UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA MARIA

CENTRO DE CINCIAS NATURAIS E EXATAS

CURSO DE CINCIAS BIOLGICAS

Caderno Didtico de
Biologia Celular (BLG 138)

lgion Loreto

Departamento de Biologia -2005

 Sumrio:

Pgina

Introduo 3

Primeira Parte
Uma breve reviso de Biologia Celular 4
A lgica da composio molecular dos seres vivos 4

Estruturas supra-moleculares e a emergncia de novas propriedades 12

A organizao celular: o conceito de clula mnima 16
Da clula procaritica para a clula eucaritica 24

Segunda Parte
Recomendaes de ordem geral a serem observadas no uso do Laboratrio. 27
O uso do microscpio ptico (mo) 29
Observando clulas de epitlio de escamas de cebola 40
Propriedades fsico-qumicas dos componentes da membrana plasmtica. 41
Comparando clulas procariotas e eucariotas. 42
Um pouco de fsico-qumica: pH 44
Estudando a passagem de solutos e solventes pela membrana plasmtica. 47
Fracionamento celular :
centrifugao. 49
cromatografia 51
eletroforese 53
Observao de ciclose e cloroplastos em clulas de Elodea 54
Observando clios e sistema de endomembranas 57
Preparao de lminas permanentes 59
Observao de complexo de Golgi em lminas permanentes de epiddimo 60
Observao de clulas musculares estriadas 61
Observao de mitose em ponta de raiz de cebola 62
Atividades de prticas de biologia como componente
de formao pedaggica.
atividade 1 Biologia na cozinha. 65
atividade 2 - O uso de modelos didticos e simulaes 65

2
INTRODUO
Biologia Celular (BLG 138) uma disciplina do primeiro semestre, e ministrada com duas
horas/aula (h/a) tericas e duas h/a prticas semanais.
Os principais objetivos da disciplina so o dar ao aluno:
- uma viso atual da organizao e funcionamento celular, assim como o domnio dos
conceitos bsicos dessa rea do conhecimento;
- uma viso histrica sobre as principais descobertas que levaram aos paradigmas atuais
dessas cincias;
- instrumentalizao para busca de informao e atualizao, de forma autnoma nessa
rea do conhecimento;
- instrumentalizao para o desenvolvimento de atividades didticas de Biologia Celular,
para todos os nveis de ensino, incluindo as atividades prticas.

O presente Caderno Didtico foi escrito para auxiliar a atingir os objetivos descritos acima.
Para tal, ele consta de duas parte:
1a) Uma breve reviso terica atualizada, porm escrita em nvel de ensino mdio. Este
texto servir de base para as primeiras semanas de aula terica que consistir de uma reviso
geral de Biologia Celular.
2a) Protocolos das aulas prticas. Estas atividades sero executadas durante as aulas
prticas e cabe ao aluno fazer o registro solicitado nos protocolos. Pensamos ser este material
uma posterior fonte de consulta para a execuo de atividades didticas.

O aprofundamento terico, que se seguir reviso apresentada na primeira parte deste

Caderno Didtico ser feito a partir da seguinte bibliografia:

CARVALHO, H.F. e RECCO-PIMENTEL, S.M. A clula 2001. Barueri,SP, Ed. Manole, 2001.
JUNQUEIRA , L.C. e CARNEIRO, J. Biologia Celular e Molecular. 7a Ed. Rio de Janeiro,
Guanabara-Koogan, 2000.
DeROBERTIS, E.D.P. e DeROBERTIS, E.M.F. Bases da Biologia Celular e Molecular. 14 ed, Rio
de Janeiro, Guanabara-Koogan, 2003.
COOPER, G.M. A clula, uma abordagem molecular. 2 ed P. Alegre, Artes Mdicas, 2001.
ALBERTS, B. e colaboradores. Fundamentos da Biologia Celular. P. Alegre, Artes Mdicas,
1999.
ALBERTS, B. e colaboradores. Biologia Molecular da Clula. 4 ed. P. Alegre, Artes Mdicas,
2004.

3
 Uma breve reviso de Biologia Celular
Unidade I
A lgica da composio molecular
dos seres vivos:
DE QUE SO FEITAS AS CLULAS?
Os conceitos primordiais para o
entendimento dos seres vivos so aqueles
relacionados aos tipos de molculas que os
compem. Os seres vivos so formados por
clulas e todas as clulas so constitudas
pelos mesmos componentes qumicos,
organizados em uma lgica muito simples:
tomos se agrupam para formar molculas,
estas, nos seres vivos so as vezes muito
grandes, e por isto chamadas
macromolculas, que se associam para
formar as organelas e demais partes da
clula. (Figura 1).
Figura 1. Organizao das estruturas
celulares a partir dos tomos.
1. A gua e suas propriedades especiais
A gua a molcula mais abundante
nos sistemas vivos e perfaz 70%, ou mais, do
peso da maioria das formas de vida. Sempre
admitimos a gua como um lquido inerte,
suave, conveniente para muitos propsitos
prticos. Embora seja quimicamente estvel,
ela uma substncia com propriedades
incomuns. Na verdade, a gua e seus
produtos de ionizao, os ons H+ e OH-,
influenciam profundamente nas propriedades
de muitos componentes importantes das
clulas, como as enzimas, as protenas, os
cidos nuclicos e os lipdios.
de
A molcula da gua eletricamente
neutra, mas o arranjo dos tomos de
hidrognio e oxignio em forma de V torna
essa molcula um dipolo eltrico. Pela
presena dos dois plos (+ e -) a gua dita
um solvente polar.
A gua melhor solvente do que a
maioria dos lquidos comuns. Quase todos os
sais minerais, podem ser dissolvidos na gua
sob forma de ons, como por exemplo, os
ons de Na+, Cl -, K+, Mg++ . Estes ons, em
especial, so de fundamental importncia no
controle da quantidade de gua nas clulas
(presso osmtica), e atuam tambm no
funcionamento de muitas enzimas e na
excitabilidade das clulas.
As molculas orgnicas, que so as
molculas mais importantes na constituio e
4
funcionamento dos seres vivos, podem que as molculas biolgicas podem ser
apresentar trs diferentes comportamentos organizadas em apenas 4 classes. Alm
com relao a gua: a) so solveis (se disso, deve-se levar em conta que as
solubilizam totalmente na gua, como a molculas orgnicas so formadas por,
maioria dos glicdios); b) so insolveis (por aproximadamente, 30 componentes bsicos.
exemplo, as gorduras neutras), ou c) so Entender esta classificao fundamental
anfipticos, isto , possuem uma parte da para a compreenso da qumica da vida.
molcula que se dissolve na gua e outra
As quatro classes de molculas
que insolvel. Temos,como exemplo desse
orgnicas que esto presentes nas clulas
ltimo tipo, os lipdios e protenas que
so as seguintes:
compem as membranas.
A) Glicdios (tambm chamados de
A forma e propriedades funcionais
acares ou carboidratos)
que as macromolculas vo apresentar so
B) cidos nuclicos
profundamente influenciadas pelo modo com
C) Protenas
que elas interagem com a gua. Sendo
D) Lipdios (gorduras)
assim, esse lquido inodoro, incolor e sem
As trs primeiras classes formam
gosto desempenha, no funcionamento
MOLCULAS POLIMRICAS, isto , so
celular, um papel muito importante.
molculas compostas por unidades que se
repetem, denominadas MONMEROS.
2. As molculas orgnicas
Em uma primeira observao,
podemos constatar que os seres vivos so
quimicamente muito complexos. Suas
molculas orgnicas so gigantescas
quando comparadas as molculas dos seres
brutos e, alm disso, so extremamente
variveis. Por exemplo, um organismo bem
simples como uma bactria, pode ter mais de
2.000 protenas diferentes. Um ser humano
Figura 2. Formao de polmeros
deve ter em torno de 100.000 tipos de
protenas.
Podemos resumir a composio das
Como poderemos estudar
macromolculas orgnicas dos seres vivos
quimicamente estes seres, se, considerando
na Figura 3, em que encontramos os tomos
somente as protenas, temos uma
que compem cada classe de
diversidade to grande ?
macromolcula, os monmeros de cada
Esta tarefa, que aparentemente
classe e o polmero formado.
impossvel, torna-se facilitada pelo fato de

5
 Devemos lembrar que na Figura 3 as
molculas polimricas aparecem formadas
por poucos monmeros, mas na realidade,
geralmente, elas so formadas por milhares
deles.
Figura 3. Classes de molculas presentes
nas clulas
Como podemos ver na Figura 3, seis
principais tipos de tomos vo formar todas
as molculas orgnicas dos seres vivos.
Estes seis elementos se organizam em
aproximadamente 30 40 tipos de molculas
(os monmeros) que podem ser classificados
por sua estrutura qumica em 4 grupos.
No grupo dos glicdios, o principal
monmero a glicose. Nas protenas, os
monmeros so 20 diferentes aminocidos
e, nos cidos nuclicos, so basicamente
8 nucleotdeos. Somando-se a estes alguns
tipos predominantes de lipdeos, teremos
ento, aproximadamente os 30- 40
componentes qumicos bsicos, e suas
variaes, que so predominantes nos
seres vivos.
2.1 PROTENAS
As protenas so as molculas
responsveis pelo funcionamento da
clula.
Praticamente todas as atividades da
clula e, portanto, de um organismo so
executadas por protenas.
O transporte de substncias
realizado por protenas, como por exemplo, a
HEMOGLOBINA que transporta oxignio. O
movimento das organelas no interior da
clula, e mesmo o movimento proporcionado
pelos msculos, como um todo, resultado
da interao de protenas como a TUBULINA
e DINEIRA; a ACTINA e a MIOSINA. A
proteo do nosso corpo contra os
microrganismos que causam doenas dada
pela ao de ANTICORPOS, que so
protenas. Todas as reaes qumicas que,
constantemente, esto ocorrendo em nosso
organismo, so realizadas por protenas
especiais chamadas de ENZIMAS. Enfim,
todo o funcionamento do nosso organismo se
d graas atividade das PROTENAS.
Cada uma dessas funes
realizada por uma protena diferente. Existe,
6
no corpo humano, cerca de 100.000 tipos
diferentes de protenas, cada uma sendo
especialista em uma funo.
As protenas so construdas a partir
de 20 tipos de aminocidos, que diferem
entre si atravs de uma parte da molcula,
chamada de radical.
estrutura primria . A substituio de um
nico aminocido em uma cadeia protica,
provoca uma alterao na estrutura primria
dessa protena. A conseqncia da
modificao pode ser grave, resultando em
uma nova protena que no funcione
corretamente dentro da clula.
Chamamos de estrutura secundria a
interao entre os aminocidos vizinhos um
uma cadeia polipeptdica. A interao entre
radicais + e ou hidrofbicos e hidroflicos
fazem com que parte da cadeia se organize
em hlice ou pregas (folhas) .
Na Figura 5, est representada a
estrutura primria da ribonuclease bovina, que
uma enzima que degrada o RNA. Na
estrutura primria, est explcito apenas qual
a ordem dos aminocidos que compem uma
protena, ou seja, qual o primeiro, o segundo,
o terceiro... at o ltimo aminocido.

Figura 4 - Os 20 aminocidos que compe

as protenas

As protenas so formadas pela

unio de 100 ou mais aminocidos. O que vai
diferenciar uma protena de outra a
seqncia dos aminocidos que a compem.
Como existem 20 diferentes tipos desses
aminocidos e as vrias protenas podem ter
comprimentos diferentes, temos uma
Figura 5. Estrutura primria da ribonuclease bovina
diversidade muito grande nessa classe de
macromolculas (figura 4). Por exemplo, a A estrutura terciria de uma
enzima ribonuclease bovina formada por protena, por sua vez, aquela que
124 aminocidos, j a albumina do soro representa como a sua forma
humano formada por 528 aminocidos. tridimensional. O formato da mioglobina, ou
A seqncia de aminocidos que seja, sua estrutura terciria representada
compe uma protena, recebe o nome de na da Figura 6. A estrutura terciria das

7
protenas depende da seqncia
aminocidos (estrutura primria).
Figura 6. Estrutura secundria
terciria da mioglobina.
Forma e Funo das Protenas
Para todo o lado que olhamos,
podemos observar que a forma dos objetos
que ditam a sua funo. Na Figura 7, temos a
representao de uma tesoura e de uma
colher. muito difcil cortar um pano com
uma colher, ou comer sopa com uma
tesoura. A forma desses objetos que
permite sua funo.
de O modo como uma protena ir
desempenhar a sua atividade depender de
sua forma tridimensional, ou seja, depende
de sua estrutura terciria, que em ltima
anlise depende da seqncia de
aminocidos que compe a protena
(estrutura primria).
A troca, acrscimo ou retirada de um
aminocido PODE ocasionar alteraes na
estrutura dessa protena, alterando sua forma
e, portanto, sua funo. A troca de um
aminocido na protena ribonuclease, por
exemplo, a substituio do terceiro
aminocido (treonina) por uma glicina
resultar em uma protena com outra forma
e
tridimensional e incapaz de executar sua
funo.
Somos formados por aproximadamente 100
trilhes de clulas. As clulas so estruturas
muito organizadas cujo funcionamento ,
essencialmente, realizado por uma classe de
molculas, as protenas. So as protenas
que iro dar forma as estruturas celulares,
transportar substncias, realizar as reaes
qumicas necessrias a sobrevivncia e
crescimento da clula, enfim so elas que
iro pr as clulas a funcionar. Existem
milhares de protenas diferentes em cada
clula. Cada protena est envolvida em uma
funo ou atividade especfica. Diferentes
clulas apresentam protenas diferentes, o
que explica as variaes nas formas e
funes observadas em cada tipo celular

Portanto, para entender o

funcionamento celular temos que olhar com
Figura 7- Relao entre forma e funo ateno para as protenas. As protenas so
cadeias de aminocidos. Imagine uma

8
protena como um colar de prolas, cada
aminocido sendo uma prola. Existem 20
diferentes tipos de aminocidos, o que
poderia ser representado em nosso colar por
prolas de 20 cores diferentes. O nmero de
prolas e a seqncia nas cores das prolas
(aminocidos) variam de protena
protena, como nos dois "colares" vistos na
Figura 8.
Figura 8: Diferentes protenas
podem possuir diferentes nmeros de
aminocidos (como no exemplo aqui temos
um "colar" com 11 e outro com 9 contas). As
protenas diferem tambm com relao a
seqncia de cores das contas do colar
(seqncia de aminocidos).
O nmero de aminocidos varia
de uma protena para outra, as menores
tem em torno de 50 aminocidos e as
maiores perto de 20.000. As protenas se
dobram formando uma estrutura
tridimensional tpica, ou seja
protena tem uma forma definida que
depende da seqncia de aminocidos
que possui. essa forma que vai ser
responsvel pela funo da protena.
Observe a sua volta diferentes
objetos e veja como a funo de cada
um deles est relacionada sua forma.
a estrutura tridimensional que permitir
a uma enzima (protena que ativa
reaes qumicas) encaixar-se
perfeitamente ao seu substrato e alter-
lo. Vamos a um exemplo: o fator VIII
para
uma protena de 2.531 aminocidos e
est envolvida na coagulao sangunea.
A ausncia ou a reduo da atividade
dessa protena no sangue causa a
hemofilia clssica (hemofilia A), condio
em que a pessoa pode morrer devido
hemorragia intensa e de longa durao,
desencadeada por qualquer pequeno
ferimento.
H casos em que os hemoflicos
tm o fator VIII no sangue, porm, essa
protena apresenta alguns dos seus
aminocidos trocados ou faltando, e isso
causa uma alterao no formato
tridimensional dessa protena, impedindo
que ela se ligue com as outras protenas
envolvidas na coagulao sangunea, ou
dificultando essa ligao.
Sabe-se tambm que algumas
substituies de aminocidos na protena
podem ter efeitos menos drsticos,
cada
provocando apenas uma pequena
alterao de forma do fator VIII, sem
comprometer o funcionamento de modo
muito intenso. Neste caso, a pessoa
pode ter um tempo de coagulao um
pouco maior do que a maioria dos
9
indivduos, sendo, no entanto, normal e As Protenas na Nossa Dieta
no hemoflica. As protenas, enquanto
macromolculas, no so essenciais na dieta
humana. Alguns monmeros que formam as

Enzimas protenas que so considerados essenciais

As enzimas formam uma classe
especial de protenas que tem como funo
catalisar (acelerar) as reaes qumicas.
Cada enzima especializada em
acelerar uma reao especfica.
exemplo, a enzima amilase age sobre o
amido e o degrada at glicose. O amido, que
a substncia que vai ser alterada durante a
reao qumica, recebe o nome
SUBSTRATO.
Na enzima, existe uma regio que se
liga especificamente ao substrato e a esta
regio chamamos de STIO ATIVO. Assim,
aps a interao do substrato com o stio
ativo, ocorre a reao qumica, sendo
liberado o PRODUTO da reao, que no
caso da amilase, a glicose.
As enzimas no se alteram com a
reao qumica que promovem, saindo
intactas do processo, podendo ir localizar
mais substrato para catalisar nova reao
(Ver Figura 9).
para nutrio humana.
Os aminocidos chamados de essenciais so
aqueles que nossas clulas no conseguem
produzir.
As protenas presentes nos alimentos
Por
so degradadas no aparelho digestivo. Essa
degradao corresponde separao da
cadeia polipeptdica em monmeros. Os
aminocidos liberados so, ento, levados
de
atravs do sangue para todas as clulas do
nosso corpo. Uma vez no interior de nossas
clulas, esses aminocidos sero utilizados
para compor as nossas protenas e fazer
funcionar o nosso organismo.
As protenas de um bife eram
importantes no msculo da vaca. As
protenas do ovo seriam importantes para o
pintinho que iria se desenvolver naquele ovo.
Se essas protenas entrassem intactas em
nossa circulao, de nada adiantaria, pois
no estariam aptas a desempenhar as
funes que as nossas clulas devem
executar. Alm do mais, como sabemos, toda
protena estranha serve como antgeno, e
provavelmente, a absoro de uma protena
de vaca ou de galinha provocaria uma reao
alrgica. Nosso sistema imune reconheceria
essas protenas como estranhas ao

Figura 9 Esquema de uma reao enzimtica organismo e criaria anticorpos contra elas.
As protenas so molculas muito
grandes. Por exemplo, o colgeno
composto por aproximadamente 3.000

10
aminocidos. Essa protena fibrosa o Resumindo o que foi apresentado
principal componente da matriz extracelular e sobre protenas, podemos dizer que:
do tecido conjuntivo. Se considerarmos que a
molcula da gua (que bem menor que a
O funcionamento de um organismo
de um aminocido) tem dificuldade de depende de suas protenas.
atravessar a pele, como poderia ser
absorvida uma molcula de 3.000 O funcionamento de cada protena
aminocidos? Mas muitos cremes vendem depende de sua forma.
a idia de que podemos repor o colgeno
que est faltando em nossa derme, usando A forma de uma protena depende da
colgeno de galinha. Na verdade essa seqncia dos aminocidos que a compem.
protena no consegue atravessar a pele e
A questo agora explicar:
chegar na derme, onde normalmente est
Como o organismo estabelece seqncia
depositada. Caso isso acontecesse,
de aminocidos que deve estar presente
provocaria uma reao alrgica (seria um em cada protena?
antgeno).
Os aminocidos so divididos em A seqncia de aminocidos das
essenciais, isto , aqueles que precisam protenas est escrita (codificada) nos
fazer parte de nossa dieta, pois no temos a genes. Os genes so compostos de outro
capacidade de sintetiz-los e no essenciais tipo de molcula orgnica, os cidos
(aqueles que podemos sintetizar). nuclicos.
A quantidade de protenas
necessrias na dieta varia conforme a idade 2.2.CIDOS NUCLICOS
e o estado fisiolgico. Crianas, gestantes e Os cidos nuclicos tambm so
lactantes necessitam mais protenas do que macromolculas polimricas, formadas por
adultos. Um adulto jovem, com intensa monmeros chamados de nucleotdeos.
atividade fsica, deve consumir em torno de Cada nucleotdeo formado por uma base
56g diria de protenas. Os alimentos de nitrogenada, um acar (ribose ou
origem animal, como carne, leite e ovos so desoxirribose) e fosfato (Figura 10):
ricos em protenas. Os vegetais tambm tm
protenas porm em quantidades menores.
Por exemplo, uma fatia de po de trigo
integral possui 2 gramas de protena, mas
como essa uma protena de baixa
qualidade, um adulto jovem precisaria comer
72 fatias dirias para obter as 56 g de
protenas.
Figura 10. Nucleotdeo

11
 Estes monmeros se unem para
formar dois tipos de polmeros, o DNA (cido
desoxirribonuclico) e o RNA (cido
ribuclico).
Os cidos nuclicos so formados
pela unio de nucleotdeos (Figura 11).
Figura 11- Molcula de cido nuclico
Na molcula de DNA encontramos as
seguintes bases: adenina (A); citosina (C);
guanina (G) e timina (T) e so chamados de
desoxiribonucleotdeos, porque o aucar a
desoxiribose. A molcula de DNA formada
por uma cadeia dupla, tendo algumas
caractersticas importantes. Sempre que
existir uma adenina em um lado da cadeia,
teremos uma timina no outro e sempre que
ocorrer uma citosina em um lado da cadeia,
teremos uma guanina no outro. Chamamos
isto de complementariedade das bases, ou
seja, as timinas sempre fazem par com as
adeninas e as citosinas sempre pareiam com
as guaninas.
Figura 12. Estrutura da molcula de DNA
mostrando a complementariedade das bases A=T;
C=G.
Duas propriedades importantes
resultam da estrutura do DNA:
1) Capacidade de replicao. Com o auxlio
de enzimas, a dupla hlice de DNA se abre,
formando fita simples e pode ser duplicada,
originando cpias exatamente iguais a
molcula original.
2) Capacidade de conter a informao da
seqncia de aminocidos que compe as
protenas. As seqncias de nucleotdeos do
DNA determinam a estrutura primria das
protenas.
Figura 13- Replicao da molcula de DNA
O RNA uma molcula formada por uma
nica cadeia, ou seja, fita simples. Os
nucleotdeos do RNA so chamados de
Ribonucleotdeos porque o acar a ribose.
No RNA a base uracila (U) substitui a Timina
do DNA. Os diferentes tipos de RNAs so
extremamente importantes para fazer com
que a informao gentica contida no DNA
seja traduzida em uma seqncia de
aminocidos, originando as protenas (ser
visto adiante).
2.3. GLICDIOS
Os glicdios, tambm chamados de
carboidratos ou acares so poliis de
aldedos ou cetonas, divididos em:
12
a) Monossacardeos - como por exemplo a As principais funes
glicose e a frutose. Os monossacardeos desempenhadas pelos glicdios so:
podem unir-se formando dissacardeos. Por -ENERGTICA: so fonte de energia
exemplo, a sacarose (acar de cana) a para a clula (ou reserva de energia)
unio de uma frutose e uma glicose. A - ESTRUTURAL: formam as paredes
maltose formada pela unio de duas das clulas vegetais
molculas de glicose e a lactose (acar do -RECONHECIMENTO: esto
leite) formada pela unio de galactose e envolvidos no processo de reconhecimento
glicose. clula-clula nos tecidos dos animais
pluricelulares, atravs do glicocalix.

2.4. LIPDIOS
Os lipdios ou gorduras
desempenham importante papel na estrutura
e funo celular. H vrias classes de
lipdios e cada uma possui funes biolgicas
especficas.
Os cidos graxos so a unidade
fundamental da maioria dos lipdios e junto
com os triglicerdios constituem as principais
gorduras neutras que funcionam como
reservas energticas.

Figura 14 -Exemplo de alguns

monossacardeos

b) Polissacardeos - so formados pela

unio de vrios monossacardeos (so
POLMEROS DE GLICOSE) Os trs Fig 15 - Exemplos de cidos graxos.
polissacardeos mais importantes so o
AMIDO (reserva de energia dos vegetais), o J os fosfolipdios e os
GLICOGNIO (reserva de energia dos esfingolipdios so lipdios derivados dos
animais) e a CELULOSE (constituinte da triglicerdios. Nesses lipdios, uma das
parede das clulas vegetais). A diferena cadeias de cido graxo substituda por uma
entre esses polissacardeos est na ligao estrutura qumica POLAR. Desta forma,
qumica que une as glicoses.

13
estas molculas tero uma parte polar
(hidroflica) e uma parte apolar (hidrofbica)
Os fosfolipdios e esfingolipdios so
componentes fundamentais das membranas
biolgicas (ser visto adiante).
Outra classe de lipdio a dos
esterides que podem ter funo estrutural,
como o colesterol que um componente da
membrana plasmtica. Outra funo
desempenhada pelos esteris a hormonal,
como por exemplo a testosterona,
progesterona.
ESTRUTURAS SUPRA-MOLECULA-
RES E A EMERGNCIA DE NOVAS
PROPRIEDADES
Um conceito importante para
entendimento dos seres vivos o de
propriedades emergentes. Vejamos um
exemplo bem simples: um professor
demonstra a ao enzimtica da amilase
salivar, atravs de um experimento muito
comum, que pode (e deve) ser realizado em
sala de aula. Nesse experimento, uma
soluo de Maizena fervida e distribuda
em dois frascos. Em apenas um dos frascos
adiciona-se um pouco de saliva e ,depois,
uma gota de lugol (ou soluo de iodo)
acrescentada em ambos os frascos.
Neste caso, a alterao de cor que
se observa no frasco explicada pelo fato da
enzima presente na saliva ter
PROPRIEDADE de degradar o amido da
Maizena. Essa uma propriedade cataltica
muito especfica, a amilase desdobra o
amido em glicose.
Se ao invs de acrescentar saliva na
mistura, acrescentssemos os aminocidos
que compem a amilase, iria ocorrer a
reao de degradao do amido? claro que
no. Uma pilha de tijolos no o mesmo que
uma casa. Uma mistura de aminocidos
isolados, no possui as propriedades da
protena que poderia ser formada pela unio
desses aminocidos.
Para que uma protena desempenhe
uma funo definida, necessrio que ela
tenha uma forma especfica. A estrutura
tridimensional de uma protena resultado
da unio de aminocidos em uma seqncia
tambm especfica. Portanto, a ligao
sucessiva de um aminocido ao outro que ir
determinar a forma final de uma protena e
o
sua capacidade funcional.
As macromolculas apresentam
propriedades novas que no esto presentes
nos seus componentes isolados. A amilase,
por exemplo, tem a capacidade de degradar
o amido, porm esta propriedade no est
presente em nenhum dos aminocidos que
compem a amilase. Quando, pela unio de
aminocidos em uma seqncia especfica, a
macromolcula amilase se forma, EMERGE
uma nova propriedade (capacidade de
degradar a amido) que no est presente nos
seus componentes.
As propriedades emergentes so um
atributo da forma esterioqumica da
a
macromolcula. Do mesmo modo que a
forma da tesoura confere a esse instrumento
uma propriedade nova (capacidade de
14
cortar), a forma da protena amilase lhe Os ribossomos so estruturas
permite catalisar a reao amidoglicose. capazes de auto-montagem, isto , basta
Muito do funcionamento celular colocarmos todos os componentes juntos e,
depende das propriedade emergentes de em condies fsico-qumicas apropriadas,
suas macromolculas. Mas as clulas no automaticamente as sub-unidades do
so formadas apenas de macromolculas, ribossomo montam-se. possvel, portanto,
elas possuem tambm ESTRUTURAS desmontar e remontar os ribossomos em
SUPRAMOLECULARES. tubos de ensaio. E sempre, aps a auto-
Estruturas supramoleculares so montagem, uma PROPRIEDADE nova
estruturas formadas por vrias EMERGE : os ribossomos so capazes de
macromolculas. Um exemplo de estrutura fazer sntese de protenas.
supramolecular o ribossomo (Figura 16). Todas as organelas intracelulares
Cada sub-unidade do ribossomo formada so estruturas supramoleculares. A
por vrias macromolculas. A sub-unidade mitocndria, por exemplo, formada por um
maior formada por 3 diferentes RNAs grande nmero de protenas, lipdios, DNA,
ribossmicos: um com 120 nucleotdeos RNA... que formam suas membranas, os
(nts), outro com 160 nts e o terceiro com seus ribossomos, corpsculos elementares,
4700 nts. Alm dos RNAs a sub-unidade etc... Estas macromolculas, ao se
maior apresenta 49 diferentes protenas associarem, formam a mitocndria que
(denominadas L1, L2, L3, ... at L49). Na possui propriedades novas que no esto
sub-unidade menor temos apenas um rRNA presentes nos componentes isolados. Por
de 1900 nts associado a 33 protenas exemplo, a sntese quimiosmtica do ATP s
(denominadas S1, S2, ..at S33). possvel graas estrutura da mitocndria
que dada pela totalidade de seus
componentes associados, e no pode ser
realizada apenas por um ou outro
componente da mitocndria. Este outro
exemplo de uma propriedade emergente, que
s se manifesta a partir do surgimento de
uma estrutura com organizao
supramolecular.

Figura 16 .Ribossomo dos eucariontes

15
UNIDADE II dependia exclusivamente do microscpio
ptico e de alguns corantes. Neste perodo, o
que mais chamava a ateno, quando se
A ORGANIZAO CELULAR observava uma clula, era a presena do
O tema de estudo da Biologia, a ncleo. Posteriormente, verificou-se que, no
VIDA uma propriedade emergente de uma ncleo, estavam os cromossomos e inferiu-
supraestrutura: a clula. A Vida originou-se se que estes eram depositrios dos genes.
na Terra a +/- 3.5 bilhes de anos atrs Assim, a idia de que, no ncleo,
quando montaram-se as primeiras clulas. estava o controle do funcionamento celular
O CONCEITO DE CLULA MNIMA relativamente antiga, porm por muito tempo
A definio mais comum para clula no foi possvel saber exatamente como
: unidade morfo-fisiolgica dos seres esse controle era exercido.
vivos. Mas o que caracteriza uma clula?
Quais so os componentes MNIMOS para
que uma estrutura possa ser considerada
uma clula?
De uma forma geral, quando
perguntamos como constituda e como
funciona uma clula, a resposta mais comum
:
...formada por membrana, citoplasma e Figura 17. Aspecto geral da organizao
ncleo. A membrana reveste a clula, celular de um procarionte.
fazendo as trocas com o meio, o
citoplasma contm as organelas CARACTERSTICAS BSICAS DE UMA
responsveis pelo funcionamento da CLULA (uma concepo atual)
clula e o ncleo controla este Se a descrio de uma clula como
funcionamento. um conjunto de membrana, citoplasma e
Devemos considerar, entretanto, dois ncleo uma viso originria do fim do
aspectos importantes: sculo passado, quais seriam as
1) As bactrias e demais procariontes so caractersticas da organizao celular em
organismos celulares e no possuem ncleo; uma viso contempornea?
2) Quando dizemos que o ncleo controla o Para responder essa questo temos
funcionamento celular, no fornecemos que pensar em caractersticas que sejam
nenhuma idia de como isto ocorre. comuns a todas as clulas, sejam elas
Esta viso da constituio e procariticas e eucariticas.
funcionamento celular originria do fim do So quatro as partes essenciais que
sculo passado e, nessa poca, o estudo da podemos encontrar em toda clula:
estrutura e do funcionamento celular

16
 Membrana - delimita a clula, separando ambiente. Estas trocas so controladas pela
os demais elementos celulares do meio membrana plasmtica. Por isto a principal
ambiente e regulando as trocas da caracterstica da membrana a
clula com o meio; PERMEABILIDADE SELETIVA.
Maquinaria metablica conjunto de Assim, a membrana permevel
enzimas e protenas capazes de utilizar porque deixa passar substncias atravs
a matria e energia do meio ambiente dela, porm, faz isso seletivamente, ou seja,
para realizar as funes celulares; escolhendo o que deve entrar e sair da
Informao gentica - informao de clula.
como, quando e onde montar as Para se entender como a membrana
protenas da mquina metablica e realiza esta funo de permeabilidade
demais protenas estruturais da clula seletiva, temos que estudar como a
Maquinaria de sntese protica membrana constituda quimicamente e
constituda por ribossomos, mRNAs e como estes componentes atuam.
tRNAs capazes de transformar a Os lipdios da membrana so
informao gentica em maquinaria diferentes dos lipdios que so usados como
metablica. reserva de energia (cidos graxos e
Estes componentes celulares podem triglicerdios). Enquanto os lipdios
ser facilmente reconhecidos nos energticos so insolveis em gua, os
Mycoplasma, um tipo de bactria, que so os lipdios que compe a membrana (chamados
seres celulares estruturalmente mais simples de fosfolipdios, esfingolipdios e outros) so
que conhecemos (Ver Figura 17). ANFIPTICOS, ou seja, tm uma parte da
molcula que eletricamente carregada e
Vamos, a seguir, tratar de cada uma hidroflica (solvel em gua), e outra parte
dessas partes que compem o que podemos que hidrofbica (insolvel em gua) -
chamar de uma clula mnima. Figura 18.

MEMBRANA CELULAR

O que delimita a clula do resto do

universo uma fina membrana LIPO- Figura 18- .Estrutura de um

PROTICA chamada membrana plasmtica Fosfolipdio

ou membrana celular.
A clula no pode se isolar do meio Tendo esta caracterstica anfiptica,

em que se encontra, precisando manter uma os fosfolipdios, quando colocados em gua,

constante troca de matria e energia com o vo ter uma organizao tpica, formando

17
finas membranas em BICAMADAS, conforme protenas da membrana tambm tero uma
representado na Figura 19. parte hidroflica e uma parte hidrofbica.

Figura 19 Formao de bicamadas lipdicas

quando os fosfolipdios so colocados em gua.

Desta forma, sempre que colocarmos

lipdios anfipticos em gua, formar-se-o Figura 20. Estrutura das protenas
bolhas e a gua estar tanto do lado de da membrana
dentro da bolha, quanto do lado de fora
(Figura 19).
A gua e todas as substncias
hidrossolveis, como os acares,
Por terem tanto regies hidrofbicas como
aminocidos, nucleotdeos, por no serem
regies hidroflicas, as protenas anfipticas
solveis em lipdios, no podem passar pela
vo se intercalar entre os fosfolipdios. (figura
camada hidrofbica da membrana.
20 e 21)
O Modelo do MOSAICO
FLUDO das membranas biolgicas explica
Como, ento, a membrana realiza a sua
como se organizam e funcionam essas
funo de permeabilidade seletiva?
membranas. Segundo este modelo, temos
S existe permeabilidade seletiva
uma bicamada de lipdios com protenas
graas ao do outro componente das
intercaladas nesta bicamada.
membranas: as PROTENAS. Como
As partes hidroflicas dos
sempre, as atividades de funcionamento dos
fosfolipdios e das protenas ficam voltadas
organismos esto relacionadas s protenas.
para as superfcies interna e externa da
As protenas das membranas
membrana em contato com a gua. As partes
tambm so ANFIPTICAS, ou seja, elas
hidrofbicas dos fosfolipdios e das
tm uma parte formada por aminocidos
protenas ficam na regio interior da
polares (com carga eltrica) e outra parte
membrana (figura 21)
constituda preponderantemente com
aminocidos apolares. Desta forma, as

18
 TRANSPORTE DE SUBSTNCIAS PELA
MEMBRANA
As substncias passam pela
membrana de trs formas diferentes:
1) Difuso simples: Algumas substncias
como o O2, CO2, lcool e ter, por serem
solveis tanto em gua como em gorduras,
podem passar diretamente pelos
fosfolipdios. Para estas substncias, a
Figura 21- Modelo do MOSAICO membrana no constitui uma barreira, e suas
FLUIDO da membrana biolgica molculas vo difundir de onde elas esto
mais concentradas para aonde esto menos
Este modelo chamado de concentradas (1 na Figura 22).
MOSAICO, porque os componentes da
membrana se organizam como um mosaico
(associao de pequenas peas que se
encaixam ou sobrepe para formar uma
estrutura). A denominao de Mosaico
FLUDO justificada pelo fato de seus
componentes (fosfolipdios e protenas) no
serem fixos na membrana, podendo
apresentar movimentos laterais.
Podemos resumir a atuao dos Figura 22 Passagem de substncias
componentes da membrana da seguinte atravs da membrana
forma:
a) OS FOSFOLIPDIOS atuam como uma A maioria das substncias no pode
barreira, impedindo que as substncias que atravessar livremente pela membrana e
esto dentro da clula saiam e evitando que precisam passar pelas protenas. Essa
as substncias que esto fora da clula passagem pode ocorrer de duas maneiras:
entrem. 2) Transporte passivo ou difuso
b) AS PROTENAS funcionam como facilitada. O transporte passivo ocorre,
portes (tecnicamente chamados de quando uma substncia est mais
CARREADORES ou POROS), por onde concentrada de um lado da membrana do
passam as molculas; so as elas que que do outro, e h interesse da clula que
reconhecem as substncias que devem esta substncia passe pela membrana.
entrar ou sair da clula. Protenas especficas, chamadas de
CARREADORES, permitem que essas

19
substncias atravessem (geralmente atravs
de aberturas ou canais nas prprias NA INTERNET:
protenas). Entenda melhor a membrana celular comparando-
No caso do transporte passivo, no a com bolhas de sabo:
h gasto de energia, porque a favor do www.sbbq.org.br/revista/artigo.php?artigoid=41
gradiente de concentrao ( 2 na Figura 22).
3) Transporte Ativo: Quando do interesse
da clula transportar substncias contra um
gradiente de concentrao, (ou seja, de onde
tem pouco de uma substncia para aonde j
existe bastante dessas mesmas molculas) a
clula precisa gastar energia para fazer esse
transporte (3 na Figura 22).
Como podemos ver, somente
molculas no muito grandes podem entrar e
sair da clula pelos carreadores. Molculas
grandes como as protenas, cidos nuclicos BRINCAR COM BOLHAS DE SABO PODE
ou polissacardeos, somente em condies AJUDAR A ENTEDER A
muito especiais podem passar pela
membrana.
Molculas grandes
(macromolculas), assim como estruturas
ainda maiores como vrus ou clulas no
passam diretamente pela membrana celular,
e s entram na clula atravs de
mecanismos de TRANSPORTE DE MASSA,
chamado endocitose (fagocitose e
pinocitose). Mas vale ressaltar que atravs
da fagocitose e pinocitose as substncias ou
estruturas entram na clula, mas no
passam a membrana pois entram MEMBRANA SEGUNDO O MODELO
envolvidas em membrana. MOSAICO-FLUIDO

20
MAQUINARIA METABLICA os em energia ou em outras molculas
estruturais da clula; as protenas motoras

O que permite que uma lacto- que produzem movimento dos componentes

bactria (bactria do iogurte) se desenvolva celulares, etc...

to bem no leite, transformando-o em iogurte No caso especfico do exemplo que

e uma aceto-bactria se procrie estamos trabalhando, a aceto-bactria ter

maravilhosamente no vinho, transformando-o as protenas de membrana para retirar do

em vinagre? Se colocarmos a bactria do vinho os nutrientes apropriados. No interior

vinho no leite, ela no vai se desenvolver, o da clula, enzimas transformaro estes

mesmo acontecendo com a bactria do nutrientes em mais macromolculas de

iogurte, quando colocada no vinho. Por que aceto-bactria. Enfim, possibilitam o sonho

isto acontece? primordial de toda aceto-bactria: tornar-se

Cada clula, mesmo simples como duas aceto-bactrias...

uma bactria, possui enzimas e outras

protenas que a capacita a desempenhar as INFORMAO GENTICA
funes para as quais est adaptada. A
lacto-bactria possui enzimas para quebrar a Porque uma aceto-bactria colocada
lactose e as protenas do leite. J a aceto- no leite no produz as enzimas necessrias
bactria possui enzimas para transformar o para usar o acar e as protenas do leite
lcool em cido actico e usar outros como nutrientes? Ou, colocando a mesma
nutrientes encontrados no vinho. Estas duas questo em um outro exemplo: sabemos que
bactrias possuem diferentes maquinarias a celulose um polissacardeo formado de
metablicas que as tornam adaptadas para molculas de glicose. No entanto, se por um
explorar recursos diversos. motivo qualquer s tivssemos papel
As diferenas que ocorrem no (celulose) para comer, acabaramos
funcionamento entre clulas so explicadas morrendo de inanio por falta de energia,
pela variao nas protenas existentes nelas. embora estivssemos ingerindo um polmero
Chamamos de maquinaria construdo com glicose. Outros organismos,
metablica o conjunto de enzimas e como cavalos, vacas ou baratas so capazes
protenas que vo ser responsveis pelo de aproveitar a glicose presente na celulose
funcionamento da clula (ou seja, pelo do papel. Nos dois exemplos, o que falta a
metabolismo celular). Por exemplo, as informao gentica de como fazer as
protenas da membrana que captam enzimas necessrias para aproveitar uma
nutrientes do meio externo e os transportam determinada molcula como fonte de
para o interior da clula; as enzimas que vo nutriente.
transformar estes nutrientes, atravs de A informao gentica est
complexas rotas bioqumicas, transformando- armazenada nas clulas sob forma de cidos

21
nuclicos. Para todas as clulas seqncia de DNA que essencial para uma
(procariticas ou eucariticas), a funo especfica. Trs tipos de genes so
macromolcula informacional o DNA. reconhecidos:
Somente alguns vrus apresentam suas
informaes armazenadas sob forma de 1) genes que codificam para
RNA. protenas. So transcritos para RNA
A informao gentica total, mensageiro (mRNA) e subseqentemente
carregada por um organismo ou clula, traduzidos, nos ribossomos, para protenas.
denominada de GENOMA. Por exemplo, na
nossa espcie, o genoma das clulas
somticas constitudo por 46 molculas de 2) genes que especificam RNAs
DNA. Cada uma dessas molculas se funcionais, como os RNAs ribossmicos
organiza sob forma de um cromossomo, ou (rRNA); RNAs transportadores (tRNA) e
seja, cada cromossomo contm uma nica RNAs que desempenham funes
molcula de DNA que contnua, regulatrias na clula como os snoRNA e
comeando em uma extremidade do miRNA.
cromossomo e prolongando-se sem
interrupo at a outra extremidade. Temos
tambm uma 47a molcula de DNA que o 3) genes no transcritos. So
cromossomo mitocondrial. seqncias de DNA que, embora no sejam
O genoma de clulas mais simples, transcritas, desempenham alguma funo.
como as bactrias, est organizado em um Por exemplo, os genes de replicao,
nico cromossomo circular. Em torno de envolvidos na duplicao do DNA; genes de
2000 genes esto presentes no genoma de recombinao, que so seqncias
uma bactria, como a Escherichia coli. envolvidas no processo de crossing-over;
O cromossomo bacteriano como de seqncias telomricas, envolvidas na
6
E. coli possui aproximadamente 4,2x 10 proteo das extremidades dos
pares de bases. Ou seja, se contssemos o cromossomos...
nmero de diferentes nucleotdeos
ATCCGGTAACC... em uma das fitas do
DNA, este nmero seria de, Assim, o genoma contm um grande
aproximadamente, 4.200.000 nucleotdeos. nmero de genes que, quando necessrios,
na seqncia de bases desta imensa so ativados, ou seja, so copiados em RNA
molcula de DNA que est escrito a (ver Figura 23).
informao gentica, nos genes dessa
bactria.
Estudos moleculares recentes tem
ampliado o conceito de gene: uma

22
 Figura 23) Exemplo hipottico do
genoma de um procarionte O genoma
contm muitos genes. Alguns so genes
para tRNA, outros para rRNA e outros ainda
codificam para polipeptdios (mRNA).

A transcrio de um gene depende

da regio regulatria desse gene. Um dos Figura 24) Processo de transcrio dos genes
ribossmicos (rRNA); dos RNAs transportadores
principais elementos da regio regulatria do tRNA e dos RNAs mensageiros mRNAs.
gene o stio ou regio promotora que mostrado tambm, a unio de todos estes
componentes no processo de TRADUO, que
corresponde ao local de entrada da RNA a sntese de protenas.
polimerase. Essa enzima, responsvel pela
transcrio de DNA em RNA, reconhece a
regio promotora do gene, se associa a esse
conjunto de bases e passa a se deslocar pela
fita molde de DNA, fazendo a ligao entre
os ribonucleotdios complementares fita de
DNA. No fim do processo de transcrio
temos uma fita de RNA que,aps passar por
algumas modificaes (processamento do
Figura 25 Fluxo da informao gentica
RNA), torna-se funcional e poder executar
dentro da clula.
as diferentes funes necessrias sntese
O DNA se duplica pelo processo chamado
de protenas.
de transcrio. A informao nele contida
copia em molculas de RNA em um
processo chamado de transcrio. Os
RNAs participam do processo de sntese
de protenas (traduo)

23
MAQUINARIA DA SNTESE PROTICA tenha uma trinca de bases que seja

No citoplasma existem todos os complementar as trs bases do mRNA que

elementos necessrios sntese de esto naquele momento no stio A. A regio

polipeptdios, que chamamos de do tRNA que entra em contado com as bases

MAQUINARIA DE SNTESE PROTICA: do mRNA dentro do ribossomo

denominada de anticdon. De um modo
simplificado, as molculas de tRNAs so
> ribossomos
representadas como tendo em uma
>RNAs transportadores
extremidade a regio do cdon e na outra a
> RNA mensageiro regio de ligao com o aminocido. Os
tRNAs que possuem o mesmo anticdon
A seqncia de eventos que resulta transportam o mesmo aminocido. Por
na sntese de uma protena pode ser exemplo, se o anticdon for AAA, esse tRNA
resumida da seguinte forma : estar transportando para dentro do
c Transcrio do DNA em RNA (nos ribossomo o aminocido fenilalanina. Alguns
1, 2 e 3 na Figura 21). aminocidos so transportados por mais de
d Processamento do RNA para que um tipo de tRNAs. Por exemplo, os tRNAs
se torne funcional (ocorre em eucariontes). que possuem anticdons GCA, GCG, GCU

e Montagem do ribossomo - a ou GCC transportam (ver tabela do cdigo

subunidade menor do ribossomo reconhece gentico) para o ribossomo arginina. Desse

o incio da fita de mRNA e se liga ao mRNA . modo, as trs bases do mRNA (cdon) que

Essa ligao permite que a subunidade maior ocupam o stio A, ao selecionar qual o tRNA

se associe subunidade menor, formando-se que permanecer dentro do ribossomo,

assim um ribossomo capaz de realizar a determinam qual o aminocido que ser

sntese de protenas. adicionado cadeia polipeptdica. O primeiro

tRNA a ocupar o stio A, deve ter anticdon
f Primeira ligao Peptdica - o
complementar trinca AUG. Esses tRNAs
ribossomo se desloca sobre a fita de mRNA
sempre transportam uma metionina, portanto
e quando encontra nessa fita a seqncia de
esse o primeiro aminocido de toda a
base AUG, cria no seu interior, dois stios,
sntese de protenas. A metionina inicial pode
um destinado a receber os tRNAs que trazem
ser removida depois, o que significa que nem
os aminocidos para serem ligados cadeia
todas as protenas funcionais tero esse
polipeptdica (stio A) e outro que ser
aminocido presente no incio da cadeia.
ocupado pelo transportador que mantm a
cadeia polipeptdica nascente (stio P).
g Crescimento da cadeia

Qualquer tRNA pode entrar no ribossomo e polipeptdica - quando os stios A e P esto

ocupar o stio A, porm para que o tRNA ocupados por tRNAs, que tenham anticodons

permanea nesse stio necessrio que ele complementares ao mRNA, na parte superior

24
da subunidade maior do ribossomo, ocorre a
ligao entre os aminocidos que esses
tRNAs transportam. Quando essa ligao
ocorre, o ribossomo se desloca sobre a fita
de mRNA e esse deslocamento corresponde
exatamente a trs nucleotdios. Assim, a
cada ligao entre dois aminocidos, um
novo cdon ocupa o stio A e determina a
entrada de um novo tRNA que trar o
prximo aminocido a ser ligado. Com o
deslocamento do ribossomo, o tRNA que
trouxe o ltimo aminocido adicionado passa
a ocupar o stio P e o tRNA, que antes estava
nesse stio, liberado pelo ribossomo,
podendo voltar a participar da sntese de
protenas quando estiver de novo ligado a um
aminocido especfico. Por exemplo, na
Figura 26, no incio da traduo, o stio P
est ocupado pelo cdon AUG e pelo tRNA
da metionina, e o stio A est ocupado com o
cdon UUU e o tRNA da fenilalanina. Aps a
ligao entre os dois primeiros aminocidos
(metionina e fenilalanina), com
deslocamento do ribossomo, o tRNA da
metionina perde sua ligao com esse
aminocido e sai do ribossomo. O tRNA da
fenilalanina passa, ento, a ocupar o stio P
e se mantm ligado fenilalanina, que por
sua vez est ligada metiona. medida que
o ribossomo se desloca, a cadeia
polipeptdica vai crescendo, sempre ligada ao
tRNA que acabou de fornecer o ltimo
aminocido.
Deve-se ressaltar que, logo aps o
primeiro deslocamento do ribossomo, o
cdon de iniciao AUG fica liberado e outro
ribossomo pode se associar ao mRNA e
iniciar a sntese de uma segunda cadeia
polipeptdica. comum encontrar, no
citoplasma, vrios ribossomos realizando
traduo a partir da mesma fita de mRNA.
Desse modo, a clula pode originar vrias
molculas da mesma protena com um nico
RNA mensageiro.
h Final da sntese - os ribossomos
seguem se deslocando na fita de mRNA e
quando o stio A ocupado por uma trinca
UAA, ou UAG ou UGA o crescimento da
cadeia polipeptdica interrompido. Nenhum
tRNA possui anticodons complementares a
essas trincas e por isso esses codon so
chamados sem sentido e sinalizam o fim da
traduo. Depois que o ribossomo atinge um
desses codon, as subunidades se separam.
A subunidade menor pode, ento, se
associar novamente com a parte inicial de
um mRNA, iniciando novamente um
processo de traduo.
o Atravs dos mecanismos de
transcrio e traduo, a informao gentica
se transforma em maquinaria metablica.
Assim, em uma clula simples como uma
lacto-bactria, a informao contida no
genoma traduzida, isto , esta informao
capaz de conduzir a sntese de um bom
nmero de protena que estaro aptas a
utilizar os nutrientes presentes no leite, para
manter a estrutura celular e ainda criar mais
macromolculas e permitir o crescimento
desta bactria e posterior reproduo.
25
 Unidade III
DA CLULA PROCARITICA PARA
A CLULA EUCARITICA.

Podemos dizer que uma bactria

um bom exemplo de uma clula mnima.
Vimos anteriormente como atuam a
membrana, a maquinaria metablica, a
informao gentica e a maquinaria da
sntese protica, para fazer uma bactria
funcionar.
Mas se as bactrias so ditas
clulas mnimas, porque existem clulas
Figura 26) Processo de traduo de
muito mais complexas, as eucariticas.
uma protena. A) montagem do ribossomo B)
O que elas possuem que no est
iniciao do processo de traduo C e D)
presente nas clulas bacterianas?
elongao da cadeia de aminocidos. Cada
tRNA que se liga ao ribossomo, deixa um c Um sistema de membranas que

aminocido. compartimentaliza as diversas funes da

clula, chamado de SISTEMA DE

A TABELA DO CDIGO GENTICO ENDOMEMBRANAS;

d Uma rede de protenas
filamentosas que do forma e mobilidade
para a clula, chamada de
CITOESQUELETO.

A INFORMAO GENTICA NOS EUCARIONTES

A informao gentica dos
eucariontes apresenta algumas
peculiaridades. Nas clulas eucariontes o
DNA est sempre complexado com
protenas. As protenas que se associam ao
DNA so de dois tipos: as histonas ou
Diga que protena resulta do seguinte mRNA: protenas bsicas e as protenas cidas.

Quando a clula no est em diviso

UUAUGGUUAGUCGUAGAUAUUGA
(durante a interfase), a molcula de DNA

26
apresenta seu grau mnimo de enrolamento,
constituindo a Cromatina. Conforme
podemos ver na Figura 27, a cromatina
apresenta vrios graus de compactao: em
(A) temos a molcula de DNA com seu
9
dimetro de 2 nammetros (nm = 10
no associado a nenhum tipo de protena. A
dupla hlice sem protenas associadas no
encontrada no ncleo das clulas, pois em
seu estado funcional o DNA eucaritico
sempre est ligado a protenas. Em (B) a
molcula de DNA apresenta-se enrolada nas
histonas, formando as fibras
nucleossomos com 11 nm. Quando a clula
inicia o processo de diviso, pode-se notar
uma mudana no aspecto do ncleo. A
medida que a clula avana na fase de
prfase, possvel visualizar, no ncleo, uma
condensao progressiva da cromatina.
Figura 27- ver texto
Em (C) a fibra de nucleossomos se
enrola sobre si mesma, originando a fibra em
solenide, em um formato de fio de
telefone; nesse formato de solenide que
a cromatina se encontra no ncleo na
m) interfase.
Algumas protenas cidas unem as
fibras da cromatina formando s alas de
cromatina (letra D na figura). As alas vo
sendo unidas em grupos cada vez mais
condensados, no centro da cromtide. No fim
desse processo, o cromossomo atinge seu
dos
grau mximo de dobramento, que
corresponde ao cromossomo metafsico, ou
seja, ele observvel na fase de metfase
da diviso celular. (letras E e F na figura
abaixo).
Para dar uma idia de como longo
os fios de cromatina, apresentamos, na
Figura 28, a cromtide de um cromossomo
mittico que teve as protenas cidas
removidas. Esse tratamento permitiu que as
alas constitudas pela fibra de cromatina se
desprendessem do centro da cromtide.
A informao gentica est escrita
na seqncia de bases que o DNA
apresenta. O genoma nuclear de uma clula
humana contm, aproximadamente,
6.000.000.000 pares de bases, compondo as
46 molculas de DNA dos cromossomos. O
menor cromossomo humano, o de nmero
21, possui 50.000.000 pares de bases. Voc
pode imaginar isso?
27
 Ter genomas grandes uma As principais vantagens da
caracterstica dos eucariotes. Esses compartimentalizao celular so:
organismos apresentam grandes Permitir a separao e a associao dos
quantidades de DNA em suas clulas, mas sistemas enzimticos;
boa parte desse DNA no considerado Aumentar a superfcie interna da clula,
gene, pois no transcrito, e no apresenta
aumentando o campo de ao enzimtica e
funo para a clula.
facilitando as reaes qumicas,
principalmente as que ocorrem em cadeia;
Permitir diferentes valores do pH
intracelular.
Componentes do sistema de
endomembranas
Retculo endoplasmtico:
O retculo endoplasmtico
constitudo por endomembranas que limitam
tbulos (pequenos tubos) e cisternas
(cavidades em forma de sacos achatados).
O retculo endoplasmtico dividido em:

Figura 28 visualizao de uma cromtide em um cReticulo endoplasmtico liso- tem a

cromossomo forma de tbulos, est envolvido em
transporte e armazenamento de substncias,
SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS
sntese de lipdios e desintoxicao celular;
dRetculo endoplasmtico rugoso-
As clulas eucariticas so
possui ribossomos aderidos a sua superfcie
compartimentalizadas, isto , possuem o
citoplasmtica; como os ribossomos fazem a
citoplasma todo dividido em estruturas
sntese protica, o retculo endoplasmtico
membranosas. Cada compartimento tem a
rugoso est envolvido na sntese protica,
sua funo especfica.
alm de transporte e armazenamento de
As membranas que delimitam estas
substncias (principalmente protenas).
organelas so do tipo mosaico fludo. Assim,
Complexo de Golgi:
os lipdios destas membranas isolam os
formado por vrias vesculas ou cisternas
contedos destes compartimentos e as
achatadas em forma de discos. Nestas
protenas controlam o que deve entrar ou sair
vesculas ocorre a maturao (modificaes
de cada compartimento. Alm disso,
qumicas) de substncias (principalmente
enzimas especificas proporcionam as
protenas que foram sintetizadas pelos
reaes qumicas caractersticas do
ribossomos do retculo endoplasmtico
funcionamento de cada organela.
rugoso). Aps esta maturao, essas

28
protenas tero dois destinos: c podem ser
enviadas para fora da clula (secreo);d
podem ser enviadas para outra organela
(lisossomo) para participar da digesto
intracelular.
Figura 29- -Sistema endomem-
branas da clula eucaritica
A Figura 29 apresenta o esquema de uma
clula eucaritica:
mp=memb. plasmtica; ri= ribossomos; mi=
mitocndrias; REG= retculo endoplasmtico
granular (rugoso); REA= ret. end. agranular
(liso); c= centrolo; G= golgi; Li= lisossomos;
Pe= peroxissomos; vs= vescula secretora;
ve= vescula endoctica; mv=
microvilosidade.
Secreo celular:
Muitas clulas produzem substncias
de exportao, isto , so substncias que
vo atuar fora da clula. Como exemplo,
temos as clulas glandulares. As clulas do
pncreas produzem insulina, que uma
protena importante para todas as clulas do
organismo. A esta exportao de substncia
chamamos SECREO CELULAR.
A secreo celular tem vrias
FASES. Vamos ver o exemplo da secreo
da insulina para entendermos estas fases. A
insulina uma protena, portanto, tem uma
seqncia especfica de aminocidos. Esta
seqncia est codificada no gene da
insulina que est no ncleo da clula. n A
primeira fase da secreo celular ocorre
ento, no ncleo da clula, onde o gene
transcrito em RNA mensageiro (mRNA). o
Este mRNA ento processado e sai do
ncleo. No citoplasma, ele ir se ligar aos
ribossomos no retculo endoplasmtico
rugoso (RER) e, l, ocorre a sntese da
protena (insulina) que entra no RER.p A
insulina transportada do RER at o
Complexo de Golgi, onde sofrer algumas
modificaes (amadurecimento) e ser
empacotada em vesculas.q As vesculas
produzidas pelo Complexo de Golgi,
chamadas vesculas secretoras, sero
levedas para fora da clula. Neste caso, a
insulina cair na corrente sangunea e ser
levada para todas as clulas do organismo.
Lisossomos:
So vesculas que contm hidrolases
cidas (enzimas digestivas que atuam em pH
cido) e esto envolvidas no processo de
digesto intracelular.
29
 Digesto intracelular: s vezes o lisossomo primrio
Chamamos de digesto intracelular a quebra envolve partes da prpria clula, que por
de macromolculas como protenas, cidos algum motivo no esto mais funcionais,
nuclicos e polissacardeos em seus formando o AUTOFAGOSSOMO, que um
respectivos monmeros, ocorrendo no lisossomo que digere uma parte da clula
interior da clula. Para fazer estas quebras, (AUTOFAGIA - auto= por si prprio / fagos=
so necessrias enzimas (PROTEASES, comer ).
DNAses, etc...). Estas enzimas no podem
ficar soltas no interior da clula, pois Como podemos notar, tanto na digesto
quebrariam as protenas, DNA.... da prpria celular como na secreo celular, nenhuma
clula. Por isso elas so isoladas no interior parte do sistema de endomembranas atua
de um compartimento, os lisossomos aonde sozinha, ao contrrio, so processos em que
ocorre a digesto intracelular. vrias partes do sistema de endomembranas
A digesto intracelular tambm atuam em conjunto.
ocorre em FASES: nop as trs primeiras
fases da digesto so idnticas a secreo Peroxissomas:
celular, uma vez que para fazer digesto, Os peroxissomas ou microssomas so
precisamos enzimas que quebrem pequenas vesculas de forma esfrica,
macromolculas, e enzimas so protenas, e semelhantes aos lisossomos, porm as
a mensagem de como fazer as protenas enzimas que carregam so muito diferentes.
esto nos genes; q na quarta fase, ocorre a Os peroxissomas carregam OXIDASES
internalizao do que vai ser digerido atravs (peroxidases, catalases e superoxido
da vescula endoctica, ou seja, por dismutase) que so enzimas que quebram as
fagocitose ou pinocitose, a clula vai formas ativas do oxignio (RADICAIS
internalizar o alimento dentro de uma LIVRES). Como exemplo de radicais livres
vescula (vescula endoctica) e r ocorre a podemos citar a gua oxigenada (H2O2). A
unio da vesicula endoctica com o lisossoma gua oxigenada, chamada tambm de
primrio (produzido no complexo de golgi, perxido de hidrognio uma molcula muito
contendo as enzimas j prontas para atuar reativa, podendo reagir com as protenas e
na digesto). Da unio da vescula endoctica outras macromolculas quebrando-as. Por
com o lisossomo primrio formar-se- o isso muitas pessoas usam gua oxigenada
lisossoma secundrio, onde ocorrer a para branquear os cabelos, pois a molcula
digesto. Aps a digesto, os monmeros de H2O2 quebra a melanina que uma
sero lanados para o hialoplasma (lquido protena que d a cor ao cabelo.
que envolve todos os compartimento do No interior de nossas clulas,
sistema de endomembrana), onde serviro milhares de reaes qumicas esto
para a clula montar novos polmeros. continuamente sendo realizadas, a estas

30
reaes chamamos METABOLISMO. Muitas
reaes metablicas produzem,
normalmente, muitas formas reativas de
oxignio do tipo da gua oxigenada, ou
mesmo alguns mais reativos, como o
superoxido (O2-). Para impedir que estes
radicais livres degradem as nossas prpria
protenas e DNAs, as nossas clulas
Figura 30- Esquema trimensional do sistema
produzem algumas enzimas (oxidases) que
de endomembranas. Podemos ver o REG na
degradam estes radicais livres. Estas
forma de cisternas (sacos achatados) e o
enzimas so armazenadas nos
REL na forma de tbulos. O golgi tambm
PEROXISSOMAS.
apresenta a forma de cisternas, porm so
Crianas que nascem com um
menores e no possui ribossomos aderidos.
defeito gentico em que estas enzimas no
so produzidas, morrem nos primeiros dois
anos de vida (Sndrome de Zellsweger).
CITOESQUELETO
Mitocndria:
Um compartimento (organela) A habilidade da clula eucaritica em
citoplasmtico muito importante a adotar variedades de formas, assim como
mitocndria, uma vez que este promover movimentos coordenados dos
compartimento est envolvido no processo componentes de seu interior, depende de
de transduo de energia (transferncia de uma complexa rede de protenas
energia provinda dos alimentos, filamentosas chamadas de
principalmente de molculas de glicdios e CITOESQUELETO (Figura 31).
lipdios para a molcula de ATP - Adenosina
Tri-Fosfato. Citoesqueleto: rede de
protenas filamentosas que do
Ncleo: forma e movimento clula
Este que o maior compartimento do
sistema de endomembranas contm a
Diferente de um esqueleto feito de
informao gentica, conforme j descrito
ossos, a rede de protenas do citoesqueleto
anteriormente.
muito dinmica, reorganizando-se
continuamente. De fato, o citoesqueleto
poderia bem ser chamado de
citomusculatura, j que responsvel
pelas mudanas de forma das clulas, pelos

31
movimentos das clulas sobre um substrato
(movimento amebide), atua na contrao
muscular, assim como em todos os
movimentos intracelulares, tais como
transporte de organelas, segregao dos
cromossomos, etc...

Figura 32- Microtbulos

Os microtbulos se distribuem pelo interior

da clula, a partir de uma regio central
chamado centro celular, aonde nas clulas
animais encontra-se o centrolo.

Estes microtbulos citoplasmticos

so importantes em estabelecer a forma da
clula, pois, ao se irradiarem a partir do
Figura 31. Clula vista ao microscpio, centro da clula, atuam como se fossem
evidenciando a rede de protenas do
citoesqueleto estacas ou colunas.
Os microtbulos citoplasmticos
DIVISES DO CITOESQUELETO: tambm esto envolvidos em movimento dos
O citoesqueleto pode ser dividido em componentes internos das clulas. Existem
trs classes de componentes: os protenas enzimticas, como a dinena e a
microtbulos, os microfilamentos e os cinesina que quebram ATP e usam a
filamentos intermedirios. Essas classes energia liberada para promover movimento.
diferem em relao ao tipo de protena que Estas protenas ligam-se s organelas que
as compe, ao padro de distribuio no precisam ser transportadas no interior da
interior da clula e quanto s funes clula, e usam os microtbulos como se
desempenhadas na clula. fossem trilhos, transportando as organelas
at seu destino.
MICROTBULOS Alm de constituir uma rede
citoplasmtica, os microtbulos podem
So tubos ocos, de 25 nm, formados formar ORGANELAS MICROTUBULARES.
por uma protena globular, a TUBULINA. Neste caso, muitos microtbulos e protenas
Milhares destas protenas iro se unir motoras se unem para formar uma estrutura
(polimerizar) formando os microtbulos. com uma finalidade especfica. Por exemplo,

32
durante a diviso celular, um feixe de so responsveis por movimentos
microtbulos se estende de um plo da intracelulares (ex.: ciclose e movimentos
clula at o outro, estes microtbulos amebides). Essa funo executada
serviro como trilhos por onde as protenas principalmente por uma protena motora, a
motoras levaro os cromossomos para os MIOSINA, que tambm usa o ATP como
plos da clula. fonte de energia e produz movimentos ao se
Clios e flagelos (ex.: flagelo da ligar e puxar as fibras de actina.
cauda do espermatozide), so formados
por muitos microtbulos e protenas motoras.
As protenas motoras fazem com que os FILAMENTOS INTERMEDIRIOS
microtbulos apresentem movimentos Os filamentos intermedirios so
rtmicos, dando capacidade de deslocamento filamentos com um dimetro em torno de 10
para a clula. Clios e flagelos tm uma nm, formado por vrios tipos de protenas,
organizao peculiar: nove pares de sendo a mais importante delas a
microtbulos formaro um feixe em volta de QUERATINA.
um par central. Os filamentos intermedirios
MICROFILAMENTOS filamentos associam-se a protenas da
Os microfilamentos so formados, membrana plasmtica e formam ligaes
principalmente por uma protena chamada entre clulas vizinhas, mantendo-as unidas.
ACTINA. Esta, uma protena globular, mas Nas clulas epiteliais, por exemplo, os
ao polimerizar-se formar longos filamentos filamentos intermedirios so mais
de 5 a 9 nm. Estes filamentos formam uma abundantes pois a unio entre as clulas
rede logo abaixo da membrana plasmtica, deve ser mais forte.
servindo de sustentao para essa estrutura
que muito fina e frgil.
DO UNICELULAR AO PLURICELULAR

Durante o processo evolutivo, alguns

Figura 33 Microfilamentos
organismos tomaram o caminho de formar
colnias de muitas clulas. Posteriormente,
cada clula foi se especializando em uma
determinada funo. Este caminho levou ao
surgimento de seres pluricelulares.
A rigor, todas as clulas dos
pluricelulares contm a MESMA
INFORMAO GENTICA. Como ento a
Alm de serem importantes para dar maquinaria metablica de uma clula
forma clula, os microfilamentos tambm

33
muscular to diferente daquele de um
neurnio?
A medida que ocorre o
desenvolvimento dos organismos
pluricelulares, diferentes genes sero
ativados. ( VER FIGURA 34) As clulas vo
sofrer um processo chamado de
diferenciao, tomando as suas vrias
funes. Embora todos os genes estejam
presentes em todas as clulas, nas clulas
musculares apenas alguns genes so ativos
(so transcritos) e ento s as protenas
codificadas pelos genes transcritos esto
presente nessas clulas. J em uma clula
nervosa, embora possua os mesmos genes
da clula muscular, outros genes esto
ativos, resultando a traduo de outras
protenas.

FIGURA 34 Diferenciao celular que

corre no desenvolvimento de organismos
pluricelulares.

34
 PRTICAS DE BIOLOGIA CELULAR*
Recomendaes de ordem geral a serem
observadas no uso do Laboratrio**
A manuteno do material colocado
a sua disposio depende de sua boa
vontade e do seu senso de responsabilidade
pessoal. O microscpio que voc usa custou
elevado preo, cuida dele como se fosse seu.
Dedique 3 minutos finais de cada aula
para limpar as objetivas com leno de
papel (se foi usado leo de imerso),
assim como a sua bancada.
Freqentemente voc dever fazer
desenhos ilustrativos das preparaes
observadas. Para tal, traga folhas de papel
ofcio, ou um caderno de desenho. Exatido
nos detalhes, limpeza e capricho sero
levados em conta mais do que habilidade
para a arte de desenhar. Nunca desenhe
algo incgnito que veja sob o microscpio.
Compare aquilo que visto sob o
microscpio com ilustraes de livros, caderno didtico.
quadros ou outras fontes. No se limite
apenas a copiar figuras, examine o material
colocado a sua disposio.
Os roteiros de aulas prticas que
esto includos neste caderno devem ser
lidos CUIDADOSAMENTE antes que
qualquer trabalho seja iniciado. Discuta suas
dvidas com o professor. Procure estar
sempre em dia com os trabalhos das aulas
prticas.
PONTOS A SEREM OBSERVADOS AO
DESENHAR:
Porque se exige um bom desenho:
1) para obrigar a observar.
2) para que a observao possa ser corrigida
por outra pessoa.
1
3) para que fique um registro da observao
efetuada que possa ser consultada
posteriormente.
**Copia parcial da introduo de MANARA,
N.T.F.(mimeografado, sem data).
FORMA CORRETA DE REALIZAR OS
DESENHOS EXIGIDOS
NAS AULAS PRTICAS.
1) Todos os desenhos e as anotaes
devero ser feitos com lpis HB, ou similar,
com a ponta fina. Tenha a mo uma borracha
macia.
2) No esquea a data e o aumento
usado.
3) Guarde as folhas arquivadas, junto ao
4) Escreva sempre com letras de
imprensa.
5) No encha o campo de desenhos. Os
espaos em branco facilitam a compreenso
e posterior estudo do tema.
6) Os desenhos devem ser proporcionais
ao observado. No faa desenhos muito
pequenos.
7) As setas indicadoras dos elementos
desenhados devero ser linhas suaves, feitas
com rgua e paralelas ao borde inferior da
folha.
8) A utilizao de formas geomtricas
(Figura 2.1) artifcio para facilitar a
representao do objeto. Sobre esta base se
1
Mais detalhes de algumas das prticas aqui
descritas podem ser encontradas no livro:
LORETO, E.L.S. & SEPEL, L. M.N. Atividades
experimentais e didticas de Biologia Molecular
e Celular. Ribeiro Preto, SBG. 2003. 2a ed.
www.sbg.org.br
35
trabalhar, at obter a maior semelhana
possvel com o observado.
9) Na Figura 2.2, encontrar um exemplo
de proporo, formas, espaos, distncias e
grossuras dos traos.
10) Antes de comear a desenhar o
contorno dos objetos:
a) observe bem o preparado. Estude-o
e interprete-o;
b) determine exatamente o espao que
vai ocupar o desenho, marcando com linha
suave;
c) observe a relao que guardam
entre si os elemento a desenhar, isto , sua
proporo, tamanho e forma, fixe-os com
linhas auxiliares dentro do contorno geral
(Figura 2.2).

Figura 2.1 Observao da linha e forma na hora de desenhar

Figura 2.2 Cuidados no fazer o desenho quanto proporo, forma, e espao.

36
 1a Aula
O USO DO MICROSCPIO PTICO (MO)

O mundo microscpico fascinante. O microscpio foi um aparelho que muito contribuiu

para o desenvolvimento da Biologia Celular. Por esse motivo iniciamos as atividades prticas
dessa disciplina descrevendo um microscpio ptico e dando algumas dicas para o seu uso
adequado.
Uma clula animal tpica tem 10 a 20 m de dimetro, ou ao redor de 5 vezes menos do
que a menor partcula visvel ao olho nu. Portanto, a descoberta de que os animais e vegetais
eram compostos por agregados de clulas individuais, ou a existncia de pequenos seres
unicelulares, no foi possvel at que bons microscpios fossem fabricados, no incio do sculo
XIX.
As clulas animais no so apenas pequenas, mas so descoloridas e translcidas;
conseqentemente, a descoberta de sua organizao interna dependeu, tambm, do
desenvolvimento, na ltima metade do sculo XIX, de uma variedade de corantes que tornaram
vrias partes da clula visveis.
O microscpio tem por objetivo produzir imagens aumentadas de objetos to pequenos
que, ao exame da vista desarmada, no poderiam ser vistos. Tem ainda como escopo, revelar
detalhes texturais imperceptveis a olho nu.
Devemos lembrar que os objetos so vistos por duas razes fundamentais: 1) porque
absorvem a luz; 2) por causa da diferena entre o seu ndice de refrao e o do meio que os
envolve. Quanto maior a diferena, mais facilmente o objeto ser visto. Assim, as clulas e seus
componentes, para serem observados ao microscpio devem ser tratados por reagentes especiais,
do que resulta sua colorao, isto , os componentes celulares passam a absorver luz
diferentemente, tornando-se bem visveis.
Chamamos de limite de resoluo (LR) a capacidade mxima de ver dois objetos como
distintos. O LR depende do comprimento de luz usado e da abertura numrica do sistema de
lentes. Dentro da faixa de luz visvel o LR de 0,4 m para o violeta e 0,7 m para o vermelho. Em
termos prticos, bactrias e mitocndrias (+/- 0,5 m) so geralmente os menores objetos vistos ao
M.O.
Na Figura 2.3 temos um microscpio, em que so indicadas as suas principais partes. Um
microscpio compe-se de um sistema ptico (condensador, objetivas e oculares), corpo do
microscpio (mesa, tubo, platina...) e fonte de iluminao (que nos microscpios mais antigos no
fazem parte do microscpio).
O condensador tem por objetivo prover uma iluminao uniforme. Geralmente dotado de
um diafragma que permite controlar a quantidade de luz que incidir sobre a preparao a ser

37
observada. Em muitos aparelhos, a intensidade e qualidade da luz tambm pode ser controlada
atravs de um parafuso que permite subir ou baixar o condensador.
Duas lentes ou conjuntos de lentes permitem o aumento da imagem da preparao, so as
lentes oculares e as objetivas. As oculares, como o prprio nome diz, ficam prximas ao olho do
observador. J as objetivas ficam prximas ao objeto a ser observado. As objetivas so afixadas
em um sistema rotativo, o revlver, que permite que sejam trocadas com facilidade. Quanto maior
o tamanho da objetiva, maior o aumento que ele proporciona. As objetivas e oculares, trazem
escrito no seu corpo, vrias informaes e entre elas o seu valor de aumento. O aumento final
dado por um conjunto de lentes obtido multiplicando o aumento da objetiva pelo aumento da
ocular. Assim, se o aumento da objetiva de 10X e a ocular tambm de 10X o aumento final
de 100 vezes.
Como proceder para focalizar no microscpio:
1) Mova o revolver de modo a deixar a objetiva panormica (menor aumento) na posio
de observao, e abaixe totalmente a mesa.
2) Coloque a lmina na mesa (platina), fixando-as com as garras do charriot (obs: a
lamnula deve estar voltada para cima).
3) Ligue o sistema de iluminao e ajuste o charriot de modo a centrar o material a ser
observado na regio iluminada do orifcio da platina.
4) Olhe pela ocular ao mesmo tempo em que a mesa lentamente elevada, girando o
parafuso macromtrico, at que a preparao esteja focalizada. Use o micromtrico para fazer o
ajuste fino do foco.
5) Mova a lmina usando o charriot de forma a encontrar campos interessantes a serem
observados. Interprete o que estas vendo, registre e se necessrio desenhe.
6) Quando mais detalhes de uma regio da lmina so necessrios, utilize as objetivas de
maior aumento (10X; 40X). Para tal, basta girar o revlver e fazer um ajuste fino do foco com o
micromtrico.
PARA USAR A OBJETIVA DE 100X, se faz necessrio colocar uma gota de leo de
imerso entre a lamnula e a lente. Focalize mexendo somente o micromtrico.
Aps o uso da lente de imerso no esquea de retirar o leo da objetiva e tambm da
preparao.
Outros lembretes importantes:
Cada pessoa tem uma distncia entre os seus olhos. Para que possamos olhar em
microscpios binoculares (com duas oculares), estes possuem um sistema de regulagem da
distncia interorbital, ou seja, um mecanismo que permite movimentar os dois canhes para a
medida exata da distncia entre os olhos de cada usurio. Alm disso, ao menos uma das
oculares tem uma regulagem de foco independente. Assim, ao comear a observao em um
microscpio binocular, primeiro focalize olhando somente a ocular que no tem regulagem,
posteriormente, focalize com a outra ocular, girando o controle de foco da ocular.
A iluminao, de fundamental importncia na visualizao ao microscpio ptico. Aps a
focalizao, movimente o condensador e o diafragma deste, at encontrar a iluminao ideal.

38
 Ao encerrar as observaes ao microscpio no esquea de deixa-lo com a platina
abaixada, com a objetiva panormica, e desligado.

Procedimento:
1) Corte um pedao de jornal que contenha algumas letras, coloque sobre uma lmina e
leve ao microscpio.
2) Focalize algumas letras. O que acontece? Desenhe.
3) Mude as objetivas. O que acontece? Desenhe.
4) Pegue um fio de cabelo, coloque entre lmina e lamnula. Leve ao microscpio, observe
e desenhe.

Questes a serem respondidas:

1) Como se calcula a aumento final que estamos vendo em um microscpio?
2) Porque a imagem vista em um microscpio invertida?
3) O que microscopia de fluorescncia? Para que serve?
4) O que microscopia de contraste-de-fase? Para que serve?
5) Descreva o processo de focalizao de Khler
6) O que um estereomicroscpio?
7) O que microscopia eletrnica? Descreva o funcionamento de um microscpio eletrnico e
compare o seu funcionamento com o do microscpio ptico.

Figura 2.3 Partes do microscpio

39
2a aula
observando clulas de epitlio
de escamas de cebola
Um dos materiais mais apropriados para um primeiro contato com as clulas uma
preparao a fresco de epitlio de escamas de cebola. uma prtica extremamente simples e as
clulas desse material so grandes de tal forma que com qualquer microscpio mesmo rudimentar
permite a visualizao dessas clulas. Com um microscpio de uma boa ptica possvel observar
o ncleo, nuclolo, plasmlise, parede celular, e plasmodesmos.

OBSERVANDO OSMOSE EM CLULAS VEGETAIS

1) Retire a epiderme de uma escama de cebola e coloque sobre uma lmina com uma gota
de azul de metileno (0,3%). Preste ateno para retirar o epitlio exterior da escama, pois este tem
uma nica camada de clulas enquanto o da camada inferior tem vrias camadas o que dificultar
a observao. Espere 1 minuto para corar e depois retire o excesso de corante com uma gota de
gua.
2) Cubra com uma lamnula. Cuide para no ficar bolhas de ar e que fique lquido entre a
lmina e a lamnula. Seque a lmina principalmente a face de baixo (sem a lamnula) pois se esta
ficar mida, vai grudar na mesa do microscpio dificultando o movimento do charriot.
2) Observe e desenhe as clulas de epiderme de cebola, indicando a parede celular, o
ncleo e o nuclolo.
3) Coloque em um dos lados da lamnula uma gota de uma soluo saturada de NaCl ou
sacarose (ou glicerina). Observe, descreva e desenhe o que aconteceu.
4) Identifique os plasmodesmos, e a parede celular.

Responda as seguintes questes:

1) Faa um desenho com todas as partes observadas.No esquea as legendas,

aumentos e a data.
2) Qual o formato das clulas observadas?
3) Para que serve o azul de metileno?
4) O que aconteceu quando colocamos as clulas em uma soluo hipertnica? Por que?
5) O que plasmlise?
6) O que so plasmodesmos?
7) O que a parede celular? No que ela difere da membrana plasmtica?

40
PARA FAZER EM CASA (As questes e desenhos dessa atividade deve ser entregue junto com as
questes e desenhos da segunda aula)

PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS DOS COMPONENTES DA

MEMBRANA PLASMTICA.
Material necessrio: 3 recipientes (copo, vidro de remdio...); 1 colher; azeite; gua;
detergente colorido (azul, verde ou vermelho); solvente orgnico (acetona, gasolina, ter ou gua-
raz); acar e sal.
As macromolculas que compe os seres vivos podem ser classificadas em 2 tipos:
polares, sendo solveis em gua (hidrossolveis) e as apolares que so insolveis em gua, mas
solveis em solventes orgnicos como ter, clorofrmio, cetonas... (lipossolveis).

Procedimento:
1) Em um recipiente com um pouco de azeite de cozinha (que um lipdio- portanto
apolar), coloque uma pitada de acar (que um glicdio). Mexa bem. O que aconteceu? Por que?
- Repita com sal de cozinha, o que aconteceu? Por que?

2) Em um recipiente, coloque um pouco de acetona ou ter ou gua-raz ou gasolina (todos

estes so solventes apolares). Coloque uma colher de acar. Agite. O que aconteceu? Por que?
- Repita com uma gota de azeite. O que aconteceu? Por que?

3) Em 3 recipientes, coloque:

no 1o: 1/2 de gua, 1/2 de azeite

no 2o: 1/2 de azeite, metade de detergente colorido (azul ou vermelho)
no 3o: 1/3 de gua, 1/3 de azeite e 1/3 de detergente colorido.
Agite os lquidos com uma colher e observe por 5 minutos ou mais. Descreva o
que aconteceu?
As membranas biolgicas so formadas, principalmente, por lipdios e protenas
anfipticas, ou seja, molculas com uma parte apolar (lipossolveis) e uma parte polar
(hidrossolvel) como os detergentes. Portanto so, hidrossolveis e lipossolveis ao mesmo
tempo.

41
Responda:
a) Faa um desenho de como so organizadas as molculas anfipticas de detergentes
em uma bolha de sabo.
b) Faa um desenho de como so organizadas as molculas de lipdios e protenas nas
membranas plasmticas (Consulte os modelos nos livros de Biologia Celular).
c) Que propriedades podemos esperar da Membrana Biolgica segundo o modelo do
Mosaico Fludo ?
d) Qual a funo dos lipdios (fosfolipdios) nas membranas biolgicas segundo o modelo
do M-F ?
e) Qual a funo das protenas nas membranas biolgicas segundo o modelo M-F?

3a Aula:
COMPARANDO CLULAS PROCARIOTAS E EUCARIOTAS.

Os seres vivos podem ser classificados em dois grandes grupos: os procariontes e os

eucariontes, conforme a organizao da clula que os compe. O objetivo desta prtica de
comparar clulas procariotas e eucariotas, suas semelhanas e diferenas. Ao microscpio ptico,
o que mais chama a ateno, a grande diferena de tamanho que existe entre as clulas
procariontes e eucariotes tpicas. claro que podemos encontrar clulas procariontes, como
algumas algas cianofcias, que possuem tamanho prximo ou mesmo maior que algumas clulas
eucariontes. Entretanto, a regra que os procariontes geralmente tm clulas bem menores que
os eucariontes.
Outra diferena bem marcante a presena do ncleo nos eucariontes e a sua ausncia
nos procariontes. Internamente, no s a presena do ncleo difere os procariontes dos
eucariontes, mas sim uma intensa compartimentalizao das diversas funes celulares em
organelas envoltas por membranas, o sistema de endomembranas que caracteriza as clulas
eucariontes. Porm, via de regra, o sistema de endomembranas de difcil visualizao ao
microscpio ptico, sendo mais bem observado ao microscpio eletrnico.
Nesta atividade, vamos colocar lado-a-lado clulas bacterianas (uma tpica clula
procarionte) e clulas da mucosa da bochecha (representando uma tpica clula eucarionte).

42
Material necessrio:
Lmina, lamnula, palito de fsforo, placa com bactrias, ala de platina, lamparina, lcool
70%, corante azul de metileno 0,05%, papel filtro, copo Becker 250 ml (ou vidro de Nescaf),
microscpio.
Procedimento:
1) Com uma ala de platina, encoste levemente em uma colnia de bactrias na placa de
Petri.
2) Esfregue a ala na lmina at espalhar bem as bactrias.
3) Fixe as bactrias pelo calor, passando a lmina na chama de uma lamparina, com as
bactrias voltadas para cima, tomando o cuidado para a lmina no aquecer demais (controle nas
costas da mo).
4) Com um palito de fsforo, raspe a bochecha, posteriormente,esfregue o palito em cima
da regio da lmina em que previamente foram colocadas as bactrias.
5) Fixe as clulas em lcool 70% por 1 minuto.
6) Coloque uma gota de corante (azul de metileno 0,3%) e espere 1 minutos.
7) Tire o corante, deixando passar um pequeno fluxo de gua, sob a torneira.
9) Cubra com lamnula, seque os lados da lmina e observe ao microscpio.
Questes a serem respondidas:
1) Compare as clulas procariotas e eucariotas (observe e desenhe):
a) Quanto ao tamanho - Faa um desenho com as relaes de tamanho, no esquecendo
de anotar o aumento usado.
b) Quanto forma.
c) Quanto presena de ncleo.
d) Porque fixamos as bactrias na chama ?
e) Qual a funo da fixao em lcool ?
f) Qual a funo de cada um dos componentes do corante?

2) Quais seres vivos chamamos de procariontes? Quais os que representam os

eucariontes?
3) Que outras diferenas existem entre as clulas procariotas e as eucariotas, mas que no
puderam ser vistas ao microscpio ptico? O que precisamos fazer para poder detectar estas
diferenas?

43
Para fazer na cozinha (2)
UM POUCO DE FSICO-QUMICA:
(as questes dessa atividade devem ser respondidas e entregues junto com as da 3a aula)

O que pH ?

INFORMAES TERICAS:
Muitas molculas esto continuamente formando ons. A gua, por exemplo, forma os ons
H+ e OH-, que permanecem por algum tempo nesta forma inica e voltam a se associar para
formar nova molcula de gua. A molcula de gua ao se dissociar, forma quantidades iguais de
ons H+ e OH- .
Algumas molculas formam quantidades desiguais de ons H+ ou OH-. Por exemplo:
a) HCl (cido clordrico) forma os ons H+ e Cl - . Sempre que a dissociao de uma molcula em
seus ons forma prtons H+, ela um CIDO.
b) NaOH (hidrxido de sdio) forma os ons Na+ e OH-. Sempre que a dissociao de uma
molcula em seus ons forma hidroxilas OH-, ela uma BASE.

O pH (potencial de Hidrognio) uma medida da quantidade de prtons H+ presentes em

uma soluo. Quanto mais prtons H+, mais cida a soluo. Quanto mais hidroxilas (OH-)
mais bsica, ou alcalina a soluo. A gua, como tem igual quantidade de H+ e OH- dita
NEUTRA.
Chamamos de ESCALA DE pH as variaes na quantidades de prtons H+, que varia de 1
a 14. As solues com pH abaixo de 7 so ditas cidas e as acima de 7 so as bsicas (alcalinas).
A gua tem pH 7,0.
cido Neutro Base
pH 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Quando, em uma soluo cida, vamos gradativamente acrescentando uma base,
forma-se Sal e gua e o pH da soluo vai subindo at ficar neutro e posteriormente continua
subindo tornando-se bsica.

44
 Agora, se comearmos a adicionar um cido em uma soluo bsica, o pH vai diminuindo,
torna-se neutro e passa a cido.

EXPERIMENTOS PARA DEMONSTRAR ALTERAO DE pH

Algumas substncias podem mudar de colorao dependendo do pH da soluo.

Podemos usar esta propriedade para demonstrar alteraes de pH.

45
 I . Preparando a atividade:

Material Necessrio para Execuo do Experimento:

- Folhas de Repolho Roxo,
- cido actico (3%) ou vinagre
- Hidrxido de sdio (0,1 M), ou uma soluo feita com umas escamas de soda custica (2 ou 3)
em 10 ml de gua (+/- 3 colheres); em ltimo caso pode se usar leite de magnsia.
- Frascos incolores / transparentes para a visualizar as alteraes de colorao
- Conta-gotas ou pipetas (no mnimo um para cada soluo)

Preparo das Solues-

A) Infuso de repolho roxo:

Picar bem 2 a 3 folhas de repolho roxo (correspondente a uma xcara), colocar em gua
fervente e esperar alguns minutos, para que a gua torne-se colorida.

PROCEDIMENTO:

1. Colocar, em quatro frascos transparentes um pouco da soluo de repolho roxo

2. Acrescentar algumas gotas de vinagre. Observe o que acontece.
3. Acrescente agora algumas gotas de soluo de NaOH (ou soluo de soda custica).
Acrescente tanta gotas at que no mude mais de cor.
4. Volte a adicionar gotas de vinagre.
5. Volte a adicionar NaOH.
6. Comparar e registrar as coloraes obtidas.
OBS.: O fenmeno de alterao de cores reversvel portanto, ocorrendo toda vez que o pH
ultrapassa o ponto de viragem do indicador.

Responda as questes:

1) Quais so os pHs que encontramos no sangue, na urina e no estomago humano?

2) O pH do sangue sofre variaes? Existe algum mecanismo de controle do pH no sangue?
3) E dentro da clula, as diferentes organelas tm o mesmo pH? D exemplos.
4) O que acontece com as protenas quando temos pequenas alteraes de pH ? E quanto as
protenas so submetidas a grandes alteraes de pHs, como quando colocadas em um meio com
pH muito cido ou muito alcalino?
5) Localize 5 propriedades biolgicas associadas com pH?

46
4 a Aula

ESTUDANDO A PASSAGEM DE SOLUTOS E SOLVENTES

PELA MEMBRANA PLASMTICA.

As clulas de qualquer organismo esto cobertas pela membrana celular. A constituio

dessa membrana promove a passagem controlada de substncias e o conseqente equilbrio
dinmico dentro do organismo.
A gua e outros ons pequenos podem passar sem gasto de energia (transporte passivo)
pelas membranas biolgicas (M.B).
Uma das formas de transporte passivo a osmose, que vem a ser a passagem do solvente
de uma soluo menos concentrada para a soluo mais concentrada, atravs de uma membrana
semi-permevel.
Observao importante:
O uso de sangue em aulas prticas, deve ser feito com muita cautela, principalmente
depois do aparecimento da AIDS. Mas pensamos que isto, ao invs de ser um obstculo, deve ser
um componente a mais para a formao dos alunos. Devemos fazer uso de agulhas estreis, o
chamar a ateno para que todos evitem, de toda maneira, usar a lmina dos colegas, ficando
restrito a manipulao do seu prprio sangue. O professor, e todos os que vo manipular sangue,
devem, sem exceo, usar luvas descartveis. Aps a atividade, todo o material deve ser
desinfectado com lcool.

Material necessrio:
Lmina, lamnula, agulha hipodrmica descartvel, lmina de barbear, conta gotas, gua
destilada, soro fisiolgico (NaCl 0,9%), soluo hipertnica (soluo saturada de NaCl e/ou
acar); papel filtro, MO, luvas descartveis, gua sanitria, algodo, glicerina.

Procedimento:
1) Coloque uma gota de soro fisiolgico em duas lminas limpas (o uso de soro fisiolgico
e opcional, se a gota de sangue for de um volume razovel -uma gota grande- no se faz
necessrio o uso de soro fisiolgico).
2) Fazer um pequeno furo na ponta de um dedo, com uma agulha descartvel estril e
colocar uma gota de sangue sobre cada lmina (todas as agulhas devem ser dispensadas em um
frasco com uma soluo 20% de gua sanitria).
3) Cubra com lamnula e observe ao MO. Descreva e desenhe as hemcias.

47
 4) Em uma das lminas, com um conta-gotas coloque uma gota de uma soluo
hipertnica em um dos lados da lamnula e encoste um papel filtro do outro lado para substituir o
soro da lmina. Dessa forma, o papel filtro puxar um pouco do sangue da lmina e no outro lado,
um pouco da soluo hipertnica entrar em contato com as clulas sanguneas.
5) Observe ao MO, principalmente na regio da lmina onde as hemcias mais entraram
em contato com a soluo hipertnica que as hemcias murcharam, ficando crenadas.
6) Na outra lmina, repita o mesmo procedimento anterior, s que em vez de soluo
saturada, use gua destilada. Observe na regio da lmina onde as hemcias mais entraram em
contato com a soluo hipotnica que as clulas esto trgidas, quase estourando (e as vezes
realmente estouram).

Terminada esta parte da prtica, as lminas devem ser mergulhadas em uma soluo de
gua sanitria 20% (ou lcool 96 GL) por no mnimo 1/2 hora, para depois ser limpo e
reaproveitadas. Cada aluno deve passar um algodo com lcool, na mesa e demais partes
manuseadas do microscpio.

1) O que osmose? quando ocorre?

2) Porque ocorre hemlise (as hemcias estouram) quando as colocamos em gua destilada?
3) Porque as hemcias ficam crenadas na presena de uma soluo hipertnica?

48
5a aula

FRACIONAMENTO CELULAR

O emprego do microscpio, seja o microscpio ptico ou eletrnico, geralmente fica restrito

descrio das estruturas celulares. Para o estudo da composio qumica dos componentes
celulares e interpretao das interaes entre estes componentes para explicar o funcionamento
celular, se faz necessrio o emprego de outras metodologias que no o uso do microscpio. O
estudo bioqumico dos componentes celulares requer a separao e o isolamento cuidadoso das
vrias organelas e macromolculas celulares. As 3 principais tcnicas usadas para isto so a
centrifugao, cromatografia e eletroforese.

1) ORGANELAS E MACROMOLECULAS PODEM SEM SEPARADAS POR

CENTRIFUGAO.

As clulas podem ser rompidas de vrias maneiras, como por choque osmtico, vibraes
ultrasnicas, foradas a passar por um pequeno orifcio ou homogeneizadas por fora mecnica.
Quando cuidadosamente aplicadas, estes procedimentos deixam as organelas como ncleo,
mitocndrias, complexo de Golgi, peroxissomos... intactos. Assim como muitas vesculas derivadas
do retculo endoplasmtico, chamadas microssomos, mantm muito de suas propriedades
bioqumicas originais.
Como todos estes componentes tem grandes diferenas de tamanho, eles podem ser
separadas por centrifugao.
Postos em um tubo a girar em altas rotaes, os vrios componentes vo sofrer a ao da
fora centrfuga. Os componentes maiores como clulas intactas e ncleos vo sedimentar
primeiro no fundo do tubo (p/ ex: 1000 rpm por 5'); rotaes medianas em maior tempo faro
sedimentar componentes um pouco menores como mitocndrias, lisossomas e peroxissomas
(20.000 rpm por 10'). Altas rotaes em tempos ainda maiores (80.000 rpm por 3 horas)
sedimentam ribossomos e grandes macromolculas.
Ver esquema de fracionamento por centrifugao em Junqueira e Carneiro (2000).

Material Necessrio:
Folhas de Tradescantia; gral e pistilo; tubos de centrfuga; pipetas Pasteur; centrfuga;
soro fisiolgico; SDS 10% (sdio-duodecil-sulfato) ou detergente, gua destilada. lmina, lamnula
e microscpio.

49
Procedimento:
Primeira parte: Observao de um corte transversal de folha de Tradescantia
1) com uma gilete afiada, corte transversalmente uma folha de Tradescantia, o mais fino
possvel.
2) Coloque o corte em uma lmina com uma gota de gua, cubra com lamnula e leve ao
microscpio.
3) Observe: a) que clulas tem pigmento roxo. Desenhe
b) Que clulas tem cloroplastos. Identifique os cloroplastos e desenhe.

Segunda Parte: Fracionamento por centrifugao.

1) Coloque 3 ml de soro fisiolgico em um gral;

2) Esmague nesta soluo 3 a 4 folhas de Tradescantia com um pistilo;
3) Coloque o lquido em um tubo de centrfuga e centrifugue rapidamente (15 seg) para retirar
fibras de celulose e restos de tecidos;
4) Transfira o sobrenadante para um novo tubo, e centrifugue por 5 minutos a 7.000 rpm.
6) Desenhe e descreva o que encontramos no tubo aps a centrifugao.
7) Passe o sobrenadante para um novo tubo.
8) Ressuspenda o precipitado com dois ml de soro fisiolgico.
9) Faa uma lmina com o sobrenadante e com o precipitado, observe ao microscpio e
desenhe.
10) Acrescente uma gota de SDS 1% ou detergente no tubo com lquido verde, agite por um
minuto.
11) Centrifigue os tubos, sobrenadante e o precipitado (agora ressuspenso) por 5 mim a 7.000.
12) Observe e desenhe o que encontramos nos tubos
13) Faa uma lmina com o precipitado do tubo verde.

Responda as questes:
1) Que mtodo usamos para romper as clulas, nesta prtica?
2) Porque usamos soro fisiolgico e no gua?
3) O que encontramos no sobrenadante aps a primeira centrifugao? E no precipitado?
4) Por que usamos o SDS?
5) Por que o sobrenadante agora verde e o precipitado incolor?
6) o que uma ultracentrfuga?
7) Faa um esquema de fracionamento celular, que voc poderia fazer se tivesse uma
ultracentrfuga, e desejasse fracionar hepatcitos nos seus vrios componentes.
6a aula

50
 FRACIONAMENTO MOLECULAR POR CROMATOGRAFIA

Como podemos isolar uma protena ou uma outra molcula da clula?

Para o desenvolvimento da Biologia Celular, foi crucial obter as molculas que compe a
clula, como as protenas, em seu estado puro, isto , isolado das outras molculas da clula. Mas
mesmo uma bactria bem simples possui mais de 2000 tipos de protenas, como podemos isolar
s uma enzima que nos interesse?
Um dos mtodos mais utilizados para este fim a cromatografia de coluna, na qual uma
mistura de molculas em soluo aplicada na parte superior de uma coluna, que contm uma
matriz slida, porosa. Posteriormente, um grande volume do solvente passa pela coluna e
coletado em tubos separados, medida que emerge na parte inferior da coluna. As diferentes
molculas so retardadas diferencialmente, pela sua interao com a matriz, molculas diversas
atravessam a coluna com velocidades diferentes e so ento fracionados em uma srie de tubos.

Depois de passar em algumas dessas colunas, a enzima de nosso interesse estar

isolada de todas as outras molculas, em um dos diferentes tubos que foram coletados.

Atividade experimental:

1- Coloque um pequeno pedao de esponja na ponta de uma pipeta Pasteur.

51
2- Faa uma soluo de Slica gel em um copo volumtrico ou becker, usando gua de torneira
levemente acidulada com 1 gota de vinagre para cada 10 ml. Com um conta-gotas, coloque a
resina (slica gel) na coluna. A este procedimento chamamos empacotamento da coluna.
3- Em um gral, coloque uma folha de manto-de-viuva (Tradescantia), com umas gotas de gua-
acidulada e esmague com o pistilo.
4- Colocar aproximadamente um ml desse lquido na coluna
5- Com uma pipeta de Pasteur coloque gua na ponta superior da coluna e observe que um lquido
roxo comea a descer, enquanto uma camada verde se deposita na ponta superior da coluna.
Aps algum tempo comea a pingar uma soluo roxa (antocianina). Colete amostra desta fase.
6- Substitua o lquido que passa pela coluna, coloque etanol na parte superior da coluna e observe
que o pigmento verde comea a descer
7- Quando comear a pingar o pigmento verde, colete uma amostra deste.

Responda:
1) Faa um desenho esquemtico representando o experimento e explique-o.
2) Porque o pigmento roxo diludo primeiro na coluna?
3) Por que o pigmento verde fica retido no coluna enquanto estava passando gua pela coluna?
4) Por que ele desceu na presena de lcool?
5) Qual a localizao intracelular das antocianinas?
6) Qual a localizao intracelular das clorofilas?
7) Qual a solubilidade desses pigmentos?

ISOLAMENTO DE DNA NA COZINHA

Em um laboratrio de Biologia Molecular, o primeiro passo para se estudar um gene o

isolamento do DNA. Voc tambm pode fazer isto na sala de aula ou em sua cozinha.

Procedimento:

1) Pique uma cebola grande (250g) em pequenos pedaos (ou rale com um ralador). Faa uma
soluo misturando 10 ml de detergente de loua, 1/2 colher de sopa de sal e complete com gua
at 100 ml. Aquea a soluo at +/- 60oC e adicione esta mistura ao picadinho de cebola,
deixando 10 minutos em banho-maria a 60oC.

52
2) Resfrie rapidamente a mistura colocando o recipiente em uma bacia contendo gua e gelo. Coe
a mistura em um filtro de papel para caf, aparando o filtrado em um vidro.
3) Adicione delicadamente lcool (gelado) no filtrado de cebola, deixando o etanol escorrer pela
parede do vidro. Observe a formao de fios esbranquiados que sobem para onde est o lcool.
Estes fios correspondem aos cidos nuclicos - DNA e RNA.
4) Voc pode retirar o DNA da soluo enrolando em um basto.
5) Deixe o basto secar ao ar e coloque o basto em um tubo com gua para re-dissolver o DNA.
Aplique este DNA no processo de eletroforese explicado a seguir.

Atividades Propostas e Perguntas

1) Faa um desenho esquemtico com todas as fases do experimento. - Em detalhe, mostre o que
vai acontecendo com as clulas e com as macromolculas.
2) Porque usamos detergente?
3) Qual a funo do sal e da gua quente?
4) Por que baixamos a temperatura, aplicando gelo?
5) Por que coamos em um filtro de caf?
6) Qual a finalidade de acrescentarmos o lcool?

7a aula

ELETROFORESE

Molculas que possuem carga eltrica, como as protenas e os cidos nuclicos, podem
ser separadas por eletroforese. Eletroforese o movimento de molculas eletricamente carregadas
em um campo eltrico.
Geralmente, em um processo eletrofortico, as protenas ou cidos nuclicos so
colocadas a migrar sob um campo eltrico, no interior de um suporte gelatinoso (um gel) de
poliacrilamida, agarose ou amido.

A seguir ser apresentado o processo de eletroforese vertical para separao de protenas. O que voc
vir em aula ser eletroforese horizontal de cidos nuclicos, preste ateno na aula e faa as devidas
observaes das diferenas entre a tcnica descrita para protenas e a feita em aula para DNA.

53
 As amostras contendo uma mistura de protenas so aplicadas em um gel. Posteriormente uma
corrente eltrica aplicada neste gel por algumas horas, as protenas mais negativas e menores
migraro mais rapidamente que as positivas e maiores.

Posterior a migrao, o gel colocado em uma soluo contendo corantes especficos

para protenas (A). Aps a colorao, podemos visualizar diferentes bandas que correspondem a
protenas que possuem cargas ou tamanhos diferentes (B).
Alguns processos de eletroforese podem revelar mais de 1000 diferentes protenas em um
nico gel. Esta grande sensibilidade torna esta tcnica muito til para identificar quais as protenas
so responsveis por diferenas genticas ou fisiolgicas em qualquer organismo.

Atividade experimental:
1) Montar um gel de agarose 0,8% da seguinte forma:
Ferver em microondas 0,8 gramas de agarose, em 100 ml de uma soluo tampo (TAE) e
aps fundir a agarose, acrescentar 25 microlitros de Brometo de etdio. (usar luvas sempre que
usar esta droga, pois ela cancergena).
Colocar a agarose ainda quente em uma placa com um pente

54
 Esperar esfriar e colocar o gel na cuba eletrofortica de gel horizontal
2) Misturar 5l de uma soluo de DNA com 5l de uma soluo de tampo de amostra
(Glicerina e azul de bromofenol) . Aplicar com uma micropipeta em um dos pocinhos do gel.
3) Ligar a fonte de eletroforese a 100 volts e deixar o azul de bromofenol migrar
aproximadamente 3 cm
4) Observar o gel no transluminador ultravioleta (UV).

RESPONDA e Faa os desenhos do que foi visto em aula.

1) Quantas diferentes bandas foi possvel ver em cada aplicao?
2) Quem migrou mais rpido o DNA ou o RNA? Porqu?
3) Por que os cidos nuclicos migram em direo ao plo positivo?
4) Qual a funo do azul de bromofenol?
5) O que uma soluo tampo?
6) Por que colocamos brometo de etdio no gel?
7) Quais as semelhanas e diferenas dos processos de eletroforese horizontal de cidos
nuclicos e o sistema de eletroforese vertical de protenas descrito?

8a Aula
OBSERVAO DE CICLOSE E CLOROPLASTOS EM
CLULAS DE Elodea

Elodea uma planta usada como ornamental em aqurios, facilmente adquirida em lojas
que vendem produtos para aquariofilia. uma monocotilednea pertencente famlia
Hydrocharitaceae. As folhas dessa planta so timas para observao de ciclose que o
movimento contnuo do citoplasma no interior da clula, assim como de cloroplastos.
Geralmente, os componentes das clulas so incolores. Por isso, ao se observar direto ao
microscpio, pouco se pode observar de seus constituintes. Para se superar este problema,
geralmente fazemos uso de corantes que vo evidenciar alguma parte da clula.
Os cloroplastos, organela presente somente nas clulas vegetais e responsveis pela
fotossntese, so naturalmente corados. Em virtude disto, e tambm por serem organelas bastante
grandes, os cloroplastos podem ser facilmente visualizados ao microscpio.
As folhas de Elodea apresentam apenas duas camadas de clulas, em que se pode
observar com facilidade os cloroplastos.
As clulas eucariontes possuem um citoesqueleto que promove o movimento dos
componentes no interior da clula. s vezes estes movimentos so correntes citoplasmticas que
chamamos CICLOSE. Se todos os componentes do interior da clula so incolores, muito difcil
se observar os movimentos citoplasmticos. A presena dos cloroplastos que so naturalmente

55
corados torna possvel a visualizao da ciclose. Devemos lembrar que a ciclose o movimento do
citoplasma causado pela ao do citoesqueleto. Os cloroplastos so levados por essa corrente do
citoplasma.

Procedimento
1) Com o auxlio de uma pina ou gilete, retire uma folha de Elodea.
2) Em uma lmina para microscopia com uma gota de gua, coloque a folha de Elodea, por
sobre a gota.
3) Cubra com lamnula, e leve ao microscpio para observao.
4) Observe o tamanho e forma dos cloroplastos. Geralmente aps alguns minutos de
observao, podemos ver a ciclose. Descreva como a ciclose.

Observao de ciclose em clulas do plo estaminal de Tradescantia (manto-

de-viuva).

As clulas do plo estaminal de manto-de-viva (trapoeraba) tambm apresentam ciclose

bastante ativa. Vale salientar que nessas clulas existe a presena de um grande vacolo. O
citoplasma da clula fica restrito a alguns canais internos da clula, o restante ocupado pelo
vacolo.

Procedimento:

1) Com uma pina, retire um plo do estame de uma flor de manto-de-viva.

2) Coloque sobre a lmina com uma gota de gua e cubra com uma lamnula.
3) Observe ao microscpio, desenhe e descreva a ciclose.

56
Responda as questes:
1) Por que podemos ver facilmente os cloroplastos, mas no outros componentes do
sistema de endomembranas como o complexo de Golgi, retculo endoplasmtico ou
mitocndrias?
2) Que parte do citoesqueleto est envolvida na ciclose? De que forma?
3) Por que a ciclose nas clulas da Elodea ocorrem no interior de toda a clula enquanto
na clula da Tradeschantia ocorre apenas dentro de estruturas que lembram canais?

9a Aula

OBSERVANDO CLIOS E SISTEMA DE ENDOMEMBRANAS

Podemos observar com facilidade a atuao do citoesqueleto, atravs dos clios e dos
pseudpodes em protozorios de vida livre. Nos Paramecium podemos ver os clios e em Amoeba
os pseudpodes. Alm disso, vrios componentes do sistema de endomembranas, como vacolos
digestivos (e pulstil em Paramecium) so tambm facilmente observveis.
Paramecium o nome genrico de um protozorio ciliado muito comum em mananciais de
gua como os audes e riachos. Estes protozorios so de fcil cultivo, se alimentando
principalmente de bactrias, pequenas algas e outros protozorios menores. Podem ser mantidos
em recipientes com um pouco de gua e uma pequena pitada de leite em p (+/- 60mg para cada
100 ml de gua). Como a qualidade da gua importante para este protozorio, devemos trocar
um pouco da cultura velha (mais ou menos a metade) por gua nova com leite, a cada semana.
Assim, podemos manter infinitamente o Paramecium. Outro meio de cultivar este ciliado colocar
um pouco de grmen de trigo na gua a cada semana, e sempre trocando a metade do volume da
cultura por gua nova a cada semana.
Por ser de fcil cultivo e apresentar clios e o sistema de endomembranas facilmente
observvel, alm de ter uma taxa de reproduo assexual bem alta, este protozorio um
excelente recurso para atividades prticas de Biologia Celular. Antes, porm, de descrever estas

57
prticas, vamos mencionar alguns aspectos importantes sobre a biologia e estrutura dos
Paramecium.
As espcies mais comuns de Paramecium possuem em torno de 0,5 mm de comprimento.
Os ciliados so excepcionais entre os eucariontes, uma vez que possuem no mnimo dois ncleos
com funes distintas. O macroncleo participa das atividades do dia a dia como crescimento,
metabolismo e reproduo. O microncleo permanece relativamente dormente at que a clula
entre em reproduo sexuada. Os Paramecium possuem dois tipos de reproduo; a) diviso
binria: em condies favorveis a clula se divide em duas. As duas novas clulas,
geneticamente idnticas, crescem rapidamente e voltam a se dividir. Mantendo as condies
favorveis estes organismos podem se dividir duas a trs vezes em um dia; b) conjugao: em
condies ambientais desfavorveis, dois indivduos de sexos diferentes entram em contato e
formam uma ponte citoplasmtica temporria, por meio da qual trocam microncleos.

Observando os clios e o sistema de endomembranas:

Nos Paramecium podemos observar com facilidade a atuao do citoesqueleto, atravs

dos clios, assim como o movimento intracelular dos vacolos digestivos e contrtil. Alm disso,
vrios componentes do sistema de endomembranas, como vacolos digestivos e pulstil so
tambm facilmente observveis.
Material necessrio:
Cultura de Paramecium; microscpio, lmina lamnula; infuso de cigarro.
Procedimento:
1) Encher um tubo de centrfuga com uma cultura de Paramecium. Centrifugar por 60
segundos.
2) Retirar o sobrenadante, deixando apenas uma pequena gota de meio lquido.
3) Acrescentar, na gota que restou no tubo em que os Paramecium foram centrifugados,
uma gota de uma soluo de narctico feito da seguinte maneira: ( deixar um cigarro em infuso
em 30 ml de gua por 12 horas). A finalidade desta infuso de cigarro e diminuir a atividade dos
Paramecium , uma vez que estes protozorios so muito rpidos e sem este narctico muito
difcil segui-los ao microscpio.
Outra opo colocar alguns fios de algodo entre a lmina e a lamnula. Os Paramecium
no podem nadar to livremente entre os fios de algodo, facilitando a sua observao.

4) Faa um desenho com as principais partes de um Paramecium.

5) Observe o batimento dos clios e desenhe (observe e descreva os tricocistos)
6) Identifique e observe a contrao dos vacolos contrteis.
7) Identifique os vacolo digestivo.

58
 8) Identifique e desenhe o citostoma e a citofaringe. (O que so fagossomas e onde estes
se formam nos Paramecium ?
9) Faa um desenho comparando a ultra-estrutura de um clio e de um centrolo.

10a Aula
PREPARAO DE LMINAS PERMANENTES (aula demonstrativa).

Estruturas biolgicas grandes no podem ser vistas diretamente ao microscpio, por que a
luz no pode atravess-las. Precisamos, ento, fazer cortes o mais fino possvel, para que a luz
possa passar pelas estruturas, e assim ser visto ao microscpio. Para sofrer tais cortes, o material
deve ser fixado, emblocado em parafina ou outra resina e, imerso neste suporte, cortado em
pequenas "fatias", atravs de um aparelho chamado micrtomo. Posteriormente este material
corado e a lmina montada.
Nesta prtica, vamos visitar os laboratrios de anatomia vegetal do Dep. de Biologia, em
que lminas permanentes de vegetais so preparadas.
Preste ateno as explicaes (e faa as perguntas que achar necessrio) e
posteriormente responda as seguintes questes:

1) O que a fixao do material? Qual a funo da fixao?

2) lcool etlico, clorofrmio, formol, cido actico, cido pcrico, e cido smico so as
principais substncias usadas como fixadores. Quais so as principais caractersticas de cada um
destas quanto a sua capacidade de fixao?

59
 3) As substncias citadas na pergunta anterior, geralmente no so usadas em conjunto,
constituindo fludos fixadores. Alguns destes fludos so muito usados, como o Fluido de Carnoy; o
F.A.A; o Bouin. Diga qual a composio destes fixadores e suas caractersticas.
4) Porque desidratamos o material em uma srie alcolica antes de emblocar em parafina?
5) Para que emblocar em parafina?
6) Que outros suportes ou estratgias podem sem usadas no lugar do emblocamento em
parafina?
7) O que orientao do corte?
8) Para que re-hidratar o material antes de cora-lo?
9) Qual a importncia do uso de corantes na preparao de lminas?
10) O que significam: colorao vital; corante acidfilo; corante basfilo?
11) Entre os principais corantes podemos citar: Carmim; hematoxilina; azul de metileno;
Cristal violeta (violeta genciana); Eosina; Fast Green; Fucsina cida, safranina; Sudan black; diga
quais as caractersticas principais destes corantes (que estruturas eles coram, solubilidade,
concentraes usadas...)

11a Aula

OBSERVAO DE COMPLEXO DE GOLGI EM LMINAS

PERMANENTES DE EPIDDIMO.

Material fornecido: lminas permanentes de epiddimo de rato.

Procedimento:
1) Localize e desenhe as clulas nos tbulos de epiddimo.
2) Observe e desenhe a posio do ncleo.
3) Observe e desenhe a posio e a forma do complexo de Golgi.

Responda as questes:
1) Por que foi escolhido o epiddimo para observar o complexo de Golgi? Que outro tipo de
clula poderia ser usada?
2) Que mtodo de colorao foi usada e por que?
3) Como se forma o Complexo de Golgi?

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Observao de neurnios em cerebelo de camundongo.

Material fornecido: lminas permanentes de cerebelo de camundongo.

Procedimento:
Observe ao microscpio a regio entre as substncias branca e cinzenta, nela existem
alguns neurnios gigantes em que podemos ver perfeitamente o corpo celular (com ncleo), o
axnio e dendritos.
Responda:

1)Observe e desenhe estas clulas, suas partes, e descubra como so chamadas estas
clulas.
2)Qual a relao existente entre forma e funo nestas clulas?

12a Aula
OBSERVAO DE CLULAS MUSCULARES ESTRIADAS

O desenho esquemticos de clulas presente nos livros so muito comuns e teis. Porm,
muitas vezes os alunos tem dificuldade de reconhecer que em um ser pluricelular, a diferenciao
celular a regra. Muitas clulas acabam com formatos muito diferentes. As clulas musculares
estriadas esquelticas so um exemplo.
Clulas musculares estriadas so clulas muito longas, polinucleadas apresentando os
ncleos na periferia da clula. O citoesqueleto hipertrofiado, sendo que os microfilamentos de
actina e miosina, vo ocupar a maior parte da fibra muscular, constituindo estruturas especficas
das clulas musculares estriadas, que so os sarcmeros. Essas estruturas que do uma
aparncia estriada a essas clulas quando vistas ao microscpio.

Material necessrio:
Lmina, lamnula, agulha histolgica e lmina de barbear, abelhas (ou outro inseto grande),
soluo de verde Janus (0,7% em etanol 70%).

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Procedimento:
1) Com uma gilete, abra o trax de uma abelha, vespa ou outro inseto voador grande
(previamente morta em vapores de ter).
2) Com uma agulha histolgica retire algumas fibras musculares e transfira para uma
lmina com uma gota de corante.
3) Cubra com lamnula, deixe corar por 3 minutos, e observe ao microscpio.

Alguns questionamentos :
a) Como esto organizados os sarcmeros e como estes funcionam? (faa um desenho).
b) Quais as fases da contrao muscular?
c) Como est organizado o citoesqueleto em uma clula muscular lisa?
d) Relacione as regies estriadas que podemos ver nas fibras musculares com o sarcmero.
e) Qual a funo do Verde Janus?

13 a aula
OBSERVAO DE MITOSE EM PONTA DE RAIZ DE CEBOLA,
Allium cepa (2n = 16).

COLETA E FIXAO DAS PONTAS DE RAZES DE CEBOLA

O procedimento mais fcil encher um frasco com gua colocar a cebola com a parte das
razes imersa na gua (figura abaixo) e esperar at que as razes comecem a crescer.
Dependendo da poca isso pode ocorrer em 24 horas ou em alguns dias.

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 Quando as razes tiverem atingido pelo menos cinco milmetros podero ser facilmente
destacadas do bulbo, com auxlio de uma lmina de barbear, estilete ou mesmo agulha. No
necessrio deixar as razes crescerem mais do que os cinco milmetros, pois o material que nos
interessa est na ponta.

As pontas de raiz devem ser imediatamente fixadas em soluo de lcool e cido actico
(3:1). Essa soluo no dever ser estocada, recomenda-se que seja preparada no momento em
que vai ser usada.
O tempo mnimo que as pontas de raiz devem ficar no fixador duas horas, as vezes, se o
material fica muito tempo no fixador ocorre um amolecimento excessivo do tecido dificultando a
preparao da lmina.
Aps o tempo de imerso no fixador as pontas de raiz podem ser estocadas em lcool 70%
(de preferncia em refrigerador) ou ento preparadas para a observao das mitoses.

2. HIDRLISE DO MATERIAL FIXADO

Transferir as pontas de raiz de cebola para uma soluo de cido clordrico 1N e deixar em
imerso por 15 minutos. Depois disso lavar em gua (imerso por um ou dois minutos); remover o
excesso de gua com um papel absorvente e transferir para uma lmina de microscopia.

3. COLORAO
Antes de adicionar o corante sobre a ponta de raiz, pode-se remover (ou simplesmente
romper com uma agulha) a parte mais extrema do material (correspondente regio da coifa), pois
isso facilitar a colorao e a observao ao microscpio.
Para colorao um dos corantes mais usados a orcena actica 2% (outros corantes
produzem o mesmo efeito e podem substituir a orcena). Uma gota desse corante suficiente para

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uma boa colorao, desde que se espere no mnimo vinte minutos, antes de bater ou esmagar
o tecido.
Ao colocar a lamnula deve-se cuidar para deixar o menor nmero possvel de bolhas de ar
para que a observao do material no seja prejudicada.
Depois que o corante atuou sobre o tecido pode-se envolver a lmina com um papel filtro e
pressionar com o dedo polegar a regio onde est a lamnula. Esse movimento far com que o
tecido se espalhe pela lmina e seja possvel observar camadas de clulas isoladas. Nesses
grupos de clulas que ser possvel observa as mitoses. No se deve colocar uma quantidade
muito grande de tecido na lmina pois isso ira dificultar o espalhamento. Dois milmetros de ponta
de raiz produz material suficiente para observao.
Outra forma de realizar o espalhamento segurar a regio da lamnula com um papel
absorvente e bater com um lpis borracha ou com a ponta da tampa de uma caneta.
Aps o esmagamento do material, a lmina deve ser observada inicialmente em menor
aumento (x10), para que se localize rapidamente onde esto as clulas em diviso.

5. LAMINAS SEMI-PERMANENTES
As lminas que estiverem boas podem ser temporariamente conservadas (uma semana)
se forem vedadas com esmalte para unhas ou cola para cmera de pneu de bicicleta.

6. LMINAS PERMANENTES
As lminas semi permanentes podem ser transformadas em permanentes, para isso basta
remover o vedante (esmalte ou cola) e colocar as lminas no freezer at que seja possvel soltar a
lamnula.
Aps a remoo da lamnula, mergulhar rapidamente as lminas em alcool absoluto e
deixar secar. Colocar uma gota de Resina para microscopia (Permonte; Entelan ou Balsamo do
Canad) na regio onde est o material. Fechar com uma lamnula e deixar secar.
Procedimento:
1) Pegue uma raiz j fixada
2) Hidrlise: coloque as pontas de raiz em uma soluo 1N de HCl por 5 min.
3) Lavagem: deixe as razes em gua por 5 min.
4)Corte com uma gilete +/- 3mm da ponta da raiz, logo aps os 2 primeiros mm (coifa).
5) Coloque este material em uma lmina com uma gota de orceina actica, deixe corar por
5 minutos.
6) Cubra com uma lamnula, colocando a lmina entre papel higinico e aperte fortemente
para espalhar o material ( com o polegar).
7) Vede as bordas da lamnula com luto (ou esmalte de unha).
8) Observe ao microscpio.

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Questes:
a) Descreva e desenhe o que ocorre na: interfase; prfase; metfase; anfase; telfase.
b) O que uma clula 2n=16?
c) O que centrmero e qual sua funo?
d) O que so cromtides? o que representam?

Vvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvv

Atividades de Prticas de Biologia como componente de formao

pedaggica.

Atividade 1
Biologia na cozinha.

A cozinha de nossa casa pode ser um excelente laboratrio. As experincias feitas nas 2a e 3a
aula so exemplos disso. Em grupos, a turma elaborar um experimento relacionado ao programa
de biologia celular e apresentar em aula em data a ser marcada.

Atividade 2:

O USO DE MODELOS DIDTICOS E SIMULAES.

(com marcao da data para apresentao dos modelos)
Simulaes e modelos didticos so excelentes recursos didticos, principalmente se
conseguimos colocar os alunos a construir os modelos ou montar as simulaes.
Os modelos didticos, por representarem bidimensionalmente ou tridimensionalmente de
modo macroscpico estruturas e/ou funes, permitem um entendimento mais fcil de fenmenos
microscpicos que de outra forma so apresentados e entendidos apenas de forma abstrata. Os
modelos permitem uma visualizao das estruturas, tornando o assunto mais concreto. Desta
forma os modelos facilitam o aprendizado e a discusso sobre o tema em estudo.
As simulaes correspondem representao dinmica de processos, com ajuda de materiais e
dos alunos. Nas simulaes, podemos, por exemplo imprimir uma longa seqncia de DNA em

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papel e com a participao dos alunos pedir que eles encontrem uma seqncia correspondente
ao stio de clivagem de uma enzima de restrio. Podemos pedir que os alunos cortem com
tesoura este stio e posteriormente o mesmo stio de um plasmdeo. Posteriormente podemos
simular como seria uma reao de ligao de todos esses fragmentos, e uma transformao
bacteriana com os plasmdeos gerados. Por fim podemos discutir conceitos como clonagem de
genes e bancos genmicos.

Apresentamos exemplos de alguns dos modelos que podem ser construdo na pgina
www.ufsm.br/auladebio

BIBLIOGRAFIA COMPLEMENTAR PARA A PARTE PRTICA:

LORETO, E.L.S. & SEPEL, L. M.N. Atividades experimentais e didticas de Biologia Molecular e
Celular. Ribeiro Preto, ed. Da Sociedade Brasileira de Gentica. 2003. 2a ed.
www.sbg.org.br
DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA, UFPR. Bioqumica: aulas prticas. 5 ed.Curitiba, Ed. da
UFPR, 1997.
JORDO, B.Q e colaboradores. Prticas de Biologia Celular. Londrina, Editora UEL, 1998.
JUNQUEIRA, L.C.U e JUNQUEIRA, L.M.M.S. Tcnicas Bsicas de Citologia e Histologia. So
Paulo, Ed. Santos, 1983.
MANARA, N.T.F. Roteiro de aulas prticas de citologia vegetal. Santa Maria, Faculdade de
Agronomia-UFSM, (mimeografado-sem data).
MELLO, M.L.S. e VIDAL, B.C.; Prticas de Biologia Celular. So Paulo, Edgar Blcher, 1980.
POLIZELI, M.L.T.M., Manual Prtico de Biologia Celular. Ribeiro Preto, Holos editora, 1999.
QUESADO, H.L.C. e colaboradores. Biologia: Prticas. Fortaleza, Edies UFC, 1996.
SLATER, J. Experiments in molecular biology. Clifton, N.J., The Humana Press, 1986.
VALLE, F.C., Prticas de citologia e gentica. Rio de Janeiro, MEDSI, 2001.

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