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Anticorpos......................................................................................................................
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Citocinas (Interleucinas)........................................................................................................40
IV. Antgeno.........................................................................................................................42
Reconhecimento
de
antgeno...................................................................................45
Fases da resposta imunolgica...............................................................................................51
Resposta Primria e Secundria.............................................................................................52
Imunizao............................................................................................................................5
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Expectativas imunolgicas da vacinao................................................................................56
Objetivos da Vacinao.........................................................................................................57
Imunidade contra vrus..........................................................................................................59
Mecanismos
de
escape...........................................................................................................64
Imunidade contra bactrias....................................................................................................
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Mecanimos
de
escape.............................................................................................................68
VACINAS
VRICAS.............................................................................................................69
Vacinas replicativas (vrus vivo)..............................................................................69
Vacinas vivas recombinantes...................................................................................73
Vacinas com vrus inativado....................................................................................82
Vacinas de subunidade...........................................................................................84
Vacinas de protenas recombinantes.......................................................................85
Vacinas de peptdeos sintticos..............................................................................87
Vacinas de DNA....................................................................................................92
Vacinas de RNA....................................................................................................94
Imunizao contra enfermidades bacterianas.........................................................................94
Toxides................................................................................................................95
Bacterinas..............................................................................................................96
Vacinas bacterianas................................................................................................97
Adjuvantes...........................................................................................................................97
Testes de vacinas/controle de qualidade
Vacinao (vias, vacinaes polivalentes, idade, etc...)
Falhas de vacinas
Efeitos colaterais
Bibliografia
I. INTRODUO
A vacinao tem sido extremamente importante no controle de vrias enfermidades
infecciosas humanas e animais, constituindo-se em uma das formas mais eficazes e com
relao custo-benefcio mais favorvel no controle de doenas em populaes. Atualmente,
existem mais de uma centena de vacinas de uso veterinrio e dezenas de vacinas humanas em
uso. Alm dessas, vrias vacinas esto em fase de desenvolvimento ou testes e em breve
algumas delas devero estar em uso. Algumas enfermidades j foram erradicadas do mundo
pela vacinao, como o exemplo da varola. Outras encontram-se sob controle ou em vias de
erradicao, como a poliomielite e sarampo. Em animais, enfermidades como a Febre Aftosa,
Doena de Aujeszky e Peste Suna Clssica j foram ou esto sendo erradicadas de continentes
inteiros por programas baseados em vacinao. A era moderna da vacinao iniciou em torno
de 200 anos atrs, quando Edward Jenner demonstrou que poderia proteger pessoas da
enfermidade "smallpox" (varola) pela prvia exposio ao agente da "cowpox" bovina. Ele
observou que pessoas que trabalhavam com bovinos leiteiros (ordenhadores) eram mais
resistentes varola (smallpox). Como os agentes dessas enfermidades pertencem mesma
famlia de vrus (POXVIRIDAE) e possuem alguns antgenos em comum, a imunizao (ou
exposio) de pessoas com o vrus obtido a partir de crostas de leses de bovinos protegia
parcialmente contra o vrus humano em exposies subseqentes. Essas observaes e
experimentos conduzidos por Jenner constituram-se nos passos iniciais da vacinologia
moderna. Atualmente, tcnicas sofisticadas de biologia molecular tm sido empregadas com o
objetivo de aperfeioar as vacinas j existentes e de desenvolver novas vacinas. Em especial, a
manipulao gentica de agentes infecciosos tem permitido um avano muito grande na rea
de produo de vacinas. Vacinas obtidas por manipulao gentica, tambm conhecidas como
vacinas recombinantes, j esto em uso para o controle de doenas humanas (hepatite B) e
animais (herpesvrus bovino tipo 1, vrus da Doena de Aujeszky, cinomose). O nmero de
vacinas recombinantes deve aumentar significativamente nos prximos anos, pois vrias esto
atualmente em fase de desenvolvimento ou testes. Dentre estas, destacam-se vacinas
experimentais contra o HIV. A obteno de vacinas eficazes contra microorganismos como
vrus, bactrias e protozorios representa um marco na histria natural das doenas e no
combate realizado pelo homem para controlar e/ou erradicar enfermidades de populaes
humanas e animais. Por isso, a vacinologia um dos segmentos das cincias biomdicas que
mais demanda recursos e tem apresentado avanos nas ltimas dcadas.
II. O SISTEMA IMUNOLGICO
antgenos. Existem duas classes de IFN: alfa () e beta () (tambm chamados de IFN noimunes ou inespecficos) e IFN gama (). Na imunidade inespecfica, os IFNs e
desempenham papel importante. So produzidos por clulas infectadas por vrus (virtualmente
qualquer clula infectada por um vrus produz esses IFNs). Os IFNs so produzidos e
secretados no meio extracelular, sendo captados por clulas vizinhas. A captao do IFN por
essas clulas confere a elas um estado de resistncia contra o vrus. Os mecanismos de
resistncia anti-viral conferidos pelo IFN so complexos e envolvem degradao de RNA viral
e inibio da sntese protica nas clulas. Em infeces vricas, as primeiras defesas orgnicas
que limitam e restringem a infeco so exercidas pelos IFNs.
O sistema complemento uma srie de protenas plasmticas cuja ativao ocorre
em forma sequencial, como uma cascata, sempre que h leso de tecidos ou parede de vasos
ou alterao dos componentes sanguneos, presena de microorganismos, ou reao antgenoanticorpo. Os componentes do sistema complemento so mediadores do processo inflamatrio,
constituindo-se, ao lado dos anticorpos, os principais efetores da resposta imune humoral. As
principais funes resultantes da ativao do complemento so a destruio de clulas
alteradas
(ou
infectadas),
facilitao
da
fagocitose
(opsonizao)
retirada
de
imunocomplexos da circulao.
As protenas que compe o sistema complemento atuam na resposta inespecfica,
como tambm participam de mecanismos ligados resposta imunolgica adquirida
(especfica).
As principais funes biolgicas dos componentes do complemento so: 1. Citlise (lise de
bactrias ou clulas infectadas por parasitas intracelulares); 2. Opsonizao de antgenos
(microorganismos ou partculas), facilitando a fagocitose; 3. Ativao da inflamao; 4.
Quimiotaxia (atrao de leuccitos para os locais de inflamao); 5. Remoo e solubilizao
de imunocomplexos.
Os componentes do complemento solveis no plasma incluem mltiplas enzimas
proteolticas, que so ativadas sequencialmente. A clivagem de uma protena torna-a ativa.
Esta cliva uma outra enzima, ativando-a e assim por diante.
Embora as protenas do complemento estejam presentes no plasma sangneo, elas so
normalmente inativas e no podem ser ativadas espontaneamente na circulao. A ativao do
sistema complemento ocorre apenas em certos locais e em resposta a determinados estmulos.
Ativao do complemento
1 - Molculas de imunoglobulinas (anticorpos), quando ligam-se a antgenos especficos
podem ativar o complemento. Por esta razo, o complemento serve como um importante
mecanismo efetor da imunidade humoral especfica. A seqncia de ativao do sistema
complemento iniciada por complexos antgeno-anticorpo chamada de via clssica do
complemento.
2 - Alguns componentes do complemento so diretamente ativados ao ligar-se diretamente
superfcie de microorganismos, desencadeando diretamente a via alternativa do complemento.
Essa via ativada independentemente da presena de anticorpos e produz uma forma solvel
de C3 convertase e associada a membrana que catalisa a protelise do C3. Na via alternativa,
a C3 convertase formada na superfcie de clulas microbianas. A ativao dessa via tambm
leva produo de vrios fragmentos com atividade biolgica e pode culminar com a
formao do complexo de ataque membranas (membrane attack complex ou MAC) e a
conseqente destruio do microorganismo (ou da clula).
A cascata do complemento
O componente central do sistema complemento uma protena chamada C3, que um fator
crtico para as funes efetoras desse sistema. As formas biolgicas ativas da C3 so produtos
de clivagem proteoltica. As vias clssica e alternativa incluem diferentes protenas que so
ativadas por diferentes caminhos para gerar enzimas chamadas C3 convertases que so capazes
de clivar a C3 e produzir C3a e C3b.
Em estgios iniciais da via clssica, molculas de anticorpos ligadas a antgenos
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no permitem a sada de molculas grandes como as protenas. Essa situao resulta no influxo
de gua e ons nas clulas, levando lise osmtica. Bactrias ou clulas infectadas por
microorganismos intracelulares, como os vrus, so destrudas desse modo.
2. Opsonizao e promoo de fagocitose; C3b e iC3b ligam-se superfcie das clulas
infectadas e atuam como opsoninas, por ligarem-se especificamente a receptores na superfcie
de neutrfilos e macrfagos. Essas clulas possuem receptores de membrana, que reconhecem
o C3b e iC3b. O reconhecimento e ligao nesses receptores promove um contato prximo
so expressos nos
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tendo como resultado a progresso da infeco que pode resultar em doena severa e
eventualmente a a morte.
Podem ser necessrios 7 a 10 dias para o desenvolvimento de uma resposta imunolgica
especfica (linfcitos T citotxicos, T auxiliares, anticorpos) contra o agente. Enquanto isso, o
organismo defende-se atravs de respostas imunolgicas inespecficas ou naturais. Leuccitos
procuram o agente patognico, clulas bacterianas ou partculas virais, e tentam destru-lo. So
ativadas defesas como o sistema complemento, que ativa o processo inflamatrio e auxilia no
combate infeco (opsonizao, lise de bactrias, etc...). So produzidos mediadores como
os IFNs que conferem resistncia aos vrus. Clulas e mediadores inflamatrios so recrutados
ao local da infeco para combater e controlar o agente. Os mecanismos desencadeados pela
resposta natural tem dois objetivos: 1. Controlar ou limitar a infeco, at que as defesas
especficas estejam prontas e 2. Preparar e auxiliar no desenvolvimento da resposta especifica.
Em muitos casos, a resposta inespecfica consegue limitar e combater a infeco, mesmo antes
da resposta imunolgica adquirida estar desenvolvida totalmente.
A partir dos 4-5 dias aps a infeco, comeam a aparecer os componentes da
resposta imunolgica adquirida (que foram induzidos pela exposio ao agente). At ento,
foram os componentes da resposta inespecfica que limitaram e combateram o agente
patognico. O tempo que leva para o aparecimento da resposta especfica tempo necessrio
para o reconhecimento do antgeno, ativao das clulas imunolgicas (B, T), proliferao
dessas clulas e finalmente diferenciao. Esse perodo de aproximadamente 4-5 dias para
linfcitos T e de 7-10 dias para linfcitos B. Ento, fica evidente a importncia da imunidade
inespecfica, que encarrega-se de controlar e limitar o agente enquanto a resposta especfica
no est totalmente desenvolvida, e isso leva alguns dias. A partir do desenvolvimento da
resposta especfica, esta passa a combater o agente e responsvel pela eliminao do agente e
recuperao clnica do animal na infeco primria.
Quando de uma segunda exposio ao agente, a resposta muito mais rpida, pois os
componentes especficos (linfcitos T e B) ativados e proliferados durante a exposio
primria, j esto em maior nmero. Por isso, na resposta imunolgica secundria os
componentes especficos so os maiores responsveis pelo combate ao agente.
Componentes do sistema imunolgico
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1. rgos
O sistema imunolgico um sistema complexo de rgos, chamados genericamente
de rgos linfides, distribuidos pelo corpo do animal. De acordo com a sua funo, os rgos
do sistema imunolgico so classificados em 1.primrios e
2. secundrios.
Os rgos
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as clulas
sistema imunolgico. Portanto, praticamente nenhum antgeno deve ter acesso a circulao
sangunea sem antes ter sido investigado e atacado pelo sistema imunolgico em um rgo
linfide secundrio. Antgenos que forem direta ou indiretamente introduzidos na corrente
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sangnea sero filtrados no bao onde haver o contato antignico com as clulas do sistema
imunolgico.
2. Clulas
As clulas envolvidas na resposta imune pertencem linhagem hemacitopoitica,
cujas clulas progenitoras (clulas tronco ou hemocitoblastos) encontram-se na medula ssea.
Essas clulas podem dar origem a qualquer das clulas sanguneas (Figura). O processo de
hematopoiese inicia na fase fetal e continua por toda a vida do animal. As clulas mais
importantes no sistema imunolgico so os leuccitos, os quais diferenciam-se a partir de duas
linhagens : linfide e mielide. Da linhagem linfide diferenciam-se os linfcitos B,T e as
clulas NK. Da linhagem
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A primeira linha de defesa celular composta pelos fagcitos. O termo fagcito refere-se s
clulas com atividade fagoctica. Os macrfagos teciduais (derivados dos moncitos
sanguneos) e neutrfilos so as clulas que possuem atividade fagocitria relevante. Essas
clulas so produzidas pela medula ssea, circulam pelo sangue e saem da circulao e
invadem os tecidos orientadas por mediadores qumicos liberados nos locais de inflamao. O
movimento de sada dos
vasos e invaso dos tecidos chamado de diapedese. No local da inflamao, que produzida
em
resposta ao agente patognico, os fagcitos iro exercer suas funes de fagocitose e liberao
de enzimas proteolticas, que auxiliam no processo de resoluo do processo inflamatrio e
reorganizaotecidual.
Os linfcitos constituem a principal linha de defesa do sistema imunolgico, seja
atravs da imunidade mediada por clulas (IMC) ou pela produo de anticorpos. Existem
vrios tipos de linfcitos. Os linfcitos T auxiliares (helper) coordenam toda a resposta imune,
reconhecendo o agente agressor e ativando as diferentes funes efetoras atravs de
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em trs
subtipos de acordo com sua afinidade por corantes:
Os neutrfilos tm este nome porque seus grnulos no se coram com corantes bsicos ou
eosina (portanto, eles so neutros=neutrfilos). Originam-se da medula ssea a partir da
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(alcalinos). Eles tambm circulam pela corrente sangnea, porm com pouca frequncia e tm
um papel menos direto na defesa contra agentes patognicos. Eles so capazes de liberar
substncias (histamina, heparina) que estimulam a inflamao e respostas alrgicas. Possuem
receptores para IgE na sua membrana e liberam seus grnulos quando entram em contato com
o antgeno. A liberao de histamina e outras substncias responsvel pelos efeitos clnicos
observados na resposta alrgica. Basfilos que invadem e fixam residncia nos tecidos do
origem aos mastcitos. A principal funo dos mastcitos , provavelmente, participar da
defesa contra parasitas no tubo digestivo.
Moncitos e macrfagos
O sistema mononuclear fagoctico (antigo sistema retculo-endotelial) consiste de
clulas da linhagem monoctica-macrofgica. Estas clulas apresentam morfologia semelhante
e origem comum. Possuem ncleo arredondado e so ativamente fagocticos. Os moncitos
no tm grnulos no citoplasma e, juntamente com os linfcitos, so chamados de
agranulcitos. So derivados das clulas tronco na medula ssea e tm como principais
funes a fagocitose e a apresentao de antgenos aos linfcitos T auxiliares (os macrfagos
expressam molculas do MHC classe II na sua superfcie). Alm dessas funes, os
macrfagos secretam molculas que amplificam a resposta imune, controlam a inflamao,
contribuem diretamente para o reparo de danos teciduais atravs da remoo de tecido morto,
em processamento de morte e danificado e auxiliam no processo de cicatrizao. A molcula
responsvel por mediar grande parte dessas funes a interleucina 1 (IL-1) que secretada
pelos macrfagos.
Os moncitos no fagocitam ativamente, at deixarem a corrente sangnea e entrarem nos
tecidos. Ento eles amadurecem e se tornam macrfagos, que atacam e fagocitam agentes
patognicos e partculas estranhas. Enquanto que os neutrfilos podem ser mais ativos nas
fases iniciais de uma infeco, os macrfagos so capazes de manter um ataque duradouro
contra os agentes patognicos. Nos tecidos podem permanecer por dias at meses, possuem
metabolismo ativo e so capazes de se multiplicar. Quando ocorre uma infeco, os moncitos
so atrados para a rea da infeco por substncias qumicas liberadas no processo
inflamatrio. medida que eles se deslocam para os tecidos, sob a ao de mediadores
qumicos, eles crescem, amadurecem e se tornam macrfagos. Ou seja, sofrem um processo
de modificao que os transforma em clulas
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preparadas para a sua funo. Vrios estmulos originados no local da inflamao so capazes
de atrair e estimular/ativar macrfagos. Por causa da sua migrao atravs dos tecidos para os
locais de infeco, estas clulas so algumas vezes chamadas de macrfagos circulantes.
H outros macrfagos que esto sempre localizados em certos tecidos e rgos do
corpo do animal. Estes so chamados macrfagos fixos ou residentes e de acordo com os
tecidos onde se encontram recebem denominaes diferentes : clulas de Kpfer no fgado,
macrfagos alveolares nos pulmes, clulas da micrglia no sistema nervoso central,
osteoclastos nos ossos, histicitos na derme, clulas de Langerhans na epiderme. Alm disso
so tambm encontrados no
bao, nos gnglios linfticos, na medula ssea e na cavidade peritoneal, onde esto os rgos
abdominais. Estes macrfagos desempenham um papel particularmente crtico na luta contra
agentes patognicos, que tendem a formar colnias num determinado lugar do corpo, como a
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colonizao dos alvolos pulmonares (pequenas bolsas de ar) durante uma pneumonia. Ao
contrrio dos linfcitos, que podem penetrar nos tecidos e recircular no sangue, os macrfagos
so raramente recirculantes (exceo: clulas foliculares dendrticas). Ou seja, existe uma
populao de moncitos circulantes (sem atividade fagoctica) que podem eventualmente ser
recrutados a locais de inflamao. Nesse processo so ativados, tornando-se fagocticos
(macrfagos). Alm dos moncitos que em resposta a estmulos inflamatrios tornam-se
macrfagos, existe uma populao de macrfagos j residentes nos tecidos (em cada tecido
recebe uma denominao diferente). Em resposta a um processo infeccioso, tanto os
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Linfcitos
Os linfcitos so derivados da linhagem linfide de clulas que deriva-se das clulas
tronco da medula ssea. Desenvolvem-se nos rgos linfides primrios e transitam pelo
sangue at os rgos linfides secundrios. Os linfcitos esto distribuidos pelo organismo,
principalmente nos rgos linfides como linfonodos, bao e medula ssea. Alm disso, essas
clulas esto constantemente recirculando pelo sangue.
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(mediada por anticorpos, por clulas, memria imunolgica), existem tambm diferentes tipos
de linfcitos. Existem vrias populaes e subpopulaes de linfcitos, cada qual com
caractersticas e funes efetoras diferentes. As subpopulaes de linfcitos no podem ser
distinguidas com base na sua estrutura e morfologia (no so distingveis ao microscpio
ptico) e sim atravs de marcadores (protenas) de superfcie. Por isso, muitas vezes as
populaes de linfcitos so denominadas pelos marcadores de membrana que os mesmos
possuem (ex:CD8, CD4).
Em geral, as populaes de linfcitos no podem ser distinguidas pela microscopia. A
exceo est nos linfcitos grandes com grnulos no citoplasma chamados de clulas NK
(natural killer). Dentre os linfcitos, trs populaes principais podem ser reconhecidas:
linfcitos B, linfcitos T e NK. As duas primeiras so encarregadas da resposta imunolgica
especfica e a ltima envolvida na resposta inespecfica. Os linfcitos B apresentam como
marcadores de superfcie as imunoglobulinas (Igs), das classes IgD e IgM. Os linfcitos T
apresentam como marcadores o TCR (T cell receptor) e CD3. Diferentes populaes de
linfcitos T podem apresentar outros marcadores, alm do TCR e CD3 que as diferenciam. As
clulas NK no apresentam marcadores de superfcie. Por isso so tambm chamadas de
clulas nulas (null cells).A especificidade da resposta imunolgica determinada pelos
linfcitos por que essas clulas tm a capacidade de reconhecer especificamente os diferentes
antgenos.
Os linfcitos B originam-se na medula ssea e completam a sua maturao nos
linfonodos e outros acmulos linfides perifricos, aps contato com o antgeno. Os linfcitos
B caracterizam-se por apresentar imunoglobulinas (classes IgD e IgM) em sua superfcie.
Essas imunoglobulinas funcionam como receptores para estabelecer contato e permitir o
reconhecimento de antgenos. O prprio linfcito sintetiza essas imunoglobulinas e as insere
na membrana. As imunoglobulinas so receptores antignicos e cada clula possui um grande
nmero (milhares) dessas molculas na superfcie. Para cada linfcito B, todas as
imunoglobulinas presentes na membrana so idnticas entre si. Desta forma, um determinado
linfcito B s se conjugar e responder a um nico determinante antignico. Uma populao
de linfcitos que deriva-se de um nico linfcito pela sua multiplicao, estimulada pelo
encontro com o antgeno, denominada de clone. Por serem derivadas de um nico
progenitor, todos os linfcitos que compe um clone apresentam as imunoglobulinas idnticas
na sua superfcie.
Os linfcitos B so encontrados no crtex dos linfonodos, zona marginal do bao,
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medula ssea e placas de Peyer do intestino, alm de outros acmulos linfides. Apenas um
pequeno nmero dessas clulas circula no sangue.
Os linfcitos B so responsveis pela imunidade humoral: em contato com antgenos
especficos, eles proliferam (multiplicam-se, originando milhares de linfcitos [clones] com
especificidade idntica) e se diferenciam em plasmcitos. Os plasmcitos ento produzem
grande quantidade de anticorpos especficos para o antgeno que originou a sua proliferao e
diferenciao. Algumas das clulas especficas que proliferaram em resposta ao antgeno no
diferenciam-se em plasmcitos, permanecendo no centro germinativo dos linfonodos. Essas
clulas constituem as clulas de memria. Diante de uma re-exposio ao mesmo antgeno, as
clulas de memria iro responder mais rpida e eficientemente, pois grande parte dos
processos de reconhecimento, ativao e proliferao j ocorreram durante a resposta inicial
(primria). A maturao/competncia funcional dos linfcitos B s ocorre aps o contato com
o antgeno especfico que geralmente ocorre nos rgos linfides secundrios (linfonodos,
bao, timo, MALT).
A maioria dos linfcitos B expressa protenas do MHC-II na membrana e apresenta
tambm outros marcadores, como CD19, CD20 e CD22. Como os linfcitos B expressam em
sua superfcie o MHC-II, podem funcionar como apresentadores de antgeno para os linfcitos
T auxiliares (ver: apresentao de antgeno).
Receptor antignico de clulas B: cada linfcito B recoberto por cerca de 200.000 a
500.000 receptores antignicos idnticos. Alm de se conjugar com o antgeno especfico e
sinalizar para a clula B responder, esses receptores tambm mediam a internalizao
(fagocitose) de antgenos. A fagocitose resulta em protelise e processamento dos antgenos e
a expresso de fragmentos peptdicos pelas molculas do MHC-II da membrana. Esses
receptores so molculas de imunoglobulinas (anticorpos) que esto inseridas na membrana.
Como as imunoglobulinas nesse caso funcionam como receptores de clulas B, so tambm
denominadas de receptores de clulas B (B cell receptors, BCR), para diferenciar das
imunoglobulinas circulantes. Em outras palavras, os anticorpos so formas solveis dos BCR
secretados pelas clulas B/plasmcitos nos fludos corpreos.
Os BCRs so estruturalmente semelhantes ao TCR (receptores de clula T) e podem
ser divididos em dois componentes funcionalmente diferentes. Um componente se conjuga ao
antgeno (regio varivel) e o outro envia o sinal apropriado para o interior da clula B. Os
sinais enviados para o interior da clula B, aps o contato com o antgeno, so os responsveis
pela ativao, proliferao e diferenciao dos linfcitos B em plasmcitos.
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Representam uma importante linha de defesa nas infeces vricas, sobretudo nos primeiros
dias, quando ainda no existem linfcitos T e B especficos para o agente. A morte celular
induzida pelas NK ocorre por apoptose quando a NK ativada libera seus grnulos para o meio
extracelular, no espao entre a prpria NK e a clula alvo. Essas clulas diferenciam-se dos
CTLs por destrurem as clulas alteradas de modo inespecfico, independente do
reconhecimento de antgeno conjugado com o MHC. A ativao das clulas NK ocorre quando
essas clulas entram em contato com a interleucina 2 (IL-2), secretada pelos linfcitos T CD4..
A atividade das clulas NK aumentada logo aps a infeco, por ao do interferon
do tipo I (IFN-1). A citotoxicidade das clulas NK pode ser aumentada se as clulas-alvo
forem recobertas por anticorpos. As clulas NK possuem receptores que reconhecem a regio
constante (Fc) das imunoglobulinas, facilitando a sua ligao e atividade citotxica. Esse tipo
de citotoxicidade associada a anticorpos chamada de ADCC ("antibody dependent cellular
citotoxicity"). Assim, alm de desempenhar um papel importante de modo inespecfico no
incio das infeces, as clulas NK tambm participam da resposta imunolgica especfica,
tendo a sua funo facilitada pelos anticorpos.
III. ANTICORPOS
Os anticorpos so protenas plasmticas da famlia das globulinas
(por isso tambm chamados de imunoglobulinas, Igs), produzidas pelos
plasmcitos, que so clulas que derivam-se dos linfcitos B, em resposta
estmulos antignicos. As imunoglobulinas tm a capacidade de ligar-se
especificamente ao antgeno que induziu a proliferao dos linfcitos que
os produzem. A ligao das imunoglobulinas nos antgenos pode resultar
na inativao ou destruio dos mesmos, por ao direta ou com a
participao de outros componentes do sistema imunolgico (clulas,
complemento). Os anticorpos mediam uma srie de funes na resposta
imunolgica adquirida e constituem-se no principal mecanismo efetor da
resposta imunolgica humoral. Como citado anteriormente, so as formas solveis
dos receptores de linfcitos B e possuem a mesma especificidade. Ou seja, o BCR de um
determinado linfcitos B possui a mesma especificidade antignica de um anticorpo secretado
por esse linfcito. Da mesma forma, todos os BCRs e anticorpos secretados por um mesmo
linfcito B possuem a mesma especificidade. Os seus stios de ligao no antgeno so
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idnticos e por isso reconhecem e ligam-se no mesmo antgeno. Por outro lado, BCRs e
anticorpos de diferentes clones de linfcitos B diferem em sua especificidade, ligando-se em
diferentes antgenos. Diferentemente dos linfcitos B, que permanecem grande parte do tempo
no tecido linfide, os anticorpos so liberados no plasma sanguneo e fluidos teciduais, onde
podem rapidamente localizar e ligar-se aos antgenos.
A presena de anticorpos especficos para um determinado antgeno no sangue uma
indicao segura da exposio prvia a esse antgeno. Portanto, quando se faz um teste
sorolgico para verificar ttulos (nveis) de anticorpos para um determinado agente, pode-se
estar verificando se h anticorpos suficientes para garantir proteo ou simplesmente se o
animal j foi exposto anteriormente ao agente.
Estrutura das imunoglobulinas
As Igs ou anticorpos possuem uma estrutura bsica comum, que composta por
duas cadeias proticas pesadas e duas cadeias proticas leves. Essas cadeias so ligadas entre si
por pontes dissulfeto, assumindo a forma de um
desenhadas em escuro e as cadeias pesadas em claro. O tratamento das Igs com proteases
como a papana resulta na clivagem da molcula na regio da dobradia (vrtice), resultando
em dois fragmentos com funes distintas (Figura): a regio Fc (assim chamada pois a regio
que fixa [liga-se] no complemento) e a regio Fab (antigen binding = liga-se no antgeno). A
regio Fc responsvel por muitas funes dos anticorpos, como ativao do complemento,
transferncia de imunidade passiva, reconhecimento por fagcitos, citotoxicidade celular
mediada por anticorpos, etc... A regio Fab a responsvel pelo reconhecimento e ligao no
antgeno (stio conjugador do antgeno). Como os dois stios conjugadores antignicos em
cada regio do Fab so idnticos, as imunoglobulinas so capazes de se ligar com dois
antgenos ao mesmo tempo. Logo, as molculas de anticorpo podem grumar bactrias em
conjunto aglutinao.
A regio Fc constante, ou seja,
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Fc).
As diferenas
na
estrutura
refletem-se em
diferentes
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dos vasos sangneos. Podem atravessar a placenta de algumas espcies e tambm esto
presentes no colostro (primeiro leite),
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(fungos,
helmintos).
Basfilos
eosinfilos
contm
como a saliva,
fludo
intestinal, leite, colostro, urina e secrees do sistema urogenital. Possuem a meia vida mais
curta de todas as imunoglobulinas e esto presentes em concentraes baixas no soro.
Imunoglobulinas D (IgD): so encontradas inseridas na superfcie das clulas B, onde
desempenham a funo de receptores (BCRs), juntamente com imunoglobulinas da classe IgM.
Possuem a estrutura de um monmero e podem tambm ser encontrados no sangue e no tecido
linftico. As funes do IgD no so bem conhecidas, mas parecem estar envolvidas em
desencadear uma resposta inicial a antgenos.
Distribuio das imunoglobulinas
Embora os anticorpos sejam encontrados principalmente na poro fluda do sangue,
eles podem ser encontrados em vrios outros compartimentos: 1. Em compartimentos
citoplasmticos (Golgi, RE) e na superficie de linfcitos B (IgD, IgM);
2. No plasma
sanguneo: IgG (70-75%), IgA (15-20%), IgM (10%), IgE (0,004%), IgD (0,2%); 3. No
lquido intersticial dos tecidos onde os plasmcitos acumulam-se; 4. Na superfcie de algumas
clulas efetoras, que possuem receptores para a poro Fc (NK, mastcitos); 5. Em secrees
como o leite, muco (principalmente IgA).
Funes dos anticorpos
As imunoglobulinas so produzidas em resposta a um antgeno e
desempenham vrias funes especificamente contra esse antgeno. O
38
membrana
plasmtica de linfcitos
B e servem de
de
outros
mecanismos
efetores
do
sistema
imunolgico
39
do
anticorpo
ativao
do
complemento
na
membrana
40
respiratrio,
urogenital),
essas
imunoglobulinas
atuam
neutralizando
microorganismos.
11. Imunidade fetal. Em vrias espcies animais (humanos, primatas, carnvoros, roedores),
ocorre a transferncia de imunoglobulinas (sobretudo IgG) atravs da placenta para os fetos.
Essas Igs so importantes para conferir resistncia ao recm-nascido contra possveis infeces
41
peri-natais. A imunidade transmitida pela placenta aos fetos dita imunidade passiva. No
entanto, a estrutura
placentria de vrias espcies (eqideos, ruminantes, sunos) no permite a passagem de
imunoglobulinas aos fetos. Nessas espcies, o recm-nascido (antes de mamar o colostro)
virtualmente desprovido de imunidade passiva.
12. Imunidade neonatal pelo colostro. Recm-nascidos de mamferos que no transferem
anticorpos atravs da placenta nascem virtualmente desprovidos de imunidade especfica. Da
mesma forma, o seu sistema imunolgico ainda no est totalmente capaz de produzir uma
resposta imunolgica eficiente. Felizmente, anticorpos maternos so deslocados da circulao
materna para a glndula mamria no final da gestao e ficam altamente concentrados no
colostro. A ingesto de colostro, e a conseqente absoro das imunoglobulinas
(principalmente IgG) pelo sistema digestivo do recm nascido (nas primeiras 24-36h) confere a
estes animais imunidade nas primeiras semanas de vida. A imunidade passivamente adquirida
(anticorpos transmitidos atravs da placenta ou pelo colostro) temporria, durando de
semanas a meses. As imunoglobulinas so absorvidas e ficam no sangue por semanas a meses,
sendo responsveis pela imunidade humoral passiva nesses animais. Em sunos, alm das
imunoglobulinas absorvidas pela corrente sangunea, IgG e IgA ingeridas com o colostro
permanecem alguns dias no lmen intestinal e podem conferir imunidade local contra
microorganismos. Outras funes: retirada do excesso de antgeno dos lquidos corporais,
interao com outros componentes do sistema imunolgico, participao em reaes alrgicas
e auto-imunes.
Citocinas (ou interleucinas)
As clulas do sistema imunolgico secretam uma variedade de substncias proticas
que regulam a resposta imunolgica. Essas substncias, genericamente denominadas de
interleucinas (interleukinas, linfocinas ou citocinas), atuam atravs da modulao da atividade
biolgica de vrias clulas do sistema imunolgico. As citocinas secretadas pelos linfcitos so
tambm chamadas de linfocinas ou interleucinas. As citocinas so protenas solveis
circulantes, atravs das quais as clulas do sistema imunolgico podem se comunicar entre si.
So produzidas por diferentes clulas do sistema imunolgico, sendo geralmente nomeadas
pela sua atividade biolgica. A denominao original interleucina foi estabelecida porque elas
estabelecem comunicao entre leuccitos (inter=entre, leucinas=leuccitos).
As citocinas mediam uma rede complexa de interaes entre todos os tipos celulares do
42
43
As aes das citocinas podem ser redundantes, isto , muitas funes atribudas a uma
Para que a citocina consiga estimular uma clula necessrio que ela se conjugue com
Para muitas clulas alvo, citocinas atuam como reguladoras da diviso celular, isto , como
fatores de crescimento.
Principais funes das citocinas:
-
IV- ANTGENO
A funo bsica do sistema imunolgico defender o organismo
contra microorganismos patognicos. Ento, essencial que esses
microorganismos sejam reconhecidos to logo penetrem no corpo do
animal. O organismo deve ser capaz de reconhecer que esses agentes
so estranhos (no prprios) e desencadear uma resposta especfica
contra os mesmos. O sistema imunolgico capaz de reconhecer
componentes
especficos
desses
agentes
patognicos,
chamados
antgenos.
Classicamente,
substncia
(ou
antgeno
molcula)
tem
sido
capaz de
definido
como
qualquer
ligar-se especificamente
em
de
estimular
resposta
imunolgica.
Por
outro
lado,
44
imunognicos
(tambm
chamados
de
antgenos
45
so chamados imunodominantes.
hidrofbicas
tm
chance
de
ser
um
epitopo
imunognico.
Quando o
46
Esses tipos de
no
sequncia
de
aminocidos.
Linfcitos
TCD4).
Protenas
grandes
geralmente
so
melhores
direta pela ligao aos BCRs). No induzem resposta por linfcitos TCD4.
Lipdios no so bons imungenos quando no esto ligados protenas.
So muito comuns no organismo e so facilmente degradveis. cidos
nuclicos (RNA, DNA) tm alouma atividade antignica, sobretudo quando
conjugados protenas.
47
mesmo
antgeno.
Ou
seja,
linfcitos
TCD4
diretamente
pelos
BCR/anticorpos
na
superficie
dos
48
como mitgenos.
constitui-se
no
ponto
chave
da
resposta
imunolgica.
evento
central
da
resposta
imunolgica.
atravs
desse
clulas
efetoras
(plasmcitos,
Th,
CTL)
que
iro
agir
Os
49
Linfcitos B
viral
ou
bacteriano
podem
posteriormente
reconhecer
intracelulares
que
levam
proliferao
dos
linfcitos
50
os peptdeos+MHC-I atravs de
seu
protenas
TCR+CD8.
Dessa
forma,
tanto
extracelulares
como
51
Esses
linfcitos
so
inicialmente
processadas,
originando
peptdeos
(fragmentos proticos) de 8 a 10 aminocidos. Esses peptdeos associamse a molculas de MHC-I em determinados compartimentos celulares e
posteriormente os complexos MHC-I+peptdeos so enviados at a
52
apresentao em
53
Reconhecimento
de
antgeno
por
linfcitos
TCD4.
Esses
linfcitos
determinados
compartimentos
intracelulares,
esses
peptdeos
so reconhecidos pelos
54
com
molculas
de
MHC-II
na
superfcie
de
clulas
55
os
linfcitos
sofrem
alteraes
metablicas
importantes,
de
linfcitos
especficos
para
um
determinado
antgeno
56
torna
preparados
para
sua
atividade
efetora.
Os
linfcitos
infectadas
(tornam-se
CTLs).
Cabe
ressaltar,
que
aps
57
especficos para aquele determinado antgeno. Os linfcitos que possuem BCRs especficos
para
aquele antgeno ento reconhecem o antgeno (atravs dos BCRs), ficam ativados e proliferam,
originando milhares de linfcitos com a mesma especificidade (mesmos BCRs). A maioria
desses linfcitos diferencia-se em plasmcitos, que so clulas secretoras de anticorpos. Esses
plasmcitos por sua vez, iniciam a produo de anticorpos, que so especficos para o antgeno
que inicialmente induziu a sua ativao e proliferao. Alguns linfcitos especficos para o
antgeno no diferenciam-se em plasmcito e permanecem como clulas de memria, que
possuem vida longa. Cabe ressaltar que o processo de ativao, proliferao e diferenciao
dos linfcitos B em plasmcitos necessita dois sinais: o primeiro produzido pelo prprio
mecanismos de reconhecimento do antgeno pelo linfcito; o segundo sinal enviado pelos
linfcitos TCD4 (auxiliares), que ao entrarem em contato e reconhecerem o mesmo antgeno,
produzem interleucinas que auxiliam o processo de ativao/proliferao/diferenciao dos
linfcitos B. As principais interleucinas envolvidas nesse processo so a IL-4, IL-5 e IL-10.
Ento, alm do contato com o antgeno, os linfcitos B necessitam sinais qumicos dos TCD4
para o processo final de produo de anticorpos. O processo de reconhecimento, ativao,
proliferao, diferenciao e produo de anticorpos leva algum tempo. Dessa forma, os
anticorpos especficos para o agente comeam a aparecer aos poucos, a partir de um certo
perodo aps a infeco, at atingir um certo plat. Em infeces vricas, anticorpos
especficos para o agente comeam a ser detectados 7 a 8 dias aps a infeco. Inicialmente
so detectadas imunglobulinas da classe IgM. As IgG aparecem mais tardiamente. Os nveis
aumentam gradativamente at atingir um plat, ao redor dos dias 14 a 20. Esse plat dura
poucos dias, a partir do qual os nveis de anticorpos comeam a reduzir-se gradativamente.
58
Estes eventos que ocorrem aps a exposio inicial ao antigeno so chamados de resposta
humoral primria. esse tipo de resposta que ocorre aps a vacinao com um determinado
antgeno. A resposta humoral primria caracterizada por um aumento gradativo e lento, noimediato, de magnitude e durao moderadas nos nveis de anticorpos sricos especficos. O
tempo que demora para o aparecimento dos anticorpos devido aos processos de
reconhecimento, ativao, proliferao e diferenciao e sntese de anticorpos que leva algum
tempo.
Em exposies subseqentes ao mesmo antgeno, a resposta
imunolgica difere qualitativamente, quantitativamente e em relao ao
tempo necessrio para ser detectada. Na segunda vez que o antgeno
entra em contato com o organismo, o nmero de linfcitos B com
receptores especficos para esse antgeno muito maior do que na
resposta primria. O que ocorreu na resposta primria, em realidade, foi
uma expanso na populao de linfcitos especficos para aquele
antgeno (expanso clonal). A maioria dos linfcitos resultantes da
expanso
clonal
diferenciou-se
em
plasmcitos,
mas
um
nmero
bastante abreviado.
O nmero de
59
levam
perdas
embrionrias
ou
fetais.
Prtica
semelhante tem sido utilizada para imunizar fmeas bovinas com o vrus
60
humanos,
primatas,
roedores
carnvoros
transferem
so
desprovidos
de
imunidade
ao
nascer
so
muito
61
3.
Quantidade
de
colostro
ingerida;
4.
Quantidade
de
imunoglobulinas absorvida e 5. Taxa de crescimento corporal do recmnascido. Em certas criaes de eqinos e bovinos leiteiros, tem sido
recomendada a utilizao de "bancos de colostro", ou seja, armazenagem
de colostro de vrias fmeas para posterior administrao recmnascidos como forma de aumentar os seus nveis de imunoglobulinas.
A imunizao passiva pode tambm ser feita artificialmente, pela
administrao
de
soro
especfico
(antitetnico,
antiofdico,
soro
soro
contra
Clostridium
administrao
repetida
de
soro
hiperimune,
por
outro
lado,
62
imunidade.
imunolgico
bloqueia
progresso
da
replicaro
objetivo devem induzir uma resposta local (de mucosas) muito eficiente,
para reduzir ou mesmo abolir a penetrao do agente nas clulas
localizadas na porta de entrada da infeco.
2. Prevenir (atenuar) a doena clnica- Visto que impedir a infeco um
objetivo virtualmente impossvel de obter-se pela vacinao, a preveno
ou atenuao da doena clnicas ou de seus efeitos passa a ser o objetivo
maior da vacinao. Esse objetivo alcanado pela restrio da extenso
e magnitude da infeco, de modo que a replicao do agente seja a tal
63
Proteger
conseqncias
fetomaiores
Em
algumas
enfermidades
da
infeco
ocorrem
sobre
infecciosas,
o
feto,
as
com
64
Infelizmente, ainda no h
65
participam,
como
clulas
(neutrfilos,
macrfagos),
na
(macrfagos
formao
da
resposta
principalmente)
especfica.
fagocitam
Clulas
apresentam
A resposta imunolgica
66
mecanismos de defesa inespecfica contra infeces vricas, sobretudo nos estgios iniciais da
infeco.
Fator de necrose tumoral (TNF) e interferon : So produzidas
precocemente pelas clulas NK em algumas infeces. Os efeitos dessas
citocinas so semelhantes aos dos IFNs do tipo I. Alm disso, o IFN um
potente ativador dos mecanismos antivirais intracelulares desencadeados
67
por macrfagos.
Clulas:
Clulas NK: As clulas NK foram descobertas por sua atividade de
matar espontaneamente certas clulas tumorais. Posteriormente foi
demonstrado que possuem a mesma atividade contra clulas infectadas
por vrus. A sua atividade citoltica ativada pelos IFNs e e ocorre
aps infeco com uma grande variedade de vrus. Os mecanismos de lise
celular mediada pelas NK no esto bem esclarecidos, mas parecem ser
similares
aos
desencadeados
pelos
linfcitos
TCD8
(perforinas,
contra
Parecem
vrus.
No
desempenhar
entanto,
um
tambm
importante
contribuem
papel
para
na
a
68
69
70
71
de
penetrao,
os
herpesvrus
penetram
no
sistema
nervoso
novos
mutantes
que
escapam
da
neutralizao
so
Aftosa.
3. Infeco de stios de privilgio. Stios de privilgio so locais do
organismo onde os mecanismos efetores do sistema imunolgico (clulas,
principalmente) tm acesso restrito. Por isso, vrus que infectam esses
stios permanecem relativamente protegidos da resposta imunolgica. Os
hespervrus infectam o sistema nervoso central, local de difcil acesso s
clulas efetoras da resposta imunolgica. Por outro lado, os neurnios
infectados no expressam MHC-I, no podendo ser lisados por CTLs.
Vrios vrus infectam o feto, que tambm considerado um stio de
privilgio
(BVDV;
rubola,
camadas
profundas
da
parvovrus).
pele,
de
Os
difcil
papilomavrus
acesso
aos
infectam
mecanismos
72
que so
persistentemente
imunolgico
(esses
no
animais
organismo
so
sem
resposta
soronegativos=
no
do
sistema
apresentam
infeco,
sistema
imunolgico
do
feto
esteja
na
fase
de
73
esto
os
fatores
genticos,
as
barreiras
fsico-qumicas
fatores
genticos
esto
relacionados
resistncia
inata
de
74
digeridas
pelas
enzimas
lisossomais.
Bactrias
dentro da clula
formao
do
fagolisossoma.
Durante
processo
de
lipopolissacardeo
(LPS)
que
capaz
de
estimular
desempenham
uma
funo
importante
para
resposta
mais
importante
contra
bactrias.
Dentre
as
funes
75
efetiva
do
trato
respiratrio,
gastrointestinal
genito-urinrio,
que
apresentem
antgenos
bacterianos
na
superfcie
culas NK que
76
Evaso
dos
componentes
do
complemento:
protena
do
antifagocticas.
Mycobacterium
tuberculosis,
coli,
com
lisossomo,
resistindo
ao
das
enzimas
77
Imunossupresso: a enterotoxina
que
contm
vrus
vivel
replicam
no
organismo,
78
O sucesso
das
vacinas
atenuadas
baseia-se em trs
79
de bovinos. Da mesma forma, uma vacina contra a Doena de Marek de galinhas foi produzida
com um herpesvrus semelhante, de perus. Proteo contra a rotavirose suna foi obtida
atravs de vacinao com um rotavrus de bovinos. Proteo contra o vrus da parainfluenza 3
(hPI-3) humana foi obtida em crianas imunizadas com um PI-3 bovino. Na Europa, uma das
vacinas utilizadas em programas de erradicao da Doena de Aujeszky foi produzida a partir
de um mutante atenuado do herpesvrus suno causador da doena. Esse mutante natural
possui uma deleo no gene que codifica uma glicoprotena do envelope (gE), o que o torna
pouco patognico. A identificao de mutantes naturais atenuados tambm foi a base para a
produo das vacinas atuais contra a Febre Amarela (cepa 17D) e poliovrus (Sabin, poliovrus
tipo 2). Nesses casos, os mutantes naturalmente atenuados foram posteriormente mais
atenuados por passagens em ovo embrionado e animais. Embora mutantes naturais atenuados
provavelmente existam para grande parte dos vrus, na maioria das vezes a atenuao
realizada em laboratrio, a partir de cepas virulentas.
2. Atenuao por passagens em cultivo celular. o mtodo mais utilizado para atenuao de
vrus destinados produo de vacinas. A maioria das vacinas com vrus vivo de uso humano
e animal foram produzidas por esse mtodo. Geralmente utiliza-se clulas heterlogas (de
outra espcie animal) ou ocasionalmente clulas da mesma espcie, porm de outro tecido
(exemplo: para vrus respiratrio utiliza-se clulas renais, etc...). Esse mtodo baseia-se na
observao emprica de que a replicao repetida de vrus em clulas de cultivo
freqentemente acompanhada da perda progressiva de funes necessrias para a sua
patogenicidade/virulncia no hospedeiro de origem. Embora os mecanismos responsveis pela
atenuao geralmente sejam difceis de se determinar, acredita-se que as replicaes sucessivas
resultam na acumulao de mutaes e na seleo de variantes mais adaptados aos cultivos. A
adaptao gradativa aos cultivos, em contrapartida, resulta na perda progressiva da
capacidade de causar infeco clnica (doena) na espcie hospedeira natural. O nmero de
passagens necessrias para uma atenuao satisfatria depende do vrus e varia amplamente.
Alguns vrus, mesmo aps centenas de passagens, conservam a patogenicidade e virulncia
para a espcie hospedeira. Portanto, esse mtodo no efetivo para atenuao de todos os
vrus. Por outro lado, alguns vrus no replicam bem em cultivos celulares (vrus da hepatite B
e C, papilomavrus animais e humanos, vrus da Lngua Azul), o que impossibilita a utilizao
desse mtodo. Da mesma forma, a realizao de um nmero muito grande de passagens pode
resultar em uma atenuao excessiva do agente, com a perda da capacidade de replicar
eficientemente no hospedeiro natural. Nesse caso, a replicao deficiente poderia resultar em
80
passagem 20, 40, 80) em relao a sua patogenicidade/virulncia. Para isso, inocula-se esses
vrus em animais de laboratrio ou no hospedeiro natural e monitora-se a replicao e a
possvel produo de sinais clnicos. Aps atingir-se a atenuao desejada, esse vrus poder
ser considerado um candidato a vrus vacinal.
3. Atenuao por passagens em ovos embrionados ou em animais O
procedimento similar ao descrito acima, com a diferena que multiplica-se o vrus sucessivas
vezes em ovos embrionados (o vrus replica no embrio) ou em animais de laboratrio. Para a
replicao em animais de laboratro, muitas vezes necessrio adaptar-se o vrus nessa espcie
animal. Geralmente so utilizados coelhos, cobaios, camundongos. Para alguns vrus, incluindo
vrus de mamferos que replicam em ovos embrionados (influenza, por exemplo), nveis
satisfatrios de atenuao podem ser obtidos com essa estratgia.
81
82
Por outro lado, muitas vezes no se consegue obter uma atenuao completa do agente.
Ou seja, a replicao do vrus vacinal pode produzir sinais clnicos, geralmente brandos, da
infeco. Por isso freqente que animais ou crianas vacinadas com esse tipo de vacina
apresentem temperatura elevada, irritabilidade, apatia, aps a administrao da vacina. Esses
sinais podem ser mais acentuados em indivduos imunocomprometidos, idosos ou subnutridos.
Para alguns vrus, mesmo cepas vacinais bem atenuadas podem produzir conseqncias
indesejveis. Vacinas com vrus atenuado contra o vrus da Diarria Viral Bovina (BVDV) e
herpesvrus bovino tipo 1 (BHV-1), por exemplo, se administradas a vacas prenhes podem
infectar o feto e causar abortos, alm de outras perdas reprodutivas. Uma comparao entre as
principais propriedades das vacinas replicativas (vivas) e no-replicativas est apresentada na
Tabela 1.
Alm das vacinas com vrus atenuados por mtodos tradicionais, outras vacinas que
utilizam o vrus vivo podem ser obtidas por manipulao gentica. Essas vacinas so
apresentadas a seguir, na seo vacinas geneticamente manipuladas.
imungenos no-vivos. Essa ltima aplicao ser abordada em outra seco. No presente
captulo sero apresentadas as vacinas recombinantes (vricas, bacterianas) a serem utilizadas
como vacinas com vrus vivo.
83
promissora
para
as
vacinas
atenuadas
por
mtodos
tradicionais.
O
nmero
de
agentes
virais
que
tem
sido
manipulado
herpesvrus,
so
vrias
as
protenas
que
determinam
84
85
impossibilidade
de
distinguir-se
anticorpos
vacinais
dos
anticorpos
importao/exportao
de
reprodutores
programas
de
em
fase
de
testes
em
animais.
EMBRAPA/CNPSA
86
87
estveis geneticamente e portanto mais seguras que as vacinas atenuadas por mtodos
tradicionais.
Embora a maioria das vacinas diferenciais em uso ou em testes sejam para uso como
vacinas vivas, possvel tambm utilizar esses vrus delatados para a produo de vacinas
diferenciais inativadas. Da mesma forma, a maioria das vacinas diferenciais tem sido
produzidas atravs de manipulao gentica. No entanto, mtodos tradicionais de selao de
mutantes naturais defectivos em alguma glicoprotena no-essencial j foram usados. Uma das
vacinas diferenciais para o BHV-1 (gE -) utilizada na Europa foi obtida de um mutante natural
gE - e no por manipulao gentica.
3. Vacinas de vetores virais
Para alguns vrus, a resposta imunolgica que confere proteo induzida por apenas
uma ou poucas protenas virais. Nesses casos, possvel obter-se nveis adequados de proteo
utilizando-se apenas essa (s) protena (s) imunognicas como vacina. Essa (s) protena (s)
(so) purificadas dos vrions (vacinas de subunidades) ou produzidas como protenas
recombinantes. No entanto, o uso dessas protenas como imungeno vacinal possui as
limitaes das vacinas no-vivas, em termos de proteo. Principalmente, a incapacidade de
induzir resposta especfica por linfcitos CD8+ citotxicos (CTLs), to importante para a
proteo contra vrios agentes virais, constitui-se em uma limitao importante dessas vacinas.
Estratgias para contornar esse problema incluem o uso de adjuvantes ou carreadores
especiais. No entanto, a estratgia mais eficiente para apresentao (e entrega) de antgenos
virais para o organismo de modo a induzir uma imunidade slida e protetora a introduo do
gene dessa protena no genoma de outro vrus (chamado de vetor), e o uso do vrus vetor
(vivo) como vacina. O vrus vetor vacinal, ao ser administrado ao animal, ir replicar, produzir
as suas protenas e a protena do outro vrus cujo gene foi introduzido no seu genoma
induzindo uma resposta imunolgica de magnitude e espectro caracterstica de vacinas vivas
(CD4+, anticorpos, CTLs). As protenas do vrus patognico so apresentadas para o sistema
imune em uma infeco no patognica promovida pelo vrus vetor. Infelizmente, esse tipo de
estratgia s tem sucesso para os vrus em que os antgenos que induzem resposta imunolgica
protetora esto concentrados em poucas protenas que podem ser identificadas. Assim, os
genes de interesse, ou seja, aqueles que codificam esta protena, so clonados no genoma de
outro vrus que utilizado como vacina.
A
grande
vantagem
das
vacinas
de
vetores
virais
que
88
pode
restringir
replicao
do
vrus
vacinal
primeira
imunizao
pode
restringir
resposta
revacinaes.
Dois problemas em especial, devem ser considerados quando
vetores virais vivos so utilizados como vacina. Primeiro: na grande parte
dos casos, o hospedeiro monta uma resposta imunolgica contra o
antgeno de interesse bem como contra o vetor viral.. Como resultado, a
utilizao posterior desse mesmo vetor pode
resultar em resposta
atenuados,
pode
determinar
conseqncias
adversas,
89
grande e de fcil
lanados na
90
animais
das
propriedades
vizinhas
ao
foco,
limitando
Vrus
recombinantes
expressando
genes
de
interleucinas.
estimular
resposta
imunolgica
inespecfica
(neutrfilos,
interleucinas
estimulantes
da
resposta
imunolgica.
91
(expressando
uma
glicoprotena
do
vrus)
como
vetor.
92
93
formuladas a partir
Geralmente,
compreende
duas
ou
trs
vacinao
doses,
primria
(primovacinao)
revacinaes
(reforos)
so
inativando
agente
sem (ou
com
mnimas)
mudanas
94
barreira
contra
entrada
de
agentes
infecciosos
no
95
96
97
vantagens
dessas vacinas
referem-se
grande
98
de
vacinas
utilizando
protenas
recombinantes
em
alguns
desses
sistemas
(HBV,
parvovrus,
calicivrus,
99
Essas
regies
so
conhecidas
como
epitopos
ou
possvel
sintetiz-los
artificialmente.
Com
advento
da
100
101
102
Carreadores e adjuvantes
Acredita-se que carreadores e adjuvantes sejam essenciais para a
adequada eficcia de uma vacina de peptdeos sintticos. Como
peptdeos sintticos geralmente possuem baixa imunogenicidade, podese lig-lo a uma protena carreadora ou a um hapteno atravs de
diferentes sistemas de ligaes qumicas. O principal problema com esse
sistema que a ligao a uma protena carreadora tende a ser casual no
levando em considerao a orientao do peptdeo. Assim, o stio
antignico do peptdeo pode no ser adequadamente apresentado ao
sistema imunolgico. Outra abordagem seria a fuso da sequncia do
peptdeo a uma protena carreadora atravs de engenharia gentica, isto
, colocar o peptdeo em uma regio imunodominante da protena de
fuso.
Carreadores
lipdicos
conhecidos
como
ISCOMs
(complexos
103
Desvantagens
Aplicabilidade
Vrus:
Nos ltimos anos, tem se observado considervel progresso na
investigao e desenvolvimento de peptdeos sintticos indutores de
resposta imune antiviral.
J foram testadas vacinas para o vrus da Febre Aftosa (FMD)
utilizando-se peptdeos correspondentes a uma seqncia de aminocidos
da protena viral VP1, obtendo-se resultados satisfatrios. Foi descrito
ainda a proteo de
parvovrus canino (CPV), utilizando-se stios antignicos da regio aminoterminal da protena VP2.
104
importantes
epitopos
imunognicos
do
Mycobacterium
peptdeos
sintticos
como
candidatos
vacinais
ao
pois
fornece
ao
organismo
as
informaes
genticas
clulas.
Esse
antgeno
possuir
todas
as
caractersticas
105
plasmdios.
extracromossmicas
que
Os
plasmidios
replicam
so
molculas
autonomamente
em
de
DNA
bactrias,
106
pelo
patgeno
quando
infecta
hospedeiro,
gerando
107
licenciamento.
Exemplos:
Mycobacterium
tuberculosis,
vrus
da
108
109
repetidas de lipopolissacardeos.
A principal vantagem dos toxides que eles so seguros. Os toxides
administrados parenteralmente estimulam anticorpos (IgM e IgG) que interferem com a
interao da toxina e clulas do hospedeiro que no esto na superfcie das mucosas. Por
outro lado a administrao de toxides nas superficies mucosas estimulam anticorpos
secretrios (sIgM e sIgA) que interferem com a interao da toxina e clulas do hospedeiro
na superfcie das mucosas. A principal desvantagem dos toxides utilizados para imunizao
pela via das superfcies mucosas sua meia vida extremamente curta.
Bacterinas
Bacterinas so bactrias patognicas mortas. Elas so usualmente produzidas pela
morte qumica dos agentes infecciosos, com o objetivo de preservar a estrutura bacteriana,
expressando eptopos importantes para estimular uma resposta imune efetiva. A resposta
imune quase sempre anticorpos.
110
Ou
111
Adjuvante
Fosfato de alumnio
Hidrxido de alumnio
Alumnio
Adjvante incompleto de
Emulso gua-leo
Freund
Corybacteria anaerbico
BCG
Fragmentos
Diptdeo muramyl
bacterianos
Bordetella pertussis
Lipopolissacardeos
Saponina
Agentes
ativo
de
Lisolectina
superfcie
Detergentes plurnicos
Complexos
de Sulfato dextrano
hidrocarbonos
Glicanos
Adjuvantes
Adjuvante completo de
misturados
Freud
Sais de alumnio
Modo de ao
Liberao
antgeno
lenta
do
Liberao
lenta
do
antgeno
Estimula macrfagos
Estimula macrfagos
Estimula macrfagos
Estimula linfcitos
Estimula macrfagos
Estimula
o
processamento
de
antgenos
Estimula macrfagos
Estimula macrfagos e
clulas T
112
Lipossomas
Lipossomas so vesculas lipdicas, onde uma fase aquosa
totalmente envolvida por uma ou mais camadas de fosfolipdeos. So
tm
sido
testados
como
transportadores
de
diversos
Apresentam
baixa
toxicidade
imunogenicidade;
so
sintticos.
Em
alguns
casos,
so
propositadamente
estabilidade
mecnica
como
reduz
vazamento
de
113
por
diversas
bicamadas
sucessivamente
separadas
por
Vantagens
sistema de entrega pode ser controlado
So biodegradveis
Carreiam substancias aquosas e oleosas
Previnem a oxidao
Solubilizam protenas
Tm hidratao controlada
So estveis
As paredes dos lipossomas possuem fosfolpidios que podem se ligar
substncias oleosas, como adjuvantes
Desvantagens
114
Em algumas
Alguns
115
Devido sua convenincia, tem se tomado comum o uso de vacinas contendo mais de
um agente infeccioso em sua formulao. Essas vacinas so chamadas de vacinas polivalentes,
multivalentes ou mistas, podendo conter uma mistura de virus, bactrias ou ambos. Em alguns
casos, as
vacinas so direcionadas a agentes que causam algum tipo especifico de
manifestao clnica. So exemplos as vacinas contra diarrias neonatais
em bovinos com rotavrus, coronavrus, E.coli e C.perfringes; ou contra
enfermidades respiratrias contendo o BVDV, BHV-1 5 PI-3 , BRSV e
Pasteurella sp. Outras vezes essas vacinas contm agentes que causam
diferentes sindromes clnicas.
116
Imunidade
Requer mltiplas
Necessitam
Quantidade
Administrao
7. Custo baixo
Custo alto
No induzem
Efeitos colaterais
Pouco risco de
No revertem
Estveis
Sem risco de
Pode ser
117
Imunodeficincia
-------------------------------------------------------------------------------------------------------------Algumas vacinas polivalentes para ces contm at oito agentes
diferentes (adenovrus canino tipo 1 e 2, virus da cinomose, parvovrus,
vrus da raiva, parainfluenza canina e leptospiras).
Vacina trplices de
Outro
vacinas,
pois
quando
vrios
antgenos
so
administrados
Se h algum
Alguns pesquisadores
Pelo
118
vivel (vivo) nessas vacinas, pois a resposta aos outros antgenos pode
ficar prejudicada.
As mesmas consideraes feitas acima aplicam-se ao uso de vacinas
monovalentes em combinao, o que tambm uma prtica comum em
medicina humana e veterinria.
Controle de qualidade
Antes de seu uso, as vacinas devem ser submetidas a testes de controle
de qualidade que garantam a sua segurana e eficcia. Em geral, esses
testes dividem-se em trs tipos: esterilidade, inocuidade e potncia (ou
eficcia).
1. Provas de esterilidade (ou de pureza) - Visam pesquisar a
presena
de
agentes
comercializao.
contaminantes
no
produto
pronto
para
So
119
120
Problemas de
inadequadas
(temperatura)
pode
inativar
ou
reduzir
Essa
Animal
responde
Muito tarde
(animal j
protetores
infectado)
Animais com
Administrao
imunidade
passiva
Correta
Incorreta
Animal no
responde
Cepa
Vacinal
Antgenos
no-
Errada
utilizados
Imunidade
Stress
Passiva
Subnutrio,
Animal
Variao
imunodeprimido
individual
Fatores do animal
Mesmo
considerando-se
uma
vacina
excelente,
bem
121
em
indivduos
imunodeprimidos,
reaes
122
REAES VACINAIS
Erros
Resposta anormal
Toxicidade
Reaes
Neurolgicas
Produo
Administrao
Contaminao
Contaminao
Virulncia
Bacteriana ou
residual
Toxicidade
anormal
Encefalite
Febre,
Inflamao,
Neurite Dor
Hipersensibilidade
Tipos I, III, IV
Fibrossarcoma
Tipo IV
Imunossupresso,
Enfermidade,
Morte Fetal
Tipo I
Granuloma
Local
Sistmica
123
Deve-se
de
sinais
clnicos
discretos.
Em
animais
Vacinas temperatura-sensveis
Vacinas contendo
de
contaminao
por
vrus
adventcios
ocasionalmente
A inativao do agente
124
das
clulas
de
cultivo,
etc...
Todas
as
formas
de
125
Administrao de adrenalina
So
Cada
No entanto,
Nesses casos, a
126
bacterianas neonatais.
O tempo de durao da imunidade passiva muito varivel,
dependendo da espcie, do agente infeccioso, dos nveis de anticorpos
da me na poca do parto, da ingesto do colostro, do desenvolvimento
corporal do animal jovem, entre outros.
animais,
imunizaes
realizadas
ao
redor
da
15-16'
semana
conferem
proteo
prolongada
quando
requerem
entre
pela
enfermidade.
vacinaes
necessrias.
de
reforo,
mesmo
que
rotineiramente
no
fossem
127