Estrutura e Diversidade da Vida na Terra I

AULA 2 Microscopia Bsica.

Prof Fabola Dorneles Incio

fabiola.inacio@ifpr.edu.br

Vrus

27 nm a 300 nm

Clula bacteriana

Clula fngica

10 m a 90 m

Clulaprotista
protista
Clula
300 nm a 1 m

PRIMEIRAS OBSERVAES AO MICROSCPIO

1590 Francis e Zacarias Jansen (fabricantes de culos)
PRIMEIROS MICROSCPIOS

Anton van Leeuwenhoek

1663 Robert Hook estudos com lminas de cortia

CONCEITO DE CLULA

1663
Robert Hooke

1750

1689
Marcello Malpighi

1852

MICROSCPIO
APARELHO COM LENTES PTICAS QUE MAXIMIZA UM SER OU
ESTRUTURAS MINSCULAS A UM TAMANHO DE BOA OBSERVAO

O MICROSCPIO PTICO

Cuidados a ter com o Microscpio

Transport-lo com ambas as mos, apoiando a
base numa delas e segurando o brao com a
outra.
Ao coloc-lo sobre a mesa, mant-lo a alguma
distncia do bordo.

Evitar molh-lo ao usar preparaes temporrias.

 As lentes so peas muito caras. Ento, cuidado!

Aps a utilizao, encaixar a objetiva de menor ampliao

alinhada com a ocular.

LENTES OCULARES

Ampliam a imagem fornecida

pelo sistema de objetivas

CANHO OU TUBO

Serve de suporte ao
sistema ocular

BRAO

Serve de suporte platina e

ao revlver

REVLVER

Serve de suporte s
objetivas e permite a sua
mudana

OBJETIVAS

Amplia a imagem do
objeto observado

OBJETIVAS

4x = Vermelha
10x = Amarela
40x = Azul claro
100x = Preta / branca

A CAPACIDADE DE AUMENTO DE UM MICROSCPIO PTICO

DADA PELA UNIO DE DOIS SISTEMAS DE LENTES: LENTES
OBJETIVAS E LENTES OCULARES.

O AUMENTO TOTAL DADO PELA MULTIPLICAO DO

AUMENTO DA OBJETIVA PELO AUMENTO DA OCULAR

Aumento final

10

40

10

10

10

PLATINA

Serve de suporte preparao a

observar. Tem uma abertura na parte
central (janela da platina).

CONDENSADOR

Distribui regularmente no campo da

preparao a luz que atravessa o diafragma
(concentra os raios luminosos sobre o
objeto em estudo)

DIAFRAGMA

Regula a intensidade da luz captada pelo

espelho e que incide na preparao

FONTE DE LUZ

PARAFUSOS MACROMTRICO E
MICROMTRICO

Permite movimentos (de maior ou menor

amplitude) de aproximao ou afastamento
entre a preparao e as objetivas

BASE

Constitui a base de suporte de todos

os elementos do microscpio

OPERAO (PRTICA LABORATORIAL)

NORMAS E CONDUTAS NA PRTICA LABORATORIAL

1.

OBEDECER TODAS AS NORMAS DE BIOSEGURANA (EPI/EPC).

2. LAVAR AS MOS NA ENTRADA E NA SADA APS A PRTICA.

3. OBRIGATRIO QUE VOC CONHEA AS PARTES PTICAS E MECNICAS DOS MICROSCPICOS
ANTES DE US-LO.
4.

NO MANUSEAR O APARELHO COM AS MOS SUJAS OU MOLHADAS

5. NUNCA DESLOQUE O APARELHO COM A LMPADA ACESA.

6.

NA REMOO DO EQUIPAMENTO, SEGURE-O FIRMEMENTE COM UMA DAS MOS NO BRAO E A

OUTRA NA BASE.

7. AVISAR PROFESSORA SOBRE QUALQUER EVENTO ANORMAL DURANTE A AULA

COMO USAR O MICROSCPIO

NA OBSERVAO DE UMA PREPARAO, OLHE PELA OCULAR E MOVA O MACROMTRICO

MUITO LENTAMENTE, ASSIM QUE A IMAGEM APARECER, MESMO CONFUSA, PARE E

COMPLETE A FOCALIZAO COM O MICROMTRICO.

APS, FAZER A FOCALIZAO FINAL COM O PARAFUSO MICROMTRICO.

GIRAR O REVLVER E TROCAR A OBJETIVA PARA A DE MAIOR AUMENTO, CASO DESEJE

AUMENTAR A AMPLIAO E REPETIR O PROCEDIMENTO PARA OBTER FOCO.

APS O TRMINO, DIMINUA A INTENSIDADE DE LUZ, COLOQUE NA OBJETIVA DE MENOR

AUMENTO E DESLIGUE O MICROSCPIO.

MICROSCPIO PTICO OU DE LUZ

- Usa a luz visvel ou a luz UV para gerar a
imagem

- Luz visvel: radiaes eletromagnticas

com de 380 a 750 nm.
- O limite de resoluo de
microscpio ptico de 0,2 m

um

Espectro das radiaes eletromagnticas

LIMITE DE RESOLUO

- a capacidade de separar detalhes, de produzir

imagens separadas de partculas muito prximas

- a menor distncia que deve existir entre 2 pontos

para que eles apaream separados

LIMITE DE RESOLUO

0,61
D=
NA
D = limite de resoluo
= comprimento de onda da luz visvel (0,5)
NA = abertura numrica

ABERTURA NUMRICA

NA = sen

NA = abertura numrica
= metade do ngulo de abertura
= ndice de refrao (razo entre a velocidade da luz em
um meio e a velocidade da luz no vcuo). o espao que a luz
tem que percorrer depois que deixa o objeto at alcanar a lente
objetiva.

NDICE DE REFRAO

- Quando o ar o meio intercalante, = 1

- Quando usamos lentes de imerso (objetiva de 100), = 1,5

Lentes de imerso e resoluo

- Lentes secas: a luz que
atravessa a lmina sofre um
desvio (refrao); raios
escapam da abertura da
objetiva e o ngulo menor

- Lentes
de
imerso:
distncia focal menor; os
raios no sofrem desvios,
aumentando a qualidade

Lentes secas

Lentes de imerso

NA = sen

NA = sen

NA = 1 x 1 = 1

NA = 1,5 x 1 = 1,5

0,61
0,61 x 0,5
D=
D=
NA
1
D = 0,3 m

0,61 x 0,5
D=
1,5

D = 0,2 m

PODER DE RESOLUO

Grandeza inversamente proporcional ao limite de resoluo.

Quanto menor o limite de resoluo, maior seu poder de

resoluo

MICROSCOPIA ELETRNICA

- 1873 Abbe e Helmhtz resoluo

depende do da fonte de energia
- 1932 Knoll e Ruska 1 microscpio
eletrnico
- 2 principais tipos:
TRANSMISSO

VARREDURA

MICROSCOPIA ELETRNICA DE TRANSMISSO

-

Eltrons atravessam a amostra para gerar a imagem

Lentes: bobinas eletromagnticas

Fonte de eltrons: filamento de metal (ctodo), o qual

aquecido, fazendo com que os eltrons se desprendam

No se analisa material vivo (coluna em vcuo)

Imagens devem ser adquiridas o mais rpido possvel

Amostras fixadas, desidratadas e colocadas em resina

MITOCNDRIA OBSERVADA EM MET

MICROSCOPIA ELETRNICA DE VARREDURA

-

Eltrons no atravessa a amostra, mas interagem com a sua

superfcie, gerando uma imagem TRIDIMENSIONAL

Amostra fixada e desidratada (lcool ou acetona)

Lquido desidratante substitudo por CO2 lquido

Amostra recebe uma camada de ouro (20 nm de espessura)

Um sistema complexo de fluxo de eltrons atinge uma tela de

televiso

CLULAS DO SANGUE OBSERVADAS EM MEV

MO

MET

MEV

Aranha

Larva da espcie de abelha Hoplitis monstrabilis

CABEA DE UM MOSQUITO

Escamas de tubaro

Formiga operria segurando um microchip

Pelos da superfcie da pele humana

Superfcie de um morango

Bactrias na superfcie da lngua humana

Espermatozoides humano

Ganchos e laos de nylon de velcro

P em eletrodomsticos: pelos de gato, fibras de l, gros de plen de

plantas e insetos.

Piolho de cabea humana agarrado a um fio de cabelo

Cabelos e espuma de barbear entre duas lminas de barbear

O fungo Aspergillus fumigatus

Parte de um cogumelo

OBSERVAES AO MICROSCPIO PTICO

Diatomceas

Ovo em desenvolvimento
Volvox

Ameba

Protozorios

Raiz de um cabelo

OBRIGADA!