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IMOBILIZAO DE ENZIMAS
1. INTRODUO
Considerando-se uma clula intacta qualquer, temos centenas de macromolculas
(cidos nuclicos, protenas, lipoprotenas, polissacardeos, etc) dispostas em um
volume pequeno , o que provoca um forte interrelacionamento entre elas. Dentre
as mais de 2000 enzimas conhecidas, a maioria delas est associada a
membranas.
As enzimas em seu meio natural agem como catalisadores heterogneos , isto ,
encontram-se insolubilizadas.
Na dcada de 60 surgiu a idia de ligar as enzimas, quer por meios qumicos quer
por meios fsicos, a suportes inertes insolveis. Deve-se a Katchalski a introduo
dos primeiros suportes inertes teis na preparao das enzimas insolubilizadas
(imobilizadas).
2 MTODOS DE IMOBILIZAO
Podem ser classificados em quatro tipos bsicos:
-

separao por membrana;

entrelaamento em polmeros;

adsoro;

- ligaes covalentes.
2.1
SEPARAO POR MEMBRANA
A enzima est fisicamente separada do meio de reao, atravs de uma pelcula
(membrana) semipermevel, e que pode ser subdividida em:
A. Encapsulamento
Enzima imobilizada no interior de esferas, cujo envoltrio constitudo por um
polmero geliforme e semipermevel.
Procedimento:
Dissolver a enzima em soluo aquosa de alginato de sdio que gotejada em
uma soluo aquosa contendo ons Ca +2 , por exemplo.
Quando a gota de alginato de sdio entra em contato com a soluo salina, formase uma esfera, dentro dela as molculas de enzima ficam retidas, cuja membrana
constituda pelo polmero de alginato de clcio.

B. Membranas fibrosas semipermeveis


Consiste no confinamento da enzima numa dada regio da soluo, atravs de
uma membrana semipermevel (dimetro dos poros da ordem de 200 m).
Neste caso no h riscos de desnaturao de enzimas pois no so empregados
reagentes qumicos.
C. Microencapsulamento
Preparao de um sistema emulsionado, onde a enzima est confinada no interior
de micelas.
Por exemplo, misturando-se num recipiente a soluo aquosa de enzima,
hexametilanodiamina, fase orgnica, emulsificante, e cloreto de sebacila; obtmse gotculas da soluo enzimtica, envolvidas por uma pelcula semipermevel
resultante da polimerizao da diamina com o cloreto de sebacila.
O tamanho das microcpsulas e as propriedades da membrana so determinadas
pelos fatores:
- composio da mistura;
- concentrao dos reagentes:
- agitao e tempo de reao.
Em mdia gotcula dimetro da ordem de 80 m, tendo a membrana 0,02 m
de espessura e seus poros dimetro de aproximadamente 35 A.
D. Entrelaamento em triacetato de celulose
Considerando-se um caso particular do processo de microencapsulao e que
consiste do seguinte:
A soluo aquosa contendo a enzima dispersa numa soluo de triacetato de
celulose em cloreto de metileno. A mistura extrudada atravs de finos orifcios e
recolhida num recipiente contendo tolueno.
Como o triacetato de celulose insolvel neste solvente, forma-se ento um
cogulo fibroso em cujas fibras as molculas da enzima ficam retidas.
2.2

ENTRELAAMENTO EM POLMEROS

Consiste no aprisionamento das molculas de enzimas entre as malhas de um


polmero geliforme, o qual preparado da seguinte maneira:
Em um recipiente so colocados: a enzima, um agente bifuncional (exemplo,
bisacrilamida), um monmero (por exemplo, 2-hidroximetilamilamida), uma
substncia geradora de radicais livres (por exemplo, persulfato de amnio).
Depois de um certo tempo ocorre a gelificao, e em seguida o gel dividido em
partculas de dimenses conhecidas.
A eficincia do entrelaamento, a permeabilidade do gel e sua resistncia
mecnica dependero da composio da mistura reagente e da natureza do
monmero utilizado.

2.3

ADSORO

Consiste da unio entre a molcula enzimtica e um suporte inerte. Os suportes


para adsoro podem ser orgnicos (derivados da celulose, DOWEX) e
inorgnicos (celite, bentonita e alumina).
2.4. FORMAO DE LIGAES COVALENTES
A enzima ligada ao suporte inerte mediante ligaes qumicas covalentes, que
so, estabelecidas entre os amino grupos primrios e o anel fenlico dos aa
constituintes da enzima com os grupos reativos do suporte (-CHO; dentre outros).
Em geral, as reaes so feitas em meio aquoso, temperatura entre 0 e 25 o C e
o pH prximo a neutralidade.
A escolha das condies vai depender da estabilidade da enzima e do suporte
frente ao pH de formao das ligaes covalentes, assim como da estabilidade
das ligaes suporte - enzima frente ao pH de esterilizao do sistema
imobilizado.
3 TIPOS DE SUPORTE
Muitos materiais inertes podem ser utilizados. A natureza fsica desses suportes
pode variar, desde materiais geliformes at superfcies slidas (lminas de ao,
prolas de vidro, por exemplo) recobertas com alguma substncia capaz de
interagir com a enzima.
A tabela 1 mostra alguns exemplos de materiais inertes usados como suportes.
A escolha do mtodo de imobilizao e do tipo de suporte depender, de dois
fatores:
a. das caractersticas particulares da enzima;
b. das condies de uso de enzima imobilizada.
Dado a variabilidade destes fatores, no existe um mtodo geral de imobilizao
e nem um suporte universal.
Podemos proceder desta forma:
Imobilizar a enzima em vrios suportes por meio de diferentes mtodos,
avaliando-se a atividade do sistema imobilizado.
O binmio suporte mtodo mais adequado ser aquele que apresentar maior
atividade aps a imobilizao.
4 EFEITOS CAUSADOS PELA IMOBILIZAO
Ao se agregar uma enzima a um material inerte, teremos algum tipo de efeito
sobre sua atividade cataltica, a qual est relacionada com a estrutura da
macromolcula.
Os efeitos mais importantes que a imobilizao pode causar so:
Efeitos estricos e conformacionais

No so quantificados e so minimizados pela garantia da manuteno do mtodo


testado e escolhido.
Partio (Efeitos do microambiente)
Surge quando a enzima imobilizada em suporte com carga positiva ou negativa.
O campo eltrico gerado pelo suporte ao redor da enzima ir tender a dividir o
ambiente.
Efeitos de difuso
Tudo que dificultar a entrada de substrato ou sada de produto limita o uso do
sistema imobilizado.
5 VANTAGENS E DESVANTAGENS DA IMOBILIZAO
Como vantagem:
- reaproveitamento do catalisador;
- uso da enzima em processo contnuo;
- aumento da estabilidade.
Como desvantagens:
- aleatoriedade da unio suporte enzima;
- inexistncia de um mtodo geral de imobilizao;
- a enzima a ser imobilizada deve ter alto grau de pureza.