AULA PRATICA N ....... DATA: ......./......../2009.

ASSUNTO: contagem global de leuccitos em cmara de Neubauer.

CONTAGEM GLOBAL DE LEUCCITOS
O sangue diludo na proporo de 1:20 com lquido diluidor que hemolisa hemcias
e cora o ncleo dos leuccitos pelo azul de metileno.
SOLUO DILUIDORA
uma soluo hipotnica aquosa de cido actico que destri as hemcias.
cido actico glacial .............................................2,0 ml
Azul de metileno.....................................................1,0 ml
gua destilada q.s.p.............................................100,0 ml
Filtrar anteriormente ao uso.
PROCEDIMENTO
1- Pipetar 0,4 ml do liquido diluidor em um tubo.
2- Pipetar 0,02 ml ( 20 l) de sangue. Limpar sua parede externa com filtro de papel.
3- Transferir os 0,02 ml de sangue para o frasco diluidor, lavando com ele o interior da
pipeta por aspirao e expulso de lquido. A diluio de 1:20.
4- Agitar suavemente por um minuto, no mnimo.
5- Com uma pipeta encher os dois retculos da cmara de contagem, evitando excesso de
lquido e bolhas de ar sob a lamnula, aderida firmemente cmara por compresso daquela
sobre esta, cobrindo ambos os retculos.
6- Deixar repousar por dois minutos para sedimentao dos glbulos.
7- Focalizar a preparao em pequeno aumento no microscpio para localizar o retculo e
observar a distribuio uniforme dos leuccitos. Em seguida, observar com aumento de
100x e 400x conforme a necessidade.
8- Fazer a contagem de todos os leuccitos encontrados nos quatro quadrantes da cmara
de Neubauer, ou seja, 4 mm.
Clculos:
Leuccitos por l de sangue = Lc x 20 x 10
4
Lc = nmero de leuccitos contados em 4 mm.
10 = fator de converso para l.
20 = fator de converso da diluio.
4 = fator de converso para 1 l.

Ou seja:
N de leuccitos contados em 4 mm x 50.
CONTAGEM :
1 quadrante: ............... leuccitos
2 quadrante: ............... leuccitos
3 quadrante: ............... leuccitos
4 quadrante: ............... leuccitos
COMENTRIO
Nas anemias com resposta medular, como na eritroblastose fetal e talassemias, est
presente no sangue quantidade aprecivel de eritroblastos. Essas clulas nucleadas resistem
ao da soluo diluidora para a contagem de leuccitos, sendo, portanto, contadas como
leuccitos. Isso acarreta um erro, elevando a contagem. Torna-se necessria correo do
valor obtido a fim de eliminar os eritroblastos, quando constituem nmero significativo.
A contagem global expressa os valores de leuccitos mais eritroblastos. Na contagem
diferencial so enumerados 100 leuccitos e os eritroblastos que aparecem durante essa
contagem. A contagem global de leuccitos corrigida pode ser expressa da seguinte forma:
Contagem corrigida = Contagem no corrigida (L+E) x 100
100 + E
Onde:
L = leuccitos
E = eritroblastos
Em caso de eritroblastose fetal contamos 99 eritroblastos, em 100 leuccitos, com
uma contagem global de 45.300 leuccitos/ l. Nesse caso, a contagem foi corrigida para
22.763 leuccitos /l.

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ASSUNTO: analise dos diferentes esfregaos sanguneos, para diferenciao celular.
Parte I
NEUTRFILOS
Os neutrfilos tm um ncleo que se cora em prpura e dividido em 2 a 5 segmentos ou
lbulos, conectados por estreita faixa ou filamento de material nuclear.A cromatina
heterognea, algo agregada. O citoplasma azul-plido e cheio de fina granulao que se
cora em lils. Os grnulos so ditos neutrofilicos porque tomam tanto o componente acido
como o bsico do corante. Nas mulheres, uma pequena porcentagem de neutrfilos tem um
pequenino lbulo, em forma de gotcula ou ponta de baqueta de tambor (drumstick) preso
a um dos lbulos maiores, que representa o cromossomo X inativo da clula.

2- EOSINFILOS
Os eosinfilos tm ncleo usualmente bilobulado e citoplasma azul-plido cheio de
grnulos grandes, refringentes, cor de laranja, ditos eosinoflicos por tomarem o corante
acido eosina. Os eosinfilos so produzidos na medula ssea e circulam no sangue por 6
horas, antes de migrar para os tecidos.

3-BASFILOS
Os basfilos tm ncleo lobulado, geralmente escondido pelos grandes grnulos purpreos
que enchem o citoplasma azul-claro. Os grnulos so ditos basoflicos porque tomam os
componentes bsicos dos corantes (como o azul de metileno).

4- LINFCITOS
Os linfcitos so os leuccitos mais numerosos, depois dos neutrfilos. So menores que os
granulcitos, possuem contorno arredondado ou irregular e citoplasma claro, azul-plido;
alguns tm um numero varivel de grnulos azurfilos, prpura-rosado. Os linfcitos
distribuem-se em trs categorias morfolgicas, de acordo com o tamanho, a quantidade de
citoplasma e a presena ou ausncia de granulao: linfcitos pequenos, linfcitos grandes
e linfcitos grandes e granulados. Os linfcitos pequenos so os mais numerosos. A
cromatina nuclear pode ser densa e homognea (particularmente nos linfcitos pequenos)
ou de colorao mais delicada e heterognea (particularmente nos linfcitos grandes).
Alguns linfcitos normais podem mostrar, no ncleo, uma zona redonda, mais clara e mal
definida, o nuclolo.

5- MONCITOS
Os moncitos so as maiores clulas do sangue normal. Tem ncleo lobulado e citoplasma
abundante, azul-acinzentado que pode ser vacuolizado ou conter fina granulao azurfila.
Os moncitos no devem ser confundidos com os linfcitos grandes e granulados, pois
estes tm citoplasma translcido, azul-plido e grnulos bem separados e proeminentes,
enquanto o citoplasma dos moncitos mais opaco, acinzentado e a granulao fina.
Os moncitos tm uma vida intravascular de alguns dias, mas funcionam principalmente
nos tecidos nos quais se diferenciam em macrfagos (tambm chamados histicitos), de
vida longa.

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ASSUNTO: contagem das plaquetas pelo mtodo de Fnio e visualizao das plaquetas no
esfregao sanguneo.
PLAQUETAS
A contagem das plaquetas pode ser realizada em cmara de contagem, com
microscopia de fase; diretamente no esfregao corado, ou nos modernos aparelhos
eletrnicos desenvolvidos para esse fim.

Mtodo de Fnio

Contar 1.000 eritrcitos em diferentes campos, anotando-se o nmero de plaquetas

encontradas.
Paralelamente, fazer uma contagem global dos eritrcitos do modo convencional.
Clculo:

N de Plaquetas x n eritrcitos mmc

Exemplo:
Plaquetas = 70 para 1.000 eritrcitos
Glbulos vermelhos = 5.000.000 por mmc
Plaquetas = 70 x 5.000.000.000
1.000
Plaquetas = 350.000 plaquetas por mmc de sangue.
INTERPRETAO
O nmero normal das plaquetas oscila entre 100.000 e 400.000 por mmc de sangue,
sofrendo variaes constantes, em funo da temperatura ambiente, altitude, exerccios,
jejum, etc.
Seu nmero mais baixo nos primeiros dias de vida e na velhice, como tambm na
gravidez e durante o perodo menstrual.
O aumento do numero das plaquetas denominado trombocitose e sua diminuio
trobocitopenia.

6 - PLAQUETAS
As plaquetas so produzidas nos canais vasculares (sinusides) da medula ssea, pela
fragmentao do citoplasma de grandes clulas chamadas megacaricitos, de modo que no
so propriamente clulas, mas fragmentos celulares.
A plaqueta muita menor que eritrcitos e leuccitos. So de cor azul-plida, com finos
grnulos azurfilos, que se conglomeram na rea central. Quando o sangue anticoagulado
distendido em lmina, as plaquetas ficam separadas umas das outras, mas em certos casos
formam agregados.

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ASSUNTO:
SRIE VERMELHA
1-

2-

3-

4-

5-

6-

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ASSUNTO: analise dos diferentes esfregaos sanguneos, para diferenciao celular.
Parte II
1- Mieloblastos
Os mieloblastos so rarssimos no sangue normal. So maiores que os linfcitos, mas
menores que os moncitos. Tem relao ncleo-citoplasmtica alta, citoplasma um tanto
escasso, fracamente basfilo, isto , azul por tomar corantes bsicos. O ncleo
arredondado, a cromatina difusa e os nuclolos costumam ser visvel.Em paciente com
leucemia e doenas correlatas, o citoplasma pode conter pequeno numero de grnulos
azurfilos, outras incluses ou vacolos. Os mieloblastos so precursores dos neutrfilos,
eosinfilos e basfilos.

2- Promielcitos
Os promielcitos so igualmente raros no sangue normal. So maiores que os
mieloblastos, com citoplasma mais abundante e, conseqentemente, menor relao ncleocitoplasmtica. O citoplasma mais basfilo que o do mieloblasto e contem grnulos
azurfilos primrios de cor prpura-rosada. s vezes h uma zona clara justanuclear, que
representa o aparelho de Golgi, onde so produzidos os grnulos. O ncleo redondo ou
oval, geralmente excntrico, apresenta certa condensao da cromatina e um nuclolo
visvel. Como no possui grnulos especficos (caractersticos de linhagem), promielcitos
precursores de neutrfilos, eosinfilos e basfilos no podem ser distinguidos uns dos
outros.

3- Mielcitos
Os mielcitos so incomuns no sangue de indivduos normais, exceto no perodo
neonatal e na gravidez. So menores que os promielcitos. Possuem grnulos azurfilos
(primrios), mas tambm grnulos secundrios prprios de sua linhagem especifica, isto ,
neutrfilos, eosinfilos ou basfilos. O ncleo redondo ou oval, apresenta condensao
da cromatina e no se v nuclolo.

4- Metamielcitos
Raros metamielcitos neutrfilos, mas no eosinfilos e basfilos, so vistos nos
sangue normal. So semelhantes aos mielcitos, mas diferem pela endentao do ncleo,
em forma de U ou C, e pela falta de grnulos primrios.

5- Neutrfilos bastonados
Os neutrfilos bastonados esto presentes entre os neutrfilos do sangue normal em
pequena porcentagem. A forma do ncleo intermediaria entre a do metamielcito e a do
neutrfilo segmentado: irregular, mas com os bordos paralelos, de modo a assemelhar-se
a um basto ou fita. Difere do neutrofilo segmentado por no haver diviso em lbulos.
Eosinfilos e basfilos bastonados so raros.

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ASSUNTO: realizao dos clculos dos ndices eritrocitrios

NDICES ERITROCITRIOS

HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MDIA (HCM)

Expressa a quantidade mdia da hemoglobina que existe dentro de uma hemcia.
O valor normal varia entre 26 a 34 pg.
A frmula prtica para esse clculo :
HCM = hemoglobina (em gramas) X 10
Eritrcitos (em milhes)

Exemplo: hemoglobina = 16,0 g.

Eritrcitos = 5,0 milhes
HCM = 16,0 x 10 = 160 = 32 pg

VOLUME CORPUSCULAR MDIO (VCM)

calculado dividindo-se o volume globular ou hematcrito (Ht) pelo numero de

eritrcitos presentes nesse volume. O VCM varia entre 82 a 93.
Na prtica, o calculo feito pela frmula:
VCM = ____hematcrito x 10___
Eritrcitos (em milhes)

CONCENTRAO DA HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MDIA (CHCM)

a relao entre o valor da hemoglobina contida num determinado volume de sangue

e o volume globular, sendo expresso em porcentagem.
O valor normal varia entre 32 a 36 %.
A frmula para o clculo da CHCM a seguinte:
CHCM = hemoglobina (em gramas) x 100 = %
Hematcrito
Exemplo: hemoglobina = 16,0 g

Hematcrito = 45,0 %
CHCM = 16,0 x 100 = 1.600 = 35 %
45,0
45,0

O CHCM de 35 % significa que 35 % do volume globular ou hematcrito so

representados pela hemoglobina, ou seja, o CHCM d a quantidade de hemoglobina
presente num determinado volume de sangue.

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ASSUNTO: realizao da prova de falcizacao
PROVA DE FALCIZAO
O sangue deve estar em ambiente fresco e no gelado, para se manter conservado e
sem hemlise.
Estabilidade da amostra:
- temperatura ambiente: 8 horas
- refrigerada (2 8 C): 48 horas
- congelada ( - 20C) : no aceitvel
Mtodo
- Incubao do sangue em soluo de metabissulfito de sdio a 2 %
- Verificao da falcizao eritrocitria.
Valor de referncia
- Ausncia de falcizao
Interpretao
A prova de falcizao feita em sangue total incubado com metabissulfito de sdio
que acelera a desoxigenao, e a preparao lmina/lamnula vedada para impedir a
entrada de ar (oxignio). Este exame apenas qualitativo, sendo o resultado referido como
positivo ou negativo.
Tcnica
Em um tubo de ensaio colocar 10 ml de gua destilada com 2 gramas de metabissulfito de
sdio, homogeneizar durante 5 minutos ou ate a dissoluo completa .
Em uma lamina colocar uma gota da soluo e uma gota do sangue com EDTA
homogeneizado, misturar com o auxilio de um capilar e colocar uma lamnula, sem deixar
formar bolhas e vedar com o auxilio de esmalte.

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ASSUNTO: realizao do esfregao e contagem dos reticulcitos
CONTAGEM DE RETICULCITOS
1-Mtodo
- colorao supravital com azul de cresil brilhante
2- Valor de referncia
- recm-nascido: at 7 %
- 2 semana de vida em diante: 0,5 2,0%
3- Interpretao e comentrios
Exame til no diagnstico diferencial das anemias, como ndice da capacidade
regenerativa eritride. Os reticulcitos se encontram aumentados nas anemias hemolticas,
devido a um aumento da eritropoese, nas anemias por perda de sangue (antes de se
desenvolver deficincia de ferro) e no inicio de teraputica especifica de algumas anemias
(deficincia de ferro ou anemia megaloblstica). Encontram-se diminudos nas anemias
aplsticas, nas anemias ferroprivas, megaloblstica antes to tratamento e insuficincia renal.
4- Tcnica
-100l de azul de cresil brilhante
-100 l de sangue total
Colocar em banho-maria a 37 C durante 20 minutos, realizar o esfregao
sanguneo, secar e fazer a leitura.
Contar o nmero de reticulcitos em 1000 hemcias e realizar a regra de trs.

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ASSUNTO: realizao do exame e leitura do VHS
HEMOSSEDIMENTAO ( VHS)
1- Material
- sangue total com EDTA muito empregado e apresenta valores de referencia ligeiramente
diferentes, do sangue coletado com citrato de sdio.
2-Conservao
- no mximo 6 horas temperatura ambiente.
- refrigerado entre 2-8 C, at 24 horas.
- no congelar
3-Valor de referncia
- Homens : 3 a 10 mm na primeira hora
- Mulheres: 4 a 11 mm na primeira hora
4-Preparo:
- jejum de 4 horas
5- Mtodo
Homogeneizar o sangue e com o auxlio de uma pra encher um tubo de
Westergren ate a medida indicada, aguardar uma hora e realizar a leitura.
6- Desenho: