Universidade de So Paulo

Instituto de Cincias Biomdicas

Disciplina de MICROBIOLOGIA
Profa. Dra. Beatriz L. Fernandes

Clostridium sp

Adriana Dati
Ana Carolina Soares
Elisabete Maia
Fernanda Machado
Fernanda Palone
Juliana Duarte
Priscila Losano
Talita Carnaval
Soraya Akemi
ODONTOLOGIA - DIURNO
 Clostridium sp

Generalidades
A palavra Clostrdio origina-se do latim clostridium = fuso.
Os clostrdios so bastonetes, a maioria anaerbios obrigatrios, mas algumas crescem em condies
microaerfilas. So Gram positivos, mveis e grandes. Muitos decompem protenas e/ou formam toxinas.

Habitat
Distribuio ubqua. Tm como habitats preferenciais o trato gastro-intestinal de animais e seres humanos e
em pele e tecidos moles.

Caracterstica do crescimento
Por ser anaerbio, incapaz de utilizar o O2 como aceptor final de hidrognio. Estes organismos carecem
de citocromo e de citocromo-oxidase sendo incapazes de degradar o perxido de hidrognio, uma vez que no
possuem catalase. Dessa forma, o perxido tende a acumular-se em concentraes txicas quando na presena
de O2.
Os clostrdios tambm carecem de superxido desmutase permitindo o acmulo do nion txico
superxido.
Esses microorganismos s conseguem realizar seu metabolismo normal quando sujeitos a um potencial de
reduo negativo, isto , fortemente redutor (ex: ausncia de O2).
Podem fermentar acares, digerir protenas e ainda formar toxinas.

Cultura
Crescem apenas em condies anaerbias de cultura:
1. Placas de gar ou tubo de cultura so colocados em ambientes hermeticamente fechados nos quais o ar
substitudo por nitrognio com CO2 a 10% (o O2 tambm pode ser eliminado por outros mtodos como
Gaspack).
2. Meios lquidos colocados em tubos profundos contendo tecido animal ou gar de um agente redutor como
o tioglicolato. Dessa forma o crescimento bacteriano se dar de baixo para cima, j que a superfcie est
exposta ao ar.

Formas de colnias
Colnias elevadas com margens bem delimitadas (Clostridium perfringens)
Colnias menores que se estendem em redes de filamentos finos (Clostridium tetani)
Muitos clostrdios deixam no meio de cultura, zona de hemlise (Clostridium perfringens no gar sangue)

Motilidade
A maioria dos Clostrdios mvel possuindo flagelos peritrquios. Exceo: Clostridium perfringens.

Formao de endoesporos
Normalmente o esporo tem um dimetro maior que o bastonete dos quais se formaram. Pode ter
localizao central, subterminal ou terminal.

Esporulao
1. Material nuclear espalhado
2. Formao do filamento de DNA
3. Invaginao da membrana citoplasmtica para formar o pr-esporo
4. Septo do pr-esporo completo
5. Desenvolvimento completo do pr-esporo
6. Capa do esporo sintetizada e crtex completo
7. Lise da clula me (esporngio)
8. Os esporos livres germinam e crescem para formar a clula vegetativa.
Quando os esporos so liberados da clula me, podem sobreviver ao calor, ao dessecamento intenso e a
exposio a diversos compostos qumicos txicos. O que leva a essa resistncia tem sido alvo de diversas
pesquisas. No entanto, acredita-se que os fatores que conferem a resistncia so:
Presena de enzimas termoestveis
Ausncia de gua livre
 Alto contedo de minerais como o clcio
Presena de cido dipicolnico (DPA).

O processo de esporulao pode ser induzido por:

Ligeira variao de temperatura e pH em relao aos valores timos para o crescimento da clula
vegetativa
Aumento da disponibilidade de O2.

Composio do esporo (de fora pra dentro)

- Exsporo
Uma camada fina e delicada, a mais externa.
- Capa do esporo
Camada formada por varias protenas
- Crtex
Formado por peptideoglicano fracamente cruzado
- Core
Segue-se parede celular, membrana plasmtica e ao nucleide.

Transformao do esporo em clula vegetativa germinao

Este processo dividido em 3 estgios:
1. Ativao: quando ativado pelo calor ou substncias qumicas ocorre a quebra da permeabilidade do
esporo, ruptura qumica da capa e do crtex e a ativao do metabolismo de carboidratos.
2. Germinao: um sulco criado na capa do esporo servindo para a entrada de gua. Esta causa a
oxidao da glicose, o consumo de O2 e a eliminao de parte da massa seca do esporo. Ocorre a perda
de resistncia do esporo.
3. Crescimento: significativo intumescimento do esporo, com formao de membrana e parede celular. A
clula recm formada emerge da capa e alonga-se.

TTANO
Agente Etiolgico: Clostridium tetani.
um bacilo mvel, Gram positivo encontrado no solo de todas as partes do mundo e no trato gastro-
intestinal de muitos animais, incluindo os seres humanos.
Produz endsporo oval terminal, o que lhe confere uma forma inquestionvel de raquete.
Sua temperatura tima de crescimento de 37C. So metabolicamente inativos e tm uma extrema
sensibilidade toxicidade do oxignio, o que torna o crescimento e identificao do microorganismo difcil.

Patogenia
O Clostridium tetani produz duas toxinas: uma hemolisina oxignio-lbil (tetanolisina) e uma neurotoxina
termolbil (tetanospasmina).
A tetanospasmina sintetizada durante a fase estacionria de crescimento, liberada quando a clula
lisada e a responsvel pelas manifestaes clnicas do ttano. Essa neurotoxina codificada por plasmdeos e
sintetizada como um polipeptdio de cadeia simples, com 150KDa. Esse polipeptdio clivado por proteases
bacterianas e do hospedeiro em duas cadeias, uma de 100KDa que dita pesada, e outra de 50KDa e dita
leve.
A cadeia pesada liga-se a um receptor de superfcie sobre a membrana neuronal e atua bloqueando a
liberao de neurotrasmissores e sinapses inibitrias, causando assim uma desregulao da atividade sinptica
excitatria (paralisia espstica). A ligao da toxina irreversvel, de modo que a recuperao depende da
formao de novas terminaes axoniais. Porm, ao contrrio do Clostridium botulinum, no h interferncia na
transmisso da acetilcolina.
A cadeia leve da toxina internalizada em compartimentos semelhantes ao endossoma e transportada das
terminaes nervosas perifricas para o sistema nervoso central por transporte axonal retrgrado.
A doena ocorre aps a introduo dos esporos na leso, que em baixo potencial redox so capazes de
germinar e multiplicar-se. A toxina liberada no organismo aps a lise celular e ento se liga a junes
neuromusculares dos neurnios motores para ento serem endocitadas. Por transporte retrgrado, atravs dos
axnios, a tetanospasmina chega ao sistema nervoso central e ento impede a liberao de neurotrasmissores
bloqueando os impulsos inibitrios aos neurnios motores, e conseqentemente levando a uma paralisia
espstica.
Sintomatologia / Manifestaes Clnicas
O perodo de incubao do ttano varia de poucos dias a algumas semanas, e a durao desse perodo
est diretamente relacionada distncia entre a infeco primria da ferida e o sistema nervoso central.
Existem vrias formas de ttano:
Generalizado, que a forma mais comum. Na maioria dos casos o primeiro sinal e o comprometimento do
msculo masseter que recebe o nome de trismo. O riso sardnico, devido contrao contnua dos
msculos faciais tambm outra caracterstica marcante. Outros sinais como sudorese, salivao
irritabilidade e espasmos dorsais persistentes (oposttono), so caractersticas marcantes do ttano
generalizado. No caso de doena mais grave, o sistema nervoso tambm afetado, e os sinais e
sintomas incluem arritmias cardacas, flutuao da presso arterial, sudorese acentuada e desidratao.
Localizado, em que a doena permanece restrita musculatura no local da infeco primria.
Ceflico, em que a cabea o local primrio da infeco.
Neonatal, a infeco inicial ocorre no coto-umbilical e progride a uma infeco generalizada.

Diagnstico
O diagnstico do ttano estabelecido com base nas manifestaes clnicas. A deteco microscpica ou o
isolamento do Clostridium tetani so teis, mas freqentemente no tem xito, pois uma porcentagem muito
pequena dos infectados, apenas 30%, apresenta cultura positiva, visto que a doena pode ser causada por um
nmero relativamente pequeno de microorganismos e as bactrias de crescimento lento so rapidamente
destrudas quando expostas ao ar.
O ttano tambm pode ser confundido com afeces da boca que se fazem acompanhar de trismo como
abscesso dentrio, periostite alvolo-dentria, erupo viciosa do dente do terceiro molar, fratura e/ou
osteomielite da mandbula, abscesso amidaliano e/ou retrofarngeo.

Preveno e Tratamento
O tratamento do ttano requer desbridamento da ferida primria, administrao de metronidazol,
inumizao passiva com imunoglobulina antitetnica humana e vacinao com toxide tetnico. Os cuidados
com a ferida e o tratamento com metronidazol eliminam as bactrias vegetativas que produzem toxinas,
enquanto os anticorpos antitoxina ligam-se s molculas de tetanospasmina livre. A toxina ligada s terminaes
nervosas protegida dos anticorpos. Por conseguinte, os efeitos txicos devem ser controlados
sintomaticamente at o restabelecimento da regulao normal da transmisso sinptica. A vacinao com uma
srie de trs doses de toxide tetnico e doses de reforo a cada dez anos altamente eficaz na preveno do
ttano.
O ttano uma doena que no pode ser transmitida de um doente para outro, to pouco confere
imunidade. Para evitar essa doena, a populao deve ser adequadamente vacinada.

BOTULISMO
Agente Etiolgico
uma doena causada por exotoxinas produzidas pelo Clostridium botulinum, um bacilo Gram-positivo
anaerbio, formador de esporos ovais e subterminais e que apresenta flagelos peritrquios. Tem como hbitat
natural o solo, a poeira e sedimentos marinhos, podendo ser encontrados em agroprodutos frescos ou
industrializados. Essa espcie produz oito tipos de toxina, de natureza protica, denominadas A, B, C1, C2, D, E,
F e G, sendo apenas os tipos A, B, E e F causadores da doena no homem.
Atualmente, so conhecidas trs formas de botulismo:
Botulismo clssico, causado pela ingesto de alimentos contendo as neurotoxinas;
Botulismo de leses, doena infecciosa causada pela proliferao e conseqente liberao de toxinas
em leses infectadas com o C. botulinum;
Botulismo infantil, tambm uma doena infecciosa causada pela ingesto de esporos do C. botulinum e
subseqente germinao, multiplicao e produo da toxina no intestino de crianas com menos de um
ano de idade.
De modo geral, uma cepa de C. botulinum produz somente um tipo de toxina. A produo desta ocorre
durante a multiplicao bacteriana, mas apenas uma pequena quantidade liberada para o ambiente nesta fase.
A liberao maior e significativa quando se inicia o processo de lise da clula bacteriana.

Toxina / Patogenia
As toxinas do C. botulinum esto entre as substncias mais txicas conhecidas. So destrudas pelo calor a
100C durante vinte minutos e, sua a dose letal para o ser humano prxima a 1-2 g.
 So protenas neurotxicas de estrutura e ao semelhantes, constitudas de cadeias pesadas e leves,
unidas por uma ligao de dissulfeto. Com exceo da toxina C2, as demais apresentam ao neurotxica.
A toxina age atravs do bloqueio da liberao do neurotransmissor nas junes neuromusculares, sem
interferir na funo sensorial do hospedeiro. Tanto os sistemas colinrgicos quanto os adrenrgicos so afetados,
sendo necessria uma concentrao maior de toxina para inibir a liberao de noradrenalina comparada de
acetilcolina.
O mecanismo neurotxico tem incio com a ligao da toxina aos stios receptores na membrana pr-
sinptica, seguida pela internalizao da toxina e bloqueio da liberao do neurotransmissor. Depois que a toxina
sofre a internalizao, no mais possvel bloquear seu efeito neurotxico.
A toxina botulnica tem sido usada para tratamento de doenas relacionadas a contraes musculares
indesejveis e para o tratamento esttico, Botox, em concentraes muito menores quelas que causam a
doena.

Sintomatologia
O botulismo apresenta quatro quadros clnicos denominados: perodo de incubao (assintomtico),
perodo de invaso (nervoso, respiratrio, digestivo ou misto), perodo de estado e perodo de declnio.
O de origem alimentar e o de leses produzem sintomas que afetam o sistema nervoso, mas as pessoas
mantm um estado mental claro at pouco antes da morte. Os sintomas podem incluir viso embaada ou viso
dupla, sensao de boca seca, dificuldades para engolir, diminuio da presso arterial e reteno de lquidos.
Fraqueza e paralisa muscular so sintomas que indicam o incio da ao da neurotoxina.
Em algumas pessoas, a doena causa paralisia respiratria e pode provocar a morte. Bebs com botulismo
freqentemente apresentam priso de ventre, param de comer e ficam apticos, podendo apresentar sintomas
mais graves do sistema nervoso posteriormente.

Diagnstico
Histria alimentar e exame fsico do paciente nem sempre so suficientes para estabelecer o diagnstico,
pois existem outras doenas parecidas com o botulismo. A forma mais direta para se confirmar a doena
demonstrar a presena da toxina botulnica atravs da injeo das fezes no caso do botulismo alimentar e infantil
e do soro, no caso do botulismo por leses em camundongos. Depois, observa-se o desenvolvimento de
sintomas nesses animais.
A coleta do sangue do paciente para investigao da toxina deve ser feita precocemente, pois, se tardia,
pode impedir a deteco da toxina, que rapidamente absorvida pelos tecidos (aps oito dias do incio da
doena a toxina no mais encontrada).

Tratamento
O tratamento dever ser realizado em unidade de terapia intensiva e divide-se em duas fases igualmente
importantes: o tratamento especfico e o geral.
O especfico realizado com o uso de soro antibotulnico - caso a doena seja diagnosticada precocemente
- com antitoxina tri, penta ou heptavalente, que atua contra a toxina circulante e no contra aquela que j se fixou
no sistema nervoso.
O tratamento geral inclui medidas para eliminar a toxina do aparelho digestivo, antibiticos (essa terapia
com agentes antimicrobianos questionada uma vez que a lise da bactria no intestino poderia aumentar a
disponibilidade de toxina), hidratao e alimentao balanceadas e assistncia respiratria entre outras.
A recuperao da doena lenta e no existem remdios ou soro que eliminem a toxina do organismo.

Preveno
A preveno do botulismo consiste na realizao de educao sanitria: os alimentos que sero
conservados devero estar absolutamente limpos; as carnes devem provir de animais sacrificados e preparados
com as mais rigorosas medidas higinicas; quando conservados em salmoura, a concentrao de NaCl deve ser
superior a 15% e quando em cido actico, a concentrao deste no deve ser inferior a 2%; a esterilizao
industrial deve ser feita em autoclave a 120C, durante prazo varivel.
No indivduo exposto deve-se provocar o vmito e a evacuao intestinal imediata, seguidos por
soroterapia por via intramuscular.

BOTOX
 As marcas da expresso aparecem na face, na forma de sulcos ou rugas e so provocadas pela ao dos
msculos. Estes, sendo contrados repetidas vezes, ficam atrofiados e com a tonicidade aumentada, formando os
sulcos e as rugas. A toxina Botox usada ento, em pequenas doses, para corrigir essas marcas.
A tcnica consiste em injetar a substncia no msculo, obtendo-se assim uma paralisia temporria, de
msculos desnecessrios, com o desaparecimento das rugas mais leves e atenuao das mais profundas.
A durao deste efeito de seis meses e a aplicao pode ento ser repetida.

INTOXICAO ALIMENTAR E INFECO INVASIVA

Agente etiolgico: Clostridium perfringens

um grande bacilo, Gram positivo, cujos esporos so raramente observados; um dos poucos clostrdios
imveis, cresce rapidamente em tecidos e culturas (sendo favorecido por um ambiente anaerbio), hemoltico e
metabolicamente ativo. A produo de quatro toxinas letais principais de C. perfringens (toxinas alfa, beta, psilon
e iota) utilizada para subdividir os microorganismos isolados em cinco tipos (A a E).
O do tipo A o responsvel pela maioria das infeces humanas, como gangrena gasosa, infeces dos
tecidos moles e intoxicao alimentar. Habita comumente o trato intestinal dos seres humanos e animais, sendo
amplamente distribudo na natureza, sobretudo no solo e gua contaminada com fezes. Este microrganismo
forma esporos sobrevivendo por longos perodos em condies ambientais adversas.
As cepas do tipo B a E no sobrevivem no solo, mas colonizam o trato intestinal de animais e, em certas
ocasies, do homem.

Toxinas e Patogenia
O potencial patognico de C. perfringens atribudo principalmente s doze toxinas e enzimas produzidas
por esse microrganismo.
A toxina alfa a mais importante, produzida por todos os tipos de C. perfringens. uma lecitinase
(fosfolipase C) que provoca a lise dos eritrcitos, plaquetas, leuccitos e clulas endoteliais. Esta toxina est
associada ao aumento da permeabilidade vascular, com hemlise macia e sangramento, destruio tecidual,
hepatotoxicidade e disfuno do miocrdio. As maiores quantidades da toxina alfa so produzidas por C.
perfringens do tipo A.
A toxina beta responsvel pela produo das leses necrticas na enterite necrotizante.
A toxina psilon uma pr-toxina, que ativada, aumenta a permeabilidade vascular da parede
gastrintestinal.
A toxina iota possui atividade necrtica e aumenta a permeabilidade vascular.
A enterotoxina uma protena produzida no clon e liberada durante a formao de esporos. produzida
basicamente por cepas do tipo A, mas tambm por algumas cepas do tipo C e D. Interrompe o transporte de ons
no leo e jejuno atravs da sua insero na membrana celular, alterando sua permeabilidade. Muitas clulas
vegetativas devem ser ingeridas com o alimento contaminado para produzir os efeitos enterotxicos.

Gangrena Gasosa
uma doena potencialmente fatal, caracterizada por dor intensa, observada dentro de uma semana aps
a introduo dos clostrdios nos tecidos em conseqncia de traumatismos ou cirurgia. Este evento
rapidamente seguido de extensa necrose muscular, choque, insuficincia renal e morte freqentemente dentro de
dois dias aps o incio. A presena de gs no tecido ocorre em decorrncia da atividade metablica da bactria
em rpida diviso. As toxinas do microrganismo causam hemlise e sangramento. mais comumente causada
por C. perfringens, porm outras espcies de clostrdios podem causar a doena.
Quando no ocorre comprometimento muscular, o processo destrutivo e rapidamente progressivo em que
os microrganismos se disseminam atravs dos planos fasciais chamado fasciite. Estes microrganismos
tambm podem iniciar a celulite, embora algumas espcies de clostrdios possam colonizar feridas e a pele sem
nenhuma conseqncia clnica.

Intoxicao Alimentar
uma doena bacteriana relativamente comum, caracterizada por um curto perodo de incubao (8 24
horas), as manifestaes clnicas consistem em clicas abdominais e diarria aquosa na ausncia de febre,
nusea ou vmitos e evoluo clnica de menos de 24 horas. A doena produzida pela ingesto de carne
contaminada com grandes nmeros de C. perfringens do tipo A (108 a 109 microrganismos). So freqentes os
surtos em instituies como em escolas, hospitais, prises etc, onde h larga produo de alimentos preparados
com muita antecedncia antes de serem servidos, favorecendo a multiplicao de C. perfringens. A enterotoxina
produzida aps a germinao dos esporos atua como superantgeno, estimulando a liberao de citocinas dos
linfcitos. A refrigerao do alimento aps sua preparao evita a produo de enterotoxina. Por outro lado, o
reaquecimento pode destruir a toxina.

Enterite Necrosante
um processo necrosante agudo, raro, do jejuno caracterizado por dor abdominal, diarria sanguinolenta,
choque e peritonite. causada por C. perfringens do tipo C, que produz toxina beta, e, a taxa de mortalidade em
pacientes com esta infeco atinge quase 50%.
A beta toxina pode ser inibida por proteases pancreticas.

Tratamento
A gangrena gasosa e a fasciite podem ser tratadas agressivamente com desbridamento cirrgico e altas
doses de penicilina. Apesar de todos os esforos teraputicos, a taxa de mortalidade varia de 40 a quase 100%.
As doenas por clostrdios localizadas e menos graves podem ser tratadas, com xito, com penicilina,
sendo o desenvolvimento de resistncia raramente registrado, porm quando ocorrido utiliza-se metronidazol ou
imipenem. No h necessidade de antibioticoterapia para a intoxicao alimentar causada por clostrdios.

Concluso

Botulismo Ttano

Paralisia Flcida Paralisia Espstica

Inibio de sinapses excitatrias Inibio de sinapses inibitrias

Inibio de sinapses excitatrias Inibio de sinapses inibitrias

Inibe a liberao do Inibe neurotransmissores

neurotransmissor da juno adrenrgicos e colinrgicos (no
neuromuscular: acetilcolina impede a acetilcolina)

Bibliografia

Microbiologia TRABULSI 4 edio

Microbiologia, conceitos e aplicaes volume 1, captulo 4
Tratado de Infectologia Ricardo Verones e Roberto Focaccia 2 edio Ed. Atheneu
Microbiologia Mdica Morraiy, P. R.; 3 edio Ed Guanabara
www.unificado.com.br/biologia/parasitismo/tetano.vacina.htm
www.saudesergipe.com.br/doencas/botulismo.htm
www.saude.discovery.com
http://microvet.arizona.edu/Courses/MIC420/lecture_notes/clostridia/clostridia_neurotox/movie/botulinum_movie.html
Revista Prtica Hospitalar ano 6 set/out 2004