Atividade antimicrobiana do mel da abelha nativa sem ferro

Nannotrigona testaceicornis (Hymenoptera: Apidae: Meliponini).

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ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DO MEL DA ABELHA NATIVA SEM FERRO

NANNOTRIGONA TESTACEICORNIS (HYMENOPTERA: APIDAE, MELIPONINI)
A.L. Gonalves, A. Alves Filho, H. Menezes
Universidade Estadual Paulista, Instituto de Biocincias, Departamento de Bioqumica e Microbiologia, Av. 24A, 1515, CEP 13506-900, Rio Claro, SP, Brasil. E-mail: airtonlgoncalves@ig.com.br
RESUMO
Diversas propriedades medicinais como antibacteriana, antifngica, cicatrizante e antioxidante
so popularmente relatadas ao mel. Poucos estudos tm sido realizados sobre atividade
antimicrobiana (AA) do mel de abelhas sociais da subfamlia Meliponinae. O objetivo deste estudo
foi investigar a AA do mel de Nannotrigona testaceicornis, uma espcie de abelha indgena sem ferro.
Para a avaliao da AA do mel foi empregado o mtodo da difuso em gar, utilizando-se discos
de 6 mm de dimetro em presena de 10 diferentes microrganismos, obtidos de focos de infeces
clnicas. Os testes indicaram resistncia em: Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Proteus
mirabilis, Staphylococcus aureus, Streptococcus -hemoltico; e indicaram sensibilidade em: Escherichia
coli, Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pyogenes, bem como Staphylococcus spp.
coagulase. Vinte e trs antibiticos comerciais distintos foram tambm avaliados no presente
estudo. Os resultados obtidos at o momento apontam para um excelente potencial teraputico
deste produto apcola.
PALAVRAS-CHAVES: Atividade antibacteriana, mel, abelha nativa, Nannotrigona testaceicornis.
ABSTRACT
ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF HONEY FROM NATIVE STINGLESS BEE NANNOTRIGONA
TESTACEICORNIS (HYMENOPTERA: APIDAE, MELIPONINI). Several medicinal properties, such
as antibacterial, antifungal, healing and antioxidant activities, are popularly reported for honey. Few
studies have been done on the antimicrobial activity (AA) of honey produced by social bees from
the sub-family Meliponinae. The objective of this study was to investigate the AA of honey produced
by Nannotrigona testaceicornis, a native stingless bee. For the honey AA evaluation, the agar diffusion
method was assayed against 10 different microorganisms isolated from inoculi obtained from
clinically infected sites. Tests indicated resistance in Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae,
Proteus mirabilis, Staphylococcus aureus, - hemolytic Streptococcus. Susceptibility was observed in
Escherichia coli, Proteus spp., Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pyogenes as well as in negativecoagulase Staphylococcus spp. Twenty-three distinct commercial antibiotics were also assayed in the
present study. Results obtained up to this date indicate an excellent therapeutical potential for this
natural product.
KEY WORDS: Antibacterial activity, honey, native bee, Nannotrigona testaceicornis.

INTRODUO
O mel de abelhas um suplemento alimentar que,
ultimamente vm recebendo um incremento no
consumo comercial decorrente, principalmente, da
comprovao cientfica de suas diversas propriedades
benficas sade (ALLEN et al., 1991).
Alm das propriedades nutricionais, a utilizao
do mel na medicina popular se deve tambm s suas
propriedades farmacolgicas. Dentre estas propriedades, a atividade antimicrobiana tem despertado
interesse entre os pesquisadores devido ao seu potencial de aplicabilidade em casos clnicos (EFEM, 1988;

ZUMLA & LULAT, 1989; MOLAN, 1992; WILLIX et al., 1992;

EFEM et al., 1992; EFEM, 1993; KROL et al., 1993).
Propriedades cicatrizante (KUMAR et al., 1993) e
antioxidante (OSZMIANSKI & LEE, 1990) esto tambm
relacionadas a este derivado apcola.
Durante as ltimas dcadas, a utilizao
indiscriminada de antibiticos em diversos setores
da agricultura, bem como da sade humana, vm
favorecendo a emergncia de linhagens de microrganismos patognicos apresentando resistncia aos
mais variados antibiticos. Frente necessidade de
desenvolvimento de novas classes de antibiticos,
diversas pesquisas tm sido desenvolvidas com

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produtos naturais, sejam de origem vegetal como

animal, visando a deteco e caracterizao de compostos qumicos com propriedades teraputicas,
entre elas a antimicrobiana.
No Brasil, alm da Apis mellifera introduzida por
imigrantes europeus, so tambm encontradas abelhas sociais nativas, pertencentes subfamlia
Meliponinae. Estas so popularmente conhecidas
como abelhas-indgenas-sem-ferro, compreendendo
mais de 200 espcies diferentes, algumas das quais
freqentemente criadas para a produo do mel (KERR,
1987).
O mel destas abelhas-sem-ferro utilizado em terapias populares, principalmente, nas zonas rurais
(CORTOPASSI-LAURINO & G ELLI, 1991) e entre indgenas, que
acreditam que diferentes tipos de mel possuem propriedades curativas especficas, sendo empregado para a
cura de um amplo espectro de doenas (POSEY, 1987).
O objetivo do presente estudo foi detectar a atividade antimicrobiana in vitro, do mel da abelha-indgena-sem-ferro Nannotrigona testaceicornis, frente a
bactrias patognicas, isoladas de diferentes focos
infecciosos humanos. Visando obter-se parmetros
mais
precisos
desta
atividade,
foram
concomitantemente efetuados ensaios de antibiose
com vinte e trs diferentes antibiticos comerciais.
MATERIAL E MTODOS
Mel
As amostras de mel utilizadas neste trabalho foram obtidas em maro de 2005, de colmias mantidas
na regio de Rio Claro, SP, Brasil. O mel foi envasado
em frasco mbar, estril e armazenado no escuro
temperatura de 5,4 C.
Discos de papel de filtro Framex 389, faixa preta,
estreis com 6 mm de dimetro foram acrescidos de
100 g de mel e posteriormente mantidos em estufa a
35 C por 24h para secagem, acondicionados em
recipientes estreis e armazenados em geladeira a 5,4
C, baseado na tcnica de BAUER et al. (1966).
Antibiticos
Foram utilizados discos de papel de 6 mm de
dimetro contendo os seguintes antibiticos, nas respectivas concentraes: ampicilina 10 g (AMP),
cefoxitina 30 g (CFO), cefalotina 30 g (CFL),
cefotaxima 30 g (CTX), tetraciclina 30 g (TET),
nitrofurantoina 300 g (NIT) , cloranfenicol 30 g
(CLO), sulfazotrim 25 g (SFT), ciprofloxacina 5 g
(CIP), eritromicina 15 g (ERI), penicilina G 10 g
(PEN), imipinem 10 g (IPM), gentamicina 10 g
(GEN), cefepime 30g (CPM), ceftriaxona 30g (CRO),

amicacina 30 g (AMI), aztreonam 30 g (ATM),

ceftazidima 30 g (CAZ), oxacilina 1 g (OXA),
rifampicina 5 g (RIF), vancomicina 30 g (VAN),
levofloxacina 5 g (LVX), clindamicina 2 g (CLI),
sendo testados contra os seguintes microrganismos:
Enterobacter aerogenes (AMP, CFO, CFL, IPM, GEN,
CPM,CRO); Enterobacter cloacae (AMP, CFL, CFO, AMI,
CLO, GEN, IPM, CPM,CRO); Escherichia coli (AMP,
CFL, ATM, IPM,CLO,CIP); Proteus mirabilis (AMP,
CTX, TET, AMI, GEN, CAZ, IPM, ATM, CRO); Proteus
spp. ( AMP, NIT, AMI, GEN, IPM, ATM); Pseudomonas
aeruginosa ( CLO, SFT, AMP, CIP, CFL, AMI, GEN,
CAZ, IPM); Staphylococcus aureus (ERI, SFT, CLO, OXA,
RIF, TET, VAN); Staphylococcus spp. coagulase-negativa (PEN, SFT, CIP, LVX, VAN, RIF, CLI); Streptococcus
-hemoltico (SFT,ERI, AMP, CLO, PEN,VAN);
Streptococcus pyogenes (SFT, ERI, VAN, LVX, CRO,
CLO).
Padronizao do inculo e semeadura
Os inculos foram coletados com swab de algodo
em infeces clnicas. Dez microrganismos foram
isolados de diferentes focos infecciosos: E. aerogenes
(ferida na regio do osso ilaco), E. cloacae [infeco de
membros inferiores (MMII)], E. coli (infeco
intrabdominal), P. mirabilis (infeco intrabdominal),
Proteus spp. (infeco urinria), P. aeruginosa (infeco de MMII), S. (infeco de MMII), Staphylococcus
spp. coagulase-negativa (secreo de conjuntivite),
Streptococcus -hemoltico (ferida na regio sacral) e S.
pyogenes (infeco de orofaringe), sendo inoculados
em nutriente gar e mantidos por 24h temperatura
de 35 C. Aps este perodo os microrganismos foram
ressuspensos em soluo fisiolgica 0,9% (p/v) at
obter-se uma turvao equivalente ao padro 0,5 da
escala de Mac Farland.
Alquotas de 100 L dessa suspenso foram
semeadas por superfcie em placas de Petri contendo
cerca de 15 mL do meio Mueller-Hinton gar, com
uma espessura de aproximadamente 4 mm (SHADOMY
& SPNEL-INGROF, 1980).
Ensaios de antibiose
Para a avaliao da AA foi empregado o mtodo da
difuso em gar (BAUERet al.,1966). Aps a semeadura
dos microrganismos no meio, os discos com o mel e os
discos com antibiticos comerciais foram distribudos e levemente pressionados sobre o gar. Foi
mantida uma distncia de 40 mm entre os discos para
evitar interferncia entre os halos de inibio. As
placas foram incubadas 35 C, e aps 24h realizou-se
a leitura dos resultados, que consistiu na medio do
dimetro dos halos de inibio, incluindo o prprio
disco de 6 mm.

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Atividade antimicrobiana do mel da abelha nativa sem ferro

Nannotrigona testaceicornis (Hymenoptera: Apidae: Meliponini).

RESULTADOS E DISCUSSO
Na Tabela 1 esto sumarizados os resultados
obtidos nos ensaios de AA com o mel da abelha
Nannotrigona testaceicornis, e os resultados obtidos nos
testes com antibiticos comerciais frente a 10 diferentes microrganismos, indicando as resistncias e sensibilidades obtidas.
Apesar de estudos de antibiose com produtos
naturais comumente utilizarem cepas de microrganismos padres, neste estudo em especial, foram utilizados microrganismos oriundos de focos infecciosos, visando caracterizar a real potencialidade deste
material no controle de infeces clnicas. Os resultados indicam uma ntida atividade antimicrobiana do
mel de N. testaceicornis frente a E. coli, Proteus spp., P.
aeruginosa, Staphylococcus spp. coag. e S. pyogenes,
todas patognicas.
Este trabalho permitiu verificar alguns dados
importantes, tais como a constatao da alta AA do
mel obtido da N. testaceicornis contra bactrias Gramnegativas (E. coli, Proteus spp. e P. aeruginosa), que nos
testes de antibiose com antibiticos comerciais mostraram-se resistentes respectivamente (AMP, CFL);
(AMP, NIT) e (CLO, SFT, AMP, CIP, CFL); tambm, a
constatao da sensibilidade dos Gram-positivos
Staphylococcus spp. coagulase-negativa e S. pyogenes
que nos testes com antibiticos comerciais mostraram-se resistentes respectivamente (PEN, SFT) e
(SFT, ERI).
O mtodo da difuso em gar, baseado na tcnica
descrita por BAUERet al. (1966) considerada de baixa

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sensibilidade (JAMES et al., 1972), pois a substncia

testada vai se diluindo conforme se difunde no gar.
No entanto, considerado como o ensaio mais apropriado para agentes antibiticos tpicos, porque resgata a avaliao da difusibilidade (ALLEN et al., 1991),
importante para a avaliao do mel, uma vez que este
considerado um agente tpico ideal no tratamento
de infeces cirrgicas, queimaduras e feridas infecciosas (EFEM et al., 1992).
Poucas pesquisas cientficas foram direcionadas
visando a caracterizao das propriedades
farmacolgicas do mel produzido por meliponneos.
CORTOPASSI-LAURINO & GELLI (1991), comparando a AA
dos mis de alguns meliponneos em relao ao de
Apis mellifera, constataram que do total de ensaios de
antibiose realizados, 50% dos microrganismos mostraram-se sensveis. Ao se comparar na literatura, a
AA de diferentes amostras de mel de A. mellifera, frente
aos microrganismos sensveis ao mel de meliponneos
constata-se que estes apresentam uma atividade nitidamente superior aos mis de A. mellifera.
Vrias substncias tais como acares, cidos
orgnicos, diversos elementos qumicos (WHITE, 1975),
vitaminas e flavonides (SABATIER et al., 1992) foram
identificadas no mel. Algumas enzimas secretadas
por glndulas do aparelho digestivo das abelhas so
introduzidas no nctar j a partir de sua coleta, como
a glicose oxidase, que converte a glicose em
glicolactona, produzindo tambm o perxido de hidrognio, este ltimo considerado por muitos autores
como sendo responsvel pela AA constatada no mel
(MENDES & COELHO, 1983).

Tabela 1 - Resultados da atividade antimicrobiana do mel da abelha Nannotrigona testaceicornis, frente a 10 diferentes
microrganismos e os resultados dos testes de controle com antibiticos comerciais.
Microrganismo

Mel

Resistente

Sensvel*

Enterobacter aerogenes
Enterobacter cloacae
Escherichia coli
Proteus mirabilis
Proteus spp.
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Staphylococcus spp. coag.Streptococcus -hemoltico
Streptococcus pyogenes

Resistente
Resistente
Sensvel (19 mm)
Resistente
Sensvel (10 mm)
Sensvel (11 mm)
Resistente
Sensvel (15 mm)
Resistente
Sensvel (14 mm)

AMP, CFO, CFL.

AMP, CFL, CFO.
AMP, CFL.
AMP, CTX, TET.
AMP, NIT.
CLO, SFT, AMP, CIP, CFL.
ERI, SFT.
PEN, SFT.
SFT, ERI.
SFT, ERI.

IPM, GEN, CPM, CRO.

AMI, CLO, GEN, IPM, CPM, CRO.
ATM, IPM, CLO, CIP.
AMI, GEN, CAZ, IPM, ATM, CRO.
AMI, GEN, IPM, ATM.
AMI, GEN, CAZ, IPM.
CLO, OXA, RIF, TET, VAN.
CIP, LVX, VAN, RIF, CLI.
AMP, CLO, PEN, VAN.
VAN, LVX, CRO, CLO.

AMI (amicacina), AMP (ampicilina), ATM (aztreonam), CAZ (ceftazidima), CIP (ciprofloxacina), CLI (clindamicina). CFO
(cefoxitina), CFL(cefalotina), CTX (cefotaxima), CLO (cloranfenicol), IPM (imipinem), TET (tetraciclina), NIT
(nitrofurantoina), SFT (sulfazotrim), ERI (eritromicina), PEN (penicilina G), GEN (gentamicina), CPM (cefepime), CRO
(ceftriaxona), OXA (oxacilina), RIF (rifampicina), VAN (vancomicina), LVX (levofloxacina), Resistente= no houve
desenvolvimento do halo de inibio; Sensvel= medida do halo de inibio em mm, incluindo o prprio disco.
*Medidas padres em mm dos halos de inibio de antibiticos comerciais AMI(17), AMP(18), ATM(20), CAZ(18), CIP(18),
CLI(19), CLO(17), CPM(18), CRO(20), GEN(15), IPM(15), LVX(16), OXA(12), PEN(20), RIF(30), TET(18), VAN(17).

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Estudos sobre antibiose em mis aquecidos

constataram reduo nos valores da AA e uma
concomitante reduo no contedo de perxido de
hidrognio bem como da atividade cataltica da
invertase (WHITE & SUBERS, 1964). Enzimas como
diastase, catalase, -glicosidase, peroxidase,
lipase, amilase, fosfatase cida e inulase, tambm
foram detectadas na composio do mel (HUIDOBRO
et al., 1995), podendo estar relacionadas com sua
AA.
Outros estudos, tambm constataram uma correlao direta entre a reduo no contedo de
perxido de hidrognio e a reduo na AA de mis
expostos a luz, conclundo-se que, quanto mais
secrees as abelhas adicionam ao nctar ou a
solues aucaradas, mais ricas estas ficam em
glicose oxidase e, conseqentemente , a quantidade
de perxido de hidrognio se torna maior,
incrementando desta forma a AA destes mis
(DUSTMANN, 1978). Entretanto outros autores (MOLAN
& RUSSELL, 1988), aps efetuarem a remoo
enzimtica do perxido de hidrognio contido no
mel monofloral, constataram que o mesmo continuava inibindo o crescimento de S. aureus. Baseado
nestes experimentos, estes mesmos autores sugeriram que substncias antibacterianas adicionais, e
no apenas o perxido de hidrognio, proveriam
uma significante parcela da AA do mel. Estes outros fatores estariam relacionados com as fontes
florais do mel.
CORTOPASSI-LAURINO & GELLI, (1984) aps observarem diferenas na AA de mis com diferentes origens
florais, sugeriram que parte desta atividade estaria
associada secrees glandulares introduzidas pelas abelhas.
Estudos de ZUMLA & LULAT (1989), sugerem que o
efeito osmtico, e o baixo pH encontrados no mel,
contribuem para o rompimento da parede da clula
bacteriana. Segundo MOLAN (1992), o efeito osmtico,
o baixo pH e o acmulo de determinados ons, constatados por WHITE (1975) e por PAMPLONA (1994) certamente contribuem para a AA do mel. A presena de
flavonides (S ABATIER et al., 1992), juntamente com o
acmulo de perxido de hidrognio estariam
sinergisticamente atuando na AA final deste composto (WHITE & SUBERS, 1963).
Certamente os estudos efetuados at o presente
momento no permitem concluir com clareza sobre
a real participao de cada um dos fatores fsicoqumicos e bioqumicos sobre a AA do mel. Considerando os resultados obtidos at o momento, novos estudos esto sendo conduzidos com mis de
outras espcies de abelhas-indgenas-sem-ferro,
sendo interessante tambm, utilizar diferentes concentraes do mel para verificar qual possui melhor
AA.

CONCLUSO
O fato de se constatar in vitro, AA do mel da abelha
N. testaceicornis, frente a diferentes microrganismos
isolados de focos infecciosos, demonstra o excelente
potencial teraputico deste produto natural e vem
fortalecer o papel da medicina popular como depositria de conhecimentos milenares que devem ser analisados cientificamente.
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Recebido em 3/11/05
Aceito em 19/12/05

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