Os carotenides esto presentes nos tecidos fotosintticos

Eles tm papis essenciais na fotorrecepo e

Fotoproteo, bem como em tecidos no-fotossintticos,
Onde atuam como corantes, precursores do isoprenide vegetal
Volteis e molculas sinalizadoras (cido abscsico e
Strigolactones), antioxidantes nutricionais e vitamina A
Precursores. Esta reviso apresenta os recentes avanos
Compreenso da sua biossntese, os principais passos metablicos
Controlando sua acumulao em plantas no-fotossintticas
Tecidos e sua engenharia metablica utilizando
Abordagens.
Genmica vem da idade
A batata e o tomate tm sido amplamente utilizados
Passado para esforos de engenharia metablica. Seqenciamento de
Seus genomas revelaram vrios novos genes
Na biossntese de carotenides e sua regulao. Em ambos
Plantas, a primeira enzima dedicada da via, sintetase de fitoeno (PSY) (Figura 1a), codificada por
trs genes, dois dos quais (PSY1 e PSY2) mostram expresso em a maioria dos tecidos, enquanto a
expresso de PSY3 muito baixa e confinado s razes. O par PSY1-PSY2 foi gerado por a
triplicao do genoma total de Solanum, aproximadamente 70 milhes de anos atrs (mya),
enquanto a origem de PSY3 parece mais antigo. A expresso Padro do Solanum PSY1 permaneceu
geralmente similar ao de sua contraparte PSY2 at recentemente (0,5-1 mya), quando a sua
superexpresso em frutos deu origem ao licopeno padro de acumulao caracterstico dos frutos
vermelhos tomate e S. pimpinellifolium. PSY e ZISO so os dois mais genes expressos na via
carotenide em frutos de espcies frutferas vermelhas, enquanto so expressas em nveis baixos em
frutos de espcies com fruto verde. PSY1 absolutamente necessrio para o acmulo de licopeno
em frutos de tomate, funo de ZISO pode ser parcialmente substituda pela luz.
PSY um regulador chave da acumulao de carotenides culturas de base como o milho, o trigo
duro e mandioca. Um nico polimorfismo nucleotdico em um PSY altamente expressa em razes de
mandioca co-segrega com nveis elevados de b-caroteno. Este polimorfismo resulta em mudana de
aminocidos nica numa regio altamente conservada de a protena que, quando testada em E. coli,
resulta em aumento da atividade cataltica. Uma comparao sistemtica mostraram que os genes
PSY de diferentes fontes vegetais diferiram muito em sua capacidade de induzir acumulao
De b-caroteno no endosperma de arroz dourado, com arroz e PSY de milho sendo o mais eficiente.
Um recente levantamento de vrias enzimas PSY de diferentes fontes mostraram que a maioria
deles se localiza em plastoglobules, com exceo do milho PSY1, que localiza Preferencialmente
no estroma.
PSY parece ser um integrador chave para vrios sinais regulando a via carotenide. Na Arabidopsis,
o Factor de transcrio que interactua com fitocromo PIF1
Interage directamente com o promotor do gene PSY, Mediando sua transcrio regulada pela luz.
Em Tomate, o MADS caixa regulador de amadurecimento, RIN, interage com o promotor PSY. A
sobreexpresso em tubrculos de batata da couve-flor ou regulador, um Chaperona capaz de induzir
a formao de cromoplastos Heterlogos, resulta em aumento do PSY estabilidade. O tomate Stay
Green SlSGR1 protena Regula o acmulo de licopeno e b-caroteno Atravs da interao direta com
a enzima PSY. Finalmente, props-se que a epistasia no tomate Mutaes envolvem a regulao da
expresso de PSY1 por Cis-carotenides.
B-caroteno hidroxilase (CHY) e licopeno e-ciclase (LCY-e) so reguladores importantes do bcaroteno e do Acmulo de carotenides no milho. Mutaes no LCY-e

Locus redireciona o fluxo para o ramo-b, aumentando o contedo de b-caroteno; Os alelos CHY
associados expresso reduzida da transcrio correlacionam-se com concentraes mais elevadas
de b-caroteno. Na batata, o silenciamento transgnico dos genes CHY e LCY-e resulta em aumento
do teor de caroteno beta e de carotenides totais. Um alelo dominante de CHY2 est associado com
acmulo de carotenides, especialmente b-xantofilas, em batata e o gene CHY2 mais expresso no
gentipo de batata de alta carotenide DM do que no RH de baixo carotenide. Um segundo gene
que controla principalmente a acumulao de zeaxantina na batata zeaxantina epoxidase (ZEP)
(Figura 1). Os alelos de perda de funo da ZEP, ou silenciamento do gene ZEP, causam um
acmulo de zeaxantina.
A sequenciao do genoma do pssego ajudou a Base molecular do carotenide alto, caracterstica
de carne amarela Em pssego. A carne branca dominante sobre o amarelo no pssego,
E est associado com aumento da emisso de isoprenide Volteis, provavelmente derivados da
clivagem de carotenides Molculas, sugerindo que o trao devido a uma mutao de ganho de
funo em uma dioxigenase de clivagem de carotenides.
A anlise de uma cultivar de cor amarela e de seu mutante de pele branca mostrou que um transcrito
de CCD4 era Induzida no mutante. Anlise de um gentipo maior Coleo sugeriu que a cor de
carne branca (CCD4) foi a situao ancestral em pssego e que Os gentipos de cor amarela
surgiram em cultivares modernas Atravs de trs mecanismos mutacionais independentes
(Substituies de nucletidos, inseres pequenas e inseres de elementos transponveis).
CCD4 tambm um determinante chave de carotenoid pigmenta-Nas ptalas de crisntemo e de
Lilium. Em Contraste, em ptalas de Calendula CrtISO um determinante chave. CCD4 tambm
um determinante chave de carotenide / Teor de apocarotenides em tubrculos de batata,
Arabidopsis Sementes e folhas senescentes e frutas ctricas. Em Arabidopsis e batata, os nveis de
CCD4 correlacionam-se inversamente Com pigmentao, enquanto em Citrus o oposto
verdadeiro. Isso ocorre porque Citrus CCD4 assimetricamente cliva b-Caroteno e zeaxantina na
posio 7,8, dando origem a Apocarotenides C30 no-volteis (Figura 1a), que Acumular no
flavedo de frutas e contribuir para a sua
pigmentao. Na batata, a inibio de RNAi de CCD4 causou Acumulao de carotenides, mas
tambm uma srie de Fentipos de desenvolvimento, sugerindo a intri-Hiptese de que um produto
de clivagem CCD4 pode Tm um papel de sinalizao, ou que CCD4 silenciamento em tubrculos
Reorienta o fluxo para outros caminhos de clivagem com um Papel de sinalizao (NCED, dando
origem a ABA e / ou CCD7 / 8, Dando origem a strigolactones).
Usando transformao biolstica. Diferentes combinaes de transgenes expressos, de nenhum a
todos os cinco, Foram recuperados numa distribuio aproximadamente normal.
Esta abordagem foi trazida um passo adiante, empilhando
Dois genes carotenides e um gene de cada um dos caminhos de ascorbato e folato para obter milho
simultaneamente Fortificado com b-caroteno (provitamina A), vitamina C e
Folato.
Uma terceira abordagem a expresso de diferentes genes (CrtB e CrtI) como um nico transcrito
sob o controlo de Um nico promotor. O produto do gene a jusante expressa quer atravs da
insero de um ribossomal interno (IRES) a partir de um vrus de plantas, ou inserindo
Entre as duas proteas uma protea de auto-clivagem (2A) a partir de um vrus animal. A
poliprotena Construo nove vezes mais eficiente do que o IRES
Em endosperma de arroz e tem sido utilizado Para aumentar os nveis de carotenides e b-carotenos
Sementes de soja. Uma quarta abordagem, aplicvel em princpio a qualquer via de biossntese
localizada por plastidios, a expresso de Mltiplos genes como um nico opero inserido em
plastidio ADN. Esta abordagem pode ser utilizada para inserir biossntese Caminhos de um
organismo diferente, ou de um Compartimentos celulares, aos plastidios: os genes CrtZ e CrtW para
Biossntese de astaxantina tm sido sobrexpressas Tabaco e alface. Numa abordagem separada,
A via citoplasmtica total de mevalonato para a biossntese de IPP foi transferida para plastidios de
tabaco.

A funcionalidade da via transferida foi demonstrada atravs da resistncia fosmidomicina (um

inibidor
Do percurso MEP). Plantas transplastomic acumulou nveis mais elevados de carotenides, esteris
e triacyglycerols do que plantas de controle.
Em geral, os carotenides acumulados em plantas engendradas com genes mltiplos so
consistentes com a funo dos transgenes introduzidos, com uma srie de
Excepes interessantes:
Engenharia gentica mltipla
A sobre-expresso estvel de mltiplos transgenes uma
Dos principais gargalos que limitam a reconstruo de vias bioqumicas complexas. Exemplos
iniciais de engenharia de mini-caminho-caminho em arroz, tomate e batata empregaram 2-3
transgenes clonados em uma nica construo de Agrobacterium. Mais recentemente, at sete genes
carotenides bacterianos diferentes (a partir de pirofosfato de isopentenilo
Isomerase (IPI) a CrtW, Figura 1), foram montados
Em uma nica construo de Agrobacterium e usado para transformar
Canola e Lilium.
Uma segunda abordagem para a engenharia de mini-vias a transformao combinatria de
construes de genes independentes.
Cinco transgenes independentes, de PSY a CrtW
(Figura 1), foram introduzidos num milho endosperma branco
(I) A CrtI dessaturase / isomerase multifuncional utilizada em muitas experincias de engenharia
metablica
Incapaz de catalisar a converso completa do fitoeno
Em compostos a jusante, sugerindo que
Parte do pool do phytoene inacessvel ao CrtI.
Fracionamento de cromoplastos transgnicos de tomate
Sobreexpresso de CrtB + CrtI mostrou que o fitoeno
Principalmente em plastoglobules, enquanto o
As enzimas CrtB e CrtI foram localizadas
Frao de membrana. Uma srie de enzimas para
Carotenides so conhecidos por se localizarem
Plastoglobules, incluindo ZDS, LCY-b, CHY e
CCD4, enquanto PSY1 foi relatado como
Ser localizados em plastoglobules e estroma.
(Ii) Um transgene de licopeno b-ciclase (LCY-b) no
Necessrios para a acumulao de b-caroteno em
Tecidos vegetais (frutos de tomate e milho e arroz
endosperma). Todos os trs tecidos que sobre-expressam CrtB /
PSY + CrtI acumulam nveis significativos de bcaroteno. A expresso de LCY-b endgena provavelmente a causa deste fentipo.
(Iii) Em plantas transformadas com mltiplos genes bacterianos
Para a produo de astaxantina, a biossntese
Frequentemente presos em compostos intermedirios, tais
Equinenona, 3 0-OH-equinenona, cantaxantina e
Adonixantina (Figura 1b). Esta limitao
Pode ser superada pela utilizao de cetolases algais e
Hidroxilases mostrando co-operative, em vez de
Antagonista ou por transformao de plastidios.

Observaes finais
Nos ltimos anos, a disponibilidade de ferramentas genmicas, incluindo seqncias de genomas
inteiros, revelou uma srie
De loci de traos quantitativos (QTLs) que controlam carotenides
Acumulao em plantas agrcolas. Estes QTLs podem agora
Ser utilizados em programas de melhoramento para otimizar
Carotenide. Ao mesmo tempo, ferramentas avanadas
Para a engenharia dos genomas nucleares e plastidios tm
Desenvolvidas, incluindo a transformao nuclear combinatria e elementos cis artificiais para a
expresso em cromoplastos. A disponibilidade adicional de
Ferramentas de biologia sinttica e modelos metablicos
A compartimentao subcelular e a especificidade dos tecidos melhorar drasticamente a nossa
capacidade
Para manipular a biossntese de carotenides de plantas para biofortificao e aplicaes de qumica
verde.