Beta Caroteno A Partir de Oleo de Buriti PDF

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO
Programa de Ps-Graduao de Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos

Escola de Qumica
Dissertao de Mestrado
Aplicao de
Tecnologia Enzimtica
na Obteno de
-Caroteno a partir de
leo de Buriti
(Mauritia vinifera)
Bernardo Dias Ribeiro
RIO DE JANEIRO
FEVEREIRO/2008
APLICAO DE TECNOLOGIA ENZIMTICA NA

OBTENO DE -CAROTENO A PARTIR DE LEO DE
BURITI (MAURITIA VINIFERA)
Bernardo Dias Ribeiro
DISSERTAO DE MESTRADO APRESENTADA AO CORPO DOCENTE DO CURSO DE PSGRADUAO EM TECNOLOGIA DE PROCESSOS QUMICOS E BIOQUMICOS DA ESCOLA
DE QUMICA DA UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIIRO, COMO PARTE DOS
REQUISITOS NECESSRIOS OBTENO DO GRAU DE MESTRE EM CINCIAS (M.Sc.).
Orientadores:
Prof. Daniel Weingart Barreto, D. Sc.
Prof. Maria Alice Zarur Coelho, D. Sc.
RIO DE JANEIRO
FEVEREIRO/2008
ii
T
18
R484a Ribeiro, Bernardo Dias
Aplicao de tecnologia enzimtica na obteno de caroteno a partir de leo de buriti (Mauritia vinifera)/
Bernardo Dias Ribeiro. Rio de Janeiro, 2008.
xvi, 103 f.: il.
Dissertao (Mestrado em Tecnologia de Processos
Qumicos e Bioqumicos) Universidade Federal do Rio
de Janeiro, Escola de Qumica, 2008.
Orientadores: Daniel Weingart Barreto e Maria Alice
Zarur Coelho
1. Hidrlise enzimtica. 2. leo de Buriti. 3. Caroteno 4. Lipases
I. Barreto, D. W. (Orient.)
II. Coelho, M. A. Z. (Orient.)
III. UFRJ. Escola de Qumica. IV. Ttulo
CDD: 665.3
iii
iv
AGRADECIMENTOS
Primeiramente, agradeo a Deus por ter me dado fora e autoconfiana para conseguir
superar todas as dificuldades que enfrentei durante esta dissertao;
minha me Sonia, que sempre lutou muito para me dar estudo, comida, conforto, e
tudo mais o que ela pode fazer, apesar de todas as dificuldades que a vida lhe proporcionou.
Sempre darei o meu melhor para poder corresponder o seu esforo, me;
minha av Maria, meu av Afranio e meu tio Afranio Jos por me apoiarem sempre
quando precisei, apesar de no conseguir ser mais presente como era em alguns anos atrs,
mas tenham certeza que amo muito todos vocs;
minha noiva Aline, porque alm de me fazer muito feliz, me deu algumas sugestes
interessantes durante a conduo desta dissertao;
A todos os meus amigos e familiares, por no terem me esquecido apesar de toda
minha ausncia neste perodo;
Ao meu orientador prof. Daniel Barreto, grande mestre e pai cientfico, por ter me
ensinado como pensar mais concretamente sobre produtos naturais e tambm na minha vida, a
ter mais foco nas pesquisas devido a minha avidez de querer saber sobre tudo e achar tudo
interessante. Grandes conversas na hora do almoo que giravam em torno de praticamente
qualquer assunto. Acima de tudo, mestre, obrigado por sua amizade e considerao;
minha orientadora prof Maria Alice, por ter me acolhido carinhosamente no seu
laboratrio desde 2003, e que considero como minha madrinha cientfica. Quem conhece
sabe que voc tem um corao imenso, teacher, e s tenho a agradecer por mim e por todos do
laboratrio por tudo o que voc faz pensando em ns;
Roberta, Etel, Priscilla, Gizele, Ana Iraidy, Ariana, Andr, Mariana, Kelly, Tatiana
e todos os outros que freqentaram o laboratrio de Enzimologia Industrial, pela amizade e
pelo ambiente agradvel de trabalho;
estagiria Lvia, por ter me ajudado em algumas anlises em um ponto crtico da
dissertao, e tambm ao pessoal do Departamento de Processos Orgnicos (rika, Elizandra,
Karine e Lourdes) pela convivncia pacifica e divertida;
prof Suely Freitas, por te me emprestado alguns solventes para realizao de
experimentos;
prof Eliana Flvia, e ao tcnico Paulinho, por terem permitido o uso do shaker no
laboratrio E-107;
A prof Magali Cammarota, por ter permitido o uso dos seus equipamentos, enquanto
nosso laboratrio estava em obras;
A prof Andra Salgado e a ps-doutoranda Ninoska, por ter permitido o uso de seu
shaker no Laboratrio de Engenharia Qumica;
Ao prof Alexandre Torres (IQ-UFRJ), por ter me tirado vrias dvidas de HPLC, e de
anlise de insaponificveis;
prof Claudia Rezende (IQ-UFRJ), e as alunas Carolina, Silvia e Michelle, por terem
feito e me explicado um pouco mais sobre anlise da composio de cidos graxos em
cromatografia em fase gasosa;
prof Dlia Rodriguez-Amaya (FEA-UNICAMP), por ter me enviado um artigo

falando sobre carotenides da polpa de buriti, e por ter feito o guia de anlise e isolamento de
carotenides, que foram essenciais para a tese;
A todas as demais pessoas que contriburam, direta e indiretamente, para que o
presente texto pudesse ser desenvolvido;
Aos membros da banca examinadora, pelo aceite do convite;
A CAPES, pela bolsa de mestrado concedida;
A FAPERJ, pela bolsa ALUNO NOTA 10 concedida;
vi
Alguns homens vem as coisas como so, e dizem: Por qu?

Eu sonho com as coisas que nunca foram e digo: Por que no?
George Bernard Shaw
vii
RESUMO
RIBEIRO, Bernardo Dias. Aplicao de tecnologia enzimtica para obteno de caroteno a partir de leo de buriti (Mauritia vinifera). Rio de Janeiro, 2008. Dissertao
(Mestrado em Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos) Escola de Qumica,
Universidade Federal do Rio de Janeiro, 2008.
O -caroteno utilizado como corante alimentcio ou como complemento nutricional, por ser
a principal fonte de pr-vitamina A. Estima-se que o mercado mundial de carotenides, que
em 2005 foi de 887 milhes de dlares, ir crescer 3% ao ano, quebrando a barreira de 1
bilho de dlares em 2009, sendo o -caroteno responsvel por quase 30% deste mercado. A
maior parte do -caroteno vendido no mundo obtida por sntese qumica a partir da ionona, mas uma pequena parte produzida por processos biotecnolgicos, utilizando
diferentes microorganismos, tais como fungos filamentosos (Blaskelea trispora e Phycomyces
blaskeleeanus), leveduras (Rhodotorula glutinis), bactrias (Flavobacterium multivorum) e
microalgas (Dunaliella salina e D. bardawil). Alguns frutos oleaginosos como o dend
(Elaeis guineensis) e o buriti (Mauritia vinifera) apresentam um alto teor de carotenides,
principalmente de -caroteno. O buriti uma palmcea que cresce em diversas reas do
Brasil, e apresenta diversos usos tradicionais, como na preparao de refrescos e doces da
regio Amaznica. O recente interesse em novas fontes naturais de -caroteno tm estimulado
o desenvolvimento de processos para a extrao do leo rico em carotenides do buriti. A
maior parte desses processos, entretando, ainda baseada em tecnologias convencionais que
incluem a secagem e a prensagem do leo da polpa. O presente trabalho trata da
caracterizao inicial do leo bruto e refinado de buriti, incluindo a determinao dos
insaponificveis, e posteriormente a hidrlise enzimtica de ambos os leos, para a posterior
extrao e concentrao de -caroteno. Na etapa de hidrlise foi avaliado o desempenho de
duas lipases comerciais, Lipozyme TL IM e CALB L, e tambm de uma lipase produzida em
laboratrio originada de Yarrowia lipolytica. Os parmetros avaliados no processo de
extrao foram: temperatura, quantidade de enzima (atividade enzimtica) e relao substrato
(leo de buriti) / gua. As condies experimentais foram estabelecidas atravs de um
planejamento estatstico de experimentos, de forma a se otimizar seus valores em funo do
maior rendimento de cidos graxos livres e a perda mnima de carotenides durante o
processo. Os resultados foram analisados em relao ao teor de cidos graxos livres por
titulao; carotenides totais por espectrofotmetro e composio de carotenides totais por
HPLC, utilizando coluna YMC ODS-A com fase mvel de acetonitrila/metanol/THF
(50/45/5). Na caracterizao do leo bruto, os resultados foram similares aos j encontrados
na literatura, mas o leo refinado apresentou apocarotenides, que so formados durante o
processo de refino de leos vegetais. As condies timas de hidrlise enzimtica foram
diferentes para cada leo, onde a lipase Lipozyme TL IM apresentou uma atividade lipoltica
superior s demais. Aps a hidrlise do leo, foram testados alguns mtodos para separar os
cidos graxos formados dos carotenides, e assim aumentar a concentrao de -caroteno no
produto final.
viii
ABSTRACT
RIBEIRO, Bernardo Dias. Aplicao de tecnologia enzimtica para obteno de caroteno a partir de leo de buriti (Mauritia vinifera). Rio de Janeiro, 2008. Dissertao
(Mestrado em Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos) Escola de Qumica,
Universidade Federal do Rio de Janeiro, 2008.
-carotene is the main source of provitamin A, and is widely used as a food colorant and
nutritional supplier. The global market for carotenoids, which was of US$ 887 millions in
2005 and has been growing at an yearly rate of 3% , is estimated to surpass US$ 1 billion in
2009., -carotene being responsible for almost 30% of this market. Most of the -carotene
sold in the world is produced by chemical synthesis from -ionone, but a small amount is
manufactured using biotechnological processes, based on different microorganisms, such as
fungi (Blaskelea trispora and Phycomyces blaskeleeanus), yeasts (Rhodotorula glutinis),
bacteria (Flavobacterium multivorum) e microalgae (Dunaliella salina and D. bardawil).
Some oleaginous fruits such as palm (Elaeis guineensis) and buriti (Mauritia vinifera) present
high concentrations of carotenoids, specially -carotene. Buriti is a palm tree that grows wild
in different areas of Brazil, and has been traditionally used for the preparation of beverages
and candies in the Amazon area. The recent interest about other natural sources of -carotene
stimulated the development of processes to extract the carotenoid-rich oil of the buriti fruit.
Most processes, however, are still based on the conventional technologies for pulps, including
drying and pressing the oil off the pulp. The present work involves the initial characterization
of crude and refined buriti oil. The characterization includes the determination of
unsaponifiable matter, followed by enzymatic hydrolysis, for further extraction and
concentration of -carotene from the buriti oil. In the hydrolysis process, the performance of
two commercial lipases Lipozyme TL IM and CALB L, and also a lipase originated from
Yarrowia lipolytica produced in our laboratory was evaluated. The analysed parameters in the
hydrolysis process were temperature, enzyme quantity (enzymatic activity) and ratio substrate
buriti oil/ water. The experimental conditions were established based on an experimental
design in order to set the more favourable conditions for the process. The results were
analysed for the free fatty acids contents using titration; total carotenoids using
spectrophotometry and its composition by HPLC, using a YMC ODS-A column with a
mobile phase of acetonitrile/methanol/THF (50/45/5). In the characterization of crude oil, the
results were similar with those described in the literature, but the refined oil presented
apocarotenoids, which were formed during the refining of the oils. The optimized conditions
of the enzymatic hydrolysis were different for each oil, where the Lipozyme TL IM had a
higher lipolytic activity. After the hydrolysis of the oil, some methods were tested to separate
the fatty acids formed from the carotenoids, increasing the -carotene concentration in the
final product.
ix
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 - Exemplares de soja, canola e palma ..........................................................................1
Figura 2 - Traumatina .................................................................................................................1
Figura 3 - Principais carotenos ...................................................................................................5
Figura 4 - Principais xantofilas...................................................................................................6
Figura 5 - Biossntese resumida dos insaponificveis (Simes et al, 2003)...............................8
Figura 6 - Esquema geral de biossntese de terpenides (Dewick, 2002) ..................................8
Figura 7 - Biossntese de licopeno. (Dey & Harborne, 1997; Bouvier et al, 2005). ..................9
Figura 8 - Biossntese de carotenides a partir do licopeno. (Dey & Harborne, 1997; Bouvier
et al, 2005)................................................................................................................................10
Figura 9 - Principais ismeros cis do -caroteno .....................................................................11
Figura 10 - Epoxicarotenides derivados do -caroteno..........................................................11
Figura 11 - Apocarotenides derivados do -caroteno ............................................................12
Figura 12 - Formulao de -caroteno dispersvel em gua (http://www.corporate.basf.com/,
2007).........................................................................................................................................15
Figura 13 Alimentos biofortificados. A) Tomate laranja e normal; B) Arroz dourado e
branco .......................................................................................................................................16
Figura 14 - Vias sintticas para obteno de -ionona.............................................................18
Figura 15 - Sntese de -caroteno por condensao enol-ter..................................................19
Figura 16 Sntese de -caroteno por condensao de Wittig ................................................19
Figura 17 Dunaliella salina e seu cultivo em tanques abertos ..............................................20
Figura 18 Phycomyces blakesleeanus e um zigosporo de Blakeslea trispora.......................22
Figura 19 - Rhodotorula glutinis e Sporobolomyces roseus ....................................................22
Figura 20 - Halomonas elongata e Escherichia coli ................................................................23
Figura 21 Palmeiras e frutos do buriti ...................................................................................25
Figura 22 Algumas reaes catalisadas por lipases...............................................................30
Figura 23 Esquema geral do stio ativo de uma lipase ..........................................................32
Figura 24 Mecanismo de reao em lipases ..........................................................................33
Figura 25 Perfil de carotenides dos leos de buriti .............................................................55
Figura 26 Avaliao do tempo reacional de hidrlise dos leos bruto (a) e refinado (b) de
buriti .........................................................................................................................................56
Figura 27 Avaliao da quantidade de cidos graxos produzida pelo custo de lipase durante
a hidrlise de leo bruto (a) e refinado (b) de buriti.................................................................56
Figura 28 Avaliao da temperatura na reduo da concentrao de -caroteno durante a
hidrlise de leo bruto (a) e refinado (b) de buriti ...................................................................57
Figura 29 Avaliao da relao leo/gua na hidrlise dos leos bruto (a) e refinado (b) de
buriti .........................................................................................................................................58
Figura 30 Avaliao da quantidade de enzima sobre a hidrlise dos leos bruto (a) e
refinado (b) de buriti.................................................................................................................58
Figura 31 Avaliao da quantidade de enzima sobre a concentrao de carotenides .........58
Figura 32 Avaliao de emulsificantes sobre a hidrlise enzimtica dos leos bruto (a) e
Figura 33 - Avaliao da adio de clcio sobre a hidrlise dos leos bruto (a) e refinado (b)
de buriti.....................................................................................................................................60
Figura 34 Avaliao de adio de adsorventes sobre a hidrlise dos leos bruto (a) e
Figura 35 - Avaliao da quantidade de alumina sobre a hidrlise dos leos bruto (a) e
x
Figura 36 - Avaliao da quantidade de alumina sobre a concentrao de carotenides durante

a hidrlise dos leos bruto (a) e refinado (b) de buriti .............................................................62
Figura 37 - Avaliao da substituio da gua por tampo fosfato sobre a hidrlise dos leos
bruto (a) e refinado (b) de buriti ...............................................................................................62
Figura 38 Diagrama de Pareto para avaliao da hidrlise do leo bruto de buriti por
Lipozyme TL IM sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b).........................................64
Figura 39 Curvas de nvel fixadas no ponto timo: efeitos de temperatura, atividade
enzimtica e relao leo/gua sobre a hidrlise de leo bruto de buriti por Lipozyme TL IM
..................................................................................................................................................65
Figura 40 Diagrama de Pareto para avaliao da hidrlise do leo bruto de buriti por
Lipozyme CalB L sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b)........................................66
enzimtica e relao leo/gua sobre a hidrlise de leo bruto de buriti por Lipozyme CalB L
..................................................................................................................................................67
Figura 42 Diagrama de Pareto para avaliao da hidrlise do leo bruto de buriti por lipase
de Yarrowia lipolytica sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b).................................68
enzimtica e relao leo/gua sobre a hidrlise de leo bruto de buriti por lipase de Yarrowia
lipolytica ...................................................................................................................................69
Figura 44 Diagrama de Pareto para avaliao da hidrlise do leo refinado de buriti por
Lipozyme TL IM sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b).........................................71
enzimtica e relao leo/gua sobre a hidrlise de leo refinado de buriti por Lipozyme TL
IM .............................................................................................................................................72
Lipozyme CalB L sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b)........................................73
enzimtica e relao leo/gua sobre a hidrlise de leo refinado de buriti por Lipozyme CalB
L................................................................................................................................................74
lipase de Yarrowia lipolytica sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b) ......................75
enzimtica e relao leo/gua sobre a hidrlise de leo refinado de buriti por lipase de
Yarrowia lipolytica...................................................................................................................76
Figura 50 Otimizao da quantidade de enzima na hidrlise enzimtica dos leos de buriti79
Figura 51 Avaliao da velocidade de agitao sobre a hidrlise enzimtica dos leos de
buriti .........................................................................................................................................79
Figura 52 Otimizao do tempo reacional na hidrlise enzimtica dos leos de buriti ........80
Figura 53 Avaliao de cidos graxos livres e carotenides durante o ps-processamento do
leos bruto e refinado de buriti.................................................................................................82
Figura 54 Perfil de carotenides do leo refinado aps desacidificao com soda alcolica82
Figura 55 Fitoesteris ..........................................................................................................101
Figura 56 Retinal .................................................................................................................102
Figura 57 - Tococromanis: (A) Tocoferis, (B) Tocotrienis..............................................102
Figura 58 Toruleno (R = CH3) e Torularodina (R = COOH) ..............................................102
xi
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 Insaponificveis de alguns leos vegetais ................................................................2
Tabela 2 Potenciais fontes vegetais produtoras de -caroteno..............................................24
Tabela 3 Composio centesimal da polpa do fruto de buriti ...............................................26
Tabela 4 Perfil de cidos graxos de frutos oleaginosos.........................................................27
Tabela 5 Perfil de carotenides de alguns leo vegetais .......................................................27
Tabela 6 Faixas timas de atuao de algumas lipases .........................................................31
Tabela 7 - Comparao entre processos convencionais de hidrlise de leos e gorduras........35
Tabela 8 Faixa de valores utilizada para otimizao dos parmetros da hidrlise enzimtica
..................................................................................................................................................50
Tabela 9 Planejamento Composto Central em 3 nveis com 3 pontos centrais.....................51
Tabela 10 Comparao da composio de cidos graxos dos leos de buriti .......................52
Tabela 11 Comparao dos ndices fsico-qumicos dos leos de buriti...............................53
Tabela 12 Comparao da composio de carotenides dos leos de buriti.........................54
Tabela 13 Comparao dos resultados (cidos graxos livres e carotenides) da hidrlise
enzimtica do leo bruto de buriti utilizando planejamento composto central ........................63
Tabela 14 Comparao dos resultados (cidos graxos livres e carotenides) da hidrlise
enzimtica do leo refinado de buriti utilizando planejamento composto central ...................70
Tabela 15 Comparao das condies timas para hidrlise enzimtica do leo bruto de
buriti .........................................................................................................................................77
Tabela 16 Comparao das condies timas para hidrlise enzimtica do leo refinado de
buriti .........................................................................................................................................77
xii
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

AOT
ATP
BHT
CHB1
CHB2
CHE
CRTISO
FAO
FPP
GGPP
HPLC
IPP
LCB
LCE
PD
PEP
ppm
PUFA
Span 20
THF
Tween 80
UV-VIS
ZD
Sulfosuccinato de bis(2-etill hexil) sdio

Adenosina Trifosfato
Butiril hidroxitolueno
Carotenide -hidroxilase non-heme-di-ferro monooxigenase
Carotenide -hidroxilase ligada ao ncleo heme do citocromo P450
Carotenide -hidroxilase ligada ao ncleo heme do citocromo P450
Carotenide isomerase
Food and Agriculture Organization of the United Nations
Pirofosfato de farnesila
Pirofosfato de geranilgeranila
High Pressure Liquid Chromatography
Pirofosfato de isopentenila
Licopeno -ciclase
Licopeno -ciclase
Fitoeno desaturase
Fosfoenolpiruvato
Partes por milho = mg/kg
Poly unsaturated fatty acids
Monolaurato de sorbitana
Tetrahidrofurano
Polioxietileno monooleato de sorbitana
Ultravioleta-visvel
-Caroteno desaturase
xiii
SUMRIO
CAPTULO 1 INTRODUO _____________________________________________ 1
CAPTULO 2 REVISO BIBLIOGRFICA _________________________________ 5
2.1) CAROTENIDES ___________________________________________________ 5
2.1.1) Caractersticas Gerais ______________________________________________ 5
2.1.2) Biossntese _______________________________________________________ 7
2.1.3) Propriedades e modificaes ________________________________________ 10
2.1.4) Aes benficas sade____________________________________________ 12
2.1.5) -Caroteno ______________________________________________________ 14
2.1.5.1) Formas de comercializao ______________________________________ 14
2.1.5.1.1) Matrizes lipoflicas_________________________________________ 14
2.1.5.1.2) Matrizes hidroflicas________________________________________ 15
2.1.5.1.3) Alimentos biofortificados____________________________________ 16
2.1.5.2) Mercado_____________________________________________________ 17
2.1.5.3) Fontes Comerciais_____________________________________________ 17
2.1.5.3.1) -caroteno Sinttico ________________________________________ 17
2.1.5.3.2) -caroteno Natural _________________________________________ 20
A Processos Biotecnolgicos ___________________________________ 20
A.1 Microalgas ______________________________________________ 20
A.2 Fungos Filamentosos______________________________________ 21
A.3 Leveduras _______________________________________________ 22
A.4 Bactrias ________________________________________________ 23
B Extrao de Fontes Vegetais _________________________________ 24
2.2) BURITI____________________________________________________________
2.2.1) Caractersticas Gerais _____________________________________________
2.2.2) leo de Buriti ____________________________________________________
2.2.3) Outras Tecnologias _______________________________________________
25
25
26
27
2.3) LIPASES __________________________________________________________

2.3.1) Fontes e Propriedades _____________________________________________
2.3.2) Estrutura e Aspectos cinticos _______________________________________
2.3.3) Especificidade ___________________________________________________
2.3.4) Hidrlise Enzimtica de leos e Gorduras _____________________________
29
30
31
33
35
CAPTULO 3 MATERIAIS E MTODOS __________________________________ 39

3.1) MATERIAIS _______________________________________________________ 39
3.2) EQUIPAMENTOS __________________________________________________ 39
3.3) MTODOS ANALTICOS ___________________________________________
3.3.1) Composio de cidos graxos _______________________________________
3.3.2) ndices _________________________________________________________
3.3.2.1) Saponificao (IS) _____________________________________________
3.3.2.2) Perxido (IP) _________________________________________________
3.3.2.3) Iodo (II) _____________________________________________________
3.3.2.4) cidos graxos livres (AGL) _____________________________________
3.3.3) Densidade_______________________________________________________
3.3.4) Umidade ________________________________________________________
3.3.5) Material Insaponificvel ___________________________________________
40
40
40
40
41
42
42
42
42
43
xiv
3.3.5.1) Teor de Insaponificveis ________________________________________

3.3.5.2) Carotenides _________________________________________________
3.3.5.2.1) Carotenides Totais ________________________________________
3.3.5.2.2) Composio de carotenides _________________________________
3.3.5.3) Tocoferis Totais _____________________________________________
3.3.5.4) Esteris Totais________________________________________________
3.3.6) Atividade Lipoltica _______________________________________________
43
44
44
44
45
45
45
3.4) PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS _______________________________

3.4.1) Caracterizao dos leos de buriti ___________________________________
3.4.2) Pr-Avaliao do Processo Enzimtico________________________________
3.4.2.1) Tempo reacional e Seleo de enzimas_____________________________
3.4.2.2) Temperatura _________________________________________________
3.4.2.3) Relao leo/gua ____________________________________________
3.4.2.4) Quantidade de Enzima (Atividade Enzimtica) ______________________
3.4.2.5) Aditivos _____________________________________________________
3.4.3) Otimizao da Hidrlise Enzimtica __________________________________
3.4.4) Desacidificao e Concentrao de -Caroteno _________________________
46
46
47
47
48
48
48
48
49
51
CAPTULO 4 RESULTADOS E DISCUSSO _______________________________ 52

4.1) CARACTERIZAO DOS LEOS DE BURITI ________________________
4.1.1) Composio em cidos graxos_______________________________________
4.1.2) Determinao dos ndices Fsico-Qumicos ____________________________
4.1.3) Composio e Perfil de Carotenides _________________________________
52
52
52
53
4.2) PR-AVALIAO DO PROCESSO ENZIMTICO _____________________

4.2.1) Determinao do Tempo Reacional e Seleo das Enzimas ________________
4.2.2) Pr-avaliao dos Parmetros do Planejamento Experimental _____________
4.2.2.1) Temperatura _________________________________________________
4.2.2.2) Relao leo/gua ____________________________________________
4.2.2.3) Quantidade de Enzima (Atividade Enzimtica) ______________________
4.2.3) Pr-avaliao dos Aditivos _________________________________________
4.2.3.1) Emulsificantes ________________________________________________
4.2.3.2) Clcio ______________________________________________________
4.2.3.3) Adsorventes__________________________________________________
4.2.3.4) Tampo Fosfato_______________________________________________
55
55
57
57
57
58
59
59
59
60
62
4.3) OTIMIZAO DA HIDRLISE ENZIMTICA ________________________

4.3.1) Planejamento Experimental do leo Bruto de Buriti _____________________
4.3.1.1) Lipozyme TL IM______________________________________________
4.3.1.2) Lipozyme CALB L ____________________________________________
4.3.1.3) Lipase de Yarrowia lipolytica ____________________________________
4.3.2) Planejamento Experimental do leo Refinado de Buriti___________________
4.3.2.1) Lipozyme TL IM______________________________________________
4.3.2.2) Lipozyme CALB L ____________________________________________
4.3.2.3) Lipase de Yarrowia lipolytica ____________________________________
4.3.3) Resumo das Condies timas na Hidrlise dos leos de Buriti ____________
4.3.4) Otimizao ______________________________________________________
4.3.4.1) Quantidade de Enzima _________________________________________
4.3.4.2) Agitao ____________________________________________________
4.3.4.3) Tempo Reacional _____________________________________________
63
63
63
66
68
70
70
73
75
77
78
78
79
79
4.4) DESACIDIFICAO E CONCENTRAO DE -CAROTENO ___________ 80

xv
4.4.1) Recuperao da Alumina ___________________________________________

4.4.2) Mtodos de Desacidificao ________________________________________
4.4.2.1) Partio com Etanol ___________________________________________
4.4.2.2) Saponificao ________________________________________________
4.4.2.3) Winterizao _________________________________________________
80
81
81
82
83
CAPTULO 5 CONCLUSO _____________________________________________ 84

CAPTULO 6 SUGESTES ______________________________________________ 86
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ________________________________________ 88
GLOSSRIO ___________________________________________________________ 101
APNDICE _____________________________________________________________ 103
xvi
CAPTULO 1 INTRODUO
Os leos vegetais so a maior fonte de lipdeos comestveis, contabilizando mais de
75% do total de gorduras consumidas no mundo, com uma produo anual de cerca de 150
milhes de toneladas. Entre estes, quase 75% extrada do endosperma de sementes de
oleaginosas, como a soja e a canola, enquanto os demais so extrados do pericarpo de frutos,
como oliva e palma (Figura 1) (Salas et al, 2000; FAO, 2007).
Figura 1 - Exemplares de soja, canola e palma
A funo do leo na maioria dos vegetais superiores de reserva energtica primria

nas sementes, sendo metabolizado atravs de reaes de -oxidao para produo de acetato,
que aciona o ciclo do glioxilato, gerando os intermedirios para a formao de
monossacardeos via gliconeognese, auxiliando a germinao e o crescimento durante o
desenvolvimento da planta (Eastmond & Graham, 2001).
A presena de leo no pericarpo de frutos tem como funes principais a proteo
contra perda de gua pela formao de ceras; e o auxlio na defesa contra injrias superfcie
do fruto, onde pela degradao enzimtica por lipoxigenase so gerados aldedos precursores
de um hormnio vegetal chamado traumatina (Figura 2), que induz o reparo na planta e tem
atividade antimicrobiana. (Salas et al, 2000).
Figura 2 - Traumatina
Nos plastdeos, como cloroplastos e cromoplastos ocorre, alm da produo de

triglicerdeos, a biossntese de outras molculas, como os intermedirios destes
triacilgliceris, que so os fosfatdeos, os diglicerdeos e os cidos graxos livres, e tambm do
material insaponificvel (Salas et al, 2000).
Os insaponificveis so definidos como a soma dos componentes dissolvidos em leos
e gorduras, que aps saponificao alcalina, permanece como resduo no reagido e novoltil, sendo solveis em solventes apolares (por exemplo, ter dietlico e ter de petrleo)
(Matissek et al, 1998). Estes insaponificveis contm principalmente carotenides,
fitoesteris e tococromanis e seus derivados (vitamina E), alm de alguns componentes
menores como clorofila, polifenis, hidrocarbonetos (esqualeno) e lcoois triterpnicos,
agindo como antioxidantes e fotoprotetores, que ajudam a evitar a oxidao dos cidos graxos
insaturados. A Tabela 1 apresenta o teor e o perfil de insaponificveis de alguns leos
vegetais (Gunstone & Padley, 1997; Gunstone, 2002).
Tabela 1 Insaponificveis de alguns leos vegetais
-Tocoferol Carotenides
(ppm)
(ppm)
leos
Insaponificveis
(%)
Fitoesteris
(ppm)
Coco
0,8 1,5
500 1100
Milho
1,3 2,8
7900 22100
112 134
1,2 3,6
Algodo
1,5 2,0
2700 5900
389
900 2900
130
Amendoim
0,4 1,0
Palma
1,2
400 500
130 260
500 700
Palmiste
0,1 0,8
800 1400
62
4,3 11,8
Oliva
0,5 1,5
1200 2700
119
1 20
Canola
1,2 2,0
4800 11300
210
130
Soja
0,5 1,6
1800 4100
75 - 117
Girassol
1,5
2400 4500
487 608
1,0 1,5
Arroz
35
1800
800
Os insaponificveis tm sido objeto de grande ateno devido as descobertas recentes

sobre seus inmeros benefcios sade, a partir das evidncias publicadas sobre a ao
protetora dos antioxidantes, vitamina E e -caroteno, contra radicais livres que mediam
diferentes tipos de dano celular, que tm implicao no desenvolvimento de vrias doenas
degenerativas, como cncer, doenas cardiovasculares, catarata e degenerao macular
(Gl-stndag & Temelli, 2004). Como consequncia dessas descobertas, o interesse na
incorporao de componentes das fraes insaponificveis em produtos de consumo, como
alimentos, cosmticos ou suplementos nutricionais tambm aumentou muito, como por
exemplo a incorporao de fitoesteris derivatizados em margarinas aumentando seus
benefcios sade, como a reduo do risco de doenas cardiovasculares (Moreau et al,
2002).
As principais formas de obteno dos insaponificveis so por sntese qumica, que
geralmente simples e de baixo custo, ou por extrao e isolamento a partir de leos vegetais
ou de subprodutos do refino (destilado de leo desodorizado) atravs de diversos processos
como extrao lquido-lquido (Bhosle & Subramanian, 2005), extrao com fluido
supercrtico (Lau et al, 2007), cristalizao fracionada (Xu et al, 2005), destilao molecular
(Moraes et al, 2006), saponificao (Bhosle & Subramanian, 2005), adsoro (Rossi et al,
2001) ou separao por membranas (Subramanian et al, 2001). Alm da extrao e refino,
tambm so estudados processos de derivatizao das fraes para melhor estabilizao de
seus componentes ativos frente a agentes oxidantes (oxignio, luz e metais) (Abidi, 2000;
Ruprez et al, 2001, Gl-stndag & Temelli, 2004).
Devido semelhana entre as propriedades fsicas (solubilidade, polaridade, massa

molar) de carotenides e triglicerdeos, alm da baixa seletividade da maioria dos mtodos de
separao fsica empregados atualmente para a extrao dos carotenides, bem como as
alteraes estruturais irreversveis induzidas pelos mtodos qumicos, a busca por mtodos
mais brandos e especficos para a extrao dos carotenides contidos em leos vegetais
constitui um grande desafio (Gl-stndag & Temelli, 2004).
Nesta dissertao, a abordagem utilizada emprega a tecnologia enzimtica como
alternativa limpa para obteno de carotenides de leos vegetais. As enzimas so protenas
que participam de vrias reaes bioqumicas, aceleram reaes termodinamicamente
favorecidas, e apresentam caractersticas estereoespecficas. Normalmente os processos
enzimticos tm ao rpida, ausncia de toxidez e no geram problemas ambientais, alm de
ocorrerem em temperaturas e pHs brandos, atuando sobre um substrato especfico com uma
baixa concentrao de preparado enzimtico (Godfrey & West, 1996; Uhlig, 1998).
O objetivo desta dissertao consiste no desenvolvimento de um bioprocesso
utilizando a hidrlise enzimtica do leo bruto e refinado de buriti atravs de lipases, visando
a alterao de polaridade e solubilidade dos triglicerdeos com a gerao de cidos graxos e
glicerol, facilitando assim a extrao e concentrao de -caroteno por diferentes mtodos
com potencial de aplicao comercial.
CAPTULO 2 REVISO BIBLIOGRFICA

2.1) CAROTENIDES
2.1.1) Caractersticas Gerais
Carotenides so os pigmentos responsveis pelas cores vermelho, amarelo e laranja,
largamente distribudos em frutas, flores, razes, algas, invertebrados, peixes, pssaros,
bactrias, fungos e leveduras e tm como principais funes o auxlio na fotossntese e a
fotoproteo (Isler,1971; Ikan,1991; Britton et al, 1995).
Os carotenides incluem 2 classes de compostos: carotenos propriamente ditos,
compostos por hidrocarbonetos poliinsaturados C40 (Figura 3), e xantofilas, seus derivados
oxigenados (Figura 4).
Figura 3 - Principais carotenos
Dos carotenos acclicos, licopeno e -caroteno so os mais comuns. O licopeno o

principal pigmento de muitos frutos carnosos avermelhados, como tomate (Lycopersicon
esculentum), melancia (Citrullus lanatus), mamo (Carica papaya), goiaba (Psidium guajava)
e toranja (Citrus paradisi), enquanto o -caroteno est presente em pequenas quantidades em
grande nmero de plantas, sendo que apenas na carambola (Averrhoa carambola) e no
maracuj (Passiflora alata) este adquire maior importncia, aparecendo como seu principal
pigmento. Outros carotenos como o fitoflueno e fitoeno so incolores e provavelmente mais
largamente distribudos do que o reportado (Isler,1971; Britton et al,1995).
Dentre os carotenos cclicos, o que mais se destaca o -caroteno, presente em
cenoura (Daucus carota), manga (Mangifera indica), acerola (Malpighia glabra), damasco
(Prunus armeniaca), nspera (Mespilus germanica) e frutos da famlia Palmae/Arecaceae. O
-caroteno e o -caroteno esto geralmente em menor concentrao que o -caroteno, sendo
o primeiro encontrado em cenouras e abboras (Cucurbita sp.), e o ltimo em rosa silvestre
(Rosa canina) e pitanga (Eugenia uniflora). O -caroteno menos freqente, mas encontrado
em tomate e pupunha (Bactris gasipaes) (Goodwin, 1976; Rodriguez-Amaya, 2001).
Figura 4 - Principais xantofilas
Dentre as xantofilas hidroxiladas, as principais so derivadas do - e -caroteno, como

a -criptoxantina, lutena e zeaxantina. -criptoxantina o principal pigmento de frutos
alaranjados, como pssego (Prunus persica), caqui (Diospyros kaki) e caj-mirim (Spondias
mombin). Lutena o carotenide predominante em folhas, vegetais verdes e flores amarelas,
e a zeaxantina o principal no milho (Zea mays) e no piqui (Cariocar villosum). As
xantofilas epoxidadas como a violaxantina e a anteraxantina so os produtos da degradao
de outros carotenides, como a zeaxantina, e subestimadas nos alimentos, como a manga, por
exemplo (Goodwin, 1976; Rodriguez-Amaya, 2001).
H algumas xantofilas incomuns como a capsantina, presente em pimenta malagueta
(Capsicum frutescens), bixina, principal pigmento do urucum (Bixa orellana) e a crocetina,
que predominante no aafro (Crocus sativus) (Isler,1971; Britton et al,1995).
Embora folhas verdes contenham hidroxicarotenides no esterificados, quando o
fruto amadurece, estes so esterificados com cidos graxos. Mas em alguns frutos como kiwi
(Actinidia chinensis), que permanecem verdes mesmo quando maduros, estes compostos no
so esterificados (Rodriguez-Amaya, 2001; Bouvier et al, 2005).
2.1.2) Biossntese
Os precursores dos metablitos especiais presentes nos leos vegetais, e o prprio leo
so intermedirios no metabolismo primrio, que se inicia a partir da fotossntese, onde a
glicose gerada para depois ser consumida na respirao e produzir gua e CO2, sendo que
esta ocorre em 3 etapas: gliclise, ciclo do cido ctrico e fosforilao oxidativa. De uma
forma resumida, a Figura 5 mostra a formao destes metablitos visando principalmente nos
insaponificveis (Berg et al, 2004).
Figura 5 - Biossntese resumida dos insaponificveis (Simes et al, 2003)
A biossntese dos carotenides segue o padro usual da sntese de terpenides, que

segue a via do cido mevalnico, onde este descarboxilado gerando o pirofosfato de
isopentenila (IPP) principal bloco construtivo dos isoprenides. O esquema geral da
biossntese de terpenides pode ser visto na Figura 6 (Bouvier et al, 2005).
FPP
IPP
IPP
GGPP
Figura 6 - Esquema geral de biossntese de terpenides (Dewick, 2002)
A passagem do intermedirio fitoeno para o licopeno (Figura 7) ocorre atravs de

enzimas que promovem a desidrogenao, envolvendo a remoo de pares de tomos de
hidrognio de forma alternada (Dey & Harborne, 1997; Fraser & Bramley, 2004; Bouvier et
al, 2005).
Aps a formao do licopeno, ocorre a ciclizao atravs da licopeno ciclase, podendo
gerar -caroteno (anel ) ou -caroteno (anel ), que so os precursores do -caroteno e do caroteno, respectivamente. Estes carotenos formados podem ser modificados para gerao de
outros carotenides como lutena e zeaxantina (Figura 8) e outras xantofilas, atravs de
hidroxilases, epoxidases, cetolases e sintases.
PD
PD
ZD
CRTISO
ZD
Figura 7 - Biossntese de licopeno. PD: fitoeno desaturase; ZD, -caroteno desaturase; CRTISO, carotenide
isomerase (Dey & Harborne, 1997; Bouvier et al, 2005).
LCE
LCB
LCB
LCB
CHB1, CHB2
CHB1, CHB2
CHE
CHB1, CHB2
Figura 8 - Biossntese de carotenides a partir do licopeno. LCE, licopeno -ciclase; LCB, licopeno -ciclase;
CHB1, carotenide -hidroxilase non-heme-di-ferro monooxigenase; CHB2, carotenide -hidroxilase ligada ao
ncleo heme do citocromo P450; CHE, carotenide -hidroxilase ligada ao ncleo heme do citocromo P450
(Dey & Harborne, 1997; Bouvier et al, 2005).
2.1.3) Propriedades e modificaes

A presena de ligaes duplas conjugadas na estrutura dos carotenides contribui para
sua pigmentao, absoro de radiao na faixa de UV-VIS e atividade antioxidante, mas
tambm so a principal razo da sua instabilidade qumica, pois as ligaes duplas conjugadas
so muito suscetveis oxidao e isomerizao geomtrica.
Alguns fatores como calor, luz, cidos, refluxo em solvente orgnico, fuso de cristais
e tratamento com iodo, podem promover a isomerizao cis-trans dos carotenides (Figura 9).
A isomerizao de trans-carotenides, que a configurao usual dos carotenides na
natureza, para a forma cis aumenta a solubilidade e diminui a intensidade da cor, o ponto de
fuso e a atividade de pr-vitamina A (Goodwin, 1976; Britton et al, 1995; RodriguezAmaya, 2001; Schiebe & Carle, 2005).
10
Figura 9 - Principais ismeros cis do -caroteno
A oxidao, o principal mecanismo de degradao dos carotenides, acelerada pela

luz, calor, presena de cidos graxos insaturados, perxidos, metais como ferro, cobre e
mangans, e exposio a solventes orgnicos e enzimas (lipoxigenases, fenoloxidases e
peroxidases) (Goodwin, 1976; Britton et al, 1995; Rodriguez-Amaya, 2001).
Os principais derivados da degradao de carotenides so os epoxicarotenides
(Figura 10), apocarotenides (Figura 11) e compostos volteis, que apesar de terem sua
atividade pr-vitammica A muito reduzida, ainda podem ser aproveitados como corantes
alimentcios, no caso de alguns apocarotenides, ou como aromatizantes naturais, no caso dos
compostos volteis (Rodriguez & Rodriguez-Amaya, 2007; Uenojo et al, 2007).
Figura 10 - Epoxicarotenides derivados do -caroteno
11
Estes derivados so formados em vrios tipos de processamento de alimentos, como

cozimento, fritura, pasteurizao, extruso e desidratao, com perdas em torno de 25-35%
(Marty & Berset, 1990; Pinheiro-Santana et al, 1998; Rodriguez & Rodriguez-Amaya,
2007), e tambm na etapa de refino de leos vegetais, onde ocorrem processos de
desacidificao, branqueamento e desodorizao (Ouyang et al, 1980).
Figura 11 - Apocarotenides derivados do -caroteno
2.1.4) Aes benficas sade

A mais importante funo nutricional dos carotenides como precursor da vitamina
A (pr-vitamina A). O envolvimento do retinal (vitamina A) como cromforo de pigmentos
visuais no olho central no processo da viso. Hipovitaminose A ainda um grande problema
nutricional em reas subdesenvolvidas do mundo onde suas conseqncias, como xeroftalmia,
cegueira e morte prematura, ainda so comuns, particularmente em crianas.
12
A vitamina A tambm tem funes sistmicas importantes no crescimento e na

eficincia reprodutiva, alm da manuteno dos tecidos epiteliais e preveno da sua
queratinizao. Por isso, os retinides tm sido utilizados para tratamento dermatolgicos,
como a acne (Britton et al, 1995; Rucker et al, 2001; Niizu, 2003).
Qualquer carotenide cclico que possua um anel tem atividade pr-vitamnica A,
principalmente o -caroteno, podendo ser clivado por uma -caroteno-15,15-dioxigenase
para gerar retinal (Della Penna & Pogson, 2006).
A propriedade antioxidante dos carotenides independente da atividade de prvitamina A, e est associada com a capacidade de se ligar a oxignio singlete atravs do
sistema de duplas ligaes conjugadas, e a mxima proteo dada pelos carotenides com
mais de 9 duplas ligaes, razo pela qual o licopeno tem demonstrado maior eficincia
antioxidante que o -caroteno. Em altas presses parciais de oxignio ou altas concentraes
de carotenides, entretanto, estes podem apresentar atividade pr-oxidante (Packer et al,
1999; Rodriguez-Amaya, 2001; Niizu, 2003; Palozza et al, 2003).
Devido sua capacidade antioxidante, o -caroteno utilizado como protetor solar
oral para prevenir o fotoenvelhecimento da pele e as queimaduras de sol, devendo ser ingerido
por vrias semanas para aumentar o seu teor no plasma e na pele (Packer et al, 1999).
Os carotenides, principalmente o licopeno, vm sendo utilizados na proteo de
doenas cardiovasculares e degenerativas, cncer de prstata, estmago e pulmo, agindo em
possveis mecanismos de modulao do metabolismo de carcingenos, inibio da
proliferao celular, aumento da diferenciao de clulas atravs dos retinides, estimulao
da comunicao intercelular e aumento da resposta imunolgica (Niizu, 2003; Fraser &
Bramley, 2004). A zeaxantina e a lutena tm uma maior ao na preveno da degenerao
macular relacionadas a idade (Packer et al, 1999; Rodriguez-Amaya, 2001; Fraser & Bramley,
2004).
13
2.1.5) -Caroteno
O caroteno foi isolado pela primeira vez por Wackenroder em 1831 na forma de
cristais de cor vermelho-rubi extrado a partir da cenoura. Mas somente em 1907, Willstder
identificou a frmula molecular correta para o caroteno, C40H56, apesar de ainda ser uma
mistura de -caroteno e -caroteno. Em 1930, Karrer e Kuhn, obtiveram a formulao correta
do licopeno, -caroteno, -caroteno, zeaxanatina e lutena (Isler,1971; Britton et al,1995).
2.1.5.1) Formas de comercializao
O -caroteno utilizado como corante alimentcio, variando de amarelo a laranja, em
concentraes entre 2 a 50 ppm, ou como complemento nutricional, por ser a principal fonte
de pr-vitamina A, j que 100% pode ser convertido a vitamina A (Britton et al,1995).
Os carotenides sintticos so purificados por cristalizao com o objetivo de formar
grandes cristais, os quais podem ser facilmente separados por filtrao e lavados dos ismeros
cis e dos subprodutos remanescentes na soluo. Para serem comercializados, os carotenides
precisam ser formulados para aplicao em matrizes hidroflicas (sucos e bebidas) ou
lipoflicas (manteigas, margarinas e queijos), e para isso preciso tambm diminuir o
tamanho dos cristais.
2.1.5.1.1) Matrizes lipoflicas

A solubilidade dos carotenides comercialmente disponveis em leos vegetais em
torno de 1000 ppm, mas concentraes entre 10 e 100 ppm j so suficientes para colorao
intensa. Para assegurar uma rpida dissoluo, os cristais so cominudos em moinhos de
bolas, alcanando dimetros de 1 a 4 m. Disperses pastosas preparadas dessa maneira tm
concentraes de carotenides entre 20 e 30%, e so predominantemente utilizadas para
colorir e estabilizar gorduras vegetais, por exemplo, na produo de margarina (Britton et
al,1996).
14
2.1.5.1.2) Matrizes hidroflicas

Os carotenides produzidos industrialmente so praticamente insolveis em meio
aquoso, sendo ento um desafio desenvolver preparaes dispersveis em gua para o setor de
alimentos e raes. Foi demonstrado que a intensidade de colorao suficiente e a
biodisponibilidade mxima podem ser conseguidas pela reduo do dimetro de partcula a
menos que 0,5 m.
Os mtodos de formulao individual diferem nas medidas utilizadas para
micronizao de cristais de carotenides sintticos. Em um processo desenvolvido pela
Danochemo, os cristais so cominudos em meio aquoso por meios mecnicos, gerando
partculas com dimetro mdio de 0,4 m, as quais so misturadas a um hidrocolide
(gelatina), que adsorvido na superfcie dos cristais, tornando-os hidroflicos, podendo
formar disperses estveis e prevenir a reagregao. A biodisponibilidade aumentada pelo
rpido aquecimento (20 s) da suspenso a 180C, o que torna o composto ativo amorfo. A
matriz aquosa pode conter outros aditivos, como antioxidantes (-tocoferol e cido
ascrbico), emulsificantes (lecitina e palmitato de ascorbila), acar e amido para melhorar as
propriedades mecnicas do produto final (Britton et al,1996).
Figura 12 - Formulao de -caroteno dispersvel em gua (http://www.corporate.basf.com/, 2007)
15
No processo de soluo/precipitao desenvolvido pela Roche, uma disperso de

carotenide preparada para matriz lipoflica tratada muito rapidamente (0,5 s) com vapor
superaquecido, onde em seguida a mistura leo-gua e carotenide estabilizada pela
emulsificao em uma matriz aquosa, e ento os carotenides precipitam da sua soluo
inicial na fase oleosa em uma forma amorfa finamente dividida.
A BASF tambm produz preparaes de carotenides dispersveis em gua pelo
processo soluo/precipitao (Figura 12). Os carotenides sintticos so transformados em
uma disperso molecular em solventes hidroflicos, de baixo ponto de ebulio e incuos,
como lcool ou acetona e aquecidos a 170C, por menos de 0,5 s, evitando assim a
isomerizao. Em outro tanque, essa mistura adicionada a uma matriz aquosa, e os ncleos
cristalinos so formados espontaneamente. O crescimento do ncleo pode ser controlado pela
escolha apropriada do colide protetor e pode ser restrita a 0,1 m. O solvente orgnico
ento removido em um evaporador em filme (Paust, 1994; Britton et al,1996).
Ao final, estas preparaes comerciais de carotenides dispersveis em gua so
desidratadas atravs de spray-drying e vendidas na forma de p (Britton et al,1996).
2.1.5.1.3) Alimentos biofortificados

Um outro mtodo de se obter um alimento com -caroteno adicionar suco de
cenoura, ou promover alteraes genticas na planta de forma a torn-la apta para a
biossntese deste carotenide, como o caso do arroz dourado e tomate.
(b)
Figura 13 Alimentos biofortificados. A) Tomate laranja e normal; B) Arroz dourado e branco
16
O arroz dourado gerado pela insero de genes da bactria Erwinia e de narciso

(Narcissus pseudonarcissus) e contm cerca de 2 mg de -caroteno por g de arroz. No tomate,
as modificaes genticas geram uma diminuio no teor de carotenides totais no fruto de 10
mg para 5 mg por 100 g de fruto, mas em compensao o licopeno, que correspondia 90% dos
carotenides totais, agora foi substitudo pelo -caroteno que teve sua biossntese aumentada
em 5 vezes, e representa mais de 50% dos carotenides, conforme visto na Figura 13. Estes
alimentos biofortificados podem contribuir bastante para deficincia de vitamina A no mundo,
j que so amplamente consumidos (Giuliano et al, 2000; Fraser & Bramley, 2004; Al-Babili
& Beyer, 2005).
2.1.5.2) Mercado
Estima-se que o mercado mundial de carotenides, que em 2005 gerou cerca de 887
milhes de dlares, ir crescer 3% ao ano quebrando a barreira de 1 bilho de dlares em
2009, sendo o -caroteno responsvel por quase 30% deste mercado. No mercado brasileiro, o
produto em p com 20% de -caroteno oferecido por R$ 215 a 240 por quilo, isso quer
dizer, de R$ 1075 a 1200 por quilo de -caroteno puro. O mercado internacional dominado
por empresas como Roche, BASF, Merck, Rhne-Poulenc e DSM (Fraser & Bramley, 2004;
http://www.sbaf.org.br/, 2006; http://aliceweb.desenvolvimento.gov.br/, 2007).
2.1.5.3) Fontes Comerciais
2.1.5.3.1) -caroteno Sinttico

O -caroteno sinttico tm sido produzido desde 1954 pela Roche e desde de 1960
pela BASF. A sua importncia econmica aumentou nas dcadas seguintes, sendo
particularmente acelerado a partir de 1990. Cada empresa utiliza um mtodo diferente para
sua produo, mas ambas utilizam o mesmo precursor, que a -ionona.
17
Este intermedirio era originalmente obtido de fontes naturais como o leo de capimlimo (Cymbopogon citratus) ou a terebentina do pinho (Pinus caribea), mas atualmente a ionona obtida a partir da acetona, ou atravs do butadieno, como mostrado na Figura 14
(Isler,1971; Britton et al, 1996).
Figura 14 - Vias sintticas para obteno de -ionona
A primeira sntese industrial de -caroteno pela Roche seguiu os princpios C19 + C2 +

C19 de sntese. Como no processo de obteno de vitamina A, a cadeia polinica foi produzida
por acoplamento de Grignard, eliminao e hidrogenao parcial. Alm disso, uma nova e
eficaz sntese para aldedos polinicos tem sido agora desenvolvida na forma da condensao
enol-ter e empregada industrialmente pela primeira vez na produo de C19 aldedo (8[2,6,6-trimetil-ciclohex-1-enil]-2,6-dimetil-octa-2,4,6-trien-1-al). A condensao enol-ter
permite um alongamento gradual especfico de aldedos conjugados por dois tomos de
carbono a cada vez, como visto na Figura 15 (Isler,1971; Britton et al,1996).
18
Figura 15 - Sntese de -caroteno por condensao enol-ter
J a BASF utiliza a condensao de Wittig para produzir -caroteno, onde sais de

fosfnio, anteriormente derivatizados com a trifenilfosfina (PPh3), reagem com um aldedo,
formando uma dupla ligao e aumentando a cadeia polinica. Na Figura 16, a reao ocorre
entre o retinal e o sal de retiniltrifenilfosfnio. O processo de sntese de -caroteno da Roche
apresenta um rendimento de 60%, enquanto que o empregado pela BASF de 85%, sendo
que este ltimo necessita da reciclagem do xido de trifenilfosfina, devido sua baixa
biodegrabilidade. Este processo para recuperao da trifenilfosfina contm trs fases:
purificao por destilao, clorao com fosgnio e desalogenao com alumnio (Isler,1971;
Britton et al,1996).
Figura 16 Sntese de -caroteno por condensao de Wittig
19
2.1.5.3.2) -caroteno Natural

Embora tanto o -caroteno sinttico quanto o natural possuam a mesma estrutura
molecular polinica, o -caroteno natural contm vrios outros carotenides em
concentraes menores, que apresentam benefcios sade adicionais podendo ser
consumidos em maiores quantidades. O -caroteno natural pode ser produzido por processos
biotecnolgicos utilizando fungos filamentosos, leveduras, bactrias ou microalgas, ou ainda
por extrao de fontes vegetais. Apenas 2% do total de -caroteno produzido natural, sendo
principalmente
utilizado
como
suplemento
nutricional
(Dufoss
et
al,
2005;
http://www.cotecportugal.pt/, 2006).
A Processos Biotecnolgicos
A.1 Microalgas
O gnero Dunaliella pertence ao grupo das microalgas unicelulares halotolerantes que
acumulam uma grande quantidade de -caroteno em seu cloroplasto devido a alta intensidade
luminosa, obtendo em mdia, sob condies ideais em tanques abertos (Figura 17), 400 mg caroteno por rea (m) de cultivo ao dia, i. e. 10 a 14 % em peso seco no caso de Dunaliella
salina e D. bardawil (Dufoss et al, 2005; Gobbi, 2006; Spolaore et al, 2006). GarcaGonzlez et al (2005) tambm testaram a produo de -caroteno por cultivo em
fotobiorreatores tubulares, gerando 100 mg/m ao dia.
.
Figura 17 Dunaliella salina e seu cultivo em tanques abertos
20
Para se promover a carotenognese em D. salina, alm dos nutrientes essenciais, uma

alta concentrao de sal (1,5 M NaCl) e estresse luminoso, com intervalos de fotoperodo de
12 h por 15 dias so condies requeridas (Dufoss et al, 2005; Gobbi, 2006; Spolaore et al,
2006). Outros mtodos de estresse podem ser utilizados, tais como a supresso de fontes de
nitrognio ou adio de solventes orgnicos com log P superiores a 5,6, como o decano e
hexadecano ou misturas destes solventes apolares biocompatveis com pequenas
concentraes de outros solventes mais polares, como diclorometano e metil etil cetona, o que
possibilita o uso de biorreatores bifsicos, com o objetivo de produzir e extrair -caroteno
simultaneamente (Hejazi & Wijffels, 2003; Lon et al, 2003; Mojaat et al, 2007)
O -caroteno produzido, neste caso, uma mistura de ismeros cis e trans, onde h
10% de 15-cis--caroteno, 41% de 9-cis--caroteno, 42% de trans--caroteno e 6% de outros
ismeros, e responde por cerca de 80% dos carotenides totais produzidos sendo a lutena
responsvel por 15%. As principais empresas produtoras de -caroteno a partir de cultivo de
microalgas so as companhias Cognis Nutrition and Health (Austrlia) e Nature Beta
Technologies (Israel) (Dufoss et al, 2005; Garca-Gonzlez et al, 2005; Gobbi, 2006).
A.2 Fungos Filamentosos
Os principais fungos filamentosos produtores de -caroteno so Blakeslea trispora e
Phycomyces blakesleeanus (Figura 18), que tambm geram ubiquinona, ergosterol, cidos
orgnicos e outros carotenides como licopeno, -caroteno e fitoeno. Como nas microalgas, a
carotenognese induzida na forma de alguns estmulos como luz azul, interao sexual,
adio de retinol e ftalato de dimetila em Phycomyces sp., e ausncia de luz, no caso da
Blakeslea sp..
21
Figura 18 Phycomyces blakesleeanus e um zigosporo de Blakeslea trispora
Algumas linhagens modificadas geneticamente de Phycomyces sp. podem alcanar at

30 mg de -caroteno por grama de miclio seco em 4 dias de cultivo, mais de 100 vezes a
quantidade da linhagem selvagem, correspondendo entre 90 a 95% do total de carotenides; j
Blakeslea sp. pode gerar de 13 a 19 mg de -caroteno em grama de miclio seco,
representando cerca de 73 a 85% do total de carotenides. A DSM produz na Europa, desde
2000, -caroteno a partir de cultivo de Blakeslea trispora para uso em alimentos (Dufoss et
al, 2005; Mehta et al, 1997; Kuzina e Cerd-Olmedo, 2007; Choudhari & Singhal, 2008).
A.3 Leveduras
No gnero Rhodotorula, h algumas espcies produtoras de carotenides como a R.
glutinis, R. minuta, R. mucilaginosa, R. graminis, e tambm em outro gnero como
Sporobolomyces roseus e S. patagonicus (Figura 19). Alm do -caroteno, estas leveduras
geram toruleno, torularodina e -caroteno, alcanando at 330 mg carotenides/g clula seca
em 6-7 dias de fermentao (Tinoi et al, 2005; Buzzini et al, 2007; Maldonade et al, 2008).
Figura 19 - Rhodotorula glutinis e Sporobolomyces roseus
22
Dependendo das condies de cultivo, como fontes de carbono e nitrognio, leveduras

como Rhodotorula glutinis podem gerar um perfil de carotenides bastante variado, onde o caroteno pode ser o principal produto (43%) e o toruleno, o secundrio (30%), ou o inverso,
com 28% de toruleno e 25% de -caroteno. Casos em que concentrado de uva foi utilizado
como a fonte de carbono do meio, a torularodina foi o principal carotenide obtido (60
79%). Sporobolomyces roseus apresenta um perfil de carotenides composto por 50% de caroteno e 30% de toruleno, mas com rendimento bem menor que R. glutinis, sendo cerca de
72 g/g clula seca (Maldonade et al, 2008).
A.4 Bactrias
Entre as bactrias, h algumas espcies carotenognicas, mas para produzir -caroteno
como seu principal carotenide, estas precisam ter seu metabolismo central inibido atravs de
sais inorgnicos e uria, como no caso de Flavobacterium multivorum, ou ento ser
modificadas geneticamente, como no caso de Halomonas elongata, Escherichia coli e
Sphingomonas paucimobilis (Figura 20).
Figura 20 - Halomonas elongata e Escherichia coli
A produo por F. multivorum foi de 2,9 mg/g de carotenides totais, sendo 82% de caroteno, 7% -criptoxantina e 11% zeaxantina em 2 dias de fermentao (Bhosale &
Bernstein, 2004).
23
A bactria haloflica H. elongata modificada com genes de Pantoea agglomerans e

Haematococcus pluvialis produz 0,56 mg/g clula seca, sendo 98% de -caroteno, com 2%
NaCl no meio (Rodrguez-Saz et al, 2007). E. coli recombinante com genes de Erwinia
uredovora e E. herbicola produz em um biorreator de 5 L em 2 dias de fermentao cerca de
270 mg/L de -caroteno, representando 60% dos carotenides totais (Kim et al, 2006). A
bactria do solo S. paucimobilis tratada com metanosulfonato de etila gera 3,27 mg
caotenides /g clula seca, sendo 70,7% -caroteno (Silva et al, 2004).
B Extrao de Fontes Vegetais
O -caroteno de origem vegetal geralmente obtido por extrao com solventes de

cenoura e dend, com contedos menores de -caroteno, -caroteno e algumas xantofilas.
Mas outras fontes vegetais tm sido encontradas com grande potencial para produo de caroteno, como visto na Tabela 2 (http://www.fao.org/, 2008).
Tabela 2 Potenciais fontes vegetais produtoras de -caroteno
Fontes Vegetais
Carotenides
(g/g)
-caroteno
(%)
Referncias
Cenoura (Daucus carota)
85 -174
49 - 65
Rodriguez-Amaya, 2001
Dend (leo) (Elaeis guineensis)
470-700
54,4
Batata doce (Ipomoea batatas)
160-226
92-95
Buriti (fruto) (Mauritia vinifera)
513,9
72,5
De Rosso & Mercadante, 2007
Buriti (leo)
1150-3380
Acerola (Malpighia glabra)
8,8 - 18,8
69,8-90,6
Tucum
(Astrocaryum aculeatum)
62,6 - 96,6
75,6-89,3
Marinho & Castro, 2003; De

Rosso & Mercadante, 2007
Marimari (Geoffrola striata)
38
61,1
Physalis (Physalis angulata)
80,9
76,9
Acuri (Scheelea phalerata)
22,7
76,2
Hiane et al, 2003
Pajur (Couepia bracteosa)
17,8
92,1
Marinho & Castro, 2003
Piqui (Caryocar villosum)
21
85,4
Umari (Poraqueiba sericea)
102,9
78,9
Bocaiva (Acrocomia mokayaba)
59,6
92,3
24
2.2) BURITI
2.2.1) Caractersticas Gerais
Na Tabela 2, verifica-se que o buriti uma das fontes vegetais de maior potencial para
extrao de -caroteno, com seu leo podendo alcanar at 3380 g de carotenides totais por
g de leo, sendo mais de 70% de -caroteno.
O buriti uma planta da famlia Arecaceae, antigamente conhecida como Palmae,
sendo nativa da Amrica Latina, principalmente Brasil, Peru, Bolvia, Equador, Colmbia,
Venezuela e Guiana. H duas espcies de buriti, sendo a Mauritia flexuosa nativa do Peru, e
conhecida como aguaje, e a Mauritia vinifera nativa do Brasil, conhecida tambm como
miriti. Podem chegar entre 35 a 40 m de altura, com ramos de 10 a 20 folhas, cada uma com 5
a 6 m de comprimento, gerando 3 a 4 cachos com 800 a 1000 frutos cada, sendo estes
variando entre 5 a 7 cm de dimetro, e 40 a 85 g cada (Figura 21). A polpa destes frutos de
buriti consumida pela populao local em doces e sucos (Silveira, 2004; Santos, 2005;
http://www.fao.org/, 2008).
Figura 21 Palmeiras e frutos do buriti
Em 1996, a produo brasileira chegou a quase 5000 toneladas de frutos, sendo o Piau
responsvel por cerca de 70% deste valor, alcanando prximo de 5 toneladas de leo por
hectare (http://www.sidra.ibge.gov.br/, 2008).
25
A composio centesimal da polpa do fruto de buriti descrita na Tabela 3, em termos

percentuais, comparando vrias referncias (g/100 g de polpa). tambm verificado um teor
significativo de vitamina C (cido ascrbico), entre 19,8 e 26 mg, e de clcio, entre 113 e 156
mg por 100 g de polpa de buriti (Tavares et al, 2003; Santos, 2005), alm do altssimo teor de
vitamina A derivado das concentraes presentes de -caroteno.
Tabela 3 Composio centesimal da polpa do fruto de buriti
Componentes
Mariath et
al (1989)
Tavares et Santos
al (2003) (2005)
Manhes
(2007)
gua
64,2
67,2
49,77
62,93
Protenas
1,8
1,5
2,82
2,1
Lipdios
8,1
3,8
19,8
13,85
Carboidratos
25,2
26,1
26,76
20,18
Cinzas
0,7
1,4
0,85
0,94
2.2.2) leo de Buriti

O leo de buriti apresenta um alto teor de cidos graxos insaturados, muito semelhante
ao azeite de oliva (Olea europaea) e leo de abacate (Persea americana) (Tabela 4) (Silva,
2002). Alm disso, contm uma alta concentrao de carotenides, principalmente caroteno, superando o azeite de dend (Tabela 5), conferindo uma alta estabilidade oxidativa
ao leo tambm devido aos teores de tocoferis (700 ppm) e fitoesteris (800 1000 ppm)
presentes (Godoy & Rodriguez-Amaya, 1995; Rodriguez-Amaya, 2001; Silveira, 2004; De
Rosso & Mercadante, 2007). Outro uso ao leo de buriti foi dado por Dures et al (2006) na
sntese de compsitos de poliestireno e de polimetacrilato para produo de plsticos mais
biodegradveis.
26
Tabela 4 Perfil de cidos graxos de frutos oleaginosos
cidos graxos
Buriti
Tucum
Oliva
Abacate
Dend
12:0
lurico
----------
----------
----------
----------
0,1 1,0
14:0
mirstico
0,1
----------
0,67
0,02 - 0,13
0,9 1,5
16:0
palmtico
17,3 - 19,3
13,86
10 - 11,7
18:0
esterico
1,86 2,0
9,80
2,15
0,5 1,0
4,2 5,1
20:0
araqudico
----------
0,82
0,48
----------
0,2 0,7
16:1
palmitolico
----------
0,17
1,45
3,9 5,6
0,1 0,3
18:1
olico
73,3 78,7
46,81
73,8 -78
60 - 71
37,3 40,8
18:2
linolico
2,4 3,9
26,13
7 - 9,8
7,1 15,3
9,1 11
18:3
linolnico
2,17 2,2
0,93
----------
0,37 1,03
0 0,6
Referncias
Santos,
2005
Bora et al,
2001
Gunstone &
Padley, 1997
Danieli,
2006
Choo,
1994
19,8 22,7 41,8 46,8
Tabela 5 Perfil de carotenides de alguns leo vegetais
Tucum
Dend
Buriti
-Caroteno
75,6-89,3
54,4 56,7
72,3 75,2
-Caroteno
2,68
25,2 37,6
3,9 - 15,9
-Caroteno
3,29
1,16 - 3,3
5,3 - 7,2
-Caroteno
0,22
0,7 2,3
0,9 2,5
-Caroteno
0,83
0,2 2,0
0 0,7
-zeacaroteno
3,27
0,6 1,0
1,1 2,41
Outros
carotenos
1,63
3,15 12,6
0,95
xantofilas
8,58
0 - 0,4
1,7 13,6
2.2.3) Outras Tecnologias

Vrias outras tecnologias esto sendo estudadas, alm da extrao por solventes, para
recuperao de -caroteno de matrizes, como leo de dend e do buriti. Frana & Meirelles
(1997) estudaram a extrao com fluido supercrtico dos carotenides de leo de dend retido
na torta de prensagem, enquanto Frana et al (1999) reportaram a utilizao de CO2
supercrtico na extrao de carotenides do fruto de buriti. Porm, nestes trabalhos apesar de
extrarem at 10000 ppm de carotenides, tambm so obtidos triglicerdeos e cidos graxos.
27
Algumas modificaes foram propostas por Chuang & Brunner (2006) neste processo
de extrao com fluido supercrtico para contornar sua baixa seletividade. Os autores
utilizaram a transesterificao do leo de palma e em seguida a extrao em trs etapas
obtendo um produto 200 vezes mais concentrado em carotenides, praticamente ausente de
steres, cidos graxos e triglicerdeos. Todavia, na temperatura utilizada (60C) e dada a
presena de O2 no CO2 supercrtico, condies que auxiliam a degradao dos carotenides,
necessria a adio de antioxidantes (BHT) ao processo (Cocero et al, 2000).
A transesterificao tambm utilizada como pr-etapa no processo de destilao
molecular, onde os carotenides so o resduo do processo, alcanando at 24000 ppm de
carotenides, com perdas de at 14%, a 210C em destilador centrfugo com tempo de
residncia em torno de 50s (Batistella & Maciel, 1998), ou ento em um destilador em filme
descendente em duas etapas, obtendo 80000 ppm de carotenides, com perdas de 25%, mas
sem alterao significativa no seu perfil (Ooi et al, 1994).
O processo de separao por membranas, que inicialmente era realizado para
degomagem de leos vegetais, foi testado tambm para recuperao de carotenides
utilizando-se membranas densas polimricas, mas na realidade este processo bastante
efetivo na separao das xantofilas e clorofila, alm dos fosfolpideos, com reteno entre 80
e 100%, produzindo um leo rico em carotenos (Subramanian et al, 2001; Arora et al, 2006).
Este processo, apesar de positivo na concentrao unicamente de carotenos, apresenta a
necessidade de uma etapa adicional de hidrlise ou transesterificao.
A hidrlise enzimtica tambm foi testada como pr-tratamento para facilitar a
recuperao de carotenide podendo substituir com xito a hidrlise alcalina, sem perdas por
degradao e isomerizao dos mesmos.
28
Lietz & Henry (1997) testaram a hidrlise do leo de palma utilizando a lipase de
Candida rugosa em uma concentrao de 10% p/v leo solubilizado em tampo fosfato
0,08M, mantendo a relao de leo e soluo aquosa em 1/175, e agitao em atmosfera de
N2, a 35C, durante 4 horas. Os autores obtiveram um rendimento de 96% em cidos graxos,
mantendo inalterada a concentrao de carotenides. Resultado similar foi alcanado por
Fernandez et al (2000), que apenas modificaram a relao de leo e soluo aquosa para
1/350, mostrando que tambm nessas condies a quantidade de carotenides se manteve
praticamente constante e igual a 330 ppm, enquanto que a saponficao alcalina promoveu a
reduo em 15% no teor de carotenides. Segundo os autores, a reduo era ainda maior
quando o sabo formado era removido por filtrao.
You et al (2002) utilizaram tambm leo de palma e lipase de Candida rugosa, mas
em condies diferentes. Neste trabalho, a quantidade de enzima empregada foi de 1% p/v,
substituindo o tampo fosfato por gua, alterando a relao leo/gua para 1/1, e aumentando
a temperatura para 50C e o tempo reacional para 24 h. Os autores obtiveram um rendimento
de 94% em cidos graxos e uma reduo no teor de carotenides da ordem de 15%,
provavelmente devido temperatura empregada.
2.3) LIPASES
As lipases so enzimas classificadas como hidrolases (glicerol ster hidrolases, E.C.
3.1.1.3) e atuam sobre a ligao ster de vrios compostos, tendo os acilgliceris como os
melhores substratos, podendo catalisar reaes de hidrlise, sntese, transesterificao e
interesterificao (Figura 22). As lipases so distintas de outras esterases, pois atuam de forma
nica em substratos insolveis em gua, atuando na interface leo-gua de solues
emulsionadas. Alm disso, caractersticas como estabilidade na presena de solventes
orgnicos, ausncia da necessidade de cofatores e alta enantiosseletividade, permitem que as
lipases tenham grande interesse tecnolgico (Sharma et al, 2001; Castro et al, 2004).
29
Figura 22 Algumas reaes catalisadas por lipases
2.3.1) Fontes e Propriedades

As lipases podem ser obtidas a partir de vrias fontes animais, vegetais e microbianas.
Dependendo da fonte, as lipases podem ter massa molecular variando entre 20 a 75 kDa,
atividade em pH na faixa entre 4 a 9 e em temperaturas variando desde a ambiente at 70 C.
Lipases so usualmente estveis em solues aquosas neutras temperatura ambiente
apresentando, em sua maioria, uma atividade tima na faixa de temperatura entre 30 e 40 C.
Contudo, sua termoestabilidade varia consideravelmente em funo da origem, sendo as
lipases microbianas as que possuem maior estabilidade trmica (Castro et al, 2004).
30
A maioria das preparaes lipsicas comerciais so compostas pela mistura de vrias

isoenzimas em diferentes propores, como no caso daquelas obtidas a partir de culturas
Candida rugosa, C. antarctica, Rhizopus niveus, Chromobacterium viscosum, entre outras.
Cada isoforma tem propriedades diferentes, tais como massa molar, especificidade,
estereosseletividade, presena de glicosilaes e preferncia por substratos (Sharma et al,
2001; Saxena et al, 2003; Mara et al, 2006). As principais fontes de lipases e suas
propriedades esto descritas na Tabela 6.
Tabela 6 Faixas timas de atuao de algumas lipases
Fontes
pH
T (C)
Referncia
Candida rugosa
5-8
35 - 50
Lpez et al, 2004
Candida antarctica A
6 - 10
35 - 70
Pfeffer et al, 2006
Thermomyces lanuginosus
69
30 - 50
Fernandes et al, 2004
Aspergillus niger
68
40 - 55
Shu et al, 2007
5,5 7,5
35 - 45
Ogino et al, 2000
Bacillus subtilis
8 10
30 - 40
Lesuisse et al, 1993
Geotrichum candidum
6,5 - 8
32 - 42
Burkert et al, 2004; Maldonado, 2006
Streptomyces rimosus
8,5 - 10
45 - 60
Abrimic et al, 1999
Yarrowia lipolytica
4-7
30 - 45
Destain et al, 1997; Aloulou et al, 2007;

Brgida et al, 2007
Rhizopus niveus
5-7
30 - 45
Uhlig, 1998
6,5 7,5
30 - 40
Abbas et al, 2002
6-9
40 - 55
Godfrey & West, 1996
4 - 4,5
30 - 35
Eastmond, 2004; Cavalcante, 2006
Pseudomonas aeruginosa
Rhizomucor miehei
Pncreas suno
Mamona (Ricinus communis)
2.3.2) Estrutura e Aspectos cinticos

As lipases mostram uma caracterstica padro conhecida como o entrelaado de /
hidrolase. O stio ativo da lipase formado por uma trade cataltica constituda pelos
aminocidos: serina, cido asprtico (ou glutmico) e histidina; o resduo nucleoflico serina
localizado no C-terminal da fita 5 de um pentapeptdeo GXSXG altamente conservado,
formando uma caracterstica principal em torno de , designada como a cavidade
nucleoflica.
31
Como visto na Figura 23, o stio composto de uma folha central consistindo de 8
diferentes fitas (1-8) conectadas com seis -hlices (A-F) (Jaeger et al, 1999; Martins,
2001; Castro et al, 2004).
Figura 23 Esquema geral do stio ativo de uma lipase
A hidrlise do substrato inicia-se com o ataque nucleoflico pelo oxignio da serina no

tomo de carbono carbonlico na ligao ster, levando formao de um intermedirio
tetradrico estabilizado pelas ligaes do hidrognio a tomos de nitrognio de resduos da
cadeia principal pertencente cavidade de oxinion. Um lcool liberado aps a formao do
complexo acil-lipase, o qual finalmente hidrolisado com a liberao dos cidos graxos e
regenerao da enzima, conforme demonstrado na Figura 24 (Jaeger et al, 1999, Martins,
2001; Amaral, 2007).
As reaes lipolticas ocorrem na interface gua-lipdeo podendo, em alguns casos,
impedir que as cinticas das reaes enzimticas sejam descritas pelo mecanismo de
Michaelis-Menten, que s so vlidas se a reao ocorrer em fase homognea. O mecanismo
cintico mais aceito para descrever a ao das lipases o Ping-Pong Bi Bi (Cunha, 2007).
32
Figura 24 Mecanismo de reao em lipases
O fenmeno conhecido como ativao interfacial foi originado de estudos cinticos

recentes de reaes lipolticas e relaciona o aumento da atividade da lipase com a presena de
substratos insolveis, que formam emulso. Isso porque o stio ativo de algumas lipases
coberto por uma superfcie entrelaada, denominada de tampa (ou borda). Quando h ligao
do substrato na superfcie da enzima, esta tampa move-se, alterando a forma fechada da
enzima para a forma aberta, com o centro ativo agora acessvel ao substrato e, ao mesmo
tempo, expondo uma larga superfcie hidrofbica que facilita a ligao da lipase interface.
Este modelo de ativao interfacial tem excees tais como as cutinases, que no apresentam
tampa cobrindo o stio ativo (Meirelles, 1997; Jaeger et al, 1999; Gama, 2000; Castro et al,
2004).
2.3.3) Especificidade
Para aplicaes industriais, a especificidade da lipase um fator crucial. A enzima
pode ser especfica com relao a estrutura cida ou alcolica do substrato, e tambm em
relao aos seus ismeros. As lipases podem ser subdivididas em 3 grupos baseados em sua
especificidade.
33
Lipases no especficas (como por exemplo as produzidas por Candida rugosa,

Staphylococcus
aureus,
Chromobacterium
viscosum,
Thermomyces
lanuginosus
Pseudomonas sp.) quebram as molculas de acilglicerol randomicamente, produzindo cidos

graxos livres, glicerol, monoacilgliceris e diacilgliceris como intermedirios. Neste caso, os
produtos so similares queles produzidos por catlise qumica, porm com menor grau de
termodegradao, pois a temperatura do meio reacional bem inferior s temperaturas
empregadas nos processos qumicos (Uhlig, 1998; Castro et al, 2004; Amaral, 2007).
Lipases 1,3 especficas (ex: de Aspergillus niger, Mucor javanicus, Rhizopus delemar,
Rhizopus oryzae, Yarrowia lipolytica, Rhizopus niveus e Penicillium roquefortii) liberam
cidos graxos das posies 1 e 3 e formam, por esta razo, produtos com composies
diferentes daquelas obtidas pelas lipases no regiosseletivas, ou mesmo pelos catalisadores
qumicos. Geralmente, a hidrlise de triglicerdeos em diglicerdeos bem mais rpida do que
destes em monoglicerdeos (Meirelles, 1997; Uhlig, 1998; Castro et al, 2004).
Lipases cido graxo especficas so lipases com ao especfica na hidrlise de
steres, cujos cidos graxos apresentam cadeia longa insaturada com duplas ligaes, em cis
no carbono 9. steres com cidos graxos insaturados, ou sem insaturao no carbono 9, so
lentamente hidrolisados. Este tipo de especificidade no comum entre as lipases e o exemplo
mais estudado at hoje a lipase produzida por Geotrichum candidum (Meirelles, 1997;
Uhlig, 1998; Gama, 2000; Martins, 2001; Castro et al, 2004).
Lipases tambm podem ser estereoespecficas, onde um dos ismeros de um racemato
pode ser hidrolisado preferencialmente em detrimento de outro, ou ainda, a formao de um
ismero pode ser catalisada seletivamente a partir de precursores pr-quirais, como os
compostos meso-disteres ou meso-diis. Como exemplos podemos citar as lipases originadas
de Burkholderia cepacia, Candida antarctica, Candida rugosa e Rhizopus delemar (Gama,
2000; Martins, 2001).
34
2.3.4) Hidrlise Enzimtica de leos e Gorduras

A hidrlise de leos e gorduras pode ocorrer a partir de processos convencionais
(Tabela 7; Shreve & Brink Jr, 1997), onde se utilizam temperaturas e presses elevadas na
presena de catalisadores inorgnicos, resultando em um alto consumo de energia e vrios
subprodutos indesejveis (polimerizao e degradao de cidos graxos insaturados, produo
de cetonas e hidrocarbonetos); ou ento a partir de processos enzimticos, onde as reaes so
conduzidas a presses e temperaturas menores na presena de um biocatalisador (lipase),
proporcionando menor consumo energtico, minimizao de degradao trmica e a
possibilidade de recuperar e concentrar molculas de alto valor agregado, como os cidos
poliinsaturados (PUFA) e os insaponificveis (Queiroz, 1996; Castro et al, 2004; Hasan et al,
2006; Gunstone et al, 2007).
Tabela 7 - Comparao entre processos convencionais de hidrlise de leos e gorduras
Processos
Convencionais
Autoclave
(mdia presso)
Twitchell
Colgate Emery
Temperatura (C)
149 177
100 - 104
252
Presso (atm)
5,1 10,2
40,8 47,6
Tempo (h)
5 - 10
12 - 48
2-3
Rendimento (%)
85 -98
85 -98
97 - 99
xidos de zinco,
clcio ou magnsio
cidos sulfnicos
em H2SO4
Catalisador
A hidrlise enzimtica de leos e gorduras pode ser conduzida de vrias formas. Neste
processo necessria a formao de uma interface lipdeo/gua e a absoro da lipase nesta
interface, e para isso podem-se empregar enzimas livres ou imobilizadas em sistemas
emulsionados, apenas agitados ou na presena de solventes orgnicos (Queiroz, 1996; Sharma
et al, 2001; Castro et al, 2004; Brigida, 2006).
Muitos trabalhos tm sido realizados utilizando sistemas emulsionados para hidrlise
enzimtica. Yao et al (2005) mostraram que a conduo de sistemas microemulsionados de
AOT (sulfosuccinato de bis(2-etill hexil) sdio) em isooctano para hidrlise de azeite de oliva
35
utilizando lipase de Candida rugosa em tampo fosfato 0,05M a 30C e 150 rpm, apresentou
um rendimento em cidos graxos de apenas 30% em 72 h de reao, sendo o baixo
rendimento atribudo a inativao que este sistema causa lipase.
Padilha & Augusto-Ruiz (2007) apresentaram resultados um pouco melhores
utilizando um sistema com acetato de polivinila e detergente aninico como emulsionantes
para hidrlise de leo de pescado com uma soluo tamponada de lipase pancretica, a 38C
por 1 h resultando em 44% de cidos graxos livres como resultado.
Noor et al (2003) testaram a hidrlise de leo de palma utilizando a lipase SP398 em
tampo emulsionado com goma arbica agitado a 1000 rpm, a 40C por 90 min, obtendo
hidrlise total do leo. Outras alternativas para se produzir emulses com maior rea
interfacial vm sendo testadas como a emulsificao por ultrassom, que aumenta em 67 vezes
a rea de contato do que o sistema conduzido por agitao a 1000 rpm, apesar de manter a
emulso estvel apenas por 2 h (Ramachandran et al, 2006).
Mas a hidrlise enzimtica no necessita exclusivamente de emulsionantes. Esta pode
ocorrer apenas com a agitao mecnica, apresentando taxas de hidrlise similares, conforme
verificado por Wang et al (1988).
Com o sistema apenas agitado, Gutierrez-Ayesta et al (2007) testaram vrias lipases
com diferentes estruturas conformacionais em tampo para hidrlise de leo de girassol
solubilizado em heptano, mantendo uma relao fase orgnica/fase aquosa de 1/1, e uma
quantidade de lipase de 5% em peso em relao ao leo, durante 6 h, a 60C. As lipases de
Thermomyces lanuginosus e Pseudomonas cepacia forneceram os melhores resultados,
correspondendo respectivamente a 85,3 e 69% de cidos graxos livres. A lipase tipo B de
Candida antarctica, tanto livre como imobilizada, por outro lado, forneceu as piores taxas de
hidrlise, em torno de 5%.
36
Vacek et al (2000) compararam dois procedimentos experimentais para hidrlise de

leo de semente de groselha. No primeiro mtodo, sob agitao, foram misturados 100 mg de
leo e 100 mL de gua, a 40C por 24 h. No outro, 300 mg de leo foram solubilizados em 2
mL de isooctano e misturados com 1 mL de tampo fosfato 0,1 M, a 30C, durante 4 h, sendo
neste mtodo utilizadas apenas enzimas imobilizadas. No primeiro mtodo foi utilizada uma
quantidade de enzima 4 vezes maior em relao ao segundo. Os melhores resultados foram
obtidos no primeiro procedimento utilizando-se as lipases de Pseudomonas cepacia
imobilizada e de Mucor miehei imobilizada em resina macroporosa de troca inica (Lipozyme
RM IM) com rendimentos superiores a 80% de cido graxo livre.
A hidrlise de leo de soja com diferentes tipos de lipase foi estudada por Park et al
(1988), tendo como principal objetivo a comparao das atividades dessas enzimas em
sistemas isolados e combinados. Aps 10 h de reao, foi verificado que os sistemas
combinados de lipases microbianas, tais como Penicillium sp. e Rhizopus niveus ou
Penicillium sp. e Rhizopus delemar, forneceram rendimentos mais elevados (98,0 e 99,5% de
hidrlise) que os obtidos em sistemas contendo apenas uma lipase (7,2 e 44,4% de hidrlise).
A relao leo/gua na mistura reacional foi avaliada por Rooney & Weatherley
(2001) utilizando uma lipase de Candida rugosa para hidrlise de leo de girassol em
diferentes quantidades. A reao conduzida com 0,8% peso de lipase em peso de mistura
reacional, a temperatura ambiente (20 25C) durante 90 min e 500 rpm, variando a relao
leo/gua em 3/1, 4/1, 8/1 e 16/1 obteve como resultados 88, 68, 64 e 45% de cidos graxos
livres, respectivamente.
Alguns aditivos podem ser usados para aumentar a hidrlise enzimtica, como ons
Ca+2 que agem como ativadores de lipases; alumina e ciclodextrinas que retiram os cidos
graxos da mistura reacional atravs de adsoro e de complexos de incluso, respectivamente;
ou ento remoo do glicerol com recirculao da lipase (Queiroz, 1996).
37
Considerando que inmeras variveis podem estar envolvidas nesse tipo de processo,
observa-se uma tendncia pelo emprego da metodologia de planejamento estatstico, que
possibilita verificar a influncia das variveis e suas interaes no rendimento de um
determinado processo com grande economia de tempo, material e recursos. Como exemplo,
cita-se o trabalho desenvolvido por Oliveira et al (1999) no qual foi analisada a influncia da
concentrao de lipase e do tempo de reao no desempenho da hidrlise da gordura de
babau por lipase comercial empregando a metodologia de superfcie de resposta, sendo
obtidos rendimentos entre 6,52 e 41,44% de cidos graxos livres. O ponto timo do processo
(maior porcentagem de hidrlise no menor tempo possvel), entretanto, no foi alcanado,
pois o planejamento fatorial proposto no cobriu a faixa correspondente a maiores tempos de
reao.
38
CAPTULO 3 MATERIAIS E MTODOS

3.1) MATERIAIS
Os leos de buriti bruto RF3800 e refinado RF3810 foram cedidos pela empresa
Beraca Sabar.
As lipases utilizadas foram Lipozyme TL IM proveniente de Thermomyces
lanuginosus; Lipozyme CALB L e Novozym 435, que so produzidas por Candida
antarctica, onde a primeira est na forma livre, e a ltima, na forma imobilizada. Todas foram
doadas gentilmente pela Novozymes. A lipase de Yarrowia lipolytica IMUFRJ 50682 foi
produzida em biorreator multifsico de acordo com a metodologia desenvolvida por Amaral
(2007).
O padro de -tocoferol foi cedido pelo Laboratrio de Bioqumica Nutricional e de
Alimentos do Instituto de Qumica da UFRJ. O kit enzimtico para determinao de esteris
totais foi doado pela Laborlab.
3.2) EQUIPAMENTOS
Os equipamentos utilizados no presente trabalho esto relacionados a seguir:
Centrfuga Fanem modelo 204-NR;
Transmissor de pH (pHmetro) Actron pH-2000;
Espectrofotmetro Hach DR/4000 UV;
Incubador com agitao e controle de temperatura (Shaker) Certomat BS-1;
Cromatgrafo lquido de alta eficncia (HPLC), equipado com uma bomba binria Waters
1525, de um detector UV-Visvel Waters 2487, alm de injetor e aquecedor de coluna.
Para processamento e anlise de dados foi utilizado o software Breeze v. 3.30. A coluna
analtica empregada foi a YMC-Pack ODS-A (100 x 4,6 mm), com tamanho de poro de
120
39
Cromatgrafo em fase gasosa HP 6890 acoplado a um detector de massas HP 5972 com

ionizao por impacto de eltrons a 70 eV. A coluna utilizada foi DB-1 30 m x 0,25 mm x
0,25 m pertencente ao Laboratrio de Anlise de Aromas do Instituto de Qumica da
UFRJ.
3.3) MTODOS ANALTICOS

3.3.1) Composio de cidos graxos
Os leos bruto e refinado de buriti foram inicialmente transesterificados atravs da
adio de metanol, na razo molar de 1/9, e de 3 mol % de carbonato de potssio, a 100C por
2 h. A mistura reacional foi resfriada e neutralizada com soluo aquosa de HCl 10%, sendo
os steres metlicos isolados por extrao com acetato de etila. A fase orgnica resultante foi
submetida a lavagens sucessivas com gua destilada (3 x), tratada com sulfato de sdio anidro
e evaporada.
Os steres metlicos formados foram analisados em um cromatgrafo em fase gasosa,
que operou sob as seguintes condies: temperatura do injetor e do auxiliar = 280C;
temperatura inicial da coluna, 100C (32 min.), com rampa de 5C/min at 140C, uma espera
(hold) de 5 min, mais uma rampa de 5C/min at 200C, e depois mais uma rampa de
15C/min at a temperatura final da coluna, 280C; Splitter (razo de diviso da amostra),
1:20; o gs de arraste utilizado foi hlio (0,9 mL/min); volume da amostra injetada, 0,5 L. A
varredura foi efetuada na faixa de massa de 40 a 500 Daltons. O mtodo utilizado para a
determinao quantitativa dos steres foi o da normalizao interna (Rezende, 2006)
3.3.2) ndices
3.3.2.1) Saponificao (IS)
O ndice de saponificao uma medida dos cidos graxos livres e combinados que
existem no leo e diretamente proporcional massa molar mdia (MMM). Quanto menor
esta MMM, maior ser o IS.
40
O mtodo utilizado o oficial Cd-3b-76 (Firestone, 1997), onde foram adicionados 2 g

de amostra a 25 mL de soluo alcolica 0,5M de KOH e prolas de vidro, mantendo em
refluxo por 60 minutos, garantindo a solubilizao total da amostra. Depois foram adicionadas
2 gotas de uma soluo alcolica 1% de fenolftalena, e titulando-se com uma soluo 0,5 M
HCl at desaparecimento da cor vermelha. O branco foi preparado com gua ao invs da
amostra. Na frmula abaixo, a representa o volume (mL) de HCl titulado quando se utiliza a
amostra, e b o volume (mL) titulado quando a amostra a gua.
IS =
(b a) * 0,5 * 56,1
(mg KOH/g leo)
2
3.3.2.2) Perxido (IP)
O ndice de perxido uma medida do oxignio ligado aos leos em forma de

perxido. O mtodo utilizado o oficial Ja-8-87 (Firestone, 1997), tambm conhecido como
mtodo de Wheeler. Inicialmente, o material de vidro deve estar totalmente limpo, por isso
incialmente foi lavado com gua quente, em seguida imerso em soluo sulfocrmica, e
depois lavado mais 5 vezes com gua destilada.
A 1 g de amostra foi adicionado 30 mL de uma mistura 3/2 (v/v) de cido actico
glacial/clorofrmio, e depois mais 0,5 mL de soluo saturada de KI, agitando energicamente
por 1 minuto exato. Imediatamente depois, a soluo foi diluda com 30 mL de gua destilada,
e o iodo liberado foi titulado com soluo 0,01M de tiossulfato de sdio. Pouco antes de
desaparecer a cor amarela, 0,5 mL de soluo 1% de amido foi adicionada, mantendo a
titulao at desaparecer a cor azul ou turvao. O branco foi preparado com gua ao invs da
amostra. Na frmula abaixo, a representa o volume (mL) de Na2SO3 titulado quando se utiliza
a amostra, e b o volume (mL) titulado quando a amostra a gua.
IPO =
(a b) * 0,1 *1000
meq O2/kg
1
41
3.3.2.3) Iodo (II)

O ndice de iodo uma medida do grau de insaturao dos componentes do leo.
Quanto maior o nmero de duplas ligaes por unidade de leo, maior o II.
O ndice de iodo foi calculado a partir da composio em cidos graxos de acordo com
o mtodo oficial Cd-1c-85 (Firestone, 1997), de acordo com a seguinte equao, sendo AOD,
cido octadecenico; AODD, cido octadecadienico e AODT, cido octadecatrienico.
II = % AOD * 0,86 + % AODD * 1,732 + % AODT * 2,616 g I2 /100 g leo

3.3.2.4) cidos graxos livres (AGL)
O mtodo utilizado foi de titulao potenciomtrica, onde as amostras so adicionadas
a lcool quente neutralizado, completando 50 mL de soluo, e os grupos cidos so
neutralizados com soluo 1M NaOH at deteco do ponto final a pH 10,2, j que o cido
esterico tem pKa neste valor (Kanicky & Shah, 2002; Osawa & Gonalves, 2006). A %AGL
na maioria dos tipos de leos calculada tendo como base cido oleico:
%AGL =
Vol(mLNaOH)
28,2
Amostra(g)
3.3.3) Densidade
Um balo volumtrico vazio (m1) foi pesado, sendo depois preenchido com gua
destilada, que tenha sido antes fervida e resfriada, e depois pesado novamente (m2). E
finalmente, o balo foi rinsado com amostra, e em seguida preenchido com esta e pesado
(m3), obtendo a densidade relativa, de acordo com frmula abaixo (Matissek et al, 1998):
d 20 =
20
m3 m1
m2 m1
3.3.4) Umidade
O mtodo utilizado foi o oficial Bc-2-49 (Firestone, 1997), que consiste em se retirar
uma alquota de 2 mL de amostra, adicionando-a ao cadinho (m2), previamente seco e pesado
(m1), e seca em uma estufa a 103C, durante 24 horas (m3). O teor de umidade na amostra foi
determinado pela frmula:
42

m m1
100
% Umidade = 1 3
m 2 m 1
3.3.5) Material Insaponificvel

3.3.5.1) Teor de Insaponificveis
O mtodo utilizado o oficial Tk-1a-64 (Firestone, 1997), sendo feito em trs etapas:
saponificao, extrao e concentrao.
A 0,1 g de amostra foram adicionados 50 mL de soluo hidroalcolica (90% lcool)
2M de KOH, em banho-maria, em refluxo por 1 hora. A soluo quente saponificada obtida
foi colocada em um funil de decantao, sendo a vidraria de refluxo rinsada 3 vezes com 17
mL de gua destilada para evitar perdas de material.
Depois de esfriar, 100 mL de ter de petrleo foram adicionados ao funil, agitado
energicamente, e deixado em repouso at clara separao de fases, sendo ento retirada a fase
inferior (fase B). Em seguida, a fase A (superior) foi lavada 2 vezes com 40 mL de gua
destilada, e depois retirada a fase inferior, reunindo-a a fase B anterior.
A esta fase B foram adicionados mais 100 mL de ter de petrleo, repetindo-se o
procedimento acima. Com toda a fase A reunida, fez-se uma lavagem com 50 mL de etanol
50% at a gua de lavagem estar em pH neutro. Depois, foram adicionados 1,5 g de sulfato de
sdio anidro, secando por 10 minutos, e agitando um pouco.
Finalmente, a fase A foi colocada em um balo previamente seco e pesado (m1), e
acoplado a um rotovaporador para eliminao do solvente. Depois foi seco na estufa por 30
minutos a 103C (m2). Com isso, o teor de insaponficveis foi calculado de acordo com a
equao abaixo:
% Insaponificavel =
m2 m1
100
0,1
43
3.3.5.2) Carotenides
3.3.5.2.1) Carotenides Totais

Neste ensaio, a amostra foi solubilizada e diluda em ter de petrleo, sendo detectada
a 450 nm no espectrofotmetro (Rodriguez-Amaya, 2001). A concentrao de carotenides
totais foi calculada de acordo com a equao abaixo:
Carotenides totais (ppm) =
Abs. (Amostra) Vol.Amostra(mL) 10 4

A 1%
1 cm ( caroteno) Amostra ( g )
3.3.5.2.2) Composio de carotenides

As amostras foram analisadas quanto a sua composio em carotenides em HPLC,
utilizando uma fase mvel de acetonitrila/metanol/THF (50/45/5 v/v/v), com adio de 0,05%
trietilamina ao metanol, sendo submetida a ultrassom antes do uso. A vazo da fase mvel foi
de 1,0 ml/min. A temperatura da coluna era a ambiente (25 2C), e a absorbncia foi
detectada a 450 nm. As amostras foram solubilizadas em acetona, e diludas para depois
serem injetadas (5 L) no HPLC (http://www.waters.com/, 2006).
Os padres de carotenides utilizados foram obtidos atravs de separao por
cromatografia em coluna 2,5 cm x 30 cm, usando como adsorvente uma mistura ativada 1/1
de xido de magnsio e terra diatomcea (Celite).
Inicialmente foi adicionada uma amostra da frao insaponificvel do leo bruto de
buriti coluna, e em seguida eluda com ter de petrleo em concentraes variando de 4 a
20% de ter etlico. As fraes obtidas foram -caroteno, -caroteno e -caroteno. O 10-apo-carotenal foi obtido por partio em etanol do leo refinado de buriti, e purificado pelo
HPLC, injetando 100 L por 3 vezes nas condies j supra citadas. Estes carotenides foram
confirmados pela varredura no espectro visvel em espectrofotmetro (Godoy & RodriguezAmaya, 1995; Rodriguez-Amaya, 2001).
44
3.3.5.3) Tocoferis Totais

As amostras foram analisadas quanto aos tocoferis totais em HPLC, utilizando uma
fase mvel de isopropanol (grau HPLC)/gua ultra-pura milli-Q (65/35 v/v), sendo submetida
a ultrassom antes do uso. A vazo da fase mvel foi de 0,7 ml/min. A temperatura da coluna
foi ajustada para a temperatura ambiente (25 2C), e a absorbncia foi detectada em 295
nm. As amostras foram solubilizadas em metanol, e diludas para depois serem injetadas (7
L) no HPLC. O padro utilizado foi o -tocoferol (Satomura et al, 1992).
3.3.5.4) Esteris Totais
Para determinao de fitoesteris totais, foi utilizado um mtodo espectrofotomtrico
atravs de um kit enzimtico que contm lipase, colesterol oxidase e peroxidase, tendo como
padro uma soluo de colesterol de 200 mg/mL (Moreau et al, 2003).
Inicialmente, o reativo de trabalho (0,5 mL de 4-aminofenazona 0,025 M + 19 mL
gua + 0,5 mL fenol 0,055 M + 0,2 mL reativo enzimtico) preparado, sendo utilizado:
Reativo de Trabalho
Reativo Padro
Amostra
Branco
2,0 mL
-
Padro
2,0 mL
20 L
-
Amostra
2,0 mL
20 L
As solues branco, padro e amostra so incubadas a 37 C em um banho-maria por

60 minutos, e depois detectados em espectrofotmetro a 505 nm. A concentrao de esteris
totais calculada de acordo com a frmula abaixo.
EsterisTotais (mg / dL) =
Abs.( Amostra )
200
Abs.( Padro)
3.3.6) Atividade Lipoltica

A atividade da lipase foi estimada mediante a variao de absorbncia a 410 nm em
espectrofotmetro devido oxidao do p-nitrofenil laurato (p-NFL) com uma concentrao
de 0,162 mg.mL-1 em tampo fosfato de potssio (0,05 M), pH 7,0 (Meirelles, 1997).
45
O substrato (p-NFL) foi preparado solubilizando 0,018 g deste em 1 mL de

dimetilsulfxido (DMSO). Em seguida, uma alquota foi diluda 100 vezes em tampo fosfato
de potssio (0,05 M).
Um tubo de ensaio contendo 1,8 mL do substrato previamente preparado foi
aclimatado a 37C por, aproximadamente, 15 minutos. Aps esse tempo, foram adicionados
0,2 mL de soluo de enzima e a absorbncia acompanhada em espectrofotmetro a 410 nm
contra o branco de reao (0,2 mL do tampo fosfato de potssio adicionados a 1,8 mL do
substrato).
O clculo da atividade realizado utilizando a equao abaixo:
A=
(Abs ) * D * f *1000
(t ) * V
onde:
A = atividade da enzima (U.L-1), onde 1 Unidade enzimtica (1U) a quantidade de enzima
capaz de produzir 1mol de p-nitrofenol por minuto nas condies de ensaio;
Abs = variao de absorbncia no intervalo de tempo t (em minutos) transcorrido durante a

fase de aumento linear da absorbncia;
D = diluio da soluo enzimtica;
V = volume (mL) da soluo enzimtica utilizado no ensaio.
f = fator de converso (0,1062 mol/mL)
3.4) PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS

3.4.1) Caracterizao dos leos de buriti
Nesta etapa inicial, foi conduzida a caracterizao dos leos bruto e refinado de buriti,
permitindo avaliar alguns parmetros-base, como a composio em termos de cidos graxos;
suas propriedades fsico-qumicas (ndices de perxido, saponificao e iodo; cidos graxos
livres; densidade e umidade) e o teor e a composio de material insaponificvel, dentre os
quais esto tocoferis, fitoesteris e carotenides.
46
3.4.2) Pr-Avaliao do Processo Enzimtico

A pr-avaliao do processo enzimtico foi realizada para se determinar uma faixa de
valores mais restrita para as variveis a serem testadas, como o tempo reacional mnimo para
cada enzima; a temperatura de atuao tima das enzimas sem que haja degradao dos
carotenides; a quantidade e a seleo de enzimas a serem adicionadas ao sistema reacional; e
a melhor proporo entre leo e gua. Alm disso, foram testados alguns aditivos como
emulsificantes, clcio, alumina bsica ativada S, amberlita XAD-2 e substituio da gua por
tampo fosfato. Estes parmetros foram avaliados em relao formao de cidos graxos
livres por titulao, a quantidade de carotenides totais por espectrofotometria e a variao no
perfil destes atravs de HPLC.
3.4.2.1) Tempo reacional e Seleo de enzimas
Nesta etapa, foram avaliados o tempo reacional (1, 2, 4 e 24 h) a ser fixado para o
planejamento experimental e quais enzimas deveriam ser testadas. Para isso foram utilizados
alguns parmetros fixos como agitao (200 rpm), quantidade de enzima (1 U de atividade em
8 mL de volume total), temperatura (30C) e relao leo/gua (1/1).
Cada enzima apresenta uma atividade lipoltica diferente: Novozym 435 possui 1835,6
96,3 U por kg de enzima imobilizada, a Lipozyme CALB L apresenta 53106 640 U/L, a
Lipozyme TL IM apresenta 690,24 6 kU/kg de atividade e a lipase de Yarrowia lipolytica,
inicialmente tinha 2000 U/L quando produzida em frascos agitados (utilizada nesta pravaliao). Posteriormente, quando a produo foi conduzida em biorreator, foi obtido 30184
500 U/L de atividade lipoltica (utilizada no planejamento experimental). Isso quer dizer
que para representar 1 U de atividade foram necessrias 0,545 g de Novozym 435; 18,83 L
de Lipozyme CALB L; 1,5 mg de Lipozyme TL IM e 0,5 mL de lipase de Yarrowia lipolytica
para um total de 8 mL de mistura reacional.
47
O custo destas enzimas no mercado em 2007 est em US$ 1785,70 por kg de

Novozym 435; US$ 86,42 por kg de Lipozyme TL IM e US$ 138,36 por kg de Lipozyme
CALB L. Neste trabalho foi estimado que o valor de mercado da lipase de Yarrowia lipolytica
teria o mesmo custo da Lipozyme CALB L por esta tambm estar na forma livre.
3.4.2.2) Temperatura
Para avaliar a cintica de degradao do -caroteno, foram feitos ensaios que
consistiram da manuteno dos leos bruto e refinado em tubos fechados em diferentes
temperaturas (25, 35, 45, 55 ,65 e 75C) controladas durante 2 horas.
3.4.2.3) Relao leo/gua
Para avaliar a relao leo/gua, foram empregadas como condies experimentais:
temperatura (30C), agitao (200 rpm), lipase (Lipozyme TL IM, 10 U) e tempo reacional (2
h), variando esta relao de leo para gua em 7/1, 3/1, 1/1, 1/3 e 1/7.
3.4.2.4) Quantidade de Enzima (Atividade Enzimtica)
Como na etapa anterior, alguns parmetros operacionais foram adotados como
temperatura (30C), agitao (200 rpm), lipase (Lipozyme TL IM), relao leo/gua (1/1) e
tempo reacional (2 h) para avaliao da quantidade de enzima (1, 10, 50, 100 e 250 U) sobre a
hidrlise enzimtica dos leos de buriti.
3.4.2.5) Aditivos
Nesta etapa foram testados alguns aditivos (emulsificantes, clcio, adsorventes,
tampo fosfato) que poderiam promover um aumento na hidrlise dos leos de buriti.
O desempenho de todas as lipases selecionadas foi avaliado, uma vez que estes
aditivos podem ter atuao diferente sobre cada uma destas, j que possuem estruturas
distintas. Nesta avaliao foram empregadas as seguintes condies: temperatura (30C),
agitao (200 rpm), lipase (10U), relao leo/gua (1/1) e tempo reacional (1,5 h).
48
3.4.3) Otimizao da Hidrlise Enzimtica

Nesta etapa foi feito o planejamento experimental composto central para cada varivel
selecionada na respectiva faixa de valores determinada na etapa anterior (item 3.4.2),
constitudo de 17 experimentos para cada enzima e para cada leo, gerando um total de 102
experimentos, como mostrado nas Tabelas 8 e 9.
Os parmetros e suas interaes foram avaliados de acordo com o diagrama de Pareto,
e as condies timas obtidas atravs de resposta por desirability, gerando os grficos de
contorno de superfcie, e um modelo com o qual se estimam os valores a serem obtidos das
variveis-resposta: cidos graxos livres e carotenides. A correlao deste modelo com os
resultados obtidos foi avaliada pelo coeficiente de correlao, R, permitindo verificar o ajuste
do modelo.
O diagrama de Pareto um histograma que apresenta os efeitos padronizados (valores
absolutos calculados atravs da distribuio t de Student) de cada parmetro em termos
lineares, quadrticos e a interao do seu termo linear com o de outro parmetro, sendo estes
considerados relevantes se forem estatisticamente significativos, isto , quando o efeito
padronizado do parmetro for inferior ao p-valor (probabilidade de significncia) de 0,05,
para 95% de confiana (Rodrigues & Iemma, 2005).
A abordagem geral da funo desirability consiste em converter primeiro cada
resposta yi em uma funo individual desirability di , que varia de 0 a 1, onde quanto mais
prximo de 1, melhor o ajuste. Assim, as variveis independentes so escolhidas de modo a
maximizar a desirability global, definida como a mdia geomtrica de todas as funes
individuais di.
49
Atravs desta funo podem-se obter superfcies de resposta, curvas de nvel e

tambm as condies timas das variveis independentes. As superfcies de resposta
apresentam o comportamento da desirability global perante a variao de 2 parmetros, mas
neste trabalho optou-se pelas curvas de nvel para uma melhor visualizao da regio de
maior desirability (Calado & Montgomery, 2003).
Tabela 8 Faixa de valores utilizada para otimizao dos parmetros da hidrlise enzimtica
Fatores
Temperatura (C)
Atividade Enzimtica (U)
Relao leo/gua
-1,68
25
1
1/1 (1)
-1
29
10,7
7/5 (1,4)
0
35
25
2/1 (2)
+1
41
39,9
13/5 (2,6)
+1,68
45
50
3/1 (3)
Tabela 9 Planejamento Composto Central em 3 nveis com 3 pontos centrais
Ensaios
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15 (C)
16 (C)
17 (C)
T(C) Ativ(U) Oleo/agua

29,0
10,7
1,4
29,0
10,7
2,6
29,0
39,9
1,4
29,0
39,9
2,6
41,0
10,7
1,4
41,0
10,7
2,6
41,0
39,9
1,4
41,0
39,9
2,6
25,0
25,0
2,0
45,0
25,0
2,0
35,0
1,0
2,0
35,0
50,0
2,0
35,0
25,0
1,0
35,0
25,0
3,0
35,0
25,0
2,0
35,0
25,0
2,0
35,0
25,0
2,0
Os parmetros fixados foram: volume reacional (8 mL), tempo reacional (4 h),

agitao (200 rpm), enzimas (Lipozyme TL IM, Lipozyme CALB L e lipase de Yarrowia
lipolytica), aditivo (alumina em concentrao de 10% em peso em relao ao volume de leo
adicionado). As condies a serem otimizadas foram: temperatura, quantidade de enzima
(atividade enzimtica) e relao de quantidade de substrato (leo de buriti) para uma
quantidade de gua. Os resultados foram analisados atravs do software STATISTICA 6.0.
50
Com as condies timas obtidas neste planejamento, foram realizados testes variando
alguns parmetros em intervalos menores, como a quantidade de enzima (5, 15, 25, 35, 45, 55
e 65 U), agitao (200, 300 e 400 rpm) e tempo reacional (0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6 e 8 h) para se
alcanar maiores rendimentos em cidos graxos livres.
3.4.4) Desacidificao e Concentrao de -Caroteno

Inicialmente, a fase aquosa (gua + glicerol), os cidos graxos precipitados, a alumina
e lipase foram separadas da fase orgnica (carotenides + cidos graxos). Alguns testes foram
feitos para recuperao da alumina com vrios solventes orgnicos para dessoro de cidos
graxos e carotenides.
A desacidificao da fase orgnica foi testada atravs de partio com lcool etlico,
adicionado com o mesmo volume da fase rica em carotenides, agitado a 300 rpm por 15 min
a 45C por 4 vezes (Gonalves et al, 2007), sendo avaliada a concentrao de carotenides na
fase orgnica. Outros mtodos tambm foram testados como saponificao utilizando soda
alcolica e aquosa (NaOH 0,5 M) nas mesmas condies utilizadas na partio com etanol. A
winterizao foi testada mantendo a fase orgnica em temperaturas de 4C por 2 h seguida de
centrifugao.
51
CAPTULO 4 RESULTADOS E DISCUSSO

4.1) CARACTERIZAO DOS LEOS DE BURITI
4.1.1) Composio em cidos graxos
A Tabela 10 indica as composies em cidos graxos dos leos bruto e refinado de
buriti. Os dados obtidos referentes ao leo bruto de buriti esto de acordo com trabalhos
reportados por Garca-Quiroz et al (2003) e Santos (2005). J os dados referentes ao leo
refinado de buriti no foram relatados na literatura. Os resultados aqui obtidos apresentaram
um alto teor de cidos graxos insaturados (88,3%), podendo ser indicado como alimento
funcional e para aplicao em cosmticos.
Tabela 10 Comparao da composio de cidos graxos dos leos de buriti
cidos graxos
Miristico (14:0)
Palmtico (16:0)
Esterico (18:0)
Oleico (18:1)
Linolico (18:2)
Linolnico (18:3)
Araquidico (20:1)
% Bruto
19,58
2,62
74,74
1,83
1,23
% Refinado
11,68
73,16
15,16
-
4.1.2) Determinao dos ndices Fsico-Qumicos

A Tabela 11 compara os principais ndices fsico-qumicos dos leos bruto e refinado
de buriti. Alguns ndices foram comparados com valores referenciados pelo grupo empresarial
Beraca-Sabar, como o ndice de iodo, o ndice de saponificao, o ndice de perxido, os
cidos graxos livres e a densidade. Garca-Quiroz et al (2003) tambm mediram alguns
ndices do leo de buriti, obtendo uma densidade de 0,86 g/cm, ndice de iodo de 77,2 g I2
/100g e ndice de saponificao de 169,9 mg KOH/g. Todos os ndices encontrados esto de
acordo com estas referncias.
52
Tabela 11 Comparao dos ndices fsico-qumicos dos leos de buriti
Anlises
ndice de Iodo (g I2/100g)
ndice de Saponificao (mg KOH/g)
ndice de Perxido (meq O2/1000g)
cidos Graxos Livres (%)
Densidade, a 20C (g/cm)
Umidade (%)
Teor de Insaponificveis (%)
Tocoferis Totais (ppm)
Esteris Totais (ppm)
Carotenides Totais (ppm)
leo
Bruto
67,45 1,0
186,53 6,0
3,79 0,4
10,0 1,0
0,844 0,03
0,73 0,1
1,99 0,2
777 20
1600 50
1817 30
Referncias
115 - 150
180 - 250
mx. 10
mx. 5
0,86 0,98
700
800 - 1000
1150 - 3380
leo
Refinado
89,17 1,0
174,8 6,0
1,19 0,2
4,37 0,4
0,812 0,02
1,90 0,2
1,23 0,1
159 20
1083 50
864 7
Referncias
80 150
150 210
mx. 7
mx. 1
0,8 0,98
-
O teor de insaponificveis foi comparado ao de leo de palma (1,2%), pois tambm

apresenta teor representativo de carotenides (500-700 ppm), sendo bastante similar ao leo
de buriti, apesar de este ser ligeiramente maior devido ao alto teor de carotenides (1150-3380
ppm) (Gunstone & Padley, 1997; Rodriguez-Amaya, 2001). Os tocoferis totais no leo bruto
encontrado foram um pouco inferior ao reportado por Silveira (2004), mas considerando os
esteris totais esta concentrao foi muito superior. Poucos trabalhos fornecem dados de
concentraes de carotenides em relao ao leo, como Garca-Quiroz et al (2003) que
encontraram 1706 54 ppm. No leo refinado, os insaponificveis so parcialmente
removidos ou degradados durante as etapas de desacidificao, branqueamento e
desodorizao (Ouyang et al, 1980), sendo por isso seus teores menores que no leo bruto.
4.1.3) Composio e Perfil de Carotenides

Na Tabela 12, a composio de carotenides de ambos os leos de buriti estudados so
comparadas. O leo bruto de buriti apresenta percentuais semelhantes aos descritos na
literatura (Godoy & Rodriguez-Amaya, 1995; Garcia-Quiroz et al, 2003; de Rosso &
Mercadante, 2007), sendo que neste trabalho no foi utilizada coluna cromatogrfica
especfica para deteco de cis-carotenides, que geralmente representam de 2 a 18% de caroteno presente no leo de buriti.
53
Os outros carotenides presentes, alm dos j mencionados, so variados, como os

encontrados por Godoy & Rodriguez-Amaya (1995) utilizando uma coluna C18 Vydac 201TP54, 250 x 4,6 mm, com a seguinte composio: 3,9% zeaxantina, 1,1% -zeacaroteno e
0,9% -caroteno. Garcia-Quiroz et al (2003) detectaram fitoflueno (0,95%), -zeacaroteno
(2,4%), -caroteno (2,5%), -caroteno (0,7%), mutacromo (2,86%), -10-apocarotenal (4,4%)
e zeaxantina (6,2%), mas sem mencionar qual coluna foi utilizada. De Rosso & Mercadante
(2007) utilizando uma coluna C30 YMC, 250 x 4,6 mm, com detector PDA e espectrmetro
de massas, analisaram o leo de buriti e encontraram derivados epoxidados de -caroteno
(1,6%), -caroteno (2,2%), -criptoxantina (0,25%), -caroteno (0,016%) e lutena (0,007%).
Tabela 12 Comparao da composio de carotenides dos leos de buriti
Carotenides
-caroteno
-caroteno
-caroteno
Apocarotenides
Outros
% Bruto
76,8 0,4
8,8 0,1
4,5 0,1
0,45 0,07
9,4 0,4
% Refinado
45,0 0,3
2,5 0,1
1,9 0,1
45,0 1,2
6,0 0,2
No caso do leo refinado de buriti, a composio de carotenides demonstra como o

processo de refino promove a degradao dos carotenides, sendo quase metade do caroteno transformado em apocarotenides, principalmente em 10-apo--carotenal. Este
problema inicial pode na verdade ser uma soluo futura, pois alm do aproveitamento do caroteno natural, poder-se-ia separar este apocarotenide para aplicao em margarinas como
substituto de corantes sintticos, como cantaxantina e 8-apo--carotenal.
Na Figura 25 encontram-se os perfis de carotenides dos leos de buriti, diludos 500
vezes em acetona, com identificao do tempo de reteno de cada carotenide.
54
leo bruto
Beta-caroteno
Alfa-caroteno
Gamacaroteno
Apocarotenides
leo refinado
Gamacaroteno
Alfa-caroteno
Beta-caroteno
Figura 25 Perfil de carotenides dos leos de buriti
4.2) PR-AVALIAO DO PROCESSO ENZIMTICO

4.2.1) Determinao do Tempo Reacional e Seleo das Enzimas
Na Figura 26, observa-se que a enzima que apresentou melhor rendimento na hidrlise
dos leos de buriti bruto e refinado foi a Novozym 435, alcanando 60% em cidos graxos
livres em 24 h. Porm, na Figura 27 avaliada a produo de cidos graxos pelo custo destas
enzimas. Tal anlise permite concluir que a Lipozyme TL muito mais eficiente em hidrolisar
o leo, com uma quantidade mnina de biocatalisador (0,01875% de peso por volume total),
sendo portanto selecionadas a Lipozyme TL IM, a Lipozyme CalB L e a lipase de Y.
lipolytica para o planejamento experimental.
55
(a)
60
CalB
435
60
TL
Yarrowia
50
40
30
20
CalB
435
TL
Yarrowia
40
% AGL
% AGL
50
(b)
30
20
10
10
10
15
tempo (h)
20
25
10
15
tempo (h)
20
25
(a)
CalB
435
TL
Yarrowia
200
150
100
50
0
Ampliando
10 x % AGL/ US$ lipase
400
350
300
250
200
150
100
50
0
400
350
300
250
(b)
10
15
tempo (h)
CalB
435
TL
Yarrowia
20
Ampliando
10
15
tempo (h)
20
7
6
5
4
3
2
1
0
25
Figura 26 Avaliao do tempo reacional de hidrlise dos leos bruto (a) e refinado (b) de buriti
25
10
15
tempo (h)
20
25
20
25
5
4,5
4
3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
0
10
15
tempo (h)
Figura 27 Avaliao da quantidade de cidos graxos produzida pelo custo de lipase durante a hidrlise
de leo bruto (a) e refinado (b) de buriti
Quanto ao tempo reacional, apesar de em 24 horas haver maior hidrlise, foi escolhido
o tempo de 4 horas uma vez que a cintica j tende a estabilidade na formao de cidos
graxos.
Os carotenides tambm foram avaliados nesta etapa, mas no apresentaram
alteraes muito significativas nos perfis, concentrando em mais de 10% do seu valor total em
24 horas de hidrlise, provavelmente pela precipitao dos cidos graxos, diminuindo um
pouco o volume total de fase orgnica.
56
4.2.2) Pr-avaliao dos Parmetros do Planejamento Experimental

4.2.2.1) Temperatura
Na Figura 28 apresentada a influncia da temperatura sobre os carotenides,
demonstrando que h uma ligeira diminuio no teor de -caroteno presente no leo bruto de
buriti entre 25 e 45C, sendo esta queda ainda mais pronunciada entre 45 e 75C. No leo
refinado, a queda na concentrao de -caroteno e o aumento de apocarotenides so
praticamente complementares, indicando tambm que a melhor faixa de operao est entre
25 e 45C, a qual foi mantida para o planejamento experimental.
(b)
ppm
ppm
(a)
1800
1600
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
beta-caroteno
Apocarotenides
20
30
40
50
T (C)
60
70
80
1800
1600
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
beta-caroteno
Apocarotenides
20
30
40
50
T (C)
60
70
80
Figura 28 Avaliao da temperatura na reduo da concentrao de -caroteno durante a hidrlise de

leo bruto (a) e refinado (b) de buriti
4.2.2.2) Relao leo/gua

Foram escolhidas relaes leo/gua com maior proporo de gua para comprovar
que estas condies promovem uma maior hidrlise do leo, mas necessitam de um maior
tempo operacional para hidrolisar grandes quantidades de leo, gerando custos operacionais
maiores e tambm um maior gasto no ps-processamento dos efluentes gerados. Portanto, a
relao leo/gua deve ser pelo menos com propores iguais entre as fases, ou com
quantidade superior de leo. Na Figura 29 visualizado que a relao leo/gua 7/1 possui
baixo teor em cidos graxos livres. Com isso, a faixa operacional foi delimitada entre 3/1 e
1/1.
57
(a)
% AGL
% AGL
80
70
60
50
40
30
20
10
0
7\1
3\1
1\1
1\3
80
70
60
50
(b)
40
30
20
10
0
1\7
7\1
3\1
1\1
1\3
1\7
Figura 29 Avaliao da relao leo/gua na hidrlise dos leos bruto (a) e refinado (b) de buriti
Os carotenides tambm foram avaliados nesta etapa, no havendo alteraes no seu

perfil, tendo sido concentrado em mais de 25% quando a relao 1/7 foi utilizada,
provavelmente devido ao seu maior rendimento na hidrlise.
4.2.2.3) Quantidade de Enzima (Atividade Enzimtica)
Os resultados obtidos no que tange a quantidade de biocatalisador indicam que
concentraes muito altas de enzima, como 100 U e 250 U em 8 mL de mistura reacional,
produziram rendimentos maiores em cidos graxos (Figura 30). Porm, o suporte em que a
lipase (Lipozyme TL IM) est imobilizada adsorve carotenides (Figura 31), alterando
parcialmente o perfil dos mesmos nos leos. Assim, a faixa operacional foi delimitada entre 1
80
70
60
50
(a)
%AGL
%AGL
e 50 U para o planejamento experimental, mantendo sempre o volume reacional de 8 mL.
40
30
20
10
0
1U
10U
50U
100U
80
70
60
50
40
30
20
10
0
(b)
1U
250U
10U
50U
100U
250U
Figura 30 Avaliao da quantidade de enzima sobre a hidrlise dos leos bruto (a) e refinado (b) de
buriti
Carotenides (ppm)
2500
Oleo Bruto
Oleo Refinado
2000
1500
1000
500
0
1U
10 U
50 U
100 U
250 U
Figura 31 Avaliao da quantidade de enzima sobre a concentrao de carotenides
58
4.2.3) Pr-avaliao dos Aditivos

4.2.3.1) Emulsificantes
A adio de emulsificantes a este sistema reacional poderia aumentar a rea interfacial
entre a fase oleosa e a aquosa, facilitando a atuao lipsica na hidrlise. Na Figura 32
apresentado o rendimento em cidos graxos encontrado quando alguns emulsificantes (goma
arbica, Tween 80 e Span 20) foram adicionados na concentrao de 5% em peso pelo
volume de gua presente. Para uma melhor comparao, foi realizado um experimento sem
adio de emulsificantes (branco). Nenhum dos emulsificantes promoveu um aumento em
cidos graxos livres comparativamente ao branco, e tambm no alterou significativamente o
teor de carotenides presentes com as trs lipases testadas.
(b)
(a)
30
Yarrowia
TL
CalB
Yarrowia
25
20
TL
CalB
20
% AGL
% AGL
25
30
15
15
10
10
5
Branco
Goma
arabica
Tween
Span
Branco
Goma
arabica
Tween
Span
Figura 32 Avaliao de emulsificantes sobre a hidrlise enzimtica dos leos bruto (a) e refinado (b) de
buriti
4.2.3.2) Clcio
A adio de ons clcio a esse sistema reacional poderia: na forma solvel, estabilizar
a lipase, dependendo da estrutura tridimensional da enzima, alm de possibiltar a formao de
sabo (interao entre ons clcio e os cidos graxos gerados); ou ainda na forma insolvel,
atuando como adsorvente dos cidos graxos formados, deslocando o equilbrio da reao no
sentido da hidrlise.
Na Figura 33 apresentado o rendimento em cidos graxos quando o clcio
adicionado substituindo a gua por uma soluo aquosa de CaCl2 a 0,01 e 0,05M ou na forma
de CaCO3 em concentraes de 5% em peso pelo volume de leo presente.
59
Para uma melhor comparao, foi feito um experimento sem adio de clcio (branco).
A adio de CaCO3 gerou um aumento (2 vezes) no rendimento em cidos graxos com todas
as lipases avaliadas, mas ao mesmo tempo, este reduziu a concentrao de carotenides em
20%, alm de necessitar de um maior nmero de centrifugaes para sua separao da fase
orgnica.
A adio de soluo de CaCl2 apresentou um pequeno aumento no rendimento em
cidos graxos quando foram utilizadas enzimas livres, no sendo este aumento porm muito
siginificativo. No caso da Lipozyme TL, a adio de CaCl2 teve efeito negativo na hidrlise
dos leos de buriti, principalmente no leo refinado. Isso pode ter ocorrido pela formao de
sabo e possvel ocluso dos poros do suporte.
(a)
60
60
Yarrowia
CalB
(b)
Yarrowia
50
TL
CalB
40
40
% AGL
% AGL
50
TL
30
30
20
20
10
10
Branco
CaCl2
0,05M
CaCl2
0,01M
CaCO3 5%
Branco
CaCl2
0,05M
CaCl2
0,01M
CaCO3 5%
Figura 33 - Avaliao da adio de clcio sobre a hidrlise dos leos bruto (a) e refinado (b) de buriti
4.2.3.3) Adsorventes
Foram testados dois adsorventes nesta etapa, um inorgnico (alumina bsica, pH entre
9-10, para cromatografia em coluna, com dimetro de partcula de 0,05-0,15 mm e rea
superficial de 155 m/g) e um polimrico (amberlita XAD2, uma resina de poliestirenodivinilbenzeno, com dimetro de partcula de 0,25 0,80 mm e rea superficial de 300 m/g).
A alumina foi selecionada dada a sua grande interao com cidos carboxlicos (KasprzykHordern, 2004), inclusive com cidos graxos (Queiroz 1996). J a amberlita adsorve vrios
tipos de compostos hidrofbicos at massa molar de 20 kDa, o que possibilitaria a adsoro
de cidos graxos, deslocando o equilbrio da reao no sentido da reao de hidrlise.
60
Inicialmente ambos os adsorventes foram adicionados em concentraes de 5% em

peso por volume de leo. Ambos os adsorventes apresentam rendimentos em cidos graxos
similares (Figura 34), sendo facilmente removidos por centrifugao aps a hidrlise. A
concentrao de carotenides se manteve inalterada no caso da amberlita e apresentou uma
reduo de 9% quando a alumina utilizada. Mas, entre estes dois adsorventes, h uma
grande diferena em relao aos seus custos. A alumina bsica tem um custo de US$37 / kg, e
amberlita XAD2 apresenta um custo bem maior: US$116 / kg.
60
50
(a)
60
Yarrow ia
50
TL
40
%AGL
% AGL
Yarrow ia
TL
CalB
CalB
40
30
30
20
20
10
10
0
Branco
(b)
Amberlita
Alumina
Branco
Amberlita
Alumina
Figura 34 Avaliao de adio de adsorventes sobre a hidrlise dos leos bruto (a) e refinado (b) de
buriti
Por isso, alumina foi escolhida para fazer os testes alterando sua concentrao no meio
reacional, como apresentado nas Figuras 35 e 36. O aumento da concentrao de alumina na
hidrlise enzimtica levou a uma maior adsoro dos carotenides, como no caso da
utilizao de 20% de alumina onde houve a reduo de 15% no leo bruto e de 35% no leo
refinado, sendo esta adsoro preferencial por apocarotenides. At a concentrao de 10% de
alumina, esta adsoro de carotenides menos evidenciada, e apresenta um alto rendimento
em cidos graxos (superior a 60%), sendo por isso a quantidade de alumina escolhida para ser
usada no planejamento experimental.
61
60
% AGL
50
(a)
(b)
70
Yarrowia
Yarrowia
TL
60
TL
50
CalB
% AGL
70
40
30
CalB
40
30
20
20
10
10
0
0
1
5
10
% Alumina no leo
20
1
5
10
% Alumina no leo
20
Figura 35 - Avaliao da quantidade de alumina sobre a hidrlise dos leos bruto (a) e refinado (b) de
buriti
2100
(a)
2100
Yarrowia
TL
Yarrowia
TL
CalB
1800
Carotenides (ppm)
1800
Carotenides (ppm)
(b)
CalB
1500
1200
900
600
1500
1200
900
600
300
300
0
0
5
% Alumina no leo
10
20
5
10
% Alumina no leo
20
Figura 36 - Avaliao da quantidade de alumina sobre a concentrao de carotenides durante a hidrlise

dos leos bruto (a) e refinado (b) de buriti
4.2.3.4) Tampo Fosfato

A utilizao de uma soluo tampo neste sistema reacional poderia manter o pH de
melhor atuao lipsica durante a hidrlise, promovendo um aumento da produo de cidos
graxos. A substituio da gua por uma soluo tampo fosfato de sdio 0,05 e 0,2M
promoveu um ligeiro aumento no rendimento em cidos graxos, mas no muito
representativo, como visto na Figura 37, sem alteraes na concentrao de carotenides. Por
isso, a gua foi mantida para o planejamento experimental.
40
40
Yarrowia
TL
CalB
30
25
25
20
15
10
10
0,05M
0,2M
Yarrowia
TL
CalB
20
15
Branco
(b)
35
30
%AGL
%AGL
35
(a)
Branco
0,05M
0,2M
Figura 37 - Avaliao da substituio da gua por tampo fosfato sobre a hidrlise dos leos bruto (a) e
refinado (b) de buriti
62
4.3) OTIMIZAO DA HIDRLISE ENZIMTICA

4.3.1) Planejamento Experimental do leo Bruto de Buriti
Os resultados obtidos durante o planejamento experimental so apresentados na
Tabela 13 referente hidrlise enzimtica do leo bruto de buriti, sendo destacados em
negrito os melhores rendimentos em cidos graxos livres para cada lipase utilizada.
Tabela 13 Comparao dos resultados (cidos graxos livres e carotenides) da hidrlise enzimtica do
leo bruto de buriti utilizando planejamento composto central
Ensaios
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15 (C)
16 (C)
17 (C)
Lipozyme TL IM
Lipozyme CALB L
Lipase de Y. lipolytica
%AGL
Carotenides (ppm)
%AGL
Carotenides (ppm)
%AGL
Carotenides (ppm)
62,89
56,58
73,61
73,04
62,53
52,83
76,46
61,20
60,11
66,06
18,78
72,00
64,24
67,86
66,06
62,61
68,87
1539
1810
1561
1732
1580
1692
1609
1609
1547
1570
1814
1602
1631
1596
1728
1746
1720
13,22
13,86
17,51
14,72
14,29
15,30
15,72
15,59
14,40
18,16
13,77
18,78
17,94
16,41
13,77
14,08
14,40
1879
1920
1903
1754
1725
1575
1857
1666
1749
1712
1758
1811
1665
1552
1700
1658
1730
15,36
15,30
34,30
32,04
15,72
11,84
34,30
25,98
32,56
25,67
9,08
35,06
31,29
33,65
28,80
30,05
31,43
1696
1799
1565
1648
1607
1693
1791
1773
1644
1754
1756
1754
1769
1868
1802
1792
1778
4.3.1.1) Lipozyme TL IM
Na Figura 38 so apresentados os diagramas de Pareto referentes aos cidos graxos
livres e aos carotenides, sendo estatisticamente significativo apenas o termo linear da
atividade enzimtica, no caso dos cidos graxos e o termo quadrtico da temperatura, no caso
dos carotenides. O coeficiente de correlao, R, para os cidos graxos livres foi igual a 0,75,
e para os carotenides foi de 0,74, tendo baixo ajuste ao modelo.
63
(a)
(b)
Figura 38 Diagrama de Pareto para avaliao da hidrlise do leo bruto de buriti por Lipozyme TL IM
sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b)
Na Figura 39, o intervalo timo (com maior desirability) foi determinado em 10 - 35U
de atividade enzimtica, 1,9 - 2,9 de relao leo/gua e 27 - 36C de temperatura. As
condies timas encontradas foram: temperatura de 31,2C, atividade enzimtica de 21,6U e
relao leo/gua de 2,33. Com estas condies foram calculadas as variveis de resposta
(cidos graxos livres e carotenides) atravs do modelo utilizando os coeficientes de
regresso resultando em 64,48% e 1749 ppm, respectivamente.
64
Figura 39 Curvas de nvel fixadas no ponto timo: efeitos de temperatura, atividade enzimtica e relao
leo/gua sobre a hidrlise de leo bruto de buriti por Lipozyme TL IM
65
4.3.1.2) Lipozyme CALB L

livres e aos carotenides, sendo estatisticamente significativo apenas o termo linear da
atividade enzimtica, no caso dos cidos graxos; e o termo linear da temperatura, no caso dos
carotenides. O coeficiente de correlao R para os cidos graxos livres foi calculado como
0,70, e para os carotenides 0,77, tendo baixo ajuste ao modelo.
(a)
(b)
Figura 40 Diagrama de Pareto para avaliao da hidrlise do leo bruto de buriti por Lipozyme CalB L
sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b)
Na Figura 41, o intervalo timo (com maior desirability) foi de 45 - 50U de atividade
enzimtica, 1,0 - 1,6 de relao leo/gua e 25 - 45C de temperatura. As condies timas
encontradas foram: temperatura de 45C, atividade enzimtica de 50U e relao leo/gua de
1,6. Com estas condies foram calculadas as variveis de resposta (cidos graxos livres e
carotenides) atravs do modelo utilizando os coeficientes de regresso resultando em
18,80% e 2067 ppm, respectivamente.
66
leo/gua sobre a hidrlise de leo bruto de buriti por Lipozyme CalB L
67
4.3.1.3) Lipase de Yarrowia lipolytica

livres e aos carotenides, sendo estatisticamente significativo os termos linear e quadrtico da
atividade enzimtica, no caso dos cidos graxos; e o termo linear da relao leo/gua, o
termo quadrtico da temperatura e a interao entre atividade enzimtica e a temperatura, no
caso dos carotenides. O coeficiente de correlao R para os cidos graxos livres foi de 0,92,
e para os carotenides foi de 0,88, tendo melhor ajuste ao modelo do que aquele obtido nos
ensaios empregando as demais lipases.
(a)
(b)
Figura 42 Diagrama de Pareto para avaliao da hidrlise do leo bruto de buriti por lipase de Yarrowia
lipolytica sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b)
enzimtica, 1,0 - 1,3 de relao leo/gua e 40 - 45C de temperatura. As condies timas
encontradas foram: temperatura de 42,4C, atividade enzimtica de 47,6U e relao leo/gua
68
de 1,0. Com estas condies foram calculadas as variveis de resposta (cidos graxos livres e
leo/gua sobre a hidrlise de leo bruto de buriti por lipase de Yarrowia lipolytica
69
4.3.2) Planejamento Experimental do leo Refinado de Buriti

Os resultados obtidos durante o planejamento experimental foram distribudos na
Tabela 14 referente a hidrlise enzimtica do leo refinado de buriti, sendo destacados em
negrito os melhores rendimentos em cidos graxos livres para cada lipase utilizada.
Tabela 14 Comparao dos resultados (cidos graxos livres e carotenides) da hidrlise enzimtica do
leo refinado de buriti utilizando planejamento composto central
Ensaios
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15 (C)
16 (C)
17 (C)
Lipozyme TL IM
Lipozyme CALB L
%AGL
Carotenides (ppm)
%AGL
Carotenides (ppm)
%AGL
Carotenides (ppm)
68,42
51,07
66,56
68,80
61,35
39,66
74,37
71,20
62,88
63,20
14,66
68,74
59,04
46,02
65,81
67,07
63,85
760
844
863
804
812
690
878
641
829
849
697
673
693
642
813
778
796
8,55
8,11
28,63
8,71
11,15
8,71
16,36
12,92
11,73
7,82
6,84
14,99
14,76
8,68
11,08
11,73
11,08
788
632
686
789
690
675
780
762
759
761
686
807
654
592
720
709
706
8,92
7,81
30,49
27,04
8,18
6,91
7,44
6,01
22,15
5,21
4,56
9,77
12,15
8,68
9,42
9,12
8,67
820
755
864
939
867
773
814
864
834
708
806
865
898
919
889
876
873
4.3.2.1) Lipozyme TL IM
Na Figura 44 so apresentados os diagramas de Pareto referentes s variveis-resposta,
cidos graxos livres e carotenides, sendo estatisticamente significativo apenas o termo linear
da atividade enzimtica, no caso dos cidos graxos livres; e a interao entre a temperatura e a
relao leo/gua, no caso dos carotenides. O coeficiente de correlao R para os cidos
graxos livres foi de 0,80, e para os carotenides foi de 0,81.
70
(a)
(b)
Figura 44 Diagrama de Pareto para avaliao da hidrlise do leo refinado de buriti por Lipozyme TL
IM sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b)
enzimtica, 1,0 - 1,8 de relao leo/gua e 25 ou 45C de temperatura. As condies timas
encontradas foram: temperatura de 45C, atividade enzimtica de 31,2U e relao leo/gua
de 1,8. Com estas condies foram calculadas as variveis de resposta (cidos graxos livres e
71
leo/gua sobre a hidrlise de leo refinado de buriti por Lipozyme TL IM
72
4.3.2.2) Lipozyme CALB L

Os diagramas de Pareto referentes aos cidos graxos livres e aos carotenides para a
enzima Lipozyme CalB L so apresentados na Figura 46, sendo estatisticamente significativo
o termo linear da atividade enzimtica e da relao leo/gua, no caso dos cidos graxos; e o
termo linear da atividade enzimtica, o termo quadrtico da relao leo/gua e a interao
entre a atividade enzimtica e a relao leo/gua, no caso dos carotenides. O coeficiente de
correlao R para os cidos graxos livres foi de 0,83, e para os carotenides foi de 0,84.
(a)
(b)
Figura 46 Diagrama de Pareto para avaliao da hidrlise do leo refinado de buriti por Lipozyme CalB
L sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b)
Na Figura 47, o intervalo timo (com maior desirability) foi obtido em 50U de
atividade enzimtica, 1,2 - 2,0 de relao leo/gua e 25 - 30C de temperatura. As condies
timas encontradas foram: temperatura de 25C, atividade enzimtica de 50U e relao
leo/gua de 1,667.
73
Com estas condies foram calculadas as variveis de resposta (cidos graxos livres e
leo/gua sobre a hidrlise de leo refinado de buriti por Lipozyme CalB L
74
4.3.2.3) Lipase de Yarrowia lipolytica

Os diagramas de Pareto referentes aos cidos graxos livres e aos carotenides para a
ao de hidrlise de Yarrowia lipolytica so apresentados na Figura 48. O termo linear da
atividade enzimtica e da temperatura, o termo quadrtico da temperatura e a interao entre
temperatura e atividade enzimtica mostraram-se estatisticamente significativos, no caso dos
cidos graxos; e o termo linear e quadrtico da temperatura, o termo linear da atividade
enzimtica e as interaes entre a atividade enzimtica e a relao leo/gua, e tambm com a
temperatura, no caso dos carotenides. O coeficiente de correlao R para os cidos graxos
livres foi de 0,94, e para os carotenides foi de 0,92, tendo um bom ajuste ao modelo.
(a)
(b)
Figura 48 Diagrama de Pareto para avaliao da hidrlise do leo refinado de buriti por lipase de
Yarrowia lipolytica sobre cidos graxos livres (a) e carotenides (b)
Na Figura 49, o intervalo timo (com maior desirability) foi determinado no intervalo
de 40 - 50U de atividade enzimtica, 2,5 - 3,0 de relao leo/gua e 25 - 28C de
temperatura.
75
As condies timas encontradas foram: temperatura de 29C, atividade enzimtica de

50U e relao leo/gua de 3,0. Com estas condies foram calculadas as variveis de
resposta (cidos graxos livres e carotenides) atravs do modelo utilizando os coeficientes de
regresso resultando em 30,80% e 708 ppm, respectivamente.
leo/gua sobre a hidrlise de leo refinado de buriti por lipase de Yarrowia lipolytica
76
4.3.3) Resumo das Condies timas na Hidrlise dos leos de Buriti

Para uma melhor comparao dos resultados obtidos neste planejamento experimental,
foram dispostos nas Tabelas 15 e 16 os dados referentes s condies timas e os rendimentos
em cidos graxos livres e carotenides previstos pelos modelos da hidrlise enzimtica dos
leos bruto e refinado de buriti, respectivamente.
Tabela 15 Comparao das condies timas para hidrlise enzimtica do leo bruto de buriti
Enzimas
Lipozyme TL
Lipozyme CalB L
Condio tima
Rendimento
T (C)
Ativ (U)
leo/Agua
% AGL
Carotenides (ppm)
31,2
45
42,4
21,6
50
47,6
2,33
1,6
1,0
64,48
18,80
34,56
1749
2067
1861
Tabela 16 Comparao das condies timas para hidrlise enzimtica do leo refinado de buriti
Enzimas
Lipozyme TL
Lipozyme CalB L
Condio tima
Rendimento
T (C)
Ativ (U)
leo/Agua
% AGL
Carotenides (ppm)
45
25
29
31,2
50
50
1,8
1,67
3,0
75,86
28,55
30,80
878
792
708
Os rendimentos em cidos graxos to distintos podem ser explicados pelas diferentes

estruturas tridimensionais dos stios ativos das lipases utilizadas (Gutierrez-Ayesta et al,
2007) ou tambm pela possvel hiperativao ocasionada pelo mtodo de imobilizao usado
na produo da Lipozyme TL IM, que deixaria o stio ativo sempre exposto e ativado (Cunha,
2007). Devos et al (2006) fez uma comparao entre 12 lipases na hidrlise de fosfolipdeos
de biomassa algal, mostrando que a Lipozyme TL IM tambm gerou rendimentos em cidos
graxos saturados e monoinsaturados de 75%, apesar de utilizar maior tempo reacional (24 h),
maior agitao (24 h), maior quantidade de enzima (1% p/v) e maior proporo entre fase
orgnica e aquosa (1/10). J a lipase imobilizada de Candida antarctica apresentou resultados
abaixo dos 20% de cidos graxos livres, valor prximo ao obtido na hidrlise do leo bruto de
buriti.
77
As lipases de Candida antarctica e Yarrowia lipolytica no possuem um histrico em

reaes de hidrlise de leos vegetais na literatura, e sim na resoluo de misturas racmicas
(Guieysse et al, 2004; Ong et al 2006), na sntese de novas molculas (Fantin et al, 2001;
Yoshida et al, 2006) ou em outras modificaes de leos e gorduras (Hrnandez-Martn &
Otero, 2008). Por isso, a obteno de baixos rendimentos em cidos graxos no foi
surpreendente, mas o estudo foi necessrio, justamente pela falta de dados na literatura.
4.3.4) Otimizao
Em ambas as hidrlises enzimticas, tanto do leo bruto como do leo refinado de
buriti, o maior rendimento em cidos graxos livres (at 75%) foi obtido quando utilizou-se a
Lipozyme TL IM com pequenas perdas de carotenides.
Em todos os diagramas de Pareto analisados foi verificado que a atividade enzimtica
foi estatisticamente significativa na hidrlise dos leos no que se refere produo de cidos
graxos livres. Porm, como a correlao dos dados experimentais com o modelo teve um
baixo ajuste na maioria das avaliaes, decidiu-se testar este parmetro isoladamente,
mantendo as outras condies timas previstas pelo modelo.
Ainda objetivando uma maior hidrlise do leo, foram testadas diferentes velocidades
de agitao do sistema, de forma a aumentar a rea interfacial, facilitando a atuao lipsica.
Tambm foi avaliada a cintica reacional de hidrlise da Lipozyme TL IM em intervalos de
tempo menores que os utilizados no item 3.4.2.1.
4.3.4.1) Quantidade de Enzima
Na Figura 50, pode-se determinar como condies timas de atividade enzimtica 25
U (0,47% p/v) e 35 U (0,66% p/v) de Lipozyme TL IM para o leo bruto e refinado,
respectivamente, sendo obtidos os maiores rendimentos em cidos graxos livres (prximo de
70%), sem perdas significativas de carotenides.
78
Carotenides (ppm)
%AGL
80
70
60
50
40
30
20
10
0
leo Bruto
leo Refinado
10
20
30
40
50
60
70
2000
1800
1600
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
leo Bruto
leo Refinado
Ativ Enz (U)
10
20
30
40
50
60
70
Ativ Enz (U)
Figura 50 Otimizao da quantidade de enzima na hidrlise enzimtica dos leos de buriti
4.3.4.2) Agitao
Mantendo as condies obtidas no item 4.3.3.1., a velocidade de agitao de 300 rpm
foi escolhida, pois gerou maiores incrementos nos rendimentos em cidos graxos livres,
alcanando perto de 75%, com perdas de carotenides ligeiramente inferiores aos obtidos a
400 rpm (Figura 51).
80
200 rpm
% AGL
75
300 rpm
400 rpm
70
65
60
Carotenides (ppm)
1800
1600
200 rpm
1400
1200
300 rpm
400 rpm
1000
800
600
400
200
0
leo Bruto
leo Refinado
leo Bruto
leo Refinado
Figura 51 Avaliao da velocidade de agitao sobre a hidrlise enzimtica dos leos de buriti
4.3.4.3) Tempo Reacional

Tendo como condies iniciais para leo bruto (25U de atividade enzimtica, 2,33 de
relao leo/gua e 31,2C de temperatura) e para o leo refinado (35U de atividade
enzimtica, 1,8 de relao leo/gua e 45C de temperatura), alm da velocidade de agitao
de 300 rpm, foi avaliada nesta ltima etapa a cintica reacional. Na Figura 52, observa-se que
a partir de 4 h de reao, a hidrlise tanto do leo bruto como do refinado se estabiliza, sendo
ento esta condio mantida como tempo reacional necessrio ao processo.
79
Adicionalmente, o rendimento em cidos graxos parece ter estabilizado em 75% fato

que pode ter ocorrido pela alterao do pH, que alcanou valores prximos a 5, pela formao
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Carotenides (ppm)
% AGL
dos cidos graxos livres, levando a uma possvel inibio da lipase.
leo Bruto
leo Refinado
3
4
5
tempo (h)
2000
1800
1600
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
leo Bruto
leo Refinado
tempo (h)
Figura 52 Otimizao do tempo reacional na hidrlise enzimtica dos leos de buriti
4.4) DESACIDIFICAO E CONCENTRAO DE -CAROTENO

4.4.1) Recuperao da Alumina
A alumina nos experimentos de hidrlise do leo de buriti adsorveu cerca de 15% dos
cidos graxos liberados e ainda 5% dos carotenides presentes no caso do leo bruto, e
prximo de 10% no caso do leo refinado. Esse aumento da adsoro de carotenides pela
alumina no leo de refinado deve estar relacionado com a grande presena de
apocarotenides, que apresentam grupos aldedos ou carboxlicos, os quais possuem afinidade
com a alumina (Kasprzyk-Hordern, 2004). Para a recuperao da alumina, e, por conseguinte
dessoro dos cidos graxos e carotenides, foram utilizados alguns solventes orgnicos como
etanol, acetona e ter de petrleo, puros ou em mistura.
A mistura 1/1 (v/v) de etanol e acetona promoveu a dessoro de 60% dos
carotenides em apenas uma extrao no caso da alumina usada durante a hidrlise do leo
bruto de buriti, e utilizando o lcool etlico em 2 extraes obteve-se a remoo de 50% ds
carotenides da alumina referente a hidrlise do leo refinado. A utilizao de 3 extraes,
sendo duas iniciais de etanol e uma ltima sendo uma mistura 1/1 de lcool etlico e acetona
removeu 85% dos cidos graxos adsorvidos da alumina referente a hidrlise de ambos os
leos de buriti.
80
4.4.2) Mtodos de Desacidificao

4.4.2.1) Partio com Etanol
Inicialmente foi avaliado o tempo de agitao para a partio dos cidos graxos ao
etanol, verificando que em 15 min a concentrao de cidos graxos j se estabilizava em 10%.
Resultado superior foi obtido por Gonalves & Meirelles (2004) onde 53% dos cidos graxos
presentes na fase oleosa distriburam-se para fase alcolica, mas neste trabalho foi includa
uma etapa de repouso de 24 h para que as fases atingissem o equilbrio e quantidade de cidos
graxos livres presentes em sua amostra era pequena, cerca de 4%.
Em relao aos carotenides apenas 2% se distribuem para a fase etanlica quando
utilizado o leo bruto de buriti, e cerca de 8%, no caso do leo de refinado, onde 90% so
apocarotenides. Gonalves et al (2007) verificaram que os carotenides de leo de palma se
distribuem para a fase alcolica entre 1,6 a 2,7%, podendo incrementar essa proporo se a
quantidade de gua no sistema for menor, por exemplo com a utilizao de etanol anidro
aumenta a partio dos carotenides para 13%.
Na Figura 53 observa-se a variao dos cidos graxos livres e dos carotenides desde a
finalizao do processo enzimtico (1), a separao da fase orgnica (carotenides + cidos
graxos) da fase aquosa (gua + glicerol + alumina + enzima + cidos graxos precipitados) (2),
e aps 4 extraes sucessivas da fase orgnica com lcool etlico (3).
Com as extraes por etanol, houve uma perda de 4,4% de carotenides quando a fase
orgnica do leo bruto de buriti foi utilizada, e 18,5% de carotenides referentes ao leo
refinado. Pela tendncia descendente de cidos graxos livres presentes na fase orgnica,
demonstrada na figura 53, para se alcanar 5% de cidos graxos livres (tendo como referncia
a quantidade inicial de cidos graxos livres do leo refinado de buriti), seriam necessrias
mais 4 extraes sucessivas com etanol.
81
leo Bruto
leo Refinado
Carotenides (ppm)
% AGL
3500
80
70
60
50
40
30
20
10
0
3000
2500
leo Bruto
leo Refinado
2000
1500
1000
500
0
Figura 53 Avaliao de cidos graxos livres e carotenides durante o ps-processamento do leos bruto e
refinado de buriti, onde (1) representa a finalizao do processo enzimtico; (2), a separao das fases
orgnica e aquosa e (3), a desacidificao com etanol em 4 extraes sucessivas
4.4.2.2) Saponificao
A saponificao foi realizada com solues aquosas e alcolicas 0,5 M de NaOH. A
saponificao aquosa no obteve separao de fases em nenhum dos dois leos de buriti,
gerando apenas sabo. A saponificao alcolica s obteve separao de fases com o leo
refinado de buriti, j que o leo bruto se tornou uma fase homognea com a soda alcolica.
A saponificao alcolica foi realizada por 2 vezes sucessivas no leo refinado,
removendo mais de 90% dos cidos graxos livres, e tambm 35% dos carotenides presentes,
alm da diminuio de 63% do volume da fase rica em carotenides. Apesar desses fatores,
esta fase ainda manteve 1085 ppm de carotenides com uma grande alterao no seu perfil
(Figura 54), se aproximando muito do perfil de carotenides encontrado no leo bruto, com
69% de -caroteno e 5% de apocarotenides.
Figura 54 Perfil de carotenides do leo refinado aps desacidificao com soda alcolica
82
4.4.2.3) Winterizao
A winterizao foi realizada apenas no leo bruto, pois no leo refinado de buriti no
ocorreu a formao de nenhum precipitado ao se resfriar a fase orgnica.
Aps a winterizao do leo bruto, foram obtidas 2 fases: a primeira slida com 43%
de cidos graxos livres e 3186 ppm de carotenides, enquanto a outra lquida obtendo 26% de
cidos graxos livres e 3910 ppm de carotenides.
83
CAPTULO 5 CONCLUSO
A caracterizao do leo bruto e refinado de buriti se mostrou coerente com os dados
referenciados na literatura. A presena de apocarotenides em quantidades elevadas no
leo refinado de buriti confirma que o processo de refino promove a degradao de
carotenides e a diminuio do seu valor nutricional.
A pr-avaliao do processo enzimtico determinou os intervalos de alguns parmetros
para o planejamento experimental, como temperatura (25 a 45C), relao leo/gua (1/1 a
3/1) e atividade enzimtica (1 a 50U) em um volume de mistura reacional de 8 mL. Alm
disso, determinaram-se o tempo reacional (4 h), as lipases a serem utilizadas (lipase de
Yarrowia lipolytica, Lipozyme TL IM e CALB L) e o uso da alumina em concentrao de
10% p/v como aditivo para aumentar a hidrlise enzimtica dos leos bruto e refinado de
buriti.
O planejamento experimental composto central determinou que tanto para hidrlise do
leo bruto como do leo refinado de buriti a Lipozyme TL IM foi a enzima que gerou
melhor rendimento em cidos graxos livres, com pequenas perdas em carotenides. Mas
como os modelos obtidos neste planejamento obtiveram baixo ajuste aos dados
experimentais, e tambm devido atividade enzimtica se demonstrar estatisticamente
significativa, foram realizadas etapas adicionais de otimizao para avaliao da influncia
de outras quantidades de Lipozyme TL IM, tempo reacional e agitao sobre a hidrlise.
Com isso, concluiu-se que as condies timas para a hidrlise enzimtica dos leo de
buriti so: bruto - 25U de atividade enzimtica, 2,33 de relao leo/gua e 31,2C de
temperatura e refinado - 35U de atividade enzimtica, 1,8 de relao leo/gua e 45C de
temperatura, mantendo o tempo reacional em 4 horas e alterando a velocidade de agitao
para 300 rpm.
84
Dos mtodos de desacidificao realizados, a utilizao de soluo etanlica 0,5M NaOH

sobre a fase orgnica do leo refinado de buriti removeu 90% dos cidos graxos livres
presentes, alm dos apocarotenides, permitindo um perfil de carotenides prximo ao do
leo bruto de buriti.
J para o leo bruto de buriti, a combinao dos mtodos de winterizao e partio com
etanol parece ser a melhor alternativa para a desacidificao, pois a winterizao promove
uma grande concentrao de carotenides e o etanol remove gradualmente os cidos
graxos livres.
85
CAPTULO 6 SUGESTES
No caso do leo refinado de buriti, poder-se-ia testar a remoo dos apocarotenides por
processos com membranas, antes mesmo de se realizar a hidrlise enzimtica.
O leo de palma tambm poderia ser utilizado como matria-prima para obteno de caroteno atravs de hidrlise enzimtica.
A adio de leo vegetal em matrizes vegetais ricas em -caroteno, como a cenoura e a
batata-doce; em licopeno, como o tomate e a melancia, ou ainda em xantofilas de interesse
comercial, caso de lutena e zeaxantina para a extrao dos carotenides, seguida de uma
posterior hidrlise enzimtica do leo vegetal poderia ser uma alternativa interessante, a
ser investigada.
Novas opes de processo, como: a combinao de duas lipases distintas, sendo que uma
delas com maior atuao em faixa mais cida de pH; outros emulsificantes; outros
adsorventes; maiores velocidades de agitao; e outras lipases, sendo estas originadas de
microrganismos diferentes deveriam ser testadas visando o aumento no rendimento da
hidrlise.
Outros mtodos de desacidificao poderiam ser testados como a extrao supercrtica, a
extrao por solventes utilizando outros lcoois de cadeia curta (metanol, propanol e
butanol) puros, ou com concentraes variadas de gua.
Diferentes concentraes de NaOH poderiam ser testadas para verificar a quantidade
mnima de base para a remoo de cidos graxos livres e apocarotenides.
A possibilidade de integrar os mtodos de winterizao e extrao com etanol para
aumentar a eficincia do processo na remoo dos cidos graxos livres e na concentrao
de -caroteno do leo bruto de buriti tambm poderia ser verificada.
86
Mtodos mais focados na complexao ou na encapsulamento dos carotenides, invs da

remoo dos cidos graxos, poderiam ser testados como a utilizao de ciclodextrinas e
uria.
A presena dos outros insaponificveis (fitoesteris e tocoferis) durante o processamento
enzimtico e desacidificao, para verificar seu aproveitamento futuro, deveria ser
analisada.
87
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
ABBAS, H.; HIOL, A.; DEYRIS, V.; COMEAU, L.; Isolation and characterization of an
extracellular lipase from Mucor sp. strain isolated from palm fruit. Enzyme and
Microbial Technology, 31 (7), 968-975, 2002.
ABIDI, S. L.; Chromatographic analysis of tocol-derived lipid antioxidants. Journal of
Chromatography A, 881, 197-216, 2000.
ABRIMIC, M.; LESCIC, I.; KORICA, T.; VITALE, L.; SAENGER, W.; PIGAC, J.;
Purification and properties of extracellular lipase from Streptomyces rimosus. Enzyme
and Microbial Technology, 25, 522-529, 1999.
AL-BABILI, S.; BEYER, P.; Golden rice five years on the road five years to go?
Trends in Plant Science, 10 (12), 565-573, 2005.
ALOULOU, A.; RODRIGUEZ, J. A.; PUCCINELLI, D.; MOUZ, N.; LECLAIRE, J.;
LEBLOND, Y.; CARRIRE, F.; Purification and biochemical characterization of the
LIP2 lipase from Yarrowia lipolytica. Biochimica et Biophysica Acta, 1771, 228-237,
2007.
AMARAL, P. F. F.; Produo de lipase de Yarrowia lipolytica em biorreator
multifsico. Tese (Doutorado), Programa de Tecnologia de Processos Qumicos e
Bioqumicos, Escola de Qumica, UFRJ, Rio de Janeiro, 2007.
ARORA, S.; MANJULA, S.; KRISHNA, A. G. G.; SUBRAMANIAN, R.; Membrane
processing of crude palm oil. Desalination, 191, 454-466, 2006.
BATISTELLA, C. B.; MACIEL, M. R. W.; Recovery of carotenoids from palm oil by
molecular distillation. Computers & Chemical Engineering, 22, S53-S60, 1998.
BERG, J.M.; TYMOCZKO, J.L.; STRYER, L.; Bioqumica, 5 ed., Editora Guanabara
Koogan, Rio de Janeiro, 2004.
BHOSALE, P.; BERNSTEIN, P. S.; -Carotene production by Flavobacterium
multivorum in the presence of inorganic salts and urea. Journal of Industrial
Microbiology and Biotechnology, 31, 565-571, 2004.
BHOSLE, B. M.; SUBRAMANIAN, R.; New approaches in deacidification of edible oils
a review. Journal of Food Engineering, 69, 481-494, 2005.
BORA, P. S.; NARAIN, N.; ROCHA, R. V. M.; MONTEIRO, A. C. O.; MOREIRA, R.
A.; Characterization of the oil and protein fractions of tucum (Astrocaryum vulgare
Mart.) fruit pulp and seed kernel. Ciencia y Tecnologa Alimentaria, 3 (2), 111-116,
2001.
88
BOUVIER, F.; RAHIER, A.; CAMARA, B.; Biogenesis, molecular regulation and
function of plant isoprenoids. Progress in Lipid Research, 44, 357-429, 2005a.
BRIGIDA, A. I. S.; Estudo da imobilizao de lipase tipo B de Candida antarctica
utilizando fibra de casca de coco verde como suporte. Dissertao (Mestrado),
Departamento de Engenharia Qumica, UFC, Fortaleza, 2006.
BRGIDA, A. I. S.; Amaral, P. F.; GONCALVES, L. R. B.; Coelho, M. A. Z.;.
Characterization of an Extracellular lipase from Yarrowia lipolytica. In: European
Congress of Chemical Engineering ECCE 6, 2007, Copenhagen. ECCE-6 Book of
Abstracts. Denmark : Norhaven Book, v. 2, 2007.
BRITTON, G.; LIAAEN-JENSEN, S.; PFANDER, H.; Carotenoids, Vol 1A: Isolation
and Analysis, Birkhaser Verlag Basel, Stuttgart, 1995.
BRITTON, G.; LIAAEN-JENSEN, S.; PFANDER, H.; Carotenoids, Vol 2: Synthesis,
Birkhaser Verlag Basel, Stuttgart, 1996.
BURKERT, J. F. M.; MAUGERI, F.; RODRIGUES, M. I.; Optimization of extracellular
lipase production by Geotrichum sp. using factorial design. Bioresource Technology, 91,
77-84, 2004.
BUZZINI, P.; INNOCENTI, M.; TURCHETTI, B.; LIBKIND, D.; VAN BROOCK, M.;
MULINACCI, N.; Carotenoid profiles of yeasts belonging to the genera Rhodotorula,
Rhodosporidium, Sporobolomyces, and Sporidiobolus. Canadian Journal of
Microbiology, 53, 1021-1031, 2007.
CALADO, V.; MONTGOMERY, D. C.; Planejamento de Experimentos usando o
Statistica, E-papers Servios Editoriais, Riode Janeiro, 2003.
CASTRO, H. F.; MENDES, A. A.; SANTOS, J. C.; Modificao de leos e gorduras por
biotransformao. Qumica Nova, 27 (1), 146-156, 2004.
CAVALCANTI, E. A. C.; Avaliao da atividade lipsica da semente dormente de
Ricinus communis. Dissertao (Mestrado), Programa de Ps-Graduao de Cincia de
Alimentos, Instituto de Qumica, UFRJ, Rio de Janeiro, 2006.
CHOO, Y. M.; Palm oil carotenoids. Food and nutrition bulletin, 15 (2), 130-137,
1994.
CHOUDHARI, S.; SINGHAL, R.; Media optimization for the production of -carotene
by Blaskelea trispora: A statistical approach. Bioresource Technology, 99, 722-730,
2008.
CHUANG, M. H.; BRUNNER, G.; Concentration of minor components in crude oil
palm. Journal of Supercritical Fluids, 37, 151-156, 2006.
89
COCERO, M. J.; GONZLEZ, S.; PREZ, S.; ALONSO, E.; Supercritical extraction of
unsaturated products. Degradation of -carotene in supercritical extraction processes.
Journal of Supercritical Fluids, 19, 39-44, 2000.
CUNHA, A. G.; Purificao e imobilizao de lipases microbianas em suportes com
diferentes graus de hidrofobicidade. Dissertao (Mestrado), Programa de Bioqumica,
Instituto de Qumica, UFRJ, 2007.
DANIELI, F.; O leo de abacate (Persea americana Mill) como matria-prima para
indstria alimentcia. Dissertao (Mestrado), Ps-Graduao em Cincia e Tecnologia
de Alimentos, ESALQ, USP, Piracicaba, 2006.
DELLA PENNA, D.; POGSON, B. J.; Vitamin synthesis in plants: tocopherols and
carotenoids. Annual Review of Plant Biology, 57, 711-738, 2006.
DE ROSSO, V. V.; MERCADANTE, A. Z.; Carotenoid composition of two Brazilian
genotypes of acerola (Malpighia punicifolia L.) from two harvests. Food Research
International, 38, 1073-1077, 2005.
DE ROSSO, V. V.; MERCADANTE, A. Z.; Identification and quantification of
carotenoids, by HPLC-PDA-MS/MS, from Amazonian fruits. Journal of Agricultural
and Food Chemistry, 55, 5062-5072, 2007.
DEVOS, M.; POISSON, L.; ERGAN, F.; PENCREACH, G.; Enzymatic hydrolysis of
phospholipids from Isochrysis galbana for docosahexaenoic acid enrichment. Enzyme
and Microbial Technology, 39, 548-554, 2006.
DEWICK, P. M.; Medicinal Natural Products: A biosynthetic approach, 2nd ed., John
Wiley & Sons, Nova York, 2002.
DEY, P. M.; HARBORNE, J. B.; Plant Biochemistry, Elsevier, Amsterd, 1997.
DUFOSS, L.; GALAUP, P.; YARON, A.; ARAD, S. M.; BLANC, P.; MURTHY, K.
N. C.; RAVISHANKAR, G. A.; Microorganisms and microalgae as sources of pigments
for food use: a scientific oddity or an industrial reality? Trends in Food Science &
Technology, 16, 389-406, 2005.DESTAIN, J.; ROBLAIN, D.; THONART, P.;
Improvement of lipase production from Yarrowia lipolytica. Biotechnology Letters, 19
(2), 105-107, 1997.
DURES, J. A.; DRUMMOND, A. L.; PIMENTEL, T. A. P. F.; MURTA, M. M.;
BICALHO, F. S.; MOREIRA, S. G. C.; SALES, M. J. A.; Absorption and
photoluminescence of Buriti oil/polystyrene and Buriti oil/poly(methyl methacrylate)
blends. European Polymer Journal, 42, 3324-3332, 2006.
EASTMOND, P. J.; GRAHAM, I. A.; Re-examining the role of the glyoxylate cycle in
oilseeds. Trends in Plant Science, 6 (2), 72-77, 2001.
90
EASTMOND, P. J.; Cloning and characterization of the acid lipase from castor beans.
The Journal of Biological Chemistry, 279 (44), 45540-45545, 2004.
FANTIN, G.; FOGAGNOLO, M.; GUERRINI, A.; MEDICI, A.; PEDRINI, P.;
FONTANA, S.; Enantioselective hydrolysis with Yarrowia lipolytica: a versatile strain
for esters, enol esters, epoxides and lactones. Tetrahedron: Assymetry, 12, 2709-2713,
2001.
FERNANDES, M. L. M.; KRIEGER, N.; BARON, A. M.; ZAMORA, P. P.; RAMOS, L.
P.; MITCHELL, D. A.; Hydrolysis and synthesis reactions catalysed by Thermomyces
lanuginosa lipase in the AOT/Isooctane reversed micellar system. Journal of Molecular
Catalysis B: Enzymatic, 30 (1), 43-49, 2004.
FERNANDEZ R., X. E.; SHIER, N. W.; WATKINS, B. A.; Effect of alcali
saponification, enzymatic hydrolysis and storage time on the total carotenoid
concentration of Costa Rican crude palm oil. Journal of Food Composition and
Analysis, 13, 179-187, 2000.
FIRESTONE, D.; Official Methods and Recommended Practices of the American Oil
Chemists Society, 5th ed, AOCS Press, Champaign, 1997.
FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION OF THE UNITED NATIONS (FAO).
Food Outlook, 22-27, November 2007.
FRANA, L. F.; MEIRELES, M. A. A.; Extraction of oil from pressed palm oil (Elaes
guineensis) fibers using supercritical CO2. Cincia e Tecnologia de Alimentos, 17 (4),
384-388, 1997.
FRANA, L. F.; REBER, G.; MEIRELES, M. A. A.; MACHADO, N. T.; BRUNNER,
G.; Supercritical extraction of carotenoids and lipids from buriti (Mauritia flexuosa), a
fruit from the Amazon region. Journal of Supercritical Fluids, 14, 247-256, 1999.
FRASER, P. D.; BRAMLEY, P. M.; The biosynthesis and nutritional uses of carotenoids.
Progress in Lipid Research, 43, 228-265, 2004.
GAMA, M. F. C. P. J. S.; Purificao e carcaterizao de lipases de Penicillium
restrictum. Dissertao (Mestrado), Programa de Bioqumica, Instituto de Qumica,
UFRJ, Rio de Janeiro, 2000.
GARCA-GONZLEZ, M.; MORENO, J.; MANZANO, J. C.; FLORENCIO, F. J.;
GUERRERO, M. G.; Production of Dunalliela salina biomasa rich in 9-cis--carotene
and lutein in a closed tubular photobioreactor. Journal of Biotechnology, 115, 81-90,
2005.
GARCIA-QUIROZ, A.; MOREIRA, S. G. C.; MORAIS, A. V.; SILVA, A. S.; ROCHA,
G. N.; ALCANTARA, P.; Physical and chemical analysis of dieletric properties and
91
differential scanning calorimetry techniques on buriti oil. Instrumentation Science &

Technology, 31 (1), 93-101, 2003.
GERHARTZ, W.; Enzymes in Industry: Production and Applications; VCH
Publishers, Nova York, 1990.
GIULIANO, G.; AQUILANI, R.; DHARMAPURI, S.; Metabolic engineering of plant
carotenoids. Trends in Plant Science, 5 (10), 406-409, 2000.
GOBBI, C. N.; Cultivo de Dunaliella salina: Impacto das Condies Operacionais.
Dissertao (Mestrado), Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos, Escola de
Qumica/UFRJ, Rio de Janeiro, Campinas, 2006.
GODFREY, T.; WEST, S.; Industrial Enzymology, 2nd ed.; The MacMillan Press,
Londres, Inglaterra, 1996.
GODOY, H. T.; RODRIGUEZ-AMAYA, D. B.; Buriti (Mauritia vinifera Mart.), uma
fonte riqussima de pr-vitamina A. Arquivos de Biologia e Tecnologia, 38 (1), 109120, 1995.
GONALVES, C. B.; MEIRELLES, A. J. A.; Liquid-liquid equilibrium data for the
system palm oil + fatty acids + ethanol + water at 318.2 K. Fluid Phase Equilibria, 221,
139-150, 2004.
GONALVES, C. B.; PESSOA FILHO, P. A.; MEIRELLES, A. J. A.; Partition of
nutraceutical compounds in deacidification of palm oil by solvent extraction. Journal of
Food Engineering, 81, 21-26, 2007.
GOODWIN, T. W.; Chemistry and Biochemistry of Plant Pigments, vol. 1 e 2, 2nd ed.,
Academic Press, Londres, 1976.
GL-STNDAG, .; TEMELLI, F.; Correlating the solubility behavior of minor
lipids components in supercritical carbon dioxide. Journal of Supercritical Fluids, 31,
235-253, 2004.
GUIEYSSE, D.; SANDOVAL, G.; FAURE, L.; NICAUD, J. M.; MONSAN, P.;
MARTY, A.; New efficient lipase from Yarrowia lipolytica for the resolution of 2bromo-arylacetic acid esters. Tetrahedron: Assymetry, 15, 3539-3543, 2004.
GUNSTONE, F. D.; PADLEY, F. B.; Lipid Technologies and Applications, Marcel
Dekker, Inc., Nova York, 1997.
GUNSTONE, F. D.; Vegetable Oils in Food Technology: Composition, Properties
and Uses, Blackwell Publishing/CRC, Oxford, 2002.
92
GUNSTONE, F. D.; HARWOOD, J. L.; DIJKSTRA, A. J.; The Lipid Handbook, 3rd
ed, CRC Press, Boca Raton, Estados Unidos, 2007.
GUTIRREZ-AYESTA, C.; CARELLI, A. A.; FERREIRA, M. L.; Relation between
lipase structures and their catalytic ability to hydrolyse triglycerides and phospholipids.
Enzyme and Microbial Technology, 41, 35-43, 2007.
HASAN, F.; SHAH, A. A.; HAMEED, A.; Industrial applications of microbial lipases.
HEJAZI, M. A.; WIJFFELS, R. H.; Effect of light intensity on -carotene production and
extraction by Dunaliella salina in two-phase bioreactors. Biomolecular Engineering, 20,
171-175, 2003.
HERNNDEZ-MARTN, E.; OTERO, C.; Different enzyme requirements for the
synthesis of biodiesel: Novozym 435 and Lipozyme TL IM. Bioresource
Technology, 99, 277-286, 2008.
HIANE, P. A.; BOGO, D.; RAMOS, M. I. L.; RAMOS FILHO, M. M.; Carotenides
pr-vitamnicos A e composio em cidos graxos do fruto e da farinha do bacuri
(Scheelea phalerata Mart). Cincia e Tecnologia de Alimentos, 23 (2), 206-209, 2003.
http://aliceweb.desenvolvimento.gov.br/, acessado no dia 29/12/07.
http://www.corporate.basf.com/en/innovationen/felder/ernaehrung/fotos/?id=V00ngerLBbcNbcp02I, acessado no dia 30/12/07.
http://www.cotecportugal.pt/index.php?option=com_content&task=view&id=70#06,
acessado no dia 07/05/06.
http://www.fao.org/ag/agn/jecfa-additives/details.html?id=699, acessado no dia 04/01/08.
http://www.fao.org/docrep/v0784e/v0784e0c.htm#buriti, acessado em 06/01/08.
http://www.sbaf.org.br/SBAF/_noticias/200503_Carotenoide.htm,
07/05/06.
acessado
http://www.sidra.ibge.gov.br/bda/tabela/listabl.asp?c=548&z=p&o=2,
06/01/08.
no
acessado
dia
em
http://www.waters.com/WatersDivision/pdfs/WA30000.pdfT, acessado em 13/06/2006.

IKAN, R.; Natural Products: A laboratory guide, 2nd ed., Academic Press, San Diego,
1991.
ISLER, O.; Carotenoids, Birkhaser Verlag Basel, Stuttgart, 1971.
93
JAEGER, K. E.; DIJKSTRA, B. W.; REETZ, M. T.; Bacterial biocatalysts: Molecular

biology, three-dimensional structures, and biotechnological applications of lipases.
Annual Reviews of Microbiology, 53, 315-351, 1999.
KASPRZYK-HORDERN, B.; Chemistry of alumina, reactions in aqueous solution and
its application in water treatment. Advances in Colloid and Interface Science, 110, 1948, 2004.
KIM, S. W.; KIM, J. B.; JUNG, W. H.; KIM, J. H.; JUNG, J. K.; Over-production of carotene from metabolically engineered Escherichia coli. Biotechnology Letters, 28,
897-904, 2006.
KUZINA, V.; CERD-OLMEDO, E.; Ubiquinone and carotene production in the
Mucorales Blakeslea and Phycomyces. Applied Microbiology and Biotechnology, 76,
991-999, 2007.
LAU, H. L. N.; CHOO, Y. M.; MA, A. N.; CHUAH, C. H.; Production of refined
carotene-rich palm oil from palm mesocarp (Elaeis guineensis) using supercritical carbon
dioxide. Journal of Food Lipids, 14, 396-410, 2007.
LON, R.; MARTN, M.; VIGARA, J.; VILCHEZ, C.; VEGA, J. M.; Microalgae
mediated photoproduction of -carotene in aqueous-organic two phase systems.
Biomolecular Engineering, 20, 177-182, 2003.
LESUISSE, E.; SCHANCK, K.; COLSON, C.; Purification and preliminary
characterization of the extracellular lipase of Bacillus subtilis 168, an extremely basic
pH-tolerant enzyme. European Journal of Biochemistry, 216 (1), 155-160, 1993.
LIETZ, G.; HENRY, C. J. K.; A modified method to minimise losses of carotenoids and
tocopherols during HPLC analysis of red palm oil. Food Chemistry, 60 (1), 109-117,
1997.
LPEZ, N.; PERNAS, M. A.; PASTRANA, L. M.; SNCHEZ, A.; VALERO, F.; RA,
M. L.; Reactivity of pure Candida rugosa lipase isoenzymes (Lip 1, Lip 2 and Lip 3) in
aqueous and organic media. Influence of the isoenzymatic profile on the lipase
performance in organic media. Biotechnology Progress, 20 (1), 65-73, 2004.
MALDONADE, I. R.; RODRIGUEZ-AMAYA, D. B.; SCAMPARINI, A. R. P.;
Carotenoids of yeasts isolated from the Brazilian ecosystem. Food Chemistry, 107, 145150, 2008.
MALDONADO, R. R.; Produo, purificao e caracterizao da lipase de
Geotrichum candidum obtida a partir de meios industriais. Dissertao (Mestrado),
Programa de Engenharia de Alimentos, FEA/UNICAMP, Campinas, 2006.
MANHES, L. R. T.; Caracterizao da polpa de buriti (Mauritia flexuosa, Mart.):
um potente alimento funcional. Seropdica: UFRRJ, 2007. 78p. Dissertao (Mestrado
94
em Cincia e Tecnologia de Alimentos). Instituto de Tecnologia, Curso de PsGraduao em Cincia e Tecnologia de Alimentos, Universidade Federal Rural do Rio de
Janeiro, Seropdica, RJ, 2007.
MARA, P. D.; SNCHEZ-MONTERO, J. M.; SINISTERRA, J. V.; ALCNTARA, A.
R.; Understanding Candida rugosa lipases: An overview. Biotechnology Advances, 24,
180-196, 2006.
MARIATH, J. G. R.; LIMA, M. C. C.; SANTOS, L. M. P.; Vitamin A activity of buriti
(Mauritia vinifera Mart) and its effectiveness in the treatment and prevention of
xerophthalmia. The American Journal of Clinical Nutrition, 49, 849-853, 1989.
MARINHO, H. A.; CASTRO, J. S.; Carotenides e valor de pr-vitamina A em frutos da
regio amaznica: pajur, piqui, tucum e umari. Anais do XVII Congresso Brasileiro
de Fruticultura, 2003KANICKY, J. R.; SHAH, D. O.; Effect of degree, type, and
position of unsaturation on the pKa of long-chain fatty acids. Journal of Colloid and
Interface Science, 256, 201-207, 2002.
MARTINS, T. S. M.; Produo e purificao de lipases de Yarrowia lipolytica
(IMUFRJ50682). Dissertao (Mestrado), Departamento de Frmacos, Faculdade de
Farmcia, UFRJ, Rio de Janeiro, 2001.
MARTY, C.; BERSET, C.; Factors affecting the thermal degradation of all trans-carotene. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 38, 1063-1067, 1990.
MATISSEK, R.; SCHNEPEL, F. M.; STEINER, G.; Anlisis de los alimentos:
Fundamentos, Mtodos y Aplicaciones, Editorial Acribia, S. A.; Zaragoza, 1998.
MEHTA, B. J.; SALGADO, L. M.; BEJARANO, E. R.; CERD-OLMEDO, E.; New
mutants of Phycomyces blaskeleeanus for -carotene production. Applied and
Environmental Microbiology, 63 (9), 3657-3661, 1997.
MEIRELLES, F. V. P.; Produo de lipases por Yarrowia lipolytica (IMUFRJ50682).
Tese (Doutorado), Programa de Bioqumica, Instituto de Qumica, UFRJ, Rio de Janeiro,
1997.
MOJAAT, M.; FOUCAULT, A.; PRUVOST, J.; LEGRAND, J.; Optimal selection of
organic solvents for biocompatible extraction of -carotene from Dunaliella salina.
Journal of Biotechnology, in press, 2007.
MORAES, E. B.; MARTINS, P. F.; BATISTELLA, C. B.; ALVAREZ, M. E. T.;
MACIEL FILHO, R.; MACIEL, M. R. W.; Molecular distillation: A powerful technology
for obtaining tocopherols from soya sludge. Applied Biochemistry and Biotechnology,
129-132, 1066-1076, 2006.
95
MOREAU, R. A.; WHITAKER, B. D.; HICKS, K. B.; Phytosterols, phytostanols, and

their conjugates in foods: structural diversity, quantitative analysis, and health-promoting
uses. Progress in Lipid Research, 41, 457-500, 2002.
MOREAU, R. A.; POWELL, M. J.; HICKS, K. B.; Evaluation of a commercial enzymebased serum cholesterol test kit for analysis of phytosterol and phytostanol products.
Journal of Agricultural and Food Chemistry, 51, 6663-6667, 2003.
MORETTIN, P. A.; BUSSAB, W. O.; Estatstica Bsica, 5 ed., Editora Saraiva, So
Paulo, 2002.
NIIZU, P. Y.; Fontes de carotenides importantes para sade humana. Dissertao
(Mestrado), Cincia dos Alimentos, Faculdade de Engenharia de Alimentos, UNICAMP,
Campinas, 2003.
NOOR, I. M.; HASAN, M.; RAMACHANDRAN, K. B.; Effect of operating variables on
the hydrolysis rate of palm oil by lipase. Process Biochemistry, 39, 13-20, 2003.
OGINO, H.; NAKAGAWA, S.; SHINYA, K.; MUTO, T.; FUJIMURA, N.; YASUDA,
M.; ISHIKAWA, H.; Purification and characterization of organic solvent-stable lipase
from organic solvent-tolerant Pseudomonas aeruginosa LST-03. Journal of Bioscience
and Bioengineering, 89 (5), 451-457, 2000.
OLIVEIRA, A. L. A.; GIOIELLI, L. A.; OLIVEIRA, M. N.; Hidrlise parcial enzimtica
da gordura de babau. Cincia e Tecnologia de Alimentos, 19 (2), 270-276, 1999.
ONG, A. L.; KAMARUDDIN, A. H.; BHATIA, S.; LONG, W. S.; LIM, S. T.;
KUMARI, R.; Performance of free Candida antarctica lipase B in the enantioselective
esterification of (R)-ketoprofen. Enzyme and Microbial Technology, 39, 924-929,
2006.
OOI, C. K.; CHOO, Y. M.; YAP, S. C.; BASIRON, Y.; ONG, A. S. H.; Recovery of
carotenoids from palm oil. Journal of American Oil Chemists Society, 71 (4), 423426, 1994.
OSAWA, C. C.; GONALVES, L. A. G.; Titulao potenciomtrica aplicada na
determinao de cidos graxos livres de leos e gorduras comestveis. Qumica Nova, 29
(3), 593-599, 2006.
OUYANG, J. M.; DAUN, H.; CHANG, S. S.; HO, C. T.; Formation of carbonyl
compounds from -carotene during palm oil deodorization. Journal of Food Science, 45,
1214-1217, 1980.
QUEIROZ JR., P. C.; Hidrlise enzimtica de leo de babau em reatores agitados.
Dissertao (Mestrado), Programa de Engenharia Qumica, COPPE, UFRJ, Rio de
Janeiro, 1996.
96
PACKER, L.; HIRAMATSU, M.; YOSHIKAWA, T.; Antioxidants Food Supplements

in Human Health, Elsevier, Amsterd, 1999.
PADILHA, M. E. S.; AUGUSTO-RUIZ, W.; Hidrlise enzimtica de leo de pescado.
Cincia e Tecnologia de Alimentos, 27 (2), 285-290, 2007.
PALOZZA, P.; SERINI, S.; DI NICUOLO, F.; PICCIONI, E.; CALVIELLO, G.;
Prooxidant effects of -carotene in cultured cells. Molecular Aspects of Medicine, 24,
353-362, 2003.
PARK, Y. K.; PASTORE, G. M.; ALMEIDA, M. M.; Hydrolysis of soybean oil by a
combined lipase system. Journal of American Oil Chemists Society, 65, 252-254,
1988.
PAUST, J.; Herstellung und anwendung von carotinoiden. Chimia, 48, 494-498, 1994.
PERRY, R. H.; GREEN, D. W.; Perrys Chemical Engineers Handbook, 7th ed.,
McGraw Hill Companies, Nova York, 1999.
PFEFFER, J.; RICHTER, S.; NIEVELER, J.; HANSEN, C. E.; RHLID, R. B.; SCHMID,
R. D.; RUSNAK, M.; High yield expression of lipase A from Candida antarctica in the
methylotrophic yeast Pichia pastoris and its purification and characterization. Applied
Microbiology and Biotechnology, 72, 931-938, 2006.
PINHEIRO-SANT'ANA, H. M.; STRINGHETA, P. C.; BRANDO, S. C. C.; PEZ, H.
H.; QUEIRZ, V. M. V.; Evaluation of total carotenoids, - e -caroteno in carrots
(Daucus carota L.) during home processing. Cincia e Tecnologia de Alimentos, 18(1),
39-44, 1998.
RAMACHANDRAN, K. B.; AL-ZUHAIR, S.; FONG, C. S.; GAK, C. W.; Kinetic study
on hydrolysis of oils by lipase with ultrasonic emulsification. Biochemical Engineering
Journal, 32, 19-24, 2006.
REZENDE, M. J. C.; Uso de argila brasileira como catalisador na produo de
Biodiesel. Tese (Doutorado), Programa de Qumica Orgnica, Instituto de Qumica,
UFRJ, Rio de Janeiro, 2006.
RODRIGUES, M. I.; IEMMA, A. F.; Planejamento de Experimentos e Otimizao de
Processos, Casa do Po Editora, Campinas, 2005.
RODRIGUEZ, E. B.; RODRIGUEZ-AMAYA, D. B.; Formation of apocarotenals and
epoxycarotenoids from -carotene by chemical reactions and by autoxidation in model
systems and processed foods. Food Chemistry, 101, 563-572, 2007.
RODRIGUEZ-AMAYA, D. B.; Assessment of the provitamin A contents of foods
Brazilian experience. Journal of Food Composition and Analysis, 9, 196-230, 1996.
97
RODRIGUEZ-AMAYA, D. B.; A Guide to Carotenoid Analysis in Food. ILSI Press,

Washington, 2001.
RODRGUEZ-SAZ, M.; SNCHEZ-PORRO, C.; DE LA FUENTE, J. L.; MELLADO,
E.; BARREDO, J. L.; Engineering the halophilic bacterium Halomonas elongata to
produce -carotene. Applied Microbiology and Biotechnology, 77, 637-643, 2007.
ROONEY, D.; WEATHERLEY, L. R.; The effect of reaction conditions upon lipase
catalysed hydrolysis of high oleate sunflower oil in stirred liquid-liquid reactor. Process
Biochemistry, 36, 947-953, 2001.
ROSSI, M.; GIANAZZA, M.; ALAMPRESE, C.; STANGA, F.; The effect of bleaching
and physical refining on color and minor components of palm oil. Journal of American
Oil Chemists Society, 78 (10), 1051-1055, 2001.
RUCKER, R. B.; SUTTIE, J. W.; McCORMICK, D. B.; MACHLIN, L. J.; Handbook of
Vitamins, 3rd ed., Marcel Dekker, Nova York, 2001.
RUPREZ, F. J.; MARTN, D.; HERRERA, E.; BARBAS, C.; Chromatographic
analysis of -tocopherol and related compounds in various matrices. Journal of
Chromatography A, 935, 45-69, 2001.
SALAS, J. J.; SNCHEZ, J.; RAMLI, U. S.; MANAF, A. M.; WILLIAMS, M.;
HARWOOD, J. L.; Biochemistry of lipid metabolism in olive and other oil fruits.
Progress in Lipid Research, 39, 151-180, 2000.
SANTOS, L. M. P.; Nutritional and ecological aspects of buriti or aguaje (Mauritia
flexuosa Linnaeus filius): a carotene-rich palm fruit from Latin America. Ecology of
Food and Nutrition, 44, 1-14, 2005.
SATOMURA, Y.; KIMURA, M.; ITOKAWA, Y.; Simultaneous determination of retinol
and tocopherols by high-performance liquid-chromatography. Journal of
Chromatography A, 625 (2), 372-376, 1992.
SAXENA, R. K.; SHEORAN, A.; GIRI, B.; DAVIDSON, S.; Purification strategies for
microbial lipases. Journal of Microbiological Methods, 52, 1-18, 2003.
SCHIEBE, A.; CARLE, R.; Occurrence of carotenoid cis- isomers in food:
Technological, analytical, and nutritional implications. Trends in Food Science &
Technology, 16, 416-422, 2005.
SHARMA, R.; CHISTI, Y.; BANERJEE, U. C.; Production, purification,
characterization and applications of lipases. Biotechnology Advances, 19, 627-662,
2001.
98
SHREVE, R. N.; BRINK JR., J. A.; Indstrias de Processos Qumicos, 4a ed., Editora
Guanabara Dois, Rio de Janeiro, 1997.
SHU, Z. Y.; YANG, J. K.; YAN, Y. J.; Purification and characterization of a lipase from
Aspergillus niger F044. Chinese Journal of Biotechnology, 23 (1), 96-100, 2007.
SILVA, C.; CABRAL, J. M. S.; VAN KEULEN, F.; Isolation of a -carotene overproducing soil bacterium, Sphingomonas sp.. Biotechnology Letters, 26, 257-262, 2004.
SILVA, C. R.; Bioativos tropicais com eficcia comprovada. Cosmetics & Toiletries
(Ed. Portugus), 14 (1), 42-46, 2002.
SILVEIRA, C. S.; Estudo qumico e farmacolgico dos frutos de Syagrus oleracea
(Mart.) Becc. (Guariroba) e Mauritia vinifera Mart. (Buriti). Dissertao (Mestrado),
Ps-Graduao em Qumica de Produtos Naturais, NPPN, UFRJ, Rio de Janeiro, 2004.
SIMES, C. M. O.; SCHENKEL, E. P.; GOSMANN, G.; MELLO, J. C. P.; MENTZ, L.
A.; PETROVICK, P. R.; Farmacognosia, da planta ao medicamento, 5 ed., Editora da
UFSC/ Editora da UFRGS, Florianpolis/Porto Alegre, 2003.
SPOLAORE, P.; JOANNIS-CASSAN, C.; DURAN, E.; ISAMBERT, A.; Commercial
applications of microalgae. Journal of Bioscience and Bioengineering, 101 (2), 87-96,
2006.
SUBRAMANIAN, R.; NABETANI, H.; NAKAJIMA, M.; ICHIKAWA, S.; KIMURA,
T.; MAEKAWA, T.; Rejection of carotenoids in oil systems by a nonporous polymeric
composite membrane. Journal of American Oil Chemists Society, 78 (8), 803-807,
2001.
TAVARES, M.; AUED-PIMENTEL, S.; LAMARDO, L. C. A.; CAMPOS, N. C.;
JORGE, L. I. F.; GONZALEZ, E.; Composio qumica e estudo anatmico dos frutos de
buriti do Municpio de Buritizal, Estado de So Paulo. Revista do Instituto Adolfo Lutz,
62 (3), 227-232, 2003.
TINOI, J.; RAKARIYATHAM, N.; DEMING, R. L.; Simplex optimization of carotenoid
production by Rhodotorula glutinis using hydrolyzed mung bean waste flour as substrate.
Process Biochemistry, 40, 2551-2557, 2005.
UENOJO, M.; MARSTICA JR., M. R.; PASTORE, G. M.; Carotenides: Propriedades,
aplicaes e biotransformao para formao de compostos de aroma. Qumica Nova, 30
(3), 616-622, 2007.
UHLIG, H.; Industrial Enzymes and their Applications, John Wiley & Sons, Inc.;
Toronto, Canada, 1998.
99
VACEK, M.; ZAREVCKA, M.; WIMMER, Z.; STRNSK, K.; KOUTEK, B.;
MACKOV, M.; DEMNEROV, K.; Lipase-mediated hydrolysis of blackcurrant oil.
WANG, Y. J.; SHEU, J. Y.; WANG, F. F.; SAHW, J. F.; Lipase-catalyzed oil hydrolysis
in the absence of added emulsifier. Biotechnology and Bioengineering, 31 (6), 628-633,
1988.
XU, W. L.; HUANG, Y. B.; QIAN, J. H.; SHA, O.; WANG, Y. Q.; Separation and
purification of stigmasterol and -sitosterol from phytosterol mixtures by solvent
crystallization method. Separation and Purification Technology, 41, 173-178, 2005.
YAO, C.; TANG, S.; HE, Z.; DENG, X.; Kinetics of lipase-catalyzed hydrolysis of olive
oil in AOT/isooctane reverd micelles> Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic,
35, 108-112, 2005.
YOSHIDA, Y.; KIMURA, Y.; KADOTA, M.; TSUNO, T.; ADACHI, S.; Continuous
synthesis of alkyl ferulate by immobilized Candida antarctica lipase at high temperature.
Biotechnology Letters, 28, 1471-1474, 2006.
YOU, L. L.; BAHARIN, B. S.; QUEK, S. Y.; ABDULLAH, M. A.; TAKAGI, S.;
Recovery of palm carotene from palm oil and hydrolyzed palm oil by adsorption column
chromatography. Journal of Food Lipids, 9, 87-93, 2002.
100
GLOSSRIO
Cloroplasto: uma organela presente nas clulas das plantas e algas, rico em clorofila,
responsvel pela sua cor verde, e onde a fotossntese realizada.
Cromoplasto: uma organela presente nas clulas das plantas e algas, onde ocorre a
biossntese de pigmentos.
Distribuio t de Student: uma distribuio de probabilidades referente a inferncias de
mdias de populaes normalmente distribudas, sendo a base
para o popular teste t de Student onde se avalia a significncia
estatstica da diferena entre 2 mdias amostrais, e tambm os
intervalos de confiana da diferena entre 2 mdias
populacionais (Morettin & Bussab, 2002).
Endosperma: um tecido vegetal, que se encontra nas sementes de muitas angiospermas e
acumula reservas nutritivas, como amido, protenas e leo, utilizadas pelo
embrio durante seu desenvolvimento.
Fitoesteris: alcois cristalinos, neutros e de alto ponto de fuso, sendo que os principais so
-sitosterol, campesterol e estigmasterol (figura 55, Moreau et al, 2002).
Figura 55 Fitoesteris
Log P: logaritmo do coeficiente de partio da substncia de um sistema padro bifsico 1octanol/gua. Quanto maior o log P, mais apolar o solvente ou a mistura (Mojaat et
al, 2007).
Mecanismo Ping-Pong Bi Bi: mecanismo cintico de reaes com mltiplos produtos e
substratos catalisadas por lipases, onde E enzima; Es,
ster; Al, lcool; Ac, cido; W, gua; F, enzima em outro
estado conformacional (Cunha, 2007)
Pericarpo: o tecido do fruto que envolve e protege a semente nas angiospermas, incluindo
trs camadas: epicarpo (mais externa), mesocarpo (intermediria) e endocarpo
(mais interna).
Retinides: derivados de sntese de vitamina A, dentre eles retinal (figura 56), retinol e
tretinona (Rucker et al, 2001).
101
Figura 56 Retinal
Significncia estatstica: a probabilidade mxima de se rejeitar acidentalmente uma

hiptese nula (a ser testada) verdadeira.
Spray-drying: um mtodo em que o material a ser seco passa por um tubo at um vaso
vertical e cilindrico, onde pulverizado na forma de pequena gotas (dimetro
em torno de 2 mm), e geralmente na direo contrria alimentado uma
grande vazo de ar ou vapor quente com energia suficiente para completa
vaporizao do lquido, em menos de 30 s (Perry & Green, 1999).
Terebintina: o destilado obtido de resina de pinheiros, sendo geralmente composto de
terpenos, principalmnete de -pineno e -pineno.
Tococromanis: consistem principalmente de tocoferis (, , , ) e tocotrienis (, , ,
), consistindo de um anel cromano e uma longa cadeia saturada fitil no caso
de tocoferis, enquanto os tocotrienis tm uma cadeia com insaturaes.
Os quatro ismeros (, , , ) diferem apenas no nmero e na posio dos
grupos metila (figura 57, Gl-stndag & Temelli, 2004).
R1 = CH3, R2 = CH3
R1 = H, R2 = CH3
R1 = CH3, R2 = H
R1 = H, R2 = H
Figura 57 - Tococromanis: (A) Tocoferis, (B) Tocotrienis
Torularodina: um dos carotenides produzidos pela levedura Rhodotorula glutinis, sendo

um derivado carboxilado do toruleno (Figura 58).
Figura 58 Toruleno (R = CH3) e Torularodina (R = COOH)
Xeroftalmia: uma doena caracterizada pela no produo de lgrimas e por dificuldades

de viso, principalmente durante a noite.
102
APNDICE
Cintica de hidrlise enzimtica do leo bruto de buriti utilizando Lipozyme TL IM, onde os
tubos esto na seguinte seqncia temporal: 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6 e 8h
Cintica de hidrlise enzimtica do leo refinado de buriti utilizando Lipozyme TL IM, onde
os tubos esto na seguinte seqncia temporal: 0,5, 1, 1,5, 2, 3, 4, 6 e 8h
(a)
(b)
Antes (a) e depois (b) da winterizao
103

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO

Programa de Ps-Graduao de Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos

APLICAO DE TECNOLOGIA ENZIMTICA NA

prof Dlia Rodriguez-Amaya (FEA-UNICAMP), por ter me enviado um artigo

Alguns homens vem as coisas como so, e dizem: Por qu?

Figura 36 - Avaliao da quantidade de alumina sobre a concentrao de carotenides durante

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

Sulfosuccinato de bis(2-etill hexil) sdio

2.3) LIPASES __________________________________________________________

CAPTULO 3 MATERIAIS E MTODOS __________________________________ 39

3.3.5.1) Teor de Insaponificveis ________________________________________

3.4) PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS _______________________________

CAPTULO 4 RESULTADOS E DISCUSSO _______________________________ 52

4.2) PR-AVALIAO DO PROCESSO ENZIMTICO _____________________

4.3) OTIMIZAO DA HIDRLISE ENZIMTICA ________________________

4.4) DESACIDIFICAO E CONCENTRAO DE -CAROTENO ___________ 80

4.4.1) Recuperao da Alumina ___________________________________________

CAPTULO 5 CONCLUSO _____________________________________________ 84

Figura 1 - Exemplares de soja, canola e palma

A funo do leo na maioria dos vegetais superiores de reserva energtica primria

Nos plastdeos, como cloroplastos e cromoplastos ocorre, alm da produo de

Os insaponificveis tm sido objeto de grande ateno devido as descobertas recentes

Devido semelhana entre as propriedades fsicas (solubilidade, polaridade, massa

CAPTULO 2 REVISO BIBLIOGRFICA

Figura 3 - Principais carotenos

Dos carotenos acclicos, licopeno e -caroteno so os mais comuns. O licopeno o

Figura 4 - Principais xantofilas

Dentre as xantofilas hidroxiladas, as principais so derivadas do - e -caroteno, como

Figura 5 - Biossntese resumida dos insaponificveis (Simes et al, 2003)

A biossntese dos carotenides segue o padro usual da sntese de terpenides, que

Figura 6 - Esquema geral de biossntese de terpenides (Dewick, 2002)

A passagem do intermedirio fitoeno para o licopeno (Figura 7) ocorre atravs de

2.1.3) Propriedades e modificaes

Figura 9 - Principais ismeros cis do -caroteno

A oxidao, o principal mecanismo de degradao dos carotenides, acelerada pela

Figura 10 - Epoxicarotenides derivados do -caroteno

Estes derivados so formados em vrios tipos de processamento de alimentos, como

Figura 11 - Apocarotenides derivados do -caroteno

2.1.4) Aes benficas sade

A vitamina A tambm tem funes sistmicas importantes no crescimento e na

2.1.5.1.1) Matrizes lipoflicas

2.1.5.1.2) Matrizes hidroflicas

Figura 12 - Formulao de -caroteno dispersvel em gua (http://www.corporate.basf.com/, 2007)

No processo de soluo/precipitao desenvolvido pela Roche, uma disperso de

2.1.5.1.3) Alimentos biofortificados

Figura 13 Alimentos biofortificados. A) Tomate laranja e normal; B) Arroz dourado e branco

O arroz dourado gerado pela insero de genes da bactria Erwinia e de narciso

2.1.5.3.1) -caroteno Sinttico

Figura 14 - Vias sintticas para obteno de -ionona

A primeira sntese industrial de -caroteno pela Roche seguiu os princpios C19 + C2 +

Figura 15 - Sntese de -caroteno por condensao enol-ter

J a BASF utiliza a condensao de Wittig para produzir -caroteno, onde sais de

Figura 16 Sntese de -caroteno por condensao de Wittig

2.1.5.3.2) -caroteno Natural

Para se promover a carotenognese em D. salina, alm dos nutrientes essenciais, uma

Figura 18 Phycomyces blakesleeanus e um zigosporo de Blakeslea trispora

Algumas linhagens modificadas geneticamente de Phycomyces sp. podem alcanar at

Figura 19 - Rhodotorula glutinis e Sporobolomyces roseus

Dependendo das condies de cultivo, como fontes de carbono e nitrognio, leveduras

Figura 20 - Halomonas elongata e Escherichia coli

A bactria haloflica H. elongata modificada com genes de Pantoea agglomerans e

O -caroteno de origem vegetal geralmente obtido por extrao com solventes de

Cenoura (Daucus carota)