Aula de Analises Clinica

DESINFECO E
ESTERILIZAO
_________________________________________________________________________________
EQB353 Microbiologia Industrial
Escola de Qumica / UFRJ
O crescimento de micro-organismos pode ser controlado

atravs de mtodos qumicos e fsicos.
fsicos Este controle pode levar
eliminao total dos micrbios ou no. Dentre os mtodos de
eliminao parcial de microrganismos de determinado material ou
p
ambiente, os mais conhecidos so os de desinfeco e anti-sepsia.
Os agentes qumicos so utilizados para controlar o crescimento
de micrbios tanto em tecidos vivos como em objetos inanimados. A
maioria dos agentes qumicos somente reduz a populao bacteriana.
Nenhum desinfetante isolado ser apropriado para todas as
circunstncias.
i
t i
_________________________________________________________________________________
Condies
ond es que afetam a atividade
at dade antimicrobiana
ant m cro ana
i)) Tamanho da p
populao;
p
ii) Intensidade ou concentrao do
agente microbiocida;
iii) Tempo de exposio ao agente;
iv) Temperatura na qual os microorganismos
g
so expostos
p
ao
agente microbiocida;
v) Natureza do material contendo os
micro organismos;
micro-organismos;
vi)
Caractersticas
dos
microorganismos;
g
vii) Condies ambientais (pH,
concentrao de carboidratos,
presena de matria orgnica)
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Intensidade ou concentrao do agente

Temperatura na qual os microrganismos
so expostos ao agente
Clulas de Escherichia coli expostas

vrias concentraes de fenol a 35oC
Clulas de Escherichia coli expostas
p
soluo de fenol 4,62 g/L em temperaturas
entre 30oC e 42oC
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Anti-sepsia Inativao ou reduo do nmero de microrganismos

presentes em um tecido vivo, com substncias anti-spticas.
D inf
Desinfeco
Inativao
In ti
ou reduo
d do
d nmero
nm
d microrganismos
de
mi
nism s
presentes em um material inanimado, no implicando na eliminao de todos
os microrganismos viveis.
Porm
elimina a potencialidade infecciosa do
objeto
ou
superfcie
de
trabalho
(eliminao
de
microrganismos
patognicos).
Assepsia
p
Impede
p
a entrada de microrganismos
g
em reas de trabalho
(manobras asspticas).
Esterilizao eliminao de toda e qualquer forma de vida presente em
um determinado material ou ambiente.
Sanitizao o tratamento que leva diminuio da vida microbiana nos
utenslios alimentares e equipamentos de manipulao de alimentos at os
nveis
i seguros de
d sade
d pblica.
bli
_________________________________________________________________________________
AGENTES QUMICOS
Desinfeco e Esterilizao por

Agentes Qumicos
_________________________________________________________________________________
Agentes Qumicos
9
bactericida = mata os microorganismos presentes num meio
bacteriosttico = apenas inibe as atividades metablicas dos

microorganismos presentes num meio
_________________________________________________________________________________
DESINFETANTES
desinfeco
compostos
qumicos
utilizados
na
FENOL
FEN
L (a
(alterao
t ra da
a estrutura
trutura de pr
protenas
t na c
coagulao)
agu a )
a) 0.5 1.0% - antissptico
b) 5% - desinfetante
c) 89% - cauterizante
Alteraes na estrutura do fenol aumento da ao antimicrobiana e

diminuio da toxicidade (alquil-fenis orto, meta e para-cresis;
creolina).
_________________________________________________________________________________
FENOL
Atividade antimicrobiana de compostos fenlicos
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HALOGNIOS (agentes oxidantes inibio de enzimas com grupos SH

SH
e NH2)
a) Hipoclorito de Sdio (gua sanitria) NaOCl
b) Cloro
Cl
Cl2
NaOCl + H2O
NaOH + HOCl
Cl2 + H2O
HOCl + H+ + Cl-
cido hipocloroso
a) Desinfeco hospitalar e de gua (alimentao e piscinas)

b) VANTAGEM:
permanncia
de
atividade
residual
(sem
recontaminao)
t i
)
OZNIO
(desinfeco da gua O3)

a) VANTAGEM: microbicida sem contaminantes
b) DESVANTAGEM: custo oneroso, sem atividade residual
_________________________________________________________________________________
DESINFETANTES SURFACTANTES diminuio da tenso superficial

entre regies de carter polar e apolar que esto em contato.
a) ALVO: interface da membrana celular com o meio polar ao
redor
b) Estrutura do surfactante:
Regio Polar: grupo polar catinico
Regio Apolar: hidrocarboneto de cadeia longa
a)) Exemplo:
E
l compostos
t quartenrios
t i de
d amnia
i (QUATS)
AGENTES ALQUILANTES promovem a alquilao de grupos COOH,

COOH, -OH,
OH,
-SH e -NH2 de enzimas, inativando-as.
F
Formaldedo
ld d (3-8%)
(3 8%)
Lisofrmio (38%)
Glutaraldedo germicida (instrumentos mdicos)
Superfcie das clulas, com as protenas, aumentando a elevao do pH,
reagindo com grupos aminas livres das protenas - aglutinao celular.
xido de etileno gs esterilizante, txico e inflamvel
g
((alquilao)
q
) de g
grupos
p funcionais de p
protenas,,
Substitui o tomo de hidrognio
cidos nuclicos e outras molculas desnatura protenas e danifica RNA e
DNA.
DNA
AGENTES ALQUILANTES
Decrscimo do nmero de esporos

de Bacillus subtilis com 1200 mg/L de
xido de etileno e 40% de umidade
_________________________________________________________________________________
ANTI-SPTICOS
ANTI
SPTICOS
antissepsia
compostos
utilizados
para
fazer
Uso em tecidos vivos (uso tpico)
No podem ser ingeridos intoxicao

ndice de toxicidade ((I)) = uma
m m
medida da toxicidade seletiva do antisptico. Os testes so feitos em culturas de clulas e visam a verificar
a toxicidade do agente qumico.
qumico O ideal no superar o valor de 1,0.
10
I = Maior diluio que mata clulas de cultura em 10 min
Maior diluio que mata bactrias em 10 min
_________________________________________________________________________________
LCOOL (etlico ou isoproplico)
a) desnaturao de protenas
b) desorganizao dos lipdeos de membrana
c) agente desidratante
d)) Antissptico
p
e desinfetante
f
e) Maior ao em clulas vegetativas do que em esporos
f) Aumento da eficcia: diluio a 70% em gua
ETANOL assepsia de pele (seca rpido e desidrata a pele)

ISOPROPANOL mais eficiente, menos voltil, mais txico.
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ALCOOIS
Atividade antimicrobiana de lcoois
_________________________________________________________________________________
IODO (forte agente oxidante complexao e inativao de protenas)

a) AO: age sobre esporos, fungos e vrus
b) USO: 2% em gua ou soluo alcolica
c) Assepsia de tecidos / sabonete de iodo
Observao: o iodo combina com o aminocido tirosina, inibindo suas
funes, alm de oxidar grupos SH
SH de certos aminocidos. um
excelente anti-sptico, utilizado em solues 2% em gua ou em soluo
alcolica para anti-sepsia
anti sepsia de tecidos e tratamento de feridas.
feridas
_________________________________________________________________________________
HEXACLOROFENO derivado clorado do fenol (mesma ao)

a) USO:
sabonetes
(assepsia
das
mos
em
pr-operatrio),
antiperspirantes / pastas de dente
Biguanidas semelhante ao hexaclorofeno (composto clorado derivado do

Fenol)
_________________________________________________________________________________
PERXIDO DE HIDROGNIO (H2O2) antissptico fraco (3%)

a) USO: anti-sepsia de feridas pela liberao rpida de O2
(catalase)
b)AO: breve
AGENTES
GENTE SURFACTANTES
URF CT NTE sabonetes
b
(l
(lauril
il sulfato
lf
d sdio)
de
di )
- AO: rompimento da membrana celular, diminuio da tenso
superficial, altera a permeabilidade celular.
_________________________________________________________________________________
M d de
Modo
d Ao
A d
de A
Agentes
t A
Anti-microbianos
ti i
bi
_________________________________________________________________________________
Mtodos para Avaliao da Potncia Anti-microbiana
_________________________________________________________________________________
Mtodos para Avaliao da Potncia Anti-microbiana
_________________________________________________________________________________
Tcnica do Coeficiente de Fenol
Exemplo de um resultado do mtodo para

teste da potncia de desinfetantes
organismo empregado: Salmonela typhi
_________________________________________________________________________________
AGENTES FSICOS
Esterilizao de Equipamentos e
Meios por Mtodos Fsicos
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CALOR
O calor um dos mais importantes mtodos utilizados para o controle
do crescimento e para eliminar os micro-organismos. seguro, barato e no
forma produtos txicos.
txicos
Acima da temperatura ideal de crescimento, o calor vai promover a
d
desnaturao
t
de
d protenas
t
estruturais
t t
i e enzimas,
i
l
levando
d a perda
d da
d
integridade celular e conseqentemente a morte.
O calor pode ainda ser dividido em calor seco e calor mido. O calor
seco elimina micro-organismos tambm por processo de oxidao. O calor
na forma mida de vapor tem maior poder de penetrao e elimina as
formas vegetativas de procariotos, vrus, fungos e esporos.
A morte pelo calor uma funo exponencial que ocorre a medida que
p
se eleva.
a temperatura
_________________________________________________________________________________
C
Caractersticas
t ti
d
dos micro-organismos
i
i
_________________________________________________________________________________
Agentes Fsicos
9
9
9
Calor
Filtrao
Radiaes
_________________________________________________________________________________
Depende do tipo de micro-organismo = endosporos necessitam de maior tempo

de contato (Endosporo Bacillus sterarothermophilus a 105
105C
C = 250 minutos)
_________________________________________________________________________________
Calor mido
Temperatura Elevada + Umidade Maior efetividade para

destruir micro
micro-organismos
organismos
Desnaturao irreversvel de protenas
Resistncia das protenas ao calor um funo da
hidratao da clula ( gua entrada nos domnios
proticos mudana conformacional = desnaturao)
_________________________________________________________________________________
Calor mido
Carboidratos
alteraes
em
funo
do
calor
(caramelizao produtos txicos)

Papel
p importante
p
na esterilizao
ESTERILIZAO A VAPOR SOB PRESSO (AUTOCLAVE)

ESTERILIZAO CALOR MIDO CONTNUO
ESTERILIZAO CALOR MIDO FRACIONADO
Calor mido
1 Autoclave utiliza o calor na forma de vapor d
1.
dgua
gua sob presso.
presso
Utilizado no preparo de meios para o cultivo de microrganismos, vidrarias.
Quando o vapor em fluxo livre,
livre a 100
100C
C, colocado sob uma presso de 1
atmosfera acima da presso do nvel do mar, a temperatura sob para
121C Este
121C.
E t mtodo
t d destri
d t i formas
f
vegetativas
t ti
e esporuladas
l d (121C/15(121C/15
30 min.) de procariotos, fungos, promovendo a esterilizao.
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
AUTOCLAVAO
Tempo de exposio requerido para

esterilizao
l
em autoclave
l
d solues
de
l
aquosas em vrios recipientes
Temperatura superior a 100C

VAPOR SATURADO SOB PRESSO
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
2. gua em Ebulio utiliza o calor na forma de vapor dgua livre.

Destri apenas formas vegetativas (100C/20 min.).
3. Tindalizao utiliza o calor na forma de vapor dgua livre. Visa

destruir formas vegetativas e esporuladas.
esporuladas tambm denominada
esterilizao fracionada ou intermitente (100C/20 min, durante 3 dias
consecutivos).
i ) Utilizado
U ili d no preparo de
d alguns
l
medicamentos,
di
vacinas,
i
etc.
_________________________________________________________________________________
4. Pasteurizao um mtodo muito utilizado nas indstrias de

alimentos no preparo do leite, cremes, cerveja, etc e que s podem ser
controladas p
para no desnaturar os
submetidos ao calor em condies
nutrientes.
Ocorre uma reduo no nmero de populaes microbianas pela exposio
breve a uma temperatura relativamente alta. Porm no necessariamente
todas as formas vegetativas so destrudas.
destrudas Existem 3 tipos de
pasteurizao:
Ult t
Ultra-temperatura
t
(UHT) 141C por 2 seg.
Alta temperatura (HTST) 72C por 15 seg
Baixa temperatura (LHT) 63C por 30 min
_________________________________________________________________________________
Calor Seco
Destruio
p
por oxidao
dos constituintes q
qumicos
Requer maior tempo e menor eficincia (calor mido)
Transferncia
T
f
l
lenta
d calor
do
l e o nvel
l de
d hidratao
hd
das
d
clulas tende a diminuir
FORNO PASTEUR
INCINERAO
FLAMBAGEM
_________________________________________________________________________________
C l Seco
Calor
S
Fornos ou Estufas Tm menor poder de penetrao que o calor mido,
utilizando tempos e temperaturas maiores.
maiores De um modo geral,
geral utiliza o
calor seco a 180C durante 30 minutos ou 160C por 2 horas. Muito
utilizado
tili d para vidrarias
id i s e para materiais
t i is danificveis
d ifi is pela
l umidade
id d como
os metais ou leos.
_________________________________________________________________________________
Flambagem Ocorre a combusto completa dos micro-organismos em

alas e agulhas microbiolgicas, esterelizando-as: aquecimento ao rubro
na chama do bico de Bunsen (300 600C).
Incinerao a combusto completa para descontaminao de

material hospitalar de uso descartvel (luvas, material plstico) alm de
lixo contaminado e animais de laboratrio (> 1.000
1 000C)
C)
_________________________________________________________________________________
U d
Uso
de ttemperaturas
t
para o controle
t l microbiano
i
bi
_________________________________________________________________________________
RADIAES
As radiaes constituem um mtodo eficaz para reduzir ou eliminar os
micro-organismos. Existem vrios tipos de radiaes eletromagnticas como o
Raio X e outras radiaes ionizantes, ultravioleta, feixes de eltrons e
microondas.
Radiaes Ionizantes (X,

(X , ,
)
As
A principais
i i i fontes
f t de
d
radiao ionizante so o cobalto 60 e o csio 137. Gerao de molculas

altamente reativas
Um tomo emite eltrons de alta energia, ionizando a molcula receptora
A morte celular resulta da formao de uma cadeia de ionizao do
DNA
_________________________________________________________________________________
RADIAES
Ultravioleta (U.V.)
(U V )
no-ionizante
com
atividade
Radiao
microbicida
efetiva
f ti
na faixa
f i
d comprimento
de
i
t de
d onda
d
entre 220 e 300 nm.
Purinas e Pirimidinas = absoro em 260
nm
O poder de penetrao muito baixo
PIRIMIDINAS = produo de ligaes
cruzadas entre pirimidinas adjacentes na
mesma
m
m f
fita DNA,, f
formando
m
dmeros
m
de
timina
- MUTAO (tambm ocorre no RNA)
_________________________________________________________________________________
FILTRAO
Filt
Filtros
B t i l i
Bacteriolgicos
empregados
d
para esterilizar materiais termolbeis como soro,

enzimas,
antibiticos,
etc.
So
filtros
de
materiais diversos como steres (acetato ou

nitrato) de celulose ou amianto. Tambm existem
que so filtros de alta eficincia
os filtros HEPA,, q
para reteno de partculas do ar, encontrado no
fluxo laminar.
laminar
_________________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________________
Cmaras de Fluxo Laminar

Filtros de ar de alta eficincia (90%)
Membranas de acetato de celulose
_________________________________________________________________________________
Baseado nos agentes qumicos

qu m cos e fsicos...
f s cos...
M
Material
i l Limpo
Li
x Material
M
i l Sujo
S j
Qual o p
Q
procedimento p
para esterilizar material limpo?
p
-Ao fsica ou ao qumica?
Qual o procedimento para descartar material sujo?
- Ao fsica ou ao qumica?
_________________________________________________________________________________
EFICINCIA DE AGENTES FSICOS E

QUMICOS NA ESTERILIZAO E
DESINFECO DE MATERIAIS E
COMPONENTES INDUSTRIAIS
CONHECIMENTO DOS ASPECTOS

FISIOLGICOS DOS MICRO-ORGANISMOS
CONHECIMENTO DOS ASPECTOS FSICOQUMICOS DOS COMPONENTES A SEREM
ESTERILIZADOS
_________________________________________________________________________________

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O crescimento de micro-organismos pode ser controlado

Intensidade ou concentrao do agente

Clulas de Escherichia coli expostas

Anti-sepsia Inativao ou reduo do nmero de microrganismos

Desinfeco e Esterilizao por

bactericida = mata os microorganismos presentes num meio

bacteriosttico = apenas inibe as atividades metablicas dos

Alteraes na estrutura do fenol aumento da ao antimicrobiana e

Atividade antimicrobiana de compostos fenlicos

HALOGNIOS (agentes oxidantes inibio de enzimas com grupos SH

a) Desinfeco hospitalar e de gua (alimentao e piscinas)

(desinfeco da gua O3)

DESINFETANTES SURFACTANTES diminuio da tenso superficial

AGENTES ALQUILANTES promovem a alquilao de grupos COOH,

Decrscimo do nmero de esporos

Uso em tecidos vivos (uso tpico)

No podem ser ingeridos intoxicao

LCOOL (etlico ou isoproplico)

ETANOL assepsia de pele (seca rpido e desidrata a pele)

IODO (forte agente oxidante complexao e inativao de protenas)

HEXACLOROFENO derivado clorado do fenol (mesma ao)

antiperspirantes / pastas de dente

Biguanidas semelhante ao hexaclorofeno (composto clorado derivado do

PERXIDO DE HIDROGNIO (H2O2) antissptico fraco (3%)

Mtodos para Avaliao da Potncia Anti-microbiana

Mtodos para Avaliao da Potncia Anti-microbiana

Tcnica do Coeficiente de Fenol

Exemplo de um resultado do mtodo para

Depende do tipo de micro-organismo = endosporos necessitam de maior tempo

Temperatura Elevada + Umidade Maior efetividade para

(caramelizao produtos txicos)

ESTERILIZAO A VAPOR SOB PRESSO (AUTOCLAVE)

Tempo de exposio requerido para

Temperatura superior a 100C

2. gua em Ebulio utiliza o calor na forma de vapor dgua livre.

3. Tindalizao utiliza o calor na forma de vapor dgua livre. Visa

4. Pasteurizao um mtodo muito utilizado nas indstrias de

Flambagem Ocorre a combusto completa dos micro-organismos em

Incinerao a combusto completa para descontaminao de

Radiaes Ionizantes (X,

radiao ionizante so o cobalto 60 e o csio 137. Gerao de molculas

para esterilizar materiais termolbeis como soro,

materiais diversos como steres (acetato ou

Cmaras de Fluxo Laminar

Baseado nos agentes qumicos

EFICINCIA DE AGENTES FSICOS E

CONHECIMENTO DOS ASPECTOS

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