1

Sumrio

Pgina

1. Introduo
2.
Espectrometria no Ultravioleta
3

3. Espectrometria no Infravermelho

4.

Espectrometria de Massa
4

5.

Espectrometria de Ressonncia Magntica Nuclear (RMN)

4

6.

Espectrofotmetro
5

7. Instrumentao

7.1.

Fontes de radiao UV-VIS

7.2.

Monocromadores

7.3.

Cubetas

7.4.

Detectores

8. Espectrofotmetro de absoro atmica

13

8.1.

Lmpada de catodo oco

13

8.2.

Lmpada de descarga EDL

14

8.3.

Chopper

14

9. Concluso

15

10. Bibliografia

16

1. Introduo
A espectrofotometria o mtodo de anlises ptico mais usado nas
investigaes biolgicas e fsico-qumicas. O espectrofotmetro um
instrumento que permite comparar a radiao absorvida ou transmitida por uma
soluo que contm uma quantidade desconhecida de soluto, e uma
quantidade
conhecida
da
mesma
substncia.
Todas as substncias podem absorver energia radiante, mesmo o vidro que
parece completamente transparente absorve comprimentos de ondas que
pertencem ao espectro visvel. A gua absorve fortemente na regio do
infravermelho.
A absoro das radiaes ultravioletas, visveis e infravermelhas dependem
das estruturas das molculas, e caracterstica para cada substncia qumica.
Quando a luz atravessa uma substncia, parte da energia absorvida: a
energia radiante no pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida.
A cor das substncias se deve a absoro de certos comprimentos de ondas
da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos
apenas
aqueles
comprimentos
de
ondas
no
absorvidos.
Espectrofotometria de absoro atmica o mtodo de anlise usado para
determinar qualitativamente e quantitativamente a presena de metais. O
mtodo consiste em determinar a presena e quantidade de um determinado
metal em uma soluo qualquer, usando como princpio a absoro de
radiao ultravioleta por parte dos eltrons que, ao sofrerem um salto quntico
depois de devidamente excitados por uma chama de gs acetileno a 3000
graus Celsius, esses devolvem a energia recebida para o meio, voltando assim
para a sua camada orbital de origem. A energia devolvida na forma de um fton
de luz, por sua vez, absorve a radiao ultravioleta emitida pela fonte
especfica (ctodo oco) do elemento qumico em questo. Dessa forma,
eltrons que esto contidos na soluo, e que sofrem tambm um salto
quntico e que no pertencem ao mesmo elemento que constitui o ctodo oco
que est sendo usado no momento, no sero capazes de causar uma
interferncia, isso porque eles absorvero apenas radiao com comprimento
de onda referente ao elemento qumico do qual fazem parte.
Alguns termos bsicos devem ser conhecidos:

Comprimento de onda (l) - Distncia medida ao longo a linha de propagao

entre dois pontos equivalentes que esto em fases adjacentes da onda.
Freqncia (u) - Nmero de ciclos por unidade de tempo.
Transmitncia (T) - Razo entre a energia radiante transmitida por uma
substncia e a energia radiante incidente nessa substncia: T = E t/Ei
Absorbncia (A) - log (1/T)
Absortividade molar (a) - Relao descrita pela absorbncia dividida pelo
produto da concentrao C da substncia (amostra) e o comprimento ptico (c)
percorrido pela radiao: a = A/(C . c )

2. Espectrometria no Ultravioleta
Quando a radiao eletromagntica da regio do UV passa atravs de um
composto que tm ligaes mltiplas (duplas e triplas), uma parcela da
radiao , usualmente absorvida pelo composto. A quantidade de radiao
absorvida depende do comprimento de onda da radiao e da estrutura do
composto. A absoro ocorre pela subtrao de energia do feixe de radiao
provocada pela excitao dos eltrons de orbitais de baixa energia para
orbitais de energia mais elevada. A espectrometria no UV, portanto,
provocam transies eletrnicas. Logo, para que um composto possa ser
detectado com radiaes na regio do UV, necessrio que esse composto
possua eltrons capazes de serem excitados, ou seja, eltrons pi ou
eltrons livres (no-ligantes). Os eltrons sigma no podem ser excitados,
porque a transio de eltrons de uma ligao sigma acarretaria a quebra
da ligao e, conseqentemente, a perda da estrutura caracterstica do
composto.

3. Espectrometria no Infravermelho
Os compostos orgnicos tambm absorvem radiaes na regio do
infravermelho (IV) do espectro. A radiao infravermelha no tem energia
suficiente para excitar os eltrons e provocar transies eletrnicas, mas ela
faz com que os tomos ou grupos de tomos vibrem com maior rapidez e
com maior amplitude em torno das ligaes covalentes que os unem. Estas
vibraes so quantizadas e, quando ocorrem, os compostos absorvem
energia IV em certas regies do espectro. Nas vibraes, as ligaes
covalentes comportam-se como se fossem pequenas molas unindo os
tomos. Quando os tomos vibram, s podem oscilar com certas
freqncias, e as ligaes sofrem vrias deformaes. Quando a ligao
absorve energia, ela sofre alteraes e, ao retornar ao estado original, libera
essa energia, que ento detectada pelo espectrmetro.
As molculas podem vibrar de muitos modos. Dois tomos unidos por uma
ligao covalente podem efetuar vibraes de estiramento dessa ligao,

como se fosse uma mola que estica e retorna ao tamanho original. Trs
tomos tambm podem efetuar diferentes vibraes de estiramento e
alterao dos ngulos de ligao, em vrios planos do espao. No entanto,
as vibraes de estiramento so as mais importantes.

4. Espectrometria de Massa
Simplificadamente, o espectro de massa funciona da seguinte maneira: Um
feixe de eltrons de alta energia bombardeia a amostra, em fase gasosa, e o
aparelho detecta e registra os fragmentos gerados pelo impacto dos
eltrons. Da, a partir do valor da massa molecular de cada um dos
fragmentos, montamos a molcula, como um quebra-cabea. Os fragmentos
gerados podem ser ons, radicais ou molculas neutras. No aparelho so
detectados apenas os fragmentos catinicos (ons positivos), chamados
ons moleculares, de carga unitria. Estes ons possuem alta energia e so
capazes de romper ligaes covalentes, fragmentando-se em pedaos
menores. A partir de um fragmento, portanto, podem surgir vrios outros
fragmentos menores.

5. Espectrometria de Ressonncia Magntica Nuclear (RMN)

O ncleo de certos elementos e istopos comporta-se como se fossem
ms girando em torno de um eixo. Tem esta propriedade alguns ncleos
como o do hidrognio comum e o do carbono 13. Quando se coloca um
composto contendo tomos de 1H ou de 13C num campo magntico muito
forte e simultaneamente se irradia o composto com energia eletromagntica,
os ncleos podem absorver energia num processo denominado ressonncia
magntica. A radiao utilizada no espectrmetro de RMN a
radiofreqncia (rf), de comprimento de onda altssimo (da ordem de
metros) e baixa energia (da ordem de 10 -6 kcal/mol). A absoro desta
radiao pelos ncleos desses elementos quantizada e produz um
espectro caracterstico. Esta absoro no ocorre a menos que a freqncia
da radiao e a intensidade do campo magntico tenham valores bem
definidos. Os espectrmetros permitem aos qumicos medir a absoro de
energia pelos ncleos de 1H e de 13C, alm do ncleo de outros elementos.
Estes instrumentos trabalham com um campo magntico muito forte, capaz
de provocar at a morte de uma pessoa que tenha uma ponte de safena e
trabalhe muito perto do aparelho de RMN.

Embora o 13C corresponda a apenas 1,1% do carbono natural, o fato do

ncleo desse istopo do carbono provocar um sinal de RMN tem grande
importncia para a anlise de compostos orgnicos. O principal istopo do
carbono, o 12C, com abundncia natural de cerca de 89,9% no tem spin
magntico, e por isso no gera sinais de RMN. De certa maneira, os
espectros de RMN 13C so, usualmente, menos complicados que os
espectros de RMN 1H e mais fceis de interpretar. Devido ao fato de o 13C
existir naturalmente em porcentagem to baixa, os sinais de RMN gerados
pelos seus ncleos no poderiam ser visualizados no espectro. Porm, a
tcnica utilizada nos aparelhos de RMN 13C consiste em irradiar um pulso
curto e potente de radiofreqncia, que excita todos os ncleos de 13C
existentes na amostra. Os dados so digitalizados automaticamente e
guardados em computador e uma srie de pulsos repetidos, que acumula os
pulsos, construindo os sinais.
Ao contrrio do espectro de RMN 1H, que necessita apenas algumas
miligramas de amostra, na RMN de 13C preciso de 10 a 200 mg em 0,4 ml
de solvente deuterado. Essa grande diferena necessria para compensar
a baixa porcentagem de 13C, e permitir o acmulo de sinais. Alm disso,
enquanto no espectro de RMN 1H a faixa de absoro magntica dos
prtons varia de 0 a 14 ppm, no espectro de RMN 13C a faixa varia de 0 a
240 ppm.

6. Espectrofotmetro
Um espectrofotmetro um aparelho que faz passar um feixe de luz
monocromtica atravs de uma soluo, e mede a quantidade de luz que foi
absorvida por essa soluo. Usando um prisma o aparelho separa a luz em
feixes com diferentes comprimentos de onda (tal como acontece no arco-ris
com a separao das cores da luz branca). Pode-se assim fazer passar atravs
da amostra um feixe de luz monocromtica (de um nico comprimento de onda,
ou quase). O espectrofotmetro permite-nos saber que quantidade de luz
absorvida a cada comprimento de onda.
Determinar a concentrao de uma espcie em soluo a partir do grfico da
variao de absorvncia (ou transmitncia) em funo da concentrao de
vrias solues-padro.
A preciso dos comprimentos de onda para anlise so chamados de bandas
de passagem, mais comum na ordem de 10nm. O espectro da anlise mais
comum de 360nm 1000nm para a faixa visvel.
A operao de um espectrofotmetro basicamente de iluminar a amostra com
luz branca e calcular o montante de luz que refletido pela amostra em cada
intervalo do comprimento de onda. Tipicamente os dados so medidos para 31
intervalos de comprimento de onda centrados em 400 nm, 410 nm, 420 nm,.....,
700 nm. Isto feito passando-se a luz refletida atravs de filtros de
interferncia ou de grade de difrao que dividem a luz em intervalos
separados de comprimentos de onda. O instrumento calibrado usando-se
uma cermica branca cuja refletncia em cada comprimento de onda seja

conhecida e comparada a uma superfcie que permita uma perfeita difuso. A

refletncia de uma amostra expressa entre 0 e 1 (como uma frao) ou entre
0 e 100 (como uma percentagem). importante compreender que os valores
de refletncia obtidos so valores relativos e, para amostras no fluorescentes,
so independentes da qualidade e quantidade de luz usada para iluminar a
amostra.
Existem trs tipos: o ultravioleta, o infravermelho e o visvel. Um bom
espectrofotmetro tem sempre dois feixes de luz: o de referencia e o que passa
atravs da soluo, colocada em um tubo especial para espectrofotometria. No
final da anlise, estuda-se a faixa de comprimentos de onda onde a absoro
foi maior. Fazendo-se um grfico com solues de concentrao conhecida,
pode-se
interpolar
a
concentrao
da
sua
soluo.
O ultravioleta mais absorvido por ligaes duplas e triplas; o infravermelho
absorvido de qualquer jeito (e, dependendo da regio de maiores ou menores
absorbncias, voc pode definir a estrutura da molcula (ele mais usado para
anlises qualitativas. Normalmente, os qumicos orgnicos se utilizam dos
Espectrofotmetros IV, UV, de massa e o RNM, para elucidar a estruturas das
molculas que eles retiraram de alguma planta.

7. Instrumentao
Um espectrofotmetro constitudo por uma fonte de luz (lmpada), um portaamostra, um monocromador (separa a luz, pode ser um prisma ou grade de
difrao, sendo este ltimo mais comum nos aparelhos modernos) e um
detector (fotoclula, fotodiodo ou vlvula fotomultiplicadora). As figuras abaixo
representam o esquema de instrumentao de um espectrofotmetro de feixe
simples e feixe duplo.

Figura 1: Esquema Bsico de um Instrumento para Medir a Absoro

Sistema de feixe simples

Figura 2: Sistema de Feixe Duplo

7.1 Fontes de radiao UV-VIS

7.1.1. Lmpada de Tungstnio e Tungstnio-Halognio
Incandescente, produz emisso continua na faixa e 320 a 2500nm. O invlucro
de vidro absorve toda radiao abaixo de 320nm, limitando o uso da lmpada
para o visvel e infravermelho.
.

7.1.2. Lmpada de Deutrio

a mais usada para emisso de radiao ultravioleta. Consiste em um par de
eletrodos fechados em um tubo de quartzo ou vidro, com janela de quartzo,
preenchido com gs hidrognio ou deutrio. Aplicando alta voltagem, produz-se
uma descarga de eltrons que excitam outros eltrons gasosos a altos nveis
energticos. Quando os eltrons voltam a seus estados fundamentais, emitem
radiao contnua de 180 a 370nm.

7.1.3. Laser
Pelo processo de emisso estimulada, os lasers produzem uma enxurrada de
feixes muito estreitos e intensos de radiao. Todas as ondas procedentes ao
material emissor esto em fase entre si, e, por isso, praticamente no
apresenta disperso quando se propaga.

Isso permite uma concentrao de energia num ponto muito pequeno, mesmo
que esteja numa distncia considervel.
.

7.2. Monocromadores
So dispositivos essenciais dos espectrofotmetros e tem como funo a
seleo do comprimento de onda e que se tem interesse para a anlise.
constitudo de uma fenda de entrada de um elemento de disperso de radiao
e de uma fenda de sada. O elemento de disperso pode ser um prisma ou
uma rede de difrao.

7.2.1. Monocromador prismtico

A radiao policromtica procedente da fonte de radiao passa pela fenda de
entrada e incide sobre a face de um prisma, sofrendo desvio. Os prismas de
quartzo so indicados para trabalhar na regio ultravioleta, embora tenham
mais disperso que o vidro. Na regio do visvel so empregados primas de
vidro. Os prismas de quartzo apresentam desvantagem de serem altamente
refringentes e oticamente ativos.

7.2.2. Monocromador reticular

O principal elemento de disperso dos monocromadores reticulares a rede de
difrao, que consiste em uma placa transparente com inmeras ranhuras
paralelas e de mesma distncia. As redes de difrao dispersam a radiao
policromtica baseadas no fenmeno da interferncia, e a disperso resultante
desta rede linear. As redes de difrao possuem resoluo melhor que os
prismas e podem ser utilizadas em todas as regies espectrais.

7.3. Cubetas
So usados como recipientes cubas ou cubetas retangulares de vidro ou
quartzo. As cubetas de vidro so usadas quando se trabalha na regio do
visvel. Para a regio do ultravioleta, devem-se usar as cubetas de quartzo, que
so transparentes radiao ultravioleta, pois o vidro absorve a mesma.

Uma cubeta ideal deve ser de 1 cm, para simplificar os clculos da expresso
da Lei de Beer. As cubetas tambm podem ter dimenses diferentes, e esse
dado deve ser considerado na hora do clculo.
Para aplicaes industriais, como, por exemplo, no controle de qualidade de
lotes de produo, utiliza-se um sistema automatizado em que as amostras
circulam em srie em cubetas adequadas. Esse sistema chamado de anlise
por injeo de fluxo ou FIA (do ingls Flow Injection Analysis)

Figura 3: Cubetas descartveis

7.4. Detectores
Os detectores em um espectrofotmetro so dispositivos capazes de fornecer
informaes fsicas de um sistema quanto intensidade de radiao incidida
no mesmo, ou de modo indireto, a intensidade absorvida por uma amostra,
convertendo esta intensidade de radiao em um sinal eltrico.
Em princpio, um detector consiste de trs componentes: uma parte receptora
sensitiva determinada caracterstica do sistema, um transdutor para converter
a informao obtida em um sinal eltrico e um amplificador de sinal. Levandose em conta o tipo de medida a que se destinam, podem-se classificar os
detectores como detectores diretos ou indiretos. Os detectores diretos so
aqueles que captam diretamente a incidncia da radiao transmitida a partir
da amostra, j os indiretos so aqueles que captam um segundo ou terceiro
sinal sem ser diretamente a radiao incidida na amostra, como temperatura ou
sinal sonoro.
Os detectores podem ser das mais variadas formas, variando de acordo com
sua finalidade e esquema de montagem do espectrofotmetro.

7.4.1. Detector Piroeltrico

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Certos cristais dieltricos apresentam polarizao dieltrica espontnea.

Quando o momento de dipolo eltrico for dependente da temperatura, o
material pode ser usado como um sensor. Este detector construdo na forma
de um capacitor e as cargas induzidas nas duas faces do cristal pelos dipolos
internos estabelecem uma corrente ou diferena de potencial que pode ser
medida por um circuito externo. A Figura 4 ilustra, esquematicamente, um
detector piroeltrico.

Figura 4: Representao esquemtica de um sensor piroeltrico.

7.4.2. Bolmetro
Bolmetros compreendem basicamente de um termistor, isto , de um
dispositivo cuja resistncia eltrica varia com a temperatura. Pode ser
construdo tanto a partir de metais quanto com semicondutores que
apresentem dependncia significativa da resistncia eltrica com a
temperatura. A utilizao dos bolmetros se d geralmente na regio do
infravermelho, na qual o detector pode facilmente interpretar a variao de
radiao incidente como uma variao de temperatura na superfcie do mesmo,
que conseqentemente ocasiona uma variao na sua resistncia. A Figura 5
ilustra, qualitativamente, essa dependncia entre dois tipos de bolmetros.

Figura 5:Comparativo resistncia em funo da temperatura

7.4.3. Fotodiodo

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Consiste basicamente em uma juno p-n, onde ocorre a formao de uma

zona de transio entre uma regio de material semicondutor, cuja
condutividade eltrica dominada por portadores de carga tipo n (eltrons), e
uma regio cuja condutividade dominada por portadores de carga tipo p
(buracos). A largura w e a simetria dessa regio dependem dos processos de
fabricao e dos materiais envolvidos. Se a concentrao de portadores,
eltrons, por exemplo, varia lentamente ao longo da distncia w relativamente
ampla, entre o valor mximo do lado n e o mnimo do lado p, a juno
chamada gradual.
A luz incidente no fotodiodo interage diretamente na regio p onde os ftons
desta radiao, de acordo com sua intensidade, preenchem os buracos que
no permitiam a passagem da corrente eltrica. Conectando as extremidades
do fotodiodo a um sistema com um voltmetro observa-se a variao da
intensidade da radiao de acordo com a variao da tenso a qual o foto
diodo submetido.

7.4.4 Fotomultiplicadoras
As fotomultiplicadoras, ou tubos fotomultiplicadores, so tubos de vidro sob
vcuo, contendo um foto-catodo (negativo), recoberto por material que absorve
a luz e emite eltrons, que so acelerados em direo a um nodo (positivo),
baseados no princpio do efeito fotoeltrico. No caminho, estes eltrons se
chocam com dinodos que esto progressivamente com potenciais mais altos
(Fig. 6), e em cada um destes um eltron desloca de 3 a 4 novos eltrons, que
so acelerados at o prximo dinodo. Esse processo pode ser repetido de dez
a quinze vezes. A multiplicao por etapas depende tambm da voltagem
aplicada, o que ocasiona uma amplificao de at 300 vezes. Desta maneira, a
luz incidente permite a passagem de uma corrente eltrica que pode ser
medida eletronicamente. O fator de amplificao extremamente sensvel
mudanas na voltagem (cerca de 1kV), que precisa ser altamente estabilizada.

Figura 6:Esquema de um tubo fotomultiplicador

7.4.5 Microfones
Utilizados na tcnica PAS (Photo Acustic Spetroscopy) os microfones captam
um sinal sonoro emitidos pela amostra contida na clula fotoacstica (fig. 7), a
qual absorve a radiao incidente, transformando em um sinal eltrico atravs

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de induo eletromagntica. A vantagem dos microfones em ralao a outros

detectores, Bolmetro, por exemplo, o tempo de resposta, alm de poder
receber um sinal em diversas freqncias,

Figura 7: Esquema de uma clula fotoacstica

7.4.6- CCDs
Iniciais do termo em ingls Charge Coupled Device (dispositivo de carga
acoplada), os CCDs (Fig. 8) criados inicialmente para atuarem como um chip
de memria (1969) mostrando ser um excelente sensor ptico, sendo utilizado
como detector em algumas tcnicas de espectroscopia.
O funcionamento dos sensores CCDs baseia-se no efeito fotoeltrico. Algumas
substncias tm a propriedade de absorver ftons e libertar no processo um
eltron. O silcio constitui a matria prima para a construo de um CCD. Um
CCD tpico consiste numa placa quadrada ou retangular de silcio com 125 a
500 micrmetros de espessura e alguns milmetros de comprimento. Nesse,
implantada uma rede de eletrodos que capturam e analisam os eltrons
gerados pelo efeito fotoeltrico. Cada trio de eletrodos atua como uma ratoeira
eletrosttica, acumulando em seu redor os eltrons gerados na placa de silcio.
O eletrodo central de cada trio mantm uma carga positiva, enquanto que os
restantes mantm um potencial nulo. Deste modo os eltrons, cuja carga
negativa, se acumulam em volta do eletrodo central medida que a luz incide
no detector. Os trios de eletrodo so dispostos em colunas que cobrem a
totalidade do sensor CCD. As diferentes colunas so isoladas entre si por um
material que gera um potencial negativo permanente ao entrar em contacto
com a placa de silcio, o que evita a contaminao entre colunas. As linhas de
eletrodos consideradas perpendicularmente s colunas so designadas como
filas. Cada trio de eletrodos uma pea fundamental do detector CCD e
corresponde a um elemento da imagem digital final, e designado pixel ou
elemento de imagem. O tamanho fsico do pixel varivel. Existem pixels
retangulares e pixels quadrados.
As suas dimenses variam habitualmente entre 6 e 27 micrmetros.

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Figura 8:Exemplo de um CCD

8. Espectrofotmetro de Absoro Atmica

Em espectrofotmetro de Absoro atmica so utilizados, alm do
monocromador e do detector, lmpadas de catodo oco HC ou lmpada de
descarga EDL e um Chopper. Ilustrado na figura 4.

Figura 9: Espectrofotmetro AA

8.1. Lmpada de catodo oco

Este de tipo de fonte dever produzir a emisso de linhas do elemento do
catodo.
Lmpadas multielementares esto disponveis, mas limitadas.
Nem todos os metais so adequados para catodo e devem ter as seguintes
caractersticas: ser um bom condutor, ser relativamente voltil e deve ser capaz
de produzir um catodo. A figura 5 mostra um exemplo de lmpada de catodo
oco.

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Figura 10: Lmpada de catodo oco

8.2. Lmpada de descarga EDL

uma alternativa a lmpada de catodo oco. Ela contm um sal do metal de
interesse em um tubo selado de quartzo enchido com gs inerte. Um campo
RF usado para excitar o gs e faz com que o metal seja ionizado. Luz intensa
emitida na proporo de 10 a 100 vezes mais que a HCs, mas no so to
estveis como as HCs. Ela est representada na figura abaixo.

Figura 11: Lmpada de descarga

8.3. Chopper

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Um chopper usado para prover um sinal modulado em conjunto com um

mdulo amplificador
Ele reduz rudos da fonte de atomizao e corrige variaes instrumentais
Auxilia a diviso do feixe de luz evitando com isso a necessidade de duas
clulas ou fontes de atomizaes. Figura abaixo mostra um esquema de
modulao de sinal pelo chopper.

Figura 12: Modulao de sinal

9. Concluso
Espectrofotmetros

so

instrumentos

capazes

de

registrar

dados

de

absorbncia ou transmitncia em funo do comprimento de onda. O espectro

de absoro caracterstico para cada espcie qumica, sendo possvel a
identificao de uma espcie qumica por seu espectro de absoro.

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10. Bibliografia
SILVERSTEIN, R. M.BASSLER, G.C.MORRILL,T. C., Identificao espectromtrica
de compostos orgnicos 5 ed., LTC.
VINAD, M. E. C; VINAD, E. R.C, Mtodos espectroscpicos de anlise
quantitativa, editora UFSM.