Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de Alimentos

Quadro 9.1. "Kits" analticos oficializados pe1aAOAC (Association ofOfficialAnalytical Chemists) para a contagem de
coliformes totais e/ou E. coliem alimentos).

Analito Fabricante Nome do "kit Validao Aplicao

Coliformes BioControl Systerns, Colitrak AOAC Official Method Todos os alimentos
totais e E. coZi Ine. 966.24
Coliformes 3M Microbiology Petrifilm Coliform Count AOAC Official Methods Carnes, aves, pescados e
totais Products Plate 986.33,989.10,991.14 produtos de pesca,
alimentos
Coliformes BioControl Systems, ColiTrak Plus AOAC Official Method Todos os alimentos
to tais e E. coZi Inc. 988.19
Coliformes 3M Microbiology Redigel Violet Red Bile AOAC Official Method Produtos lcteos
totais Products Medium for Coliform 989.11
E. coZi 3M Microbiology Petrifilm E. coZi Count Plate AOAC Official Methods Alimentos, carnes, aves,
Products 991.14,998.08 pescados e produtos de
pesca
Coliformes Idexx Laboratories Colilert AOAC Official Method gua
totais e E. coZi Ine. 991.15
Coliformes BioControl Systems, ColiComplete AOAC Official Method Todos os alimentos
to tais e E. coZi Ine. 992.30
Coliformes 3M Microbiology Petrifilm High Sensitivity AOAC Official Method Produtos lcteos
totais Products Coliform Count Plate 996.02
Coliformes 3M Microbiology Petrifilm Rapid Coliform AOAC Official Method Alimentos
totais Products CountPlate 2000.15
Coliformes BioControl S} tems, SimPlate Coliform and E. coZi AOAC Official Method Alimentos
to tais e E. coZi Inc. Colar Indicator (CEc-CI) 2005.03
Fontes: Horwitz (2000) e AO.\C International <http: www.aoac.orz testkits/kits-microbiology.htm>, acesso em 10/02/06.

9.2. MTODO DO NMERo MAIS PROVVEL (NMP)

(Coliformes Totais/Termotolerantes/E. coZi)

Mtodo da American Public Health Association (APHA), descrito no Captulo 8 da 4 Edio

do Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods (Kornacki & ] ohnson, 2001).
Includas tambm as recomendaes especficas do Captulo 7 do Standard Methods for the
Examination of Dairy Products (Davidson et al., 2004), para a anlise de produtos lcteos, e as da
Seo 9221 do Standard Methods for the Examination ofWater and Wastewater (Hunt & Rice, 2005),
para a anlise de gua. Aplicao: anlise de gua e de todos os alimentos.
Antes de iniciar as atividades, ler atentamente as orientaes do Captulo 4, que apresenta
todos os detalhes e cuidados envolvidos na contagem de microrganismos pelo NMP, da seleo
das diluies ao clculo dos resultados. O procedimento descrito abaixo no apresenta esses
detalhes, pressupondo que sejam conhecidos pelo analista.

9.2.1. MATERIAL REQUERIDO PARA A ANLISE

Preparaco da amostra e diluies seriadas
Diluente: gua Peptonada 0,1 % (H20p) ou Tampo Fosfato pH 7,2 (PB)
Tubos de diluio com 9mldeguaPeptonadaO,1 % (~Op) ou o Tampo Fosfato pH 7,2 (PB)
Pipetas de 1 ou 2ml
Observao: consultar o Anexo 2.2 do Captulo 2 para verificar casos especiais em que o tipo
ou volume de diluente variam em funo da amostra analisada.

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 Contagem de Colifonnes Totais - Colifonnes Termotolerantes -Escherichia coli

Contagem de coliformes totais e termo tolerantes

Tubos de Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST) com tubos de Durhan
Tubos de Caldo Verde Brilhante Bile 2% (VB) com tubos de Durhan
Tubos de Caldo E. coli (EC) com tubos de Durhan
Cepa padro positiva (cultura de E. coli com 24 horas)
Cepa padro negativa (cultura de E. aerogenes com 24 horas)

Contagem de E. coli (mtodo tradicional para alimentos) (opcional)

Placas de gar Levine Eosina Azul de Metileno (L-EMB)
Tubos de gar Padro para Contagem (PCA) inclinados
Tubos de Caldo Citrato de Koser ou gar Citrato de Simonns
Tubos de Caldo Triptona 1%
Tubos de Caldo VM-VP
Reagente de Kovacs para teste de indol
Soluo de Vermelho de Metila para teste de VM
Reagentes de Barrit para teste de VP (soluo de alfa-naftol 5%, soluo de KOH 40%,
creatina em cristal)

Contagem de E. coli (mtodo EC-MUG para gua) (opcional)

Tubos de Caldo E. coli com 4-metilumbeliferil-~-D-glicurondeo (EC-MUG)

Contagem de E. coli (mtodo do indol para gua) (opcional)

Tubos de Caldo Triptona 1%
Reagente de Kovacs para teste de indol

Incubao
Estufa incubadora regulada a 35O,5Ccom termmetro calibrado
Banho-maria de temperatura controlada a 45,5O,2C (para alimentos em geral) com
termmetro calibrado
Banho-maria de temperatura controlada a 44,5O,2C (para gua, pescados, moluscos)
com termmetro calibrado

9.2.2. PROCEDIMENTO
O esquema de anlise de coliformes totais, termo tolerantes e E. coli pelo mtodo do Nmero
Mais Provvel encontra-se descrito nas Figuras 9.1 (anlise de alimentos) e 9.2 (anlise de gua).

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 Manual de Mtodos de Anlise Microbiolgica de Alimentos

Homogeneizao

25g de amostra +
225ml de gua
Peptonada (H,Op)

TESTE
PRESUNTIVO

35O,5"C/24-482h

Tubos de LST
Crescimento e produo de gs

1 alada 1 alada

TESTE CONFIRMATIVO E coli TESTE CONFIRMATIVO

COLlFORMES COLlFORMES TOTAIS
TERMOTOLERANTES I ~enes

Caldo EColi (EC)

45,5O,2"C/242h
"~~ "M
Banho-maria
~J
""'''T~''2h
(gua, moluscos e crustceos)
~
~
C",,, Verde Brilhante
35O,5"C/24-482h
B". (VB) 2%

I Tubos confirmados

CONTAGEM DE CONTAGEM DE
COLlFORMES COLlFORMES TOTAIS
TERMOTOLERANTES NMP/g
NMP/g

1 alada
Aps 482h (incubao)

Confirmao de Eco/;

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 Contagem de Coliformes Totais - Coliformes Termotolerantes -Escherichia coli

1 Estrias de esqotarnento

O qar L",,, EM'" Azu de Metileno (L-EMB)

1 35C/24h
Colnias Tpicas

~ gac Padro para Contaqern (PCA)

135'CI24h

Srie Bioqumica

Colorao de Gram

~
~
Caldo Citrato de K~,
Agar Citrato de Simonns
ou
~ Caldo VM-VP
~d B,,,L,,I;,:~"J"",
Caldo Triptona 1%

I I
35C/48h (VP) I
35C/96h 35C/24h
35C/96h (VM)

1
TESTE DE CITRATO (-) I I
~
TESTE DE VP(-) VM (+) I I
1
TESTE DE INDOL (+) ou (-)

Tubos confirmados

CONTAGEM DE E.coli
NMP/g

Figura 9.1. Esquema de anlise de coliformes totais, termotolerantes e E. coli em alimentos pelo mtodo do NMP
(Kornacki &Johnson, 2001).

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