Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
ETANOL EM TEMPERATURAS
ELEVADAS POR UMA LINHAGEM
DE S. CEREVISIAE
So Paulo
2009
Crisla S. Souza
So Paulo
2009
Crisla S. Souza
Resumo
RESUMO
SOUZA, C. S. Avaliao da produo de etanol em temperaturas elevadas por
uma linhagem de S. cerevisiae. 2009. 155 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia)
Programa de Ps-Graduao Interunidades em Biotecnologia USP/Instituto
Butantan/IPT, So Paulo, 2009.
descontnuo,
descontnuo alimentado
com
vazo constante
Temperaturas
elevadas.
Ciclos
sucessivos
de
fermentao.
Crisla S. Souza
Abstract
ABSTRACT
SOUZA, C. S. Evaluation of ethanol production at high temperatures by a strain of
S. cerevisiae. 2009. 155 f. Doctor thesis (Biotechnology) - Programa de PsGraduao Interunidades em Biotecnologia USP/Instituto Butantan/IPT, So Paulo,
2009.
conditions were: 200 g.L-1 sucrose, 40 g.L-1 inoculum at 30 C, resulting in 82.7 g.L-1
ethanol production with 90% viability after 4 hours of fermentation. Simple batch,
fed-batch of constant flow and pulse fed-batch cultures were compared using strain
63M in mini-reactors containing synthetic medium and the process showed the
highest viability (99%), productivity (18,6 g.L-1.h-1) and high yield (99.2%) was pulse
fed-batch using five decreasing pulses of sucrose at 30 C. The reduction of the
sucrose concentration in the feeding was a strategy that allowed increasing the
temperature of the fermentation up to 37 C without losses in viabilities. An
industrial strain BG1 used in Brazilian distilleries was compared with strain 63M in
fermentations at high temperatures and it was observed that strain 63M produced a
higher final ethanol concentration in shorter time with higher productivity and yield.
Decreasing the inoculum to 20 g.L-1 (dry mass) allowed increasing the fermentation
time at 37 C, from 3 hours to 6 hours, but without increase in viability. Eight
successive cycles of fermentation with reuse of cells of strain 63M were carried out
in synthetic medium in fed-batch process using sucrose pulses (150 g.L-1) and an
inoculum of 20 g.L-1 at 37 C. A gradual and decreasing viability was observed (up
to 30% in the 8 cycle), but the final ethanol was kept constant (70 g.L-1) though the
eight fermentation cycles.
Introduo e Reviso
de Literatura
17
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
18
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Alguns dos alimentos e bebidas produzidos por esse processo fermentativo so:
iogurte, chucrute, picles, cerveja, vinho, entre outros. Por outro lado, a principal
desvantagem da fermentao descontnua o tempo gasto entre as bateladas,
compreendendo a carga e descarga do fermentador, a limpeza, esterilizao e a
reincio do processo (REVIEW, 2007). Outra desvantagem que a fermentao em
processo descontnuo pode levar a baixos rendimentos e/ou produtividades, quando
o substrato adicionado de uma vez s no incio da fermentao exerce efeitos de
inibio, represso ou desvia o metabolismo celular para formao de produtos que
no interessam (CARVALHO e SATO, 2001b). Segundo uma referncia que trata de
um cultivo descontnuo (GRUBB e MAWSON, 1993), os cultivos em bateladas
apresentaram algumas limitaes mesmo para diversas leveduras termotolerantes.
Um rendimento de etanol alto requer alta concentrao inicial de acar e isto gera
uma alta presso osmtica do meio sobre as clulas. A adio gradual de acar no
meio conforme sugerido por Melle-Boinot (SCHIMIDELL e FACCIOTTI, 2001),
minimiza os efeitos da presso osmtica e dos nveis altos de etanol produzido. Por
outro lado, a combinao da alta concentrao de acar com a elevao da
temperatura pode inibir o crescimento (GRUBB e MAWSON, 1993). O efeito da
presso osmtica alta pode ser observado em destilarias brasileiras quando a
concentrao de acar do mosto maior ou igual a 250 g.L-1. Dependendo do nvel
de etanol nas dornas de fermentao, pode ocorrer diminuio da tolerncia
temperatura (DAMORE et al., 1990; LYND et al., 1991). Por outro lado, leveduras
termotolerantes pertencendo principalmente aos gneros de Saccharomyces e
Kluyveromyces tm sido crescidas em condies de bateladas simples produzindo
concentraes de etanol variando entre 4-8% (m/v) (HUGHES et al., 1984;
HACKING et al., 1984; ANDERSON et al.; 1986; SZCZODRAK e TARGONSKI,
1988; DAMORE et al., 1989; BALLESTEROS et al., 1991; BANAT et al., 1992;
FLEMING et al., 1993; BARRON et al., 1994; BRADY et al., 1994; BANAT e
MARCHANT, 1995; BANAT et al., 1996).
Em escala industrial, o processo descontnuo foi adaptado tendo em vista
otimizar a produo, de modo a atender o objetivo de diferentes indstrias
(BORZANI, 1975). No caso das destilarias de lcool, o processo com recirculao de
microrganismo foi utilizado e como o prprio nome indica, usa como inculo o
microrganismo da batelada anterior. Para isto, o meio fermentado centrifugado,
separando assim as clulas e reutilizando-as. No entanto, como h a tendncia de
22
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
invertase
C6H1206 + C6H1206
D-glicose
D-frutose
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Ciclo de Krebs
C6H12O6 + 6O2
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
1998).
levedura
S.
cerevisiae
possui
duas
isoformas
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
efeitos
combinados
de
todas
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
as
variveis
em
teste
sobre
resposta
(MONTGOMERY, 2001).
Seguem, abaixo, algumas definies de alguns termos considerados
relevantes:
a) Fatores ou variveis independentes so caractersticas que podem ser
variadas no sistema; por exemplo, concentrao de reagentes, fora inica,
pH, temperatura, etc;
b) Nveis se referem ao grau ou a faixa de variao que um fator no
processo sofrer; exemplo, pH 2-10, tampo acetato 0,0 a 2 mol.L-1;
c) Respostas ou varivel dependente consiste na varivel que nos
interessa e seus efeitos sobre diferentes fatores; por exemplo, produo de
etanol, viabilidade.
Basicamente a MSR um procedimento de quatro etapas:
a) identificar os fatores: o primeiro passo identificar at 5 fatores que
sejam crticos ao estudo, ou seja os fatores responsveis pela maior
variao no processo. Esta etapa presume que o pesquisador conhea
quais so os fatores que influenciam o processo. Se os fatores no forem
conhecidos, experimentos preliminares devem ser realizados para
identificar os principais fatores;
b) definir os nveis: o segundo passo consiste em definir a faixa em que os
fatores esto sendo estudados. Se a faixa for muito ampla corre-se o risco
de no encontrarmos o ponto timo. Neste caso, um segundo
planejamento com uma faixa mais restrita deve ser realizado;
c) escolher o delineamento experimental apropriado: os delineamentos
estabelecem uma ordem de como os experimentos devem ser realizados.
Ao cobrir toda faixa escolhida para o experimento, enfatizam-se os pontos
mais prximos ao ponto mdio (ponto central), ao mesmo tempo em que
um nmero reduzido de experimentos realizado para validao;
d) anlise dos dados: a quarta etapa consiste em analisar os dados usando
um
programa
computacional
adequado.
As
concluses
desses
Crisla S. Souza
Introduo e Reviso de Literatura
41
Concluses
42
Crisla S. Souza
Concluses
5 CONCLUSES
Otimizao de condies em processo descontnuo
A otimizao das condies visando obter maior produo de etanol e maior
viabilidade em processo descontnuo foi obtida, com sucesso, atravs da
metodologia de superfcie de resposta (MSR), sendo que os resultados previstos
pelo modelo foram confirmados experimentalmente. As melhores condies obtidas
atravs da MSR foram: 200 g.L-1 de sacarose, 40 g.L-1 de inculo a 30 C,
resultando em 82,7 g.L-1 de etanol e 90% de viabilidade aps 4 horas de
fermentao em meio sinttico em processo descontnuo.
Comparao entre os tipos de alimentao
Utilizando-se concentraes de inculo, sacarose e temperatura resultante do
tratamento estatstico, comparou-se o processo descontnuo com o descontnuo
alimentado com vazo constante e por pulsos. A alimentao por 5 pulsos de
volumes decrescentes de sacarose, permitiu obter maior viabilidade, produtividade e
rendimento.
Efeito da temperatura, concentrao de sacarose no processo alimentado por
pulsos
Quando se elevou a temperatura, observou-se que s foi possvel produzir
etanol com valores elevados de viabilidade em temperaturas elevadas quando a
sacarose adicionada foi reduzida para 150 g.L-1 a 37 C e 100 g.L-1 a 40 C.
Comparao das linhagens 63M e BG1
A linhagem 63M foi comparada em temperaturas elevadas com a BG1,
linhagem utilizada nas destilarias brasileiras, e observou-se que a linhagem 63M foi
melhor por produzir maiores quantidades de etanol, maiores produtividades e
rendimentos, independente da quantidade de sacarose.
43
Crisla S. Souza
Concluses
44
Referncias
45
Crisla S. Souza
Referncias
REFERNCIAS
De acordo com:
Crisla S. Souza
Referncias
Crisla S. Souza
Referncias
123
Crisla S. Souza
Referncias
124
Crisla S. Souza
Referncias
125
Crisla S. Souza
Referncias
Crisla S. Souza
Referncias
127
Crisla S. Souza
Referncias
128
Crisla S. Souza
Referncias
Crisla S. Souza
Referncias
LLOYD, D.; MORELL, S.; CARLSEN, H. N.; DEGN, H.; JAMES, P. E.; TOWLANDS,
C. C. Effects of growth with ethanol on fermentation and membrane fluidity of
Saccharomyces cerevisiae. Yeast, v. 9, n. 8, p. 825-833, 1993.
LUONG, J. H. T. Kinetics of ethanol inhibition in alcohol fermentation. Biotechnol.
Bioeng., v. 27, p. 280-285, 1984.
LYND, L. R.; AHN, H. J.; ANDERSON, G.; HILL, P.; KERSEY, D. S.; KLAPATCH, T.
Thermophilic ethanol production - investigation of ethanol yield and tolerance in
continuous culture. Appl. Biochem. Biotechnol., v. 28-9, p. 549-569, 1991.
MAGER, W. H.; VARELA, J. C. S. Osmostress response of the yeast
Saccharomyces. Mol Microbiol., v. 10, n. 2, p. 253-258, 1993.
MAIA, A. B. R. A. Fundamentos de fermentao alcolica. Belo Horizonte: UFMG,
1989. (Apostila do curso de Engenharia Qumica).
MAJARA, M.; O`CONNOR-COX, E. S. C.; AXCELL, B. C. Trehalose - A Stress
Protectant and Stress Indicator Compound for Yeast Exposed to Adverse Conditions.
J. Am. Soc. Brew. Chem., v. 54, n. 4, p. 221-227, 1996.
MARTINI, G.; MIGNONE, C.; ERTOLA, R. Studies in beta-galactosidase production
in transient operation cultures. Biotechnol. Lett., v. 11, n. 8, p. 545-550, 1989.
MATELES, R. I.; BATAT, E. Continuous culture used for media optimization. Appl.
Microbiol., v. 28, p. 901-905, 1974.
MILANESE-RUBILAR, A. A.; MAUGERI, F. F. Modeling alcohol production and cell
viability in cascate reactor with immobilized cells. Rev. Microbiol., v. 21, n. 1, p. 7984, 1990.
MILLER, G. L. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing
sugar. Anal. Chem., v. 31, n. 3, p. 426-428, 1959.
MONTGOMERY, D. G. Design and analysis of experiments. 5th ed. New York:
John Wiley and Sons, 2001.
130
Crisla S. Souza
Referncias
131
Crisla S. Souza
Referncias
Crisla S. Souza
Referncias
133
Crisla S. Souza
Referncias
134
Crisla S. Souza
Referncias
Crisla S. Souza
Referncias
136