INVESTIGAO DE SUBSTNCIA TIPO BACTERIOCINAS EM AMOSTRAS

NO HUMANAS E AMBIENTAIS
Marlia Pinheiro Cavalcante1
Helena de Ftima Silva Lopes1
Ivanaldo Amncio da Silveira1
Elizabeth Cristina Gomes dos Santos1
RESUMO
A resistncia bacteriana aos antimicrobianos tem favorecido a busca por
substncias alternativas que apresentem carter antibacteriano, visando ao
auxlio e tratamento das diversas infeces causadas por patgenos
resistentes. Atualmente, pesquisas esto sendo desenvolvidas com
bacteriocinas, substncias sintetizadas por bactrias, relacionando a
bacteriogenicidade virulncia que alguns micro-organismos possuem e se
so responsveis pela ao competitiva em casos de colonizao e agresso.
O presente trabalho analisou a capacidade de determinadas bactrias, isoladas
de amostras no humanas e ambientais, de produzirem substncias do tipo
bacteriocinas, e sua ao antibacteriana sobre bactrias da mesma espcie e
de espcies distintas, utilizando-se o mtodo de camada dupla com
clorofrmio. Das bactrias-teste, a Pseudomonas aeruginosa, isolada do
sabonete lquido, foi a nica produtora de tal substncia, capaz de inibir as
bactrias reveladoras B. cereus ATCC 11778, E. coli ATCC 25922, S.
Typhimurium ATCC 14028, S. aureus ATCC 29213, S. aureus ATCC 33591 e
P. vulgaris, com diferentes graus de ao. Dessa forma, so necessrios
estudos mais aprofundados para a caracterizao e identificao dessa
substncia, para que possa vir a ser utilizada como provvel recurso
teraputico no tratamento de infeces causadas por patgenos resistentes e
emergentes.

Palavras-chave:

Resistncia

Microbiana.

Bacteriocina.

Atividade

Antibacteriana

ABSTRACT

Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN), Natal RN. Endereo para
correspondncia: Avenida Gustavo Cordeiro de Farias, s/n. Petrpolis. CEP: 59010-180. Natal
RN, Brasil. E-mails: elizabethcristina@ig.com.br;

The bacterial resistance to antimicrobial agents has encouraged the search for
alternative substances that have antibacterial character, seeking aid and
treatment of various infections caused by resistant pathogens. Nowadays,
researches are being developed with bacteriocins, which are substances
synthesized by bacteria, correlating the bacteriogenicidade to the virulence that
some micro-organisms have and if they are responsible by the competitive
action in cases of colonization and aggression. The present work analyzed the
capacity of certain bacteria, isolated in non-human and environmental samples,
of producing bacteriocins-like substances, and its antibacterial action over
bacteria of the same species and of different species, using the method of
double layer with chloroform. From all the analyzed bacteria, the Pseudomonas
aeruginosa, isolated of liquid soap, was the only one producing such substance,
capable of inhibit the revealing bacteria B. cereus ATCC 11778, E. coli ATCC
25922, S. Typhimurium ATCC 14028, S. aureus ATCC 29213, S. aureus ATCC
33591 e P. vulgaris, with different degrees of action. Thereby, further studies
are required for the characterization and identification of this substance, which
might be used as a therapeutic resource in the treatment of the infections
caused by emerging and resistant pathogens.

Key words: microbial resistance, bacteriocin, antibacterial activity

INTRODUO
Desde a descoberta da penicilina em 1928, e a posterior produo e
comercializao dos antibiticos, as doenas infecciosas vm sendo tratadas.
Embora a produo de antimicrobianos seja estimada em cerca de 100.000
toneladas mundialmente, o uso desses medicamentos vem transformando o
comportamento

bacteriano,

pois,

apesar

de

atuarem

contra

diversos

patgenos, muitas estirpes tornaram-se resistentes a vrios antibiticos e

quimioterpicos, produzindo o fenmeno da multirresistncia (NIKAIDO, 2009).
Com o uso extensivo da quimioterapia antimicrobiana, h o declnio da
eficcia teraputica desses frmacos, sendo esse fato previsto h muito tempo,
como

tambm

antimicrobianos

inevitvel.
torna-se

O
mais

desenvolvimento
desafiador,

de

novos

entretanto,

as

frmacos
empresas

farmacuticas preferem investir em mercados mais lucrativos (SANDEBRUINSMA et al., 2008), da a necessidade de se buscar alternativas
teraputicas antibacterianas que atendam s atuais necessidades.

O surgimento de patgenos resistentes aos antibiticos e a crescente

demanda por alimentos seguros, com menos aditivos qumicos, provocou o
aumento do interesse pelas bacteriocinas, peptdeos produzidos por bactrias,
contribuindo, desse modo, para a obteno de novas fontes de compostos
antimicrobianos e melhores estratgias referentes segurana alimentar.
Durante as duas ltimas dcadas, as bacteriocinas foram assunto muito
estudado em todo o mundo por causa de seu grande potencial como
conservantes naturais, evitando o crescimento de bactrias deteriorantes de
alimentos e/ou patognicas; como segunda gerao de antibiticos para lidar
com patgenos que adquiriram resistncia mltipla aos antibiticos tradicionais;
e como probiticos, favorecendo a sade dos seres humanos e de outros
animais (KJOS et al., 2011).
Dentre as bactrias probiticas mais utilizadas para o consumo humano,
esto as cido-lcticas (BAL), como Lactobacillus acidophilus, L. plantarum e
espcies correlatas, alm de espcies de Bifidobacterium e Enterococcus, pois
alm de

proporcionar sabor e

textura

aos alimentos, atuam como

bioconservantes, j que produzem bacteriocinas e outras substncias

antimicrobianas, prevenindo a decomposio dos alimentos (DOLZ, 2008). As
bactrias Gram-positivas produtoras de bacteriocinas, devido a apresentar
atividade antimicrobiana potente contra diversas bactrias deteriorantes de
alimentos e patgenos, tm sido consideradas promissoras para aplicao
como conservante de alimentos, bem como para o tratamento clnico (KJOS et
al., 2011).
Por esses compostos apresentarem mecanismo de ao sobre as
membranas bacterianas, seu emprego como agente teraputico deve ser
avaliado,

sendo

essas

substncias

candidatas

novos

frmacos

antimicrobianos (MILLS et al., 2011).

O estudo realizado aborda a importncia de se pesquisar compostos
microbianos que apresentam capacidade antibacteriana, ampliando, portanto,
as alternativas teraputicas que determinadas substncias podem representar
no combate a patgenos resistentes e emergentes. Avaliando, dessa forma, a
produo de substncias tipo bacteriocinas em amostras no humanas e
ambientais, isoladas de diversas fontes, usando como bactrias reveladoras
amostras de referncia de interesse clnico e alimentar, contribuindo para o

possvel aumento do arsenal teraputico para o combate das infeces

bacterianas.

1. RESISTNCIA MICROBIANA

Os medicamentos so a principal interveno teraputica adotada para a

melhora do quadro clnico de um indivduo, sendo uma necessidade na
orientao das polticas de sade pblica e, dentre esses medicamentos, esto
os antimicrobianos (GURGEL; CARVALHO, 2008). Esses agentes teraputicos
revolucionaram a medicina em muitos aspectos, salvando inmeras vidas,
sendo a sua descoberta um ponto crucial na histria da humanidade (DAVIES;
DAVIES, 2010).
O uso inadequado dos antimicrobianos tem favorecido o surgimento da
resistncia microbiana e sua disseminao, o que tem dificultado o tratamento
de infeces graves, ocasionadas por patgenos multirresistentes, gerando
aumento da mortalidade, morbidade, permanncia hospitalar e custos sade
(GIANNAKAKI; MIYAKIS, 2012).
H relatos da resistncia desde o uso dos primeiros antimicrobianos.
Segundo Lopes (2010, p. 33), at a primeira metade do sculo XX, muitos dos
casos de infeces bacterianas estavam acometidos as altas taxas de
mortalidade, pois escassas eram as alternativas de terapia mdica. Citado
ainda pelo mesmo autor, o uso contnuo de antibiticos, associado s
condies de higiene e saneamento, selecionou micro-organismos capazes de
resistir a diversos frmacos, sendo, portanto, responsvel pela multirresistncia
bacteriana, no qual um nmero expressivo de cepas patognicas multiplicou-se
dentro de ambientes hospitalares.
O fenmeno da resistncia foi observado para vrios frmacos, sendo
vista a adaptao dos micro-organismos a ambientes hostis, criados pelo
homem. Diante disso, esses achados poderiam ser um sinal de alerta para se
promover um uso racional dos insumos teraputicos, no entanto, no o que
ocorre. O uso correto de antimicrobianos fundamental, j que infeces
causadas por patgenos resistentes so mais difceis de ser tratadas, e que o

mau uso desses antibiticos o principal fator responsvel pela seleo de

micro-organismos resistentes (ZIMERMAN, 2010).
Alm do uso abusivo ou irracional desses frmacos, fatores como
prescrio arbitrria, uso de monoterapia, prescries veterinrias, ausncia de
um sistema de vigilncia epidemiolgica da resistncia bacteriana que gere
informaes que remetam a medidas de polticas teraputicas e reguladoras
e a globalizao uma vez que h transmisso de patgenos resistentes de
um pas para outro por intermdio de viajantes infectados por tais cepas,
tambm contribuem para a resistncia (GURGEL; CARVALHO, 2008; BISHT et
al., 2009).
Conforme Antonio et al. (2009), a resistncia ocorre devido aquisio de
genes, pela bactria, que permitem a interferncia no modo de ao dos
frmacos, seja por mutao espontnea do DNA ou por transformao e
transmisso de plasmdeos. Algumas bactrias so capazes de produzir
enzimas que inibem os antibiticos (Beta-lactamases, que inibem a penicilina,
por exemplo), outras sofrem alteraes nas enzimas-alvo (DNA-girase,
topoisomerase IV) ou impedem o acesso dos antimicrobianos a essas enzimas
(expresso de bombas de efluxo associadas a membranas, responsveis por
bombear os frmacos para fora da clula bacteriana).
Em virtude do surgimento de patgenos resistentes a antibiticos, tem
aumentado a preocupao da sade pblica em diversos pases. Embora
medidas tenham sido tomadas para evitar a resistncia microbiana, h uma
necessidade de se buscar por novos agentes antimicrobianos que minimizem
essa problemtica (HASSAN et al., 2012).

2. BACTERIOCINAS

As bacteriocinas so peptdeos antimicrobianos produzidos por bactrias

de natureza ribossmica, que podem apresentar espectro de ao curto,
quando ativo contra bactrias da mesma espcie ou espcies correlatas, e de
amplo espectro, contra bactrias de outros gneros (COTTER, 2012). Exerce

ao bactericida ou bacteriosttica, sendo produzida tanto por bactrias Grampositivas quanto Gram-negativas (NASCIMENTO; MORENO; KUAYE, 2008).
As bacteriocinas produzidas pelas bactrias Gram-positivas no so to
letais quanto as produzidas pelas Gram-negativas, e o seu sistema de
transporte para liberao de bacteriocinas so especficos. Dentre as bactrias
Gram-positivas consideradas grandes produtoras, esto as bactrias lcticas
(BAL), que possuem suas bacteriocinas subdivididas em quatro grupos: classe
I (ou lantibiticas, apresentando lantionina e b-metil lantionina), classe II
(peptdeos de membrana que no contm lantionina; so relativamente
estveis ao calor, sendo subdivididas em classe IIa, IIb e IIc, sendo a primeira
ativa contra a Listeria, a segunda requer dois diferentes peptdeos para ter
atividade, e a terceira apresenta peptdeos com tiol ativado, requerendo
resduos de cistena reduzido para, ento, ser ativa), classe III (so molculas
grandes e termo lbeis) e classe IV molculas complexas, contendo pores
lipdicas, ou de carboidratos, alm da poro proteica (RILEY; WERTZ, 2002;
NASCIMENTO; MORENO; KUAYE, 2008).
Elas variam, geralmente, de 30 a 60 aminocidos, e sua sntese tem sido
relacionada a diversos tipos de bactrias, sendo as bacteriocinas produzidas
por bactrias cido lcticas (BAL) as que vm chamando mais ateno quanto
ao uso seguro em alimentos (MILLS et al., 2011).
Todas essas substncias at ento conhecidas so sintetizadas como pr
peptdeos com uma sequncia N-terminal responsvel por dirigir seu transporte
para fora da clula bacteriana, e uma sequncia C-terminal que sofre
modificaes ps-traduo no seu polipeptdeo precursor. Essas modificaes
podem ser: desidratao nos resduos de treonina ou serina especficos,
resultando em 2,3-dideidroaminocidos; ou ainda adio de grupos tiois de
resduos de cistena s ligaes duplas de alguns aminocidos, gerando
resduos de lantionina e b-lantionina (BRASIL..., 2010).
As colicinas so bacteriocinas produzidas por bactrias Gram-negativas,
sendo a mais estudada a sintetizada pela Escherichia coli. A substncia
produzida pela E. coli codificada por plasmdeos, possuindo trs genes, um
que codifica a toxina (gene da toxina), o que codifica uma protena que confere
imunidade especfica para a clula produtora, se ligando e inativando a toxina
(gene da imunidade), e outro responsvel pela liberao da colicina pela lise da

clula produtora (gene de lise). Essa bacteriocina produzida em situao de

estresse. A sua ao txica abrange desde a formao de poros na membrana
celular, bem como o DNA, RNAr e RNAt, agindo como nuclease. Alm da E.
coli, outras bactrias Gram-negativas so produtoras de bacteriocinas, entre as
quais: Pseudomonas aeruginosa,

que produz as piocinas nucleases,

codificadas pelo cromossomo, e a Serratia marcescens, que tem suas

bacteriocinas codificadas por plasmdeos e cromossomos (RILEY; WERTZ,
2002).
Em razo dos possveis efeitos adversos causados pela adio de
compostos qumicos, como conservantes, em alimentos e pela crescente
demanda por alimentos seguros e minimamente processados, vem-se dando
ateno aos bioconservantes, que so substncias derivadas de microorganismos que inibem o crescimento de outros indesejveis em alimentos. As
bacteriocinas tm sido bastante utilizadas, pois no provocam alteraes
sensoriais e possuem atividade especfica contra determinados patgenos
(VIEIRA, 2011).
Dentre as bacteriocinas mais usadas na indstria alimentcia, destacamse: a nisina, produzida pelo Lactococcus lactis subsp lactis, pediocina PA-1
sintetizada por Pediococcus, lactococcina G, plantaricinas EF, divergicina A,
acidocina B e enterocina AS-48, todas elas atuando sobre a membrana
bacteriana. Como nos ltimos anos tem ocorrido aumento da resistncia
bacteriana aos antibiticos, as bacteriocinas, peptdeos antimicrobianos
catinicos naturais, constituem uma boa alternativa como novos agentes
teraputicos (DOLZ, 2008).

3. MATERIAIS E MTODOS

3.1. Micro-Organismos e Manuteno

As amostras bacterianas isoladas de diferentes origens (Quadro 1) foram

usadas como bactrias-teste, as quais foram analisadas quanto produo de

substncias tipo bacteriocinas. As bactrias utilizadas como reveladoras para a

pesquisa de atividade bacteriocinognica foram: Bacillus cereus ATCC 11778,
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853,
Staphylococcus aureus ATCC 29213, Staphylococcus aureus ATCC 33591,
Salmonella Typhimurium ATCC 14028 e Proteus vulgaris. Lactobacillus
plantarum ATCC 10021, produtora de bacteriocina, foi utilizada como controle
positivo.
Os micro-organismos foram mantidos em gar Nutriente (Himedia) e
Lignires a 4C. Todas as amostras fazem parte da coleo de microorganismos do Laboratrio de Microbiologia Clnica da Faculdade de Farmcia
da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN).
Quadro 1: Relao de bactrias-teste.
BACTRIAS-TESTE
ORIGEM
MO3
AMBIENTAL
MO5
FEZES DE RATO
MO7
CONTAMINANTE DE GELADEIRA
MO10
GUA (POO)
MO12
SABONETE LQUIDO
MO13
CHOURIO (DOCE)
Fonte: Laboratrio de Microbiologia Clnica da UFRN.
3.2. Isolamento das Bactrias em Estudo

As bactrias-teste foram isoladas do ambiente, fezes de rato, chourio

(doce), sabonete lquido, gua (poo) e contaminantes de geladeira, e em
seguida semeadas em gar Infuso de Crebro Corao (gar BHI- Brain Heart
Infusion agar/ Himedia) e incubadas por 24h a 37C. Aps crescimento, as
bactrias foram mantidas de acordo com o item 3.1.

3.3. Identificao das Bactrias-Teste

Os procedimentos realizados para a identificao das bactrias-teste,

tcnica de Gram e provas bioqumicas foram baseados em Koneman et al.
(2008). Para a identificao das bactrias Gram-negativas foram utilizados os
meios de cultura, Trplice Acar Ferro-gar (TSI/Himedia), Sulfeto Indol
Motilidade (SIM/Himedia), Citrato (Himedia), Lisina (Himedia) e Fenilalanina
(Himedia). Para as bactrias Gram-positivas: gar Manitol Salgado (Himedia) e
gar DNase (Himedia), sendo tambm realizadas as provas da catalase e
oxidase.

3.4 Determinao da Produo de Substncia Tipo Bacteriocina, pelo

Mtodo de Camada Dupla, com Clorofrmio

Os inculos bacterianos em estudo com crescimento de 18-24h foram

padronizados segundo a escala 0,5 de McFarland em salina 0,9% estril e
semeadas em gar Muller Hinton (gar MH), com posterior incubao a
37C/24h. Aps esse perodo, as placas foram expostas ao vapor de
clorofrmio (Vetec), por 30 minutos, e entreabertas por 20 minutos para
evaporao do clorofrmio residual. Na segunda etapa do experimento, as
bactrias reveladoras, com o mesmo padro de turbidez das bactrias-teste,
foram adicionadas (200 L) ao gar MH fundido (aproximadamente 45C), e
em seguida sobrepostas ao crescimento das bactrias-teste, com posterior
incubao nas mesmas condies de temperatura e tempo. A interpretao
dos resultados foi obtida pela formao ou no do halo inibitrio ao redor da
bactria-teste (APOLNIO et al., 2007). Para facilitar a visualizao do halo,
adicionou-se ao crescimento bacteriano o cloridrato de 2,3,5-trifeniltetrazlio
(1% p/v, Sigma). Todos os experimentos foram realizados em duplicata.
Em todos os experimentos foi utilizada a bactria L. plantarum ATCC
10012 como bactria de referncia produtora de bacteriocina, a qual foi
semeada em gar tomate (GAR TOMATE..., s.d.) e incubada em
microaerofilia (5% CO2) a 37C/48h.

3.5. Investigao da Produo de Substncia Tipo Bacteriocina na Curva

de Crescimento

A investigao da produo de bacteriocina ao longo da curva de

crescimento foi realizada utilizando-se a bactria produtora, em caldo MH,
caldo BHI e no sabonete lquido. A bactria-teste, aps crescimento de 24h em
gar BHI, foi inoculada em 5,0 mL de caldo Mueller Hinton (MH/ Himedia) e
incubada a 37 C por 24h, em aerobiose. Desta cultura, foi feito um inculo de
0,1 mL em 5,0 mL de caldo MH. Aps 12h de incubao foi adicionado 1,0 mL
da cultura em 99,0 mL de cada meio testado (caldo MH, caldo BHI e sabonete
lquido), sendo considerado neste momento o intervalo de tempo zero. Os
intervalos de tempo estabelecidos para leitura foram: 2, 4, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12,
14, 16, 18, 20, 22 e 24h de crescimento. Em cada intervalo de tempo retirou-se
alquotas destas culturas para semeadura em gar MH e efetuao de leituras
da densidade ptica, em espectrofotmetro (Shimadzu UV-1650PC) a 540 nm.
Durante este procedimento a cultura permaneceu incubada em aerobiose, nas
mesmas condies de tempo e temperatura. A linhagem reveladora
selecionada foi a que apresentou amplo perfil de sensibilidade substncia
antagonista produzida pela bactria-teste, e a que est relacionada com
infeces frequentes na populao.
As mesmas culturas utilizadas na curva de crescimento tambm foram
usadas na avaliao da produo de substncias tipo bacteriocina. Dessa
cultura foram realizados spots em gar MH. Os intervalos de tempo que foram
feitas as revelaes foram os mesmos da curva de crescimento (OLIVEIRA,
1996).

4. RESULTADOS

4.1. Identificao das Bactrias-Teste

Os resultados obtidos aps microscopia dos esfregaos feitos pela

colorao de Gram e pelas provas bioqumicas esto descritos no Quadro 2.
Quadro 2. Caractersticas morfotintoriais e identificao das bactrias-teste.
Bactriasteste

Origem

Caractersticas
Morfotintoriais

Identificao

MO3

Ambiental

Bacilo Gram-negativo

Enterobacter cloacae

MO5

Fezes de rato

Bacilo Gram-negativo

Enterobacter cloacae

Contaminante de

Bacilo Gram-negativo

geladeira
gua (poo)

Enterobacter cloacae

Bacilo Gram-negativo

Enterobacter aerogenes

Sabonete lquido

Bacilo Gram-negativo

Pseudomonas

Chourio (doce)

Coco Gram-positivo

aeruginosa
Staphylococcus aureus

MO7
MO10
MO12
MO13

Fonte: Laboratrio de Microbiologia Clnica da UFRN.

4.2. Determinao da Produo de Substncia Tipo Bacteriocinas, pelo

Mtodo de Camada Dupla, com Clorofrmio

O teste realizado para determinao da produo de bacteriocina mostrou

que somente a bactria-teste P. aeruginosa (MO12) foi capaz de produzir
substncia tipo bacteriocina, apresentando amplo espectro de ao contra as
bactrias reveladoras B. cereus ATCC 11778, E. coli ATCC 25922, S.
Typhimurium ATCC 14028, S. aureus ATCC 29213, S. aureus ATCC 33591 e
P. vulgaris. A bactria mais suscetvel foi o B. cereus, seguido das linhagens
de S. aureus.

O L. plantarum ATCC 10012 inibiu todas as bactrias

reveladoras. Os dados encontram-se descritos na Tabela 1.

Tabela 1. Perfil de produo de substncia tipo bacteriocina, pelo mtodo de

camada dupla com clorofrmio.
B. cereus ATCC 11778

E. coli ATCC 25922

P. vulgaris

P. aeruginosa ATCC 27853

S. Typhimurium ATCC 14028

S. aureus ATCC 29213

S. aureus ATCC 33591

Bactrias Reveladoras

E. cloacae

E. cloacae

E. cloacae

E. aerogenes

P. aeruginosa

+++

40* 1,0

251,0

301,0

530,5

501,0

S. aureus

L. plantarum

+++

+++

+++

+++

+++

320,5

390,5

Bactrias-Teste

ATCC 10012
(+++)- halo em toda a placa; (- )- no inibiu crescimento;( * )- halo inibitrio em
milmetros (mm); EPM (Erro Padro da Mdia).

4.3. Investigao da Produo de Substncia Tipo Bacteriocinas na Curva

de Crescimento

Observou-se que a bactria P. aeruginosa (MO12) em caldo MH e caldo

BHI produziu a substncia tipo bacteriocina a partir do tempo de 24h, perodo
que corresponde ao final da fase exponencial e incio da estacionria (Figura
1). Enquanto que, no sabonete lquido, iniciou a produo no tempo de 16h,
atingindo o pico mximo em 20h. No foi possvel realizar a leitura da
densidade ptica (D.O) do sabonete lquido.

Figura 1- Curva de crescimento da P. aeruginosa (MO12) e produo de

substncia tipo bacteriocina. A) em caldo BHI; B) em caldo MH; C) em
sabonete lquido.

5. DISCUSSO
As bacteriocinas, substncias de curto e amplo espectro de ao
antibacteriano, vm despertando interesse como alvo teraputico, devido ao
aumento da resistncia microbiana aos frmacos convencionais, contribuindo
para obteno de novos agentes antimicrobianos. Nesse estudo, as bactriasteste isoladas foram identificadas por testes bioqumicos e morfotintorial como
Enterobacter cloacae (de fontes diversas), P. aeruginosa (sabonete lquido) e
S. aureus (chourio). Essas bactrias so ubquas, podendo ser encontradas
em ambientes aquticos, terrestres, plantas, humanos e outros animais, dentre
outros (HOFFMANN; ROGGENKAMP, 2003; SANDEL; MCKILLIP, 2004;
WIEHLMANN et al., 2007).
A bactria P. aeruginosa (MO12) foi a nica que produziu substncia tipo
bacteriocina, a qual inibiu bactrias de interesse clnico e da rea de alimentos,
destacando-se as bactrias B. cereus e as linhagens de S. aureus (produtora
de beta-lactamase - 29213 e MRSA- 33591). Dados esses tambm observados
por Sallem et al. (2009), que verificou a inibio de diversas bactrias, pela
bacteriocina piocina produzida pela P. aeruginosa. Dentre as espcies
testadas, o composto inibiu o crescimento de diferentes cepas de
Staphylococcus (S. aureus e S. epidermidis) e Bacillus (B. subtilis e Bacillus
BC31), mas no as bactrias Gram-negativas, Escherichia coli WT e Proteus
vulgaris. Em nosso estudo, a substncia produzida pela P. aeruginosa (MO12)
foi capaz de inibir a Escherichia coli ATCC 25922 e Proteus vulgaris.
As bacteriocinas geralmente no so ativas contra as bactrias Gramnegativas, devido a estas possurem a membrana externa, que atua como uma
barreira de permeabilidade celular, dificultando a entrada de substncias, tais
como alguns antibiticos, detergentes e corantes, impedindo-as de atingirem a
membrana citoplasmtica. No entanto, h relatos na literatura da ao de
bacteriocinas produzidas pelo Lactobacillus plantarum (plantaricina 35d,
ST28MS e ST26MS) contra Aeromonas hydrophila, E. coli e Acinetobacter
baumanii; e L. pentosus e L. paracasei subp. Paracasei (bacteriocina T151BR)
contra E. coli. A termofilina, bacteriocina produzida pelo Streptococcus
thermophilus, mostrou-se ativa contra E. coli, Yersinia pseudotuberculosis, Y.

enterocolitica e Salmonella Typhimurium, e sobre algumas bactrias Grampositivas, Bacillus e Listeria monocytogenes (PARADA et al., 2007).
O L. Plantarum, utilizado como controle positivo nesse estudo, mostrou
atividade inibitria contra todas as bactrias reveladoras testadas, confirmando
os dados obtidos na literatura.
A atividade inibitria da substncia tipo bacteriocina produzida pela P.
aeruginosa (MO12) desperta interesse, o que torna seu estudo relevante como
alternativa teraputica, por agir contra as linhagens de Staphylococcus aureus.
Pesquisas mostram que a bactria S. aureus tem apresentado resistncia a
antimicrobianos convencionais, como a meticilina, sendo responsvel pelos
elevados ndices de mortalidade e morbidade, tanto em ambientes hospitalares
quanto na comunidade (GAD et al., 2010; NAVRATNA et al., 2010).
O estudo quanto produo da bacteriocina ao longo da curva de
crescimento mostrou que a P. aeruginosa (MO12) atingiu o pico mximo de
sntese no tempo de 20h, no sabonete lquido. Enquanto nos caldos BHI e MH,
s produziram no tempo de 24h. Sallem et al. (2009) afirmam que a produo
mxima da substncia inibitria ocorre em meio enriquecido, fato no
observado em nossa pesquisa. Acredita-se que as condies de estresse
tenham favorecido essa sntese.
Pesquisas mostram que a colicina, bacteriocina produzida por bactrias
Gram-negativas, so mediadas pelo regulon SOS e, com isso, a sua sntese
ocorre, principalmente, em momentos de estresse (RILEY; WERTZ, 2002)
Fontoura (2008) evidenciou a presena de uma substncia com ao
antimicrobiana na fase exponencial de crescimento da P. aeruginosa, com
atividade mxima na fase estacionria, no tempo de 108h. Em nosso estudo,
sugere-se que a produo tenha comeado na fase exponencial, atingindo
ao mxima no incio da fase estacionria.
A produo da bacteriocina piocina pela P. aeruginosa j conhecida,
sendo essa bactria capaz de produzir trs tipos distintos desse composto,
piocina-tipo R, piocina-tipo F e piocina-tipo S (SALLEM et. Al, 2009). No
entanto, no foram feitos testes de caracterizao da substncia produzida
pela bactria-teste, necessitando, portanto, de estudos que identifiquem tal
composto, quanto ao modo de ao, peso molecular, origem gentica,

propriedades bioqumicas, composio e estrutura, resistncia a altas

temperaturas e s atividades proteolticas (APOLNIO et al., 2007).
Ao longo dos anos os micro-organismos produtores de bacteriocinas e as
bacteriocinas tm despertado o interesse tanto em nvel comercial quanto para
pesquisas cientficas, evidenciando sua ao como bioconservantes, bem
como sua provvel aplicao na teraputica clnica, com o intuito de minimizar
a problemtica da resistncia aos antimicrobianos.

CONCLUSO

A bactria P. aeruginosa, obtida do sabonete lquido, produziu uma

substncia antibacteriana com espectro de ao considervel abrangendo
micro-organismos patognicos e deteriorantes de alimentos, tanto Grampositivos quanto Gram-negativos. Porm, so necessrios estudos mais
aprofundados para identificar e classificar a substncia produzida pela bactriateste. Em virtude da natureza microbiana e da caracterstica antibacteriana das
substncias tipo

bacteriocinas,

investigao

quanto

aos benefcios

teraputicos que esses compostos podem apresentar deve ser levada em

considerao, j que o fenmeno da resistncia bacteriana est limitando as
alternativas teraputicas que combatem e tratam as infeces bacterianas.

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