanto, devido
ao grande nmero de substncias qumicas que se representa um possvel perigo
para a sade humana e a limitao de recursos necessrio dar prioridade
aquelas que so diretamente consumidas pelo homem, como frmacos, os
aditivos alimentares e as que se utilizam amplamente como praguicidas ou
produtos domissanitrios.

As substncias qumicas industriais que podem estar presentes no meio

ambiente geral ou do trabalho ou contaminar outros produtos representam outra
categoria de problemas.
A mxima prioridade deve corresponder aos compostos de presumida
toxicidade elevada, aguda, crnica ou diferenciada (como a carcinogenicidade) ou
de maior persistncia no meio ambiente. Isto se aplica tambm aos compostos
que inibem a a desativao metablica de substncias qumicas, pois podem
constituir uma forma mais insidiosa de toxicidade. As substncias qumicas
resistentes ao metabolismo, em especial ao metabolismo pela microflora, tero
uma elevada persistncia ambiental. Muitos compostos halogenados se
encontram nesta categoria e, em consequncia, devero Ter algum grau de
prioridade. Tambm interessam os compostos que se acumulam nas cadeias
alimentares que se depositam no organismo, por exemplo, o metilmercrio e o
DDT.
Em suma os critrios essenciais para determinao da prioridade para
seleo das substncias qumicas que se colocar prova so os seguintes:
indicao ou suspeita de perigo para a sade humana e tipo de gravidade dos
efeitos potenciais sade.
grau provvel de produo e emprego
potencial de persistncia no meio ambiente
potencial de acumulao na e no meio ambiente, e
tipo e magnitude das populaes que estaro expostas
A substncia qumica de primeira prioridade para as provas ser aquela que
se classifique em lugar destacado em virtude de todos estes critrios ou de sua
maioria.

3) ALCANCE QUE DEVEM TER OS TESTES DE TOXICIDADE

O alcance das provas de toxicidade necessrias (ou requeridas) depender
de algumas consideraes. Como primeiro passo poder ser til realizar uma
estimativa aproximada de toxicidade com base na estrutura qumica e nas
propriedades fsico-qumicas da substncias e as correlaes conhecidas destas
variveis com a atividade biolgica. Estas consideraes sero teis para adotar
decises a respeito das medidas de segurana durante os trabalhos de
laboratrio.
A avaliao preliminar de toxicidade dever comear quando sintetizam as
substncias qumicas na fase de Laboratrio de Desenvolvimento de um processo
industrial. A avaliao completa das substncias qumicas em questo, tanto a
respeito da exposio profissional como da exposio da populao geral, e a
avaliao de possvel contaminao de gua, ou dos alimentos, devero iniciar
mais tarde, quando j tem-se resolvido levar adiante a produo. Ou seja, no caso
de medicamento, os testes toxicolgicos so realizados aps as triagens
farmacolgicas, uma vez comprovados seus efeitos teraputicos.
Os dados de toxicidade obtidos durante as etapas de desenvolvimento de
um processo tecnolgico podem ser fontes de dados a respeito dos perigos sobre

a sade, no somente das matrias primas, mas tambm de outras substncias

utilizadas ou produzidas, como produtos intermedirios, no processo tecnolgico.
Alm disso, a avaliao toxicolgica pode facilitar a seleo de um processo
tecnolgico substutivo que seja menos nocivo para a sade.
Na definio de normas ambientais e sanitrias e necessrio dar
preferncia as substncias qumicas que manifestem um grau significativo de
toxicidade e constituem um perigo de sade, as quais sero utilizadas
amplamente na Indstria, na agricultura e os produtos de consumo. importante
considerar que, as mudanas e aevoluo dos processos industriais, a formulao
de novas substncias qumicas e as modificaes no emprego das substncias
qumicas conhecidas podem propor novos e maiores perigos. E isso requer uma
constante reavaliao das prioridades.

4) RELAO DOSE-EFEITO E RELAO DOS E-RESPOSTA

Os estudos das alteraes causadas pelas substncias qumicas tem por
objetivo estabelecer as relaes dose-efeito e dose-resposta que fundamentam
todas as consideraes toxicolgicas necessrias para avaliao do risco sade.
Os estudos relativos exposio qumica objetivando medidas de
preveno dos efeitos nocivos sade necessrio existir disponvel uma medida
quantitativa da relao entre a magnitude da exposio ao agente qumico e o tipo
e grau de resposta numa populao exposta a esse agente. somente com base
nessa relao que se pode, seguramente, permitir uma dose tolervel do agente
nocivo, em algum nvel acima do zero, de tal modo que uma frao significativa do
grupo exposto no experimente um indesejvel efeito sobre a sade
Para uma melhor compreenso da diferena entre os dois tipos de
relaes, torna-se necessrio conceituar dose, efeito e resposta. A expresso
Dose se emprega para especificar a quantidade de uma substncia qumica
administrada, a qual pode no ser idntica dose absorvida. Nas exposies
ambientais pode-se estimar a dose com base na medio das concentraes
ambientais em funo do tempo. E a dose nos orgos e tecidos que interessam,
pode-se estimar com base na quantidade administrada ou injerida; ou na medida
da concentrao em amostras biolgicas. A informao para estimar a dose nos
tecidos ou orgos requer dimensionar os processos de absoro , distribuio,
armazenamento, biotransformao e excreo da substncia qumica ou seus
metablitos, em funo do tempo.
Quando a ao txica se manifesta no local de introduo ou muito prximo
deste ( por exemplo, a pele ) a estimativa da dose no tecido pode ser muito
confivel. Entretanto, quando a ao txica se manifesta em algum outo stio
distante do primeiro contato ( por exemplo clulas hepticas ), a estimativa da
dose toxicologicamente significativa menos confivel.
O s termos Efeito e Resposta, muitas vezes podem ser usados como
sinnimos para denominar uma alterao biolgica, num indivduo ou numa
populao em relao uma exposio ou dose. Contudo, na Toxicologia se
diferenciam, utilizando o termo efeito para denominar uma alterao biolgica e o

termo resposta para indicar a proporo de uma populao que manifesta um

efeito definido.
Segundo esta terminologia, a resposta a taxa de incidncia de um efeito.
Por exemplo, se pode dizer que o valor de DL 50 a dose que causar uma
resposta de 50% em uma populao em que se estuda o efeito letal de uma
substncia qumica.
Alguns efeitos podem ser medidos em uma escala graduada de intensidade
ou gravidade, relacionando sua magnitude diretamente com a dose e por isso so
denominados Efeitos Graduados. Certos efeitos, no entanto, no permitem
gradao e se podem expressar somente dizendo que esto presentes ou
ausentes. Estes efeitos se denominam Efeitos Qunticos, como por exemplo, a
morte ou ocorrncia de um tumor.
4.1) Curvas Dose-efeito e Dose-resposta
As relaes dose-efeito e dose-resposta so representadas pelas curvas
correspondentes.
A curva dose-efeito demonstra a relao entre a dose e a magnitude de um
efeito graduado, em um indivduo ou em uma populao. Estas curvas podem
adotar distintas formas, lineares ou no. Exemplo: relao entre a % de
carboxiemoglobina no sangue e a intensidade dos sinais e sintomas da
intoxicao.
A curva dose-resposta representa a relao entre a dose e a proporo da
populao que responde com um efeito quntico. Em geral estas curva so
sigmides. Uma forma de explicar a configurao das curvas dose-resposta
dizer que cada indivduo de uma populao tem uma tolerncia prpria e requer
uma certa dose antes de responder com um efeito. A princpio, existem tanto uma
dose baixa a qual ningum responder como uma dose alta a qual todos
respondero. A razo deve-se variabilidade biolgica, isto , diferente
sensibilidade dos indivduos (ou animais) ao de determinada substncia
qumica.
importante mencionar que, para cada efeito haver, ento, uma curva
dose-resposta distinta. Alm de que a configurao da curva dose-resposta da
mesma substncia qumica e a mesma espcie animal pode variar com as
mudanas das condies experimentais, por exemplo, as mudanas na forma de
distribuio da dose no tempo (frequncia).
A curva sigmide ou em forma de S uma expresso curvilnea
comumente observada na maior parte das curvas dose-resposta. O fundamento
biolgico desta relao se pode compreender parcialmente quando se pensa na
natureza da distribuio de frequncia das suscetibilidades ou resistncias
individuais em uma populao. A maior parte das pessoas que compem uma
populao respondero prximo a um nvel de dose mdia, sendo poucas as que
respondero somente a nveis de dose muito baixos ou muito altos. Isto d lugar a
uma curva de distribuio normal de frequncia, geralmente utilizando escala
logartmica de dose, a qual se apresenta como uma distribuio simtrica
A Figura 1 mostra uma distribuio normal de frequncia, simtrica em
relao ao ponto central. Sua distribuio acumulativa de frequncia mostra a

curva sigmide frequentemente observada. Uma relao dose-resposta se

apresentar como uma distribuio acumulativa de frequncia porque o indivduo
que reage a uma dose baixa tambm reagir, naturalmente, dose mais
elevadas. Em consequncia, a frequncia de indivduos reativos a uma dose
elevada determinada inclue todos aqueles que respondem a essa dose e a todas
as doses inferiores.
No entanto, a equao matemtica correspondente curva sigmide
difcil de manusear e, por isso levada a se transformar em uma linha reta para
apresentao e avaliao dos dados. A Figura 2 ilustra essa transformao
apresentando tanto a escala porcentual como a escala probito (unidade de
probabilidade), a qual possibilita a transformao em reta.
Dessa forma curva dose-resposta permite avaliar a resposta da populao
estudada a partir das doses, s quais 20%, 70%, 84% ou qualquer outra
porcentagem da populao reage a um determinado efeito. comum calcular as
doses eficazes em se tratando de um efeito teraputico, as quais so
representadas por DE20, DE50, DE70 etc.. Ao estudar o efeito letal de um agente
qumico, as doses so representadas como DL20, DL50, etc.. A DL50 constitui um
importante parmetro no estudo da toxicidade de uma substncia qumica
determinado por uma relao dose-resposta.
Um outro parmetro importante, alm da DL50, a inclinao da reta. Por
exemplo duas substncias podem ter a mesma DL50, como mostrado na Figura 3,
no entanto, qualquer afirmao a respeito da igualdade relativa de toxicidade seria
vlida somente essa dose especfica. Pois, em doses mais elevadas a
substncia C seria mais txica que a D e em dose mais baixas a substncia D
seria mais txica. Esta figura ilustra tambm a importncia do paralelismo das
curvas dose-resposta, como exemplificado pelas substncia E e F. Este
paralelismo essencial para a legitimidade das afirmaes gerais a respeito da
toxicidade relativa das substncias qumicas. Contudo deve-se compreender que
as curvas das substncia E e F se aplicam somente a um efeito especfico e a um
conjunto de condies experimentais. As observaes da resposta
corespondentes a um efeito txico distinto ou a administrao por um outra via
poder ou no produzir curvas paralelas de dose-resposta para as mesmas
substncias.
As inclinaes mais planas como apresentado na Figura 4 pela substncia
A, indicam fatores tais como uma absoro deficiente, uma excreo ou
detoxificao rpida ou efeitos txicos que se manifestam algum tempo depois da
administrao. As inclinaes empinadas como representada pela substncia B,
indicam com frequnciauma absoro rpida e rpido comeo dos efeitos txicos.

Figura 3: Curvas dose-resposta de quatro substncias qumicas

Figura 4: Curvas dose-resposta de duas substncias qumicas

A inclinao da reta pode predizer o perigo de uma substncia txica, uma

vez que ela representa a distncia existente entre a dose txica mnima e a dose
txica mxima. Quanto menor esta distncia, mais perigosa a substncia e por
isso menor a segurana no seu manuseio.
Em relao aos frmacos, alm de seu efeito teraputico , existe a
possibilidade do aparecimento de um ou mais efeitos txicos. A maneira de avaliar
a segurana de um frmaco comparar a relao dose-resposta obtida no estudo
de um efeito biolgico no txico ou efeito teraputico (chamado efeito eficaz) com
a relao dose-resposta obtida para o efeito txico. Da comparao destas duas
relaes podem ser obtidos os parmetros ndice teraputico (IT) e margem de
segurana (MS), mostrados na figura 5.

Efeito Eficaz

Efeito Txico

100

50

DE 50
dose(mg/kg)

DL50

Figura 5: Relao dose-resposta para o efeito eficaz e para o efeito txico de

um hipottica substncia W.

O ndice teraputico (IT) calculado pela relao:

DL50
IT =
DE 50
Onde: DL 50 a dose letal para 50% da populao analisada e
DE 50 a dose efetiva para 50% da mesma populao.
Quanto maior o IT maior a segurana da substncia. A desvantagem
deste ndice que para calcul-lo, utiliza-se as doses mdias e elas no
representam, significativamente, as relaes dose-resposta, como
demonstrado na Figura 4. Sempre que possvel indicado um outro
parmetro que expressa segurana, qual seja a Margem de Segurana.
A margem de segurana (MS) calculada pela relao:
DL 1
MS =
DE 99
Onde: DL 1 a dose letal para 1% da populao estudada e
DE 99 a dose efetiva para 99% da mesma populao.
5) TIPOS DE TESTES DE TOXICIDADE
Para estudar o potencial txico de uma substncia qumica preciso, alm
de estabelecer uma relao dose-resposta, proceder a realizao de outors
estudos toxicolgicos ou testes de toxicidade. Uma das finalidades dos Testes de

toxicidade fornecer dados que possam ser utilizados para avaliao do risco do
uso de substncias qumicas para o Homen e estabelecer limites de segurana na
exposio aos agentes qumicos.
Aps o epsdio da Talidomida (epidemia de m formao congnita,
1959-1961, em crianas cujas respectivas mes haviam feito uso da talidomida no
incio da gravidez), as Instituies Governamentais, em diversos pases,exigiram
um maior rigor na realizao dos testes toxicolgicos objetivando acabar ou
minimizar a ocorrncia das chamadas reaes adversas aos medicamentos.
No se tratando de medicamento, estes testes devem ser relizados para
cada substncia qumica produzida e comercializada, de acordo com os critrios j
vistos anteriormente. Os tipos de testes a serem realizados, podem variar de um
pas para outro, no entanto devem considerar os principais critrios de avaliao
de toxicidade:
exame anato-patolgico (aspectos macro e microscpico)
peso dos orgos
crescimento do animal
exames fisiolgicos
exames bioqumicos
estudos do comportamento
efeito sobre a fertilidade e feto
DE 50 e DL 50
CE 50 e CL 50
No Brasil, a Resoluo 1/78 (D.O. 17/10/78) do Conselho Nacional de
Sade, estabelece 5 tipos de ensaios de toxicidade: Aguda, Sub-aguda, Crnica,
teratognicidade, embriotoxicidade e estudos especiais ( estudos de
comportamento, carcinognicidade e outros)
5.1) Teste de toxicidade aguda
Este estudo caracterizado pela administrao ou exposio da substncia
qumica numa dose nica (ou mltipla num espao de 24 horas), utilizando pelo
menos duas espcies. A DL 50 (e CL 50) a prova mais comum de toxicidade
aguda.
Os principais objetivos deste estudo so:
avaliar a toxicidade intrnseca do Agente Toxico ou Substncia Qumica.
avaliar a suscetibilidade das espcies
identificar rgos alvo
promover informaes para o delineamento e seleo dos nveis de dose para
estudo mais prolongados (toxicidade crnica)
5.2) Testes de toxicidade sub-crnica
O tempo de exposio deste estudo de 1 a 3 meses. usado 3 doses
experimentais (mnima, intermediria e mxima). Sendo que a dose mxima no
deve produzir um ndice de letalidade acima de 10% ( para que no inviabilize as
avaliaes histopatgicas e bioqumicas).
Os principais objetivos deste estudo so:

 determinar a dose de nenhum efeito observado DNEO (que significa a dose

mxima na qual no se observa efeito).
estudar mais efetivamente rgos alvos e determinar aqueles com mais
suscetibilidade.
prover dados sobre dosagens seletivas para estudo de toxicidade crnica.
5.3) Teste de Toxicidade Crnica
Este estudo semelhante ao sub-crnico, porm o perodo de exposio
de 2 anos ou quase toda a vida do anima. Como no teste anterior, este tambm
no procura letalidade e utiliza 3 nveis de dose pela via de administrao
segundo a via de uso prescrita.
O protocolo experimental compreende as observaes e alteraes
especificadas no estudo de toxicidade sub-crnica e outros parmetros
bioqumicos que permitem uma melhor avaliao de todos os rgos e funes,
principalmente funo renal e heptica.
Os principais objetivos deste estudo so:
verificar nveis mximos de dose das substncias que no produzem efeitos
discernveis de doena quando administrados durante a maior parte da vida do
animal.
verificar os efeitos txicos que no so resultados dos estudos de toxicidade
sub-crnica
procura-se determinar o mecanismo de ao txica das substncias qumicas.
5.4) Teste de Carcinogenicidade:
As evidncias primrias que podem apontar o potencial carcinognico das
substncias qumicas so de origem epidemiolgica ou experimental em roedores.
Esses efeitos devem ser observados em pelo menos, duas espcies de animais
de laboratrio, com uma durao mxima de 130 semanas em ratos, 120
semanas em camundongos e 130 semanas em hamsters. So utilizadas, no
mnimo, 2 doses da substncia. A maior dose a dose mxima tolerada (DMT),
definida como sendo aquela que no provoca no animal uma perda de peso
superior a 10% e no induz mortalidade ou sinais clnicos de toxicidade. A menor
dose corresponde metade da DMT. Cada grupo experimental constitudo de,
pelo menos, 50 animais. Todos animais utilizados no experimento so submetidos
necropsia completa.
A avaliao final do risco de carcinogenicidade para o homem, alm das
evidncias primrias, obtida pela execuo de testes de curta durao
(evidncias secundrias). Estes testes podem ser agrupados em 3 categorias
gerais:
Testes que detectam leso do DNA, incluindo o estudo da formao de
ligaes entre o DNA e os produtos ativos formados na biotransformao do
agente txico, quebra de fitas, induo de profagos e reparo do DNA
Testes que evidenciam alteraes dos produtos gnicos ou das funes
celulares

 Testes que avaliam alteraes cromossmicas.

A evidncia de carcinogenicidade considerada limitada nas
seguintes situaes:
- nmeros reduzidos de experimentos
- impropriedade de dose e vias de administrao
- emprego de uma nica espcie animal
- durao imprpria do experimento;
- nmero reduzido de animais e
- dificuldade em diferenciar as neoplasias malgnas e bengnas.
A evidncia inadequada indicada nas seguintes situaes:
- a no excluso do acaso nos estudos realizados;
- a existncia de vcios no delineamento experimental;
- a existncia de outros estudos que demonstrem a ausncia de
carcinogenicidade.
5.5) Teste de Mutagenicidade
Os efeitos mutagnicos das substncias qumicas podem ser avaliados
atravs de ensaios como microorganismos e em organismos superiores, inclusive
o homem. Os ensaios com microorganismos, realizados "in vitro", so indicados
na triagem rotineira dos agentes txicos. Os ensaios com microorganismos
avaliam basicamente o dano provocado ao DNA pela substncia qumica
estudada ou seu produto de biotransformao
No estudo do potencial mutagnico de um composto, os ensaios com
animais de laboratrio oferecem grandes vantagens, especialmente a de
reproduzir as condies de exposio do homem. Nestes ensaios, as alteraes
cromossmicas so identificadas na medula ssea do fmur de ratos e
camundongos expostos experimentalmente ao agente txico.

Fatores que influem na Biotransformao

Alm da induo e inibio enzimtica, outros fatores podem alterar a
biotransformao dos xenobiticos. So eles:
Dose e Freqncia:

A dose geralmente altera a via de biotransformao. Certas enzimas

possuem elevada afinidade, mas baixa capacidade para biotransformar
substncias exgenas. Por isto, sero rapidamente saturadas, quando doses
elevadas do txico so administradas e outras vias secundrias passam a ter
um papel mais importante. Exemplo: o acetaminofem em doses baixas (15
mg/Kg) 90% biotransformado atravs da conjugao com sulfato. Em doses
elevadas (300 mg/kg) apenas 43% ser excretado como tal, passando a ser
significativa, as excrees como glicurondeo e cido mercaptrico
(conjugao com glutation).
Em relao freqncia, ela pode levar a uma sensibilizao ou induo de
receptores enzimticos, aumentando a biotransformao.
Dieta e estado nutricional:
O estado nutricional bastante importante para a biotransformao;
podendo alterar a atividade do Cit P450 (oxidase ou redutase). As deficincias
em vitaminas, especialmente a C, E e do complexo B, reduzem a velocidade
de biotransformao. Elas esto direta ou indiretamente envolvidas na
regulao do Cit P450 . Alm disto, suas deficincias podem alterar a energia e
o estado redox das clulas, diminuindo a produo de cofatores, necessrios
para a fase de conjugao. Uma dieta rica em lpides diminui, geralmente, a
biotransformao, uma vez que estes podem aumentar a suscetibilidade
peroxidao lipdica. Esta maior suscetibilidade pode se estender aos lpides
das membranas biolgicas, e com isto destruir os sistemas enzimticos
intracelulares levando a um aumento da toxicidade dos frmacos. Este papel
desenvolvido, tambm, pelas dietas pobres em protenas, visto que a menor
concentrao protica diminuir a sntese enzimtica e, consequentemente, a
biotransformao.
Algumas substncias naturalmente presentes nos alimentos podem
aumentar a biotransformao dos xenobiticos. o caso dos compostos
indlicos e dos hidrocarbonetos policclicos aromticos; estes ltimos
presentes em carnes assadas, que induzem Fase I da biotransformao.
Sexo, Idade, Peso:
J foi demonstrado que, para algumas substncias, existem
diferenas entre as respostas txicas de animais macho e fmea. Estudos
feitos em ratos demonstraram que as fmeas so mais suscetveis a uma
dose de hexobarbital do que os machos (elas dormem por um tempo maior).
Este fato explicado pela menor capacidade do fgado das fmeas em
biotransformar xenobiticos tornando-as mais suscetveis ao da maioria
dos agentes txicos. A menor atividade heptica destes animais fmeas no
entanto, ir diminuir a ao de frmacos que so biotransformados pelo
mecanismo de ativao (ex.: o tetracloreto de carbono e halotano). Acredita-se
que estas diferenas entre sexo sejam causadas pelos hormnios sexuais,
posto que, ao se administrar testosterona s fmeas, houve aumento na
capacidade de biotransformao e com a castrao de machos ocorreu
diminuio desta capacidade. A influncia do sexo sobre a biotransformao
ocorre tambm em processos que ocorrem em outros rgos como por
exemplo nos rins. Ex.: animais machos so mais suscetveis ao txica do
clorofrmio, provavelmente, por biotransformar mais rapidamente este

solvente, originando o fosgnio, metablito intermedirio ativo. Embora as

diferenas entre sexo sejam mais pronunciadas em ratos, outras espcies
entre elas o homem, tambm apresentam estas modificaes (ex.: nicotina,
cido acetilsaliclico, heparina, etc.).
Idade, tanto os animais jovens, quanto os velhos, apresentam menor
capacidade de biotransformar xenobiticos e, consequentemente, so mais
suscetveis aos seus efeitos txicos. Geralmente, o Cit P450 dos recmnascidos tem apenas 20% a 50% da atividade observada em adultos. Em
relao aos idosos, no s a atividade diminuda do Cit P450, mas tambm
outros fatores, tais como menor fluxo sangneo, menor eficincia no sistema
da excreo renal e biliar, contribuem para a menor biotransformao dos
xenobiticos.
2.4.1.4) Importncia da Biotransformao para as Anlises Toxicolgicas
Esta reside no fato de que a forma mais comum de se encontrar o agente
txico em material biolgico como produto biotransformado. Assim,
conhecendo a biotransformao do AT, sabe-se o que procurar na amostra
enviada ao laboratrio. Alm disto, conhecendo-se a biotransformao e os
metablitos formados, fica mais fcil saber que tipo de amostra a mais
indicada para ser requisitada. Exemplo: a metanfetamina, um anorexgeno do
grupo anfetamnicos usado como bolinha biotransformada no organismo,
produzindo anfetamina, que excretada pelos rins. Assim, quando da
ingesto ou intoxicao com a metanfetamina, o produto principal a ser
pesquisado na urina dever ser a anfetamina. Os solventes clorados do tipo
CHCl 3 e CCl4 so muito pouco biotransformados no organismo e quando isto
ocorre o produto formado geralmente o CO2, que ser, assim como os
precursores, eliminados pelo ar expirado. Logo no adianta solicitar ou
receber amostras de urina para serem analisadas.
J um outro solvente clorado, o tricloretileno, muito biotransformado no
organismo produzindo principalmente cido tricloactico (TCA) e tricloetanol
(TCE), eliminados na urina. Para este xenobitico a urina amostra biolgica
adequada.

2.4.2) Excreo
Este processo , muitas vezes, denominado Eliminao, embora pelo
conceito atual a eliminao tambm o processo de biotransformao. A
excreo pode ser vista como um processo inverso ao da absoro, uma vez
que os fatores que influem na entrada do xenobitico no organismo, podem
dificultar a sua sada. Basicamente existem trs classes de excreo:
eliminao atravs das secrees, tais como a biliar, sudorpara, lacrimal,
gstrica, salivar, lctea.
eliminao atravs das excrees, tais como urina, fezes e catarro.
eliminao pelo ar expirado.

O processo mais importante para a Toxicologia e a excreo urinria.

2.4.2) Excreo Urinria
Sabe-se que a capacidade de um rgo em realizar uma determinada
funo est intimamente relacionada com sua anatomia e que os rins
possuem um elevado desenvolvimento anatmico, voltado para a excreo de
substncias qumicas.
Os glomrulos renais filtram cerca de 20% do fluxo cardaco (os rins
recebem 25% deste fluxo) e apresentam poros bastantes largos (cerca de 40
A enquanto o de outros tecidos medem cerca de 4 A). Assim, os glomrulos
filtram substncias lipossolveis ou hidrossolveis, cidas ou bsicas, desde
que tenham PM menor do que 60.000. A filtrao glomerular um dos
principais processos de eliminao renal e est intimamente ligado a um outro
processo que a reabsoro tubular. As substncias, aps serem filtradas
pelos glomrulos, podem permanecer no lmem do tbulo e ser eliminada, ou
ento podem sofrer reabsoro passiva atravs da membrana tubular. Isto vai
depender de alguns fatores, tais como o coeficiente de partio
leo/gua; o pKa da substncia e pH do meio. De modo geral, as
substncias de carter alcalino so eliminadas na urina cida e as
substncias cidas na urina alcalina. Isto porque nestas condies as
substncias se ionizaro, tornando-se hidrossolveis e a urina , em sua
maior parte, formada de gua.

Cocana protonada

cocana base livre (carter bsico)

MDMA base livre (carter bsico: amina secundria)

cido Acetilsaliclico (carter cido: grupo cido carboxilco)

Outro processo de excreo renal a difuso tubular passiva. Substncias
lipossolveis, cidas ou bsicas, que estejam presentes nos capilares que

circundam os tbulos renais, podem atravessar a membrana por difuso

passiva e carem no lmem tubular. Dependendo do seu pKa e do pH do
meio, elas podem, ou no, se ionizarem e, consequentemente, serem
excretadas ou reabsorvidas.
O terceiro processo de excreo renal a secreo tubular ativa. Existem
dois processos de secreo tubular renal, um para substncias cidas e outro
para as bsicas estando estes sistemas localizados, provavelmente, no tbulo
proximal. A secreo tubular tem as caractersticas do transporte ativo, ou
seja, exige um carregador qumico, gasta energia, um mecanismo
competitivo e pode ocorrer contra um gradiente de concentrao. Algumas
substncias endgenas, tais como o cido rico, so excretadas por este
mecanismo e a presena de xenobiticos excretados ativamente, pode
interferir com a eliminao de substratos endgenos. A Penicilina um
exemplo de xenobitico secretado ativamente pelos tbulos. O uso de
Probenecid (frmaco excretado pelo mesmo sistema) evita que este antibitico
seja secretado muito rapidamente do organismo. Geralmente, o que ocorre no
organismo uma combinao dos trs processos de excreo renal, para
permitir uma maior eficcia na eliminao dos xenobiticos.
2.4.2.2) Excreo Fecal e Catarral
No so processos muito importantes para a Toxicologia. Os AT
encontrados nas fezes correspondem frao ingerida e no absorvida ou
ento ao AT que sofreu secreo salivar, biliar ou gstrica. As partculas que
penetram pelo trato pulmonar podem ser eliminadas pela expectorao no TGI
e, se no forem reabsorvidas, sero, tambm, excretadas pelas fezes.
2.4.2.3) Secreo Biliar
Dentre as secrees orgnicas, a mais significativa para a excreo de
xenobiticos a biliar. O fgado tem uma posio vantajosa na remoo de
substncias exgenas do sangue, principalmente daquelas absorvidas pelo
trato gastrintestinal. Isto porque, o sangue proveniente do TGI, atravs da
circulao porta, passa inicialmente pelo fgado, e somente depois entra na
circulao sistmica. No fgado parte do xenobitico pode ser biotransformado
e os metablitos ou mesmo o produto inalterado podem ser secretados pela
bile no intestino.
Existem, sabidamente, trs sistemas de transporte ativo para a secreo de
substncias orgnicas na bile, a saber, para substncias cidas, bsicas e
neutras. quase certa a existncia de um outro sistema para os metais. Uma
vez secretado no intestino, os xenobiticos podem sofrer reabsoro ou
excreo pelas fezes. No se conhece o mecanismo que determina se a
excreo ser urinria ou biliar. Esquematicamente temos:
estmago fgado circulao sistmica

intestino
bile

 o chamado ciclo entero heptico e a morfina um exemplo tpico de

xenobitico que apresenta tal ciclo. Ela conjugada com cido glicurnico no
fgado e o glicurondeo de morfina secretado pela bile no intestino. Neste
local, pela ao da enzima b-glicuronidase, a morfina liberada e reabsorvida.
O glicorondeo que no for lisado ser excretado pelas fezes.
2.4.2.4) Outras secrees
A eliminao atravs da secreo sudorpara j conhecida h alguns
anos. Desde 1911 sabe-se que substncias tais como iodo, bromo, cido
benzico, cido saliclico, chumbo, arsnio, lcool, etc., so excretadas pelo
suor. O processo parece ser o de difuso passiva e pode ocorrer dermatites
em indivduos suscetveis, especialmente quando se promove a sudorese para
aumentar a excreo pela pele.
A secreo salivar significativa para alguns xenobiticos. Os lipossolveis
podem atingir a saliva por difuso passiva e os no lipossolveis podem ser
eliminados na saliva, em velocidade proporcional ao seu peso molecular,
atravs de filtrao. Geralmente as substncias secretadas com a saliva
sofrem reabsoro no TGI.
Existe um interesse em relao secreo de xenobiticos no leite, pois
este acaba sendo ingerido por recm-nascidos. Geralmente as substncias
apolares sofrem difuso passiva do sangue para o leite e como esta secreo
mais cida do que o sangue (ela tem pH = 6,5), os compostos bsicos
tendem a se concentrarem mais a. J os compostos cidos tem uma
concentrao lctea menor que a sangnea. Vrias substncias so,
sabidamente, eliminadas pelo leite: DDT, PCB (difenil policlorados), Pb, Hg,
As, morfina, lcool, etc.

2.4.2.5) Excreo pelo ar expirado

Gases e vapores inalados ou produzidos no organismo so parcialmente
eliminados pelo ar expirado. O processo envolvido a difuso pelas
membranas que, para substncias que no se ligam quimicamente ao sangue,
depender da solubilidade no sangue e da presso de vapor. Estes
xenobiticos so eliminados em velocidade inversamente proporcional
reteno no sangue, assim, gases e vapores com K elevado (pouco solveis
no sangue) so rapidamente eliminados, enquanto os de K baixo (muito
solvel no sangue) so lentamente excretados pelo ar expirado. A freqncia
cardaca e respiratria influem na excreo destes agentes: a primeira nos de
K alto e a segunda nos de K baixo. Em relao presso de vapor, os lquidos
mais volteis sero, quase exclusivamente, excretados pelo ar expirado.
Fatores que influem na velocidade e via de excreo
Via de Introduo: a via de introduo influi na velocidade de absoro, de
biotransformao e, tambm, na excreo.

 Afinidade por elementos do sangue e outros tecidos: geralmente o agente

txico na sua forma livre est disponvel eliminao.
Facilidade de ser biotransformada: com o aumento da polaridade a secreo
urinria est facilitada.
Freqncia respiratria: em se tratando de excreo pulmonar, uma vez que,
aumentando-se a freqncia respiratria, as trocas gasosas ocorrero mais
rapidamente.
- Funo renal: sendo a via renal a principal via de excreo dos
xenobiticos, quaisquer disfuno destes rgos interferir na velocidade e
proporo de excreo.

3) FASE TOXICODINMICA
Esta a terceira fase da intoxicao e envolve a ao do agente txico
sobre o organismo. O AT interage com os receptores biolgicos no stio de
ao e desta interao resulta o efeito txico. O rgo onde se efetua a
interao agente txico-receptor (stio de ao) no , necessariamente, o
rgo onde se manifestar o efeito. Alm disto, de um AT apresentar elevadas
concentraes em um rgo, no significa obrigatoriamente, que ocorrer a
uma ao txica. Geralmente os AT se concentram no fgado e rins (locais de
eliminao) e no tecido adiposo (local de armazenamento), sem que haja uma
ao ou efeito txico detectvel.
Quando se considera a complexidade dos sistemas biolgicos (do ponto de
vista qumico e biolgico), pode-se imaginar o elevado nmero de
mecanismos de ao existentes para os agentes txicos. Alguns destes
mecanismos, os principais em Toxicologia, so resumidos a seguir:

3.1) Interferncia com o funcionamento de sistemas biolgicos

3.1.1) Inibio irreversvel de enzimas
O exemplo clssico deste mecanismo so os inseticidas organo-fosforados,
que inibem irreversivelmente a acetilcolinesterase (AChE). Estes inseticidas
impedem, assim, que a acetilcolina (Ach), um dos mais importantes
neurotransmissores do organismo, seja degradada em colina e cido actico,
aps transmitir o impulso nervoso atravs da sinapse. Ocorrer acmulo de
Ach e, consequentemente, os efeitos txicos decorrentes deste acmulo.
3.1.2) Inibio reversvel de enzimas
Geralmente, os AT que atuam atravs deste mecanismo so antimetablitos, ou seja, quimicamente semelhantes ao substrato normal de uma
enzima. Assim, o agente txico captado pela enzima, mas no consegue ser
transformado por ela, interrompendo assim reaes metablicas essenciais
para o organismo. uma inibio reversvel porque o prprio organismo ao
final da exposio capaz de revert-la, em velocidade no muito lenta. O
exemplo clssico a dos inseticidas carbamatos, que inibem tambm a AChE

s que reversivelmente. Outro exemplo so os antagonistas do cido flico

(usados no tratamento de tumores malignos e como herbicidas). Estas
substncias inibem enzimas envolvidas na sntese das bases purnicas e
pirimidnicas, impedindo, consequentemente, que haja sntese de DNA e
proliferao celular. Como estes frmacos no tem ao seletiva, podem
causar efeitos txicos em uma srie de tecidos e rgos.
3.1.3) Sntese letal
Neste tipo de mecanismo de ao, o agente txico , tambm, um
antimetablito. Ele incorporado enzima e sofre transformaes
metablicas entrando em um processo bioqumico, dando como resultado um
produto anormal, no funcional e muitas vezes txico. Em outras palavras, h
a sntese de substncias que no so farmacologicamente teis e,
dependendo da concentrao deste produto anormal, pode haver morte
celular, tecidual ou de sistemas biolgicos. Tem-se como exemplo, o cido
fluoractico (CH2-F-COOH), usado como rodenticida e que atua no organismo
tomando o lugar do cido actico no ciclo do cido ctrico. Os processos
metablicos desenvolvem-se at formao de cido fluoroctrico (no lugar do
cido ctrico). Este produto anormal vai inibir a aconitase, enzima responsvel
pela etapa seguinte do ciclo. Assim, h formao de um substrato anormal,
txico, que impede o desenvolvimento do ciclo do cido ctrico, indispensvel
para o suprimento de energia de quase todos os organismos vivos.
3.1.4) Seqestro de metais essenciais
Vrios metais atuam como cofatores em vrios sistemas enzimticos, como
por exemplo os citocromos, envolvidos nos processos de oxi-reduo.
Destacam-se o Fe, Cu, Zn, Mn e Co. Alguns agentes txicos podem atuar
como quelantes, ou seja, se ligam ou seqestram os metais, impedindo que
eles atuem como cofatores enzimticos. Desta maneira, o processo biolgico,
no qual estas enzimas atuam, ficar prejudicado ou mesmo interrompido. o
caso dos ditiocarbomatos. Eles se complexam com metais, formando
complexos lipossolveis e impedindo a ao enzimtica. Este o mecanismo
de ao do Antabuse, medicamento usado, por muitos, no tratamento do
alcoolismo.

3.2) Interferncia com o transporte de oxignio

A hemoglobina (Hb), pigmento responsvel pelo transporte de O2 dos
alvolos para os tecidos e da retirada de CO2 dos tecidos para os pulmes,
constituda de uma parte protica (globina) e outra no protica (heme). No
heme tem-se basicamente, uma molcula de Fe2+ ligada a quatro molculas
de protoporfirina. Este complexo ferroprotoporfirnico o responsvel pela
colorao vermelha da Hb. Quimicamente o ferro possui 6 valncias de
coordenaes, portanto no heme restam ainda 2 coordenaes livres. Uma
delas ligada globina formando a hemoglobina e a outra (a 6 a) ligada ao

O2, dando origem a oxemoglobina (HbO 2 ), que o pigmento normal do

sangue.
Existem alguns agentes txicos que alteram a hemoglobina e,
consequentemente, impedem o transporte de oxignio. So trs os pigmentos
anormais do sangue, ou seja, formas de Hb que so incapazes de transportar
O 2.
-Carboxemoglobina (HbCO) que pode ser causada pelo CO, diclorometano,
etc)
- Metemoglobina (MeHb) resultante, por exemplo da exposio a anilina,
acetaminofeno, nitritos,etc;
- Sulfemoglobina (SHb), a droga oxidante metaclorpramida exemplo de
um agente sulfemoglobinizante.
No caso de carboxemoglobina, o monxido de carbono, que tem 210 vezes
mais afinidade pela Hb do que o O2, liga-se sexta coordenao do Fe2+,
deslocando o O2. Esquematicamente, tem-se:
HbO 2 + CO

HbCO + O2

A HbCO incapaz de exercer a funo respiratria e efeitos decorrentes

desta hipoxia vo aparecer no indivduo exposto.
Existem vrios xenobiticos tais como os nitritos, anilina e acetaminofem,
que uma vez no sangue, oxidam os ons Fe2+ da hemoglobina, formando a
chamada metemoglobina. O Fe3+ da MeHb perde a capacidade de se ligar na
6a coordenao com o O2 e, assim, este pigmento no cumprir, tambm, a
funo respiratria. Dentro deste grupo de agentes txicos, que agem
interferindo com o transporte de O2, esto, ainda, os agentes que provocam a
lise das hemcias. Com a hemlise, a hemoglobina extravasada para o meio
extracelular, onde desnaturada. Haver assim menor quantidade de Hb e
logicamente menor transporte de O2 para os tecidos.
3.3) Interferncia com o sistema gentico
Ao mutagnica e carcinognica
Certas substncias qumicas tem a capacidade de alterarem o cdigo
gentico, ou seja, de produzirem um erro no cdigo gentico. Se esta
alterao ocorrer nos genes de clulas germinativas, ou seja, que sero
enviadas prxima gerao (clulas hereditrias), pode ocorrer um efeito
mutagnico. Este efeito possui um perodo de latncia relativamente grande,
se manifestando apenas algumas geraes aps a ao. Isto porque,
geralmente, a mutao ocorre em genes recessivos e s ser manifestada se
houver o cruzamento com outro gen recessivo que tenha a mesma mutao.
Logicamente, os estudos que comprovam esta ao so bastante difceis de
serem realizados e avaliados, o que faz com que, atualmente, poucas
substncias sejam, comprovadamente, mutagnicas. O mais comum existir
suspeita de aes mutagnicas.

A ao carcinognica vem sendo mais intensamente estudada nos ltimos

anos. Nesta ao os xenobiticos provocam alteraes cromossmicas que
fazem com que as clulas se reproduzam de maneira acelerada. Esta
reproduo incontrolvel no produzem clulas harmnicas e perfeitas.
Embora o mecanismo exato de desenvolvimento do cncer no seja
totalmente conhecido, aceita-se que esta ao ocorra em duas fases distintas:
a converso neoclssica ou fase de iniciao e o desenvolvimento neoclssico
ou promoo. Na fase de iniciao, um xenobitico ou produto de
biotransformao promove a alterao a nvel do DNA. Esta leso origina a
chamada clula neoplstica, que atravs da interferncia de outras
substncias qumicas e/ou fatores, muitas vezes desconhecidos, sofre
processo de crescimento, originando o neoplasma e o cncer instalado. Entre
as duas fases do processo carcinognico existe, geralmente, um perodo de
latncia que pode variar de meses a anos.
A teratognese resulta de uma ao txica de xenobiticos sobre o sistema
gentico de clulas somticas do embrio/feto, levando ao desenvolvimento
defeituoso ou incompleto da anatomia fetal.
(NOTA: neoplasma: massa ou colnia anormal de clulas. A neoplasia pode
ser benigna (tumor no invasivo) ou maligna).

3.4) Interferncia com as funes gerais das clulas

3.4.1) Ao anestsica
Um dentre os vrios mecanismo que podem resultar em efeito
anestsico, a interferncia com o transporte de oxignio e nutrientes para as
clulas biolgicas. O xenobitico se acumula na membrana de certas clulas,
impedindo que haja a passagem destes nutrientes. As clulas mais sensveis
essa deficincia so as do SNC, por necessitarem de maior quantidade
destes compostos essenciais.
3.4.2) Interferncia com a neurotransmisso
Na realidade, muitos dos mecanismos agrupados aqui podem decorrer de
inibio enzimtica, ou seja poderiam ser classificados no primeiro grupo de
ao txica citadas no item 3.3.1.
Vrios agentes txicos atuam alterando a transmisso neurolgica atravs
da interferncia com os neurotransmissores envolvidos. esta interferncia
pode ocorrer a nvel pr-sinptico, sinptico e/ou ps-sinptico. Exemplos:
bloqueio dos receptores de diferentes sinapses (curare);
inibio do metabolismo dos neurotransmissores (praguicidas
organofosforados);
bloqueio na sntese ou metabolismo de neurotransmissores (mercrio);
inibio da liberao da liberao pr-sinptica dos neurotransmissores
(toxina botulnica - Clostridium botulinum);
estimulao da liberao de neurotransmissores (anfetamina)

 bloqueio da recaptura dos neurotransmissores para as clulas prsinpticas (imipramina, anfetamina).

3.5) Irritao direta dos tecidos

Os xenobiticos que tem ao irritante direta sobre os tecidos, reagem
quimicamente, no local de contato, com componentes destes tecidos.
Dependendo da intensidade da ao pode ocorrer irritao, efeitos custicos
ou necrosantes. Os sistemas mais afetados so pele e mucosas do nariz,
boca, olhos, garganta e trato pulmonar. Destacam-se neste grupo, a ao dos
gases irritantes (fosgnio, gs mustarda, NO2, Cl) e lacrimognicos (acrolena,
Br, Cl). Outra ao irritante de tecidos a dermatite qumica. Os xenobiticos
que apresentam esta ao txica (substncias vesicantes como as mustardas
nitrogenadas ou agentes queratolticos como o fenol), lesam a pele e facilitam
a penetrao subsequente de outras substncias qumicas.

BIBLIOGRAFIA
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