POTENCIAL ANTIOXIDANTE DA N-ACETIL-L-CISTENA SOBRE O

ESTRESSE OXIDATIVO NA ESQUISTOSSOMOSE EXPERIMENTAL

CRNICA
Renan Andrade Fernandes de Souza ; Andr de Lima Aires2
1

Estudante do Curso de Biomedicina- CCB UFPE; E-mail: renan.andrade.fernandes@hotmail.com,

Docente/pesquisador do Depto de Medicina Tropical CCS UFPE. E-mail: andrelima26@gmail.com.

Sumrio: A esquistossomose mansoni uma helmintase acarretada pelo Schistosoma

mansoni, tpica de regies tropicais e subtropicais e que pode levar ao bito. O tratamento
realizado pelo frmaco praziquantel no garante preveno de infeces futuras, nem a
reduo da inflamao causada pelos ovos do verme. As reaes inflamatrias acarretam na
liberao de radiais livres, que devem ser neutralizados pelos mecanismos naturais de
homeostase orgnica. Porm quando essa carga de radicais livres maior do que a capacidade
de neutralizao do organismo, o indivduo entra num estado denominado estresse oxidativo.
Estudos indicam a N-acetil-L-cistena (NAC) como um agente direto ou indireto antioxidante,
devido a seu grupamento sulfidrila, que vai interagir com esses radicais, neutralizando-os. A
NAC apresentou capacidade suficiente para a reduo notvel desses radicais livres,
refletindo na diminuio direta dos marcadores orgnicos dessa condio oxidativa, podendo
ser considerada como uma droga eficaz e segura.
Palavraschave: Esquistossomose; NAC; Estresse; Oxidativo
INTRODUO
A esquistossomose uma helmintase crnica, causada pelo platelminto Schistosoma
mansoni. A infeco prevalente em pases tropical e subtropical, sobretudo na frica e
Amrica do Sul. Estima-se que uma a cada trinta pessoas, no mundo, seja portadora de
esquistossomose, que mais de 700 milhes indivduos esto em risco constante de infeco e
que cerca de 500 mil infectados evolem ao bito todos os anos. Atualmente, o tratamento
realizado com Praziquantel (PZQ), que apresenta alta eficcia contra vermes adultos e baixos
efeitos colaterais, no entanto no modula sobre as leses granulomatosas j instaladas que
podem causar sequelas irreversveis. O principal elemento patognico da infeco so os ovos
arrastados via correte sangunea e depositados no fgado, principal sitio das alteraes
patolgicas. Ao redor dos ovos inicia-se a formao inflamatria granulomatosa, culminando
em uma cicatriz fibrtica, que pode leva a uma cirrose irreversvel, impedindo que o fgado
exera suas funes biolgicas.
A inflamao causada pela esquistossomose possui um grau elevado de comprometimento do
tecido, devido liberao de espcies reativas de oxignio, causando um estresse oxidativo. O
organismo possui um sistema complexo natural para combate desse estresse, atravs da
inativao dessas espcies reativas de oxignio, dentre as quais podemos citar as enzimas
desintoxicantes (superxido dismutase, catalase, e peroxidases), alm do mecanismo natural
de reparo do DNA contra o ataque desses radicais. O problema se agrava quando a situao
est fora do controle destes mecanismos, por exemplo, quando esses radicais livres esto alm
da capacidade de defesa natural orgnica.
O estado patolgico do indivduo agravado quando os nveis de Glutationa esto reduzidos,
pois esta tem papel fundamental no metabolismo de xenobiticos, realizando uma espcie de
neutralizao dos radicais de oxignio produzidos nos locais da inflamao. A preveno do
estresse oxidativo causado pela doena, inclui o aumento dos nveis plasmticos desta
glutationa, ou a induo de sua produo pelo organismo. A glutationa possui como precursor
comum a N-acetil-L-cistena (NAC), um composto que possui atividade antioxidante e

citoprotetora. Sua molcula contm grupos sulfidrilo livres, de modo que pode reagir
diretamente com os radicais livres (Cuzzocrea et al., 2000).
MATERIAIS E MTODOS
Aps aprovao pela comisso de tica em Experimentao Animal do Centro de Cincias
Biolgicas da Universidade Federal de Pernambuco (CEEA/UFPE) (processo numero
23076.021878/2008-66), camundongos (n=48), fmea Swiss webster, com 30 dias de idade,
pesando 282 g, foram obtidos e mantidos no biotrio do Laboratrio de Imunopatologia
Keizo Asami - LIKA da UFPE. Para a infeco dos camundongos utilizamos a cepa de S.
mansoni, Belo Horizonte-MG (BH), mantida no LIKA no setor de Doenas Parasitrias e de
Esquistossomose Experimental, atravs de passagens sucessivas da cepa em caramujos
Biomphalaria glabrata e camundongos Swiss. Aps obteno de uma suspenso cercariana,
trinta e dois camundongos foram infectados via percutnea com 50 cercrias (Olivier;
Stirewalt, 1952). O restante dos animais foi mantido nas mesmas condies, mas livre de
exposio cercariana. Os animais foram divididos de acordo com a exposio cercariana e
esquema de interveno teraputica empregado. Os animais livres de infeco foram
divididos aleatoriamente em dois grupos (G1 e G2) com 8 animais cada. Os animais
infectados foram divididos aleatoriamente em quatro grupos (G3 G6) com 8 animas cada, de
acordo com o esquema: Grupo 1 (G1): No infectados controle com salina; Grupo 2 (G2):
No infectados tratados com NAC; Grupo 3 (G3): Infectados controle com salina; Grupo 4
(G4): Infectados tratados com NAC; Grupo 5 (G5): Infectados tratados com PZQ; Grupo 6
(G6): Infectados tratados com NAC e PZQ.
NAC (Sigma Chemical, St. Louis, MO, EUA) foi diluda em soluo salina na dose de
200mg/Kg/dia, de acordo com estudos anteriores (Jones et al., 1994; FAN et al., 2007; Aires
et al., 2012), e administrada via oral (sonda gstrica) a partir do 45 dia aps a infeco e foi
mantida diariamente at o 180 dias aps infeco. Todos os animais submetidos ao
tratamento com PZQ receberam a dose curativa de 100mg/Kg/dia, por cinco dias consecutivos
a partir do 45 dia aps a infeco (Aires et al., 2012).. PZQ foi suspendido em Cremophor
EL a 2% e administrado por via oral. Os grupos no expostos a nenhuma a interveno
teraputica (livre de NAC e/ou PZQ), receberam a mesma quantidade do veculo de diluio e
foram submetidos s mesmas condies que os grupos experimentais. Vinte e quatro horas
aps a ltima dose de NAC, no181 aps a infeco, todos os camundongos foram submetidos
eutansia sob anestesia. O sangue foi coletado por puno cardaca e o soro separado por
centrifugao. Os nveis sorolgicos da aspartato aminotransferase (AST), alanina
aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina (FA), e albumina (ALB) foram medidos em
aparelho de Preciso TARGA (Anlise de Tecnologia Avanada aleatria Generation).
Posteriormente a coleta de sangue, os animais foram perfundidos e o fgado coletado para
anlise do estresse oxidativo. nion superxido foi medido como previamente descrito
(Poderoso et al., 1996) e expresso em nmol/mg/protena. Superxido ser calculado com base
na taxa de oxidao de adrenalina determinado pela absorvncia a 780 nm. Espcies reativas
do cido tiobarbitrico (TBARS) foi medida como um marcador de peroxidao lipdica por
espectrofotometria a 532 nm (Draper et al., 1990). Os resultados foram expressos como
TBARS nmol/mg de protena. O teor de carbonila ser determinado por espectrofotometria a
370 nm, utilizando um coeficiente de absoro molar de 22000 M-1 cm-1 (Levine, et al.,
1990). O teor total de protena foi medida de acordo com o contedo de Protena Lowry
(Michael et. al., 1987). O ensaio foi realizado utilizando albumina de soro bovino como
padro. Um reagente de Folin fenol (reagente fosfomolbdico-fosfotngstico) foi adicionado
para se ligar protena. Os dados foram analisados utilizando-se anlise de varincia
ANOVA pelo Programa Prism (software GraphPad Prism verso 3.02). Os dados sero
considerados significantes se p<0.05.

RESULTADOS
Durante a coleta e centrifugao do sangue para obteno de soro, no conseguimos amostras
suficientes para fazer uma anlise estatstica confivel. Este fato ocorreu por falha na coleta
que causou hemlise.

Figura 1 Efeito do tratamento com NAC (200mg/kg /dia) e/ou do PZQ (100mg/kg /dia) em
camundongos, no infectados e infectados com S. mansoni, sobre os nveis de (A) nion
superxido, (B) peroxidao lipdica, (C) carbonilao de protenas e (D) grupos sulfidrila no
tecido heptico. Os resultados esto expressos em mdia de 8 animais por grupo DP. *P <
0.01 diferena entre controle infectado e NAC, PZQ e NAC+PZQ infectados; a P < 0.001
diferena entre controle no infectado e controle infectado e **P < 0.001 diferena entre
controle infectado e NAC, PZQ e NAC+PZQ infectados.
DISCUSSO
Em nosso estudo, o esquema teraputico com PZQ reduziu em 100% a carga parasitria, uma
vez que nenhum verme foi recuperado do sistema porta-heptico (dados no mostrados).
Deste modo, reduzimos os danos causados pelo parasitismo e padronizamos um modelo
fisiopatolgico da inflamao granulomatosa j instalada e assim medimos com preciso a
ao da NAC como uma droga adjuvante a terapia antischistosoma. Nos grupos sem
interveno com PZQ, a carga parasitria foi mantida e uniforme (dados no mostrados),
assim a inflamao evoluiu, resultando em complicaes patolgicas, incluindo o dano
oxidativo heptico.
Nossos resultados corroboram com os estudos de Sei fel-Din e colaboradores (2006) e Seif elDin, Al-Hroob, Ebeid (2011), onde mostram que a infeco pelo S. mansoni reduz as defesas
antioxidantes, uma vez que houve nveis elevados, no tecido heptico, de nion superxido,
peroxidao lipdica, carbonilao de protenas e reduo de grupos sulfidrila. Ademais,
durante a infeco a atividade das enzimas catalase e glutationa peroxidase drasticamente
reduzida, juntamente com os nveis intracelulares de glutationa no fgado. O sistema oxidante
tem importante papel na defesa natural do ser humano, por um equilbrio natural entre proxidantes e antioxidantes (Vertuani, 2004). Nessas condies, a reposio exgena de
antioxidantes essencial para eliminar os produtos de reaes oxidativas e manter as
operaes imunolgicas capazes de neutralizar os antgenos de ovos de S. mansoni e assim
restaurar as funes hepticas (Sei fel-Din el. al., 2006, Seif el-Din, Al-Hroob, Ebeid, 2011).
Assim, o tratamento com a NAC reduz os nveis hepticos de nion superxido, peroxidao

lipdica e carbonilao de protenas e aumenta os nveis de grupos sulfidrila no mesmo tecido,

quando comparados grupo controle infectado. Esses achados tambm so observados nos
grupos tratados com PZQ.
Os animais tratados com a NAC sofreram reduo nos nveis de oxidantes devido a sua
atuao direta ou indiretamente como antioxidante, pela neutralizao de radicais e reaes
redox (cistena-cistina) e sntese de glutationa (TUMUR, 2010). Nos resultados mostra que o
tratamento com NAC, em camundongos no infectados, no alterou os nveis dos marcadores
do estresse oxidativo e bioqumicos de danos heptico. De fato, a NAC uma droga
biossegura que j vem sendo empregada no tratamento e controle de algumas patologias e
mostra-se segura para o uso em humanos.
CONCLUSES
A NAC possui efeito eficaz na reduo significante do estresse oxidativo da esquistossomose.
Seu terminal sulfidrila reage com radicais livres, impedindo que essas espcies reativas de
oxignio intensifiquem os danos causados pelos ovos do Schistosoma mansoni. A NAC vai
agir como um auxiliar, do sistema antioxidante natural do organismo. Muito ainda precisa ser
estudado a respeito, no entanto, a certeza de que a NAC, atenua os danos severos e
irreversveis da doena, incontestvel. Sua associao com um frmaco que elimine o
parasito, traz perspectivas muito positivas para o controle desta parasitose, embora que ainda
se esteja longe do esperado.
AGRADECIMENTOS
Agradeo ao meu orientador, pelo fomento necessrio e pacincia, Dra. Mnica Pessa pela
participao fundamental junto com toda a equipe do laboratrio. Ao LIKA, pela estrutura,
UFPE, bem como a ProExt e ao CNPq pela credibilidade e bolsa cedida. A todos envolvidos
direta ou indiretamente, nosso muito obrigado!
REFERNCIAS
Draper HH, Hadley M. Malondialdehyde determination as index of lipid peroxidation.
Methods Enzymol 1990;186:421-31.
Levine RL, Garland D, Oliver CN, Amici A, Climent I, Lenz AG, et al. Determination of
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Michael G. Fiftyfold amplification of the Lowry protein assay. Analytical Biochemistry 1987
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Bulaj G, Kortemme T, Goldenberg DP. Ionization-reactivity relationships for cysteine thiols
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TUMUR, Z.; SHIMIZU, H.; ENOMOTO, A.; MIYAZAKI, H.; NIWA, T. Indoxyl sulfate
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Vertuani S, Angusti A, Manfredini S. The antioxidants and pro-antioxidants network: an
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