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FACULDADE FASIPE
DEPARTAMENTO DE BIOMEDICINA

ESTGIO SUPERVISIONADO
MICROBIOLOGIA

NOME: RAFAEL VIANA PINHEIRO


PROF. (A). ME. CEZAR ERNANI MANCINI

SINOP/MT
2017
2

Sumrio
1. INTRODUO .................................................................................................................................. 4
1.1 Rotina Laboratorial ........................................................................................................................... 5
CAPTULO I........................................................................................................................................... 6
COLORAO DE GRAM ..................................................................................................................... 6
1.1 Objetivos ........................................................................................................................................... 6
1.2 MATERIAIS ..................................................................................................................................... 6
1.3 MTODOS ....................................................................................................................................... 8
1.4 Resultados e Discusso ..................................................................................................................... 3
1.5 Concluso .......................................................................................................................................... 4
CAPTULO II ......................................................................................................................................... 5
ZHIEL NEELSEN (Pesquisa por BAAR) .............................................................................................. 5
2.1 Objetivo ............................................................................................................................................. 6
2.2 MATERIAIS ..................................................................................................................................... 6
2.3 Mtodo .............................................................................................................................................. 6
2.4 resultados e Discusses ..................................................................................................................... 7
2.5 Concluso .......................................................................................................................................... 8
CAPTULO III ........................................................................................................................................ 9
MEIOS DE CULTURA E AUTOCLAVE ............................................................................................. 9
3.1 Tipos de meios de cultivo.................................................................................................................. 9
3.2 Meios para Crescimento e Isolamento ............................................................................................ 10
3.3 Objetivo ........................................................................................................................................... 11
3.4 Materiais.......................................................................................................................................... 11
3.5 Mtodos ........................................................................................................................................... 12
3.6 Discusso......................................................................................................................................... 12
3.7 Concluso ........................................................................................................................................ 13
CAPTULO IV ...................................................................................................................................... 13
HEMOCULTURA ................................................................................................................................ 13
4.1 Objetivo ........................................................................................................................................... 14
4.2 Materiais.......................................................................................................................................... 15
4.3 Tcnica da coleta ............................................................................................................................. 15
4.4 Resultados e Discusso ................................................................................................................... 15
4.5 Concluso ........................................................................................................................................ 16
CAPTULO V ....................................................................................................................................... 17
3

UROCULTURA ................................................................................................................................... 17
5.1 Objetivo ........................................................................................................................................... 17
5.2 Materiais.......................................................................................................................................... 18
5.3 Mtodos ........................................................................................................................................... 18
5.4 Resultado e Discusso ..................................................................................................................... 18
5.5 Concluso ........................................................................................................................................ 19
CAPTULO VI ...................................................................................................................................... 20
COPROCULTURA............................................................................................................................... 20
6.1 Objetivo ........................................................................................................................................... 21
6.2 Materiais.......................................................................................................................................... 21
6.3 Mtodos ........................................................................................................................................... 21
6.4 Resultado e Discusso ..................................................................................................................... 22
6.4.1 Mtodo de Rugai com Lisina ....................................................................................................... 22
6.4.2 Tcnica .................................................................................................................................. 23
6.5 Concluso ........................................................................................................................................ 23
CAPTULO VII .................................................................................................................................... 24
ANTIBIOGRAMA ............................................................................................................................... 24
7.1 Objetivo ........................................................................................................................................... 25
7.2 Materiais.......................................................................................................................................... 25
7.3 Mtodos ........................................................................................................................................... 25
7.4 Discusso......................................................................................................................................... 26
7.5 Concluso ........................................................................................................................................ 26
CAPTULO VIII ................................................................................................................................... 27
CONSIDERAES FINAIS ................................................................................................................ 27
REFERNCIAS .................................................................................................................................... 28
ANEXOS............................................................................................................................................... 31
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1. INTRODUO

A execuo de tticas que esto voltadas incrementao e uso apropriado de anlises


laboratoriais atualmente tem sido eficiente em servios clnicos (ambulatoriais e hospitalares).
Os exames laboratoriais so uns dos principais recursos mais utilizados como base fundamental
para o diagnstico clnico, trazendo consequncias formidveis no cuidado ao paciente e custos
ao sistema de sade. Os quais esto relacionados ao desenvolvimento de novas tcnicas que
proporcionam diagnsticos laboratoriais mais eficientes e/ou confiveis (ANDRIOLO, 2014).
Os procedimentos que corresponde a respeito fase pr-analtica em laboratrios de
anlises clnicas caracterizam uma das mais importantes para garantia de resultados mais
rpidos e fidedignos. Assim, de extrema importncia que a fase pr-analtica proporcione
medidas que possam estabelecer a garantia da sua adequada execuo, permitindo com que as
falhas sejam identificadas e posteriormente corrigidas (SILVA et al., 2016).
E dentre as anlises laboratoriais a microbiologia faz o estudo dos microrganismos que
abrange um grande grupo com diversidades em organismos microscpicos que habitam clulas
isoladas ou em aglomerados, no qual inclui os vrus, que so microscpicos, porm, no so
clulas. O papel dos microrganismos est presente em toda a vida, seja na composio fsica ou
qumica do nosso planeta, seja no transporte dos elementos qumicos essenciais a vida (carbono,
nitrognio, enxofre, hidrognio e oxignio) (JAWETZ; MELNICK; ADELBERG, 2014).
A microbiologia teve seu incio marcado pelo desenvolvimento do polimento de lentes,
realizada a partir de partes de vidro, o qual foi ajustada at produzir aumentos satisfatrios que
posteriormente pudesse possibilitar uma melhor visualizao dos microrganismos. Robert e
Antony Van Leeuwenhoek permitiram as primeiras observaes de bactrias e outros
microrganismos (MADIGAN et al., 2016).
As clulas bacterianas possuem vrias formas, entre elas os bacilos (em forma de
basto), os cocos (esfricos ou ovoides) e os espirilos (em forma de saca-rolha ou curvados)
essas formas so as mais comuns, algumas bactrias possuem formas diferenciadas como em
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forma de estrela ou quadrada. Algumas podem at formar pares, cadeias, grupos; tais formaes
geralmente so caractersticas de um gnero particular ou uma espcie de bactrias
(TORTORA, 2012).
Quanto a sua estrutura as bactrias so compostas por parede celular, composta por
um complexo de carboidrato e protena chamado de peptideoglicano. O processo de reproduo
da maioria delas chamado de fisso binria (diviso em duas clulas iguais). Para a sua
nutrio, a maioria das bactrias faz uso compostos orgnicos encontrados na natureza
derivados de organismos vivos ou mortos, sendo que algumas so auttrofas (TORTORA,
2012).

1.1 Rotina Laboratorial


O estgio de Microbiologia do curso de Biomedicina do 7 semestre, ocorreu no
laboratrio Fasiclin da Faculdade de Sinop FASIPE. Onde por meio do estgio foi possvel
sedimentar os conceitos tericos adquiridos ao decorrer do curso, permitindo uma melhor
compreenso do funcionamento de vrios exames, os quais sero de extrema importncia para
nossa vida profissional. Durante o estgio obedecemos uma lista dos exames microbiolgicos
os quais contribuem para o fechamento de vrias patologias. O estgio ocorreu de forma aberta
para a populao, proporcionando aos acadmicos uma maior interao com os pacientes bem
como aos exames que foram realizados. Dentre os exames que foram prestados a comunidade
esto:

Colorao de Hemocultura;
Gram; Urocultura;
Colorao de Ziehl Coprocultura;
Neelsen; Cultura de feridas.
6

CAPTULO I
COLORAO DE GRAM

Os corantes so sais que se combinam quimicamente com o protoplasma bacteriano; os


corantes bsicos consistem em um ction dotado de cor com um nion incolor; os corantes
cidos comportam-se de modo inverso. Ricas em cido nucleico estas clulas possuem cargas
negativas sob a forma grupos fosfatos, dessa maneira se combinam com os corantes bsicos
(possuem carga positiva). Os corantes cidos no coram as clulas bacterianas (JAWETZ;
MELNICK; ADELBERG, 2014).
A colorao de Gram comea com a aplicao de um corante bsico, (o cristal violeta).
Em seguida, aplica-se uma soluo de iodo; depois, as clulas so tratadas com lcool-acetona.
As clulas Gram-positivas retm o corante cristal violeta devido ao aumento na quantidade de
cido teicico e a diminuio da permeabilidade da parede celular aos solventes orgnicos, as
bactrias Gram-positivas so coradas em azul ou roxo. J as Gram-negativas apresentam grande
quantidade de lipdeos na parede celular, que aumenta a permeabilidade aos solventes levando
a descolorao. Nestas clulas so usados contra corantes de fundo (safranina ou fucsina)
conferindo as mesmas, uma colorao rosa-vermelho (TRABULSI, 2015; STINGHEN, 2009;
JAWETZ; MELNICK; ADELBERG, 2014).

1.1 Objetivos
A colorao uma tcnica de diagnostico rpida e precisa que fornece o diagnostico
etiolgico presuntivo. Classificando grupos especficos de bactrias por sua estrutura tintorial,
classificando-as em gram positiva ou gram negativas (CUNHA, 2012).

1.2 MATERIAIS
EPIs (luva, mascara, touca, jaleco); Kit para Colorao de Gram
Newprov.
8

Microscpio; Colnias de bactrias


Lamina; Cristal violeta,
Soluo salina; Fucsina Fenicada de Gram,
Ala bacteriolgica; Lugol (iodo),
Bico de Bunsen; lcoolacetona;

1.3 MTODOS

Imagem 1: Ilustrao do Mtodo de Colorao.

Fonte: MONTEIRO et al (2009).

Cobrir o esfregao com cristal Descorar com lcool-cetona at que


violeta e deixar durante 1 minuto; no escorra mais cristal violeta
Lavar com gua corrente, retirando (cuidado para no descorar demais);
o excesso de corante; Lavar com gua corrente;
Cobrir o esfregao com lugol e Cobrir o esfregao com safranina ou
deixar por 1 minuto; fucsina;
Lavar com gua corrente; Deixar durante meio minuto;
Lavar com gua e secar ao ar;
Examinar ao microscpio.

Em alguns materiais clnicos importante avaliar a qualidade da amostra com objetiva de 10x,
verificando clulas epiteliais e leuccitos. Com objetiva de imerso de 100x, analisar vrias
3

reas do esfregao e relatar a ausncia ou presena de microrganismos, quantificando e


classificando-os (OPLUSTIL et al., 2010).

1.4 Resultados e Discusso


N Paciente Idade Data Resultados
NASOFARINGE: caractersticas morfotitoriais
compatveis com cocos gram positivos isolados e aos pares
de moderada presena.
1 Roana F. Z. A. 25 20/04/2017 OROFARINGE: caractersticas morfotitoriais
compatveis com cocos gram positivos isolados e aos pares
de rara presena.
OCULAR: ausncia de microrganismos corveis por
gram.
NASOFARINGE: caractersticas morfotitoriais
compatveis com cocos gram positivos isolados e aos pares
de moderada presena. E cocos gram positivos em cadeia
2 Vanessa F. 22 27/04/2017 de rara presena.
OROFARINGE: caractersticas morfotitoriais
compatveis com cocos gram positivos isolados e de rara
presena.
OCULAR: ausncia de microrganismos corveis por
gram.
NASOFARINGE: caractersticas morfotitoriais
compatveis com cocos gram positivos isolados e aos pares
de moderada presena.
3 Sandra J. M. 40 28/04/2017 OROFARINGE: caractersticas morfotitoriais
compatveis com cocos gram positivos isolados e aos pares
de moderada presena. E bacilos gram positivos de rara
presena.
OCULAR: ausncia de microrganismos corveis por
gram.
NASOFARINGE: caractersticas morfotitoriais
compatveis com cocos gram positivos isolados e aos pares
de moderada presena. E cocos e cocobacilos gram
positivos de rara presena.
OROFARINGE: caractersticas morfotitoriais
4 Mabely J. P. 23 04/05/2017
compatveis com cocos gram positivos isolados e aos pares
de moderada presena. E cocobacilos e bacilos gram
positivos de rara presena.
OCULAR: ausncia de microrganismo corveis por gram.
NASOFARINGE: caractersticas morfotitoriais
compatveis com cocos gram positivos isolados e aos pares
de moderada presena. E cocos gram positivos em cadeia e
agrupados de rara presena. E cocobacilos e bacilos gram
positivo de rara presena.
5 Rosilene F. 35 11/05/2017
OROFARINGE: caractersticas morfotitoriais
compatveis com cocos gram positivos isolados e aos pares
de moderada presena. E cocobacilos gram positivos e
bacilos gram negativos de rara presena.
OCULAR: ausncia de microrganismos corveis por
gram.
4

Para Pereira; Palomo (2010) a colorao de Gram um dos mtodos mais utilizados em
laboratrios de microbiologia, sendo a porta de entrada para avaliao das amostras bacterianas
(PEREIRA, 2010).
Segundo eles, o emprego dessa tcnica requer avaliao criteriosa, por meio da
classificao dos microrganismos, como Gram-positivas ou Gram-negativas, possvel fazer a
deteco de bactrias associadas s infeces. Permitindo ao profissional Biomdico
estabelecer o diagnstico e dar incio ao tratamento emprico adequado para tal infeco
(PEREIRA; PALOMO, 2010).
De acordo com Levinson (2010) o teste de colorao de Gram se faz til na identificao
de diversas bactrias. Auxiliando tambm na escolha dos antibiticos adequados. De modo que,
no geral, bactrias Gram-positivas so sensveis a certas classes de antibiticos em relao s
Gram-negativas (LEVINSON, 2010).
Em relao a eficcias do mtodo de Gram, Morais et al (2008) ressalta que a anlise
dos esfregaos corados til para dar diagnstico rpidos em clnicas mdicas. Porm,
limitado, pois apenas aponta se no material h bactrias e qual o grau de sua sensibilidade. Em
comparao a outros testes, a tcnica de colorao de Gram no aponta com preciso a
especificidade das bactrias causadoras de infeces cervicais uterinas (MORAIS et al., 2008).

1.5 Concluso
Durante os dias do estgio supervisionado de microbiologia, foi possvel analisar
bactrias pelo mtodo de colorao de Gram, e pde-se observar as caractersticas morfolgicas
das bactrias. Permitiu-se concluir tambm que existem diferenas na composio da parede
celular de bactrias Gram positivas e Gram negativas, e que o mtodo proposto auxilia na
identificao de microrganismos patognicos ao homem.
CAPTULO II
ZHIEL NEELSEN (Pesquisa por BAAR)

As micobactrias so bacilos (bastonetes) aerbios e so as nicas bactrias lcool-


cidorresistentes (BAAR). Os bacilos lcool-acidorresistentes so os microrganismos capazes
de reter a fucsina fenicada de Ziehl (fucsina bsica dissolvida em uma mistura de fenollcool-
gua) mesmo depois de serem descoradas com cido clordrico em lcool. No qual o esfregao
da bactria em lmina banhado com fucsina fenicada de Ziehl e fixado pelo vapor. Logo aps,
a amostra descorada com o cido-lcool e por fim corada com um contracorante contrastante
(azul ou verde). E as micobactrias que forem lcool- cido resistentes se coram com a cor
vermelha, e as demais adquirem a cor do contracorante (JAWETZ; MELNICK; ADELBERG,
2014; LEVINSON, 2010).
O microrganismo Mycobacterium tuberculosis o agente causador da TB (tuberculose).
E estima-se em nvel mundial que o M. tuberculosis o organismo com maior causa de mortes
se comparados aos demais agentes microbianos. Dados demostram que cerca de 3 milhes de
pessoas morrem anualmente em consequncia da TB (LEVINSON, 2010).
O Mycobacterium leprae o agente etiolgico da Hansenase. Os humanos so os
hospedeiros naturais desse bacilo, o qual tem como forma de transmisso o contato prolongado
com pacientes acometidos por Hansenase lepromatosa (o contagio acontece pelo contato de
secrees nasais e leses cutneas). Esse microrganismo replica-se intracelularmente ( 30
graus) no interior das clulas de schawnn entre outros. A patologia apresenta duas formas
distintas (tuberculoide e lepromatosa) sendo que o tratamento feito pelo uso de antibiticos
por longo perodo. E como no h vacina para a doena, a nica forma de preveno isolar os
enfermos (LEVINSON, 2010).
O mtodo de Ziehl-Neelsen tradicionalmente usado em laboratrios para o diagnstico
de micobacterioses devido sua simplicidade e rapidez (COELHO et al., 2008).
2.1 Objetivo
A colorao de BAAR tem como objetivo pesquisar a presena de Bacilo-lcool-
cido-resistente, estes bacilos tm como caracterstica uma colorao rosa ou vermelha, este
exame solicitado principalmente em casos de suspeita de tuberculose, o material deve ser
fixado na lmina preferencialmente em capela de exausto para que no ocorra contaminao
com a amostra (OPLUSTIL et al., 2010).

2.2 MATERIAIS
EPIs (luva, mascara, touca, jaleco);

Microscpio;

Capela de exausto;

Bico de Bunsen;

Bisturi;

Esptula de lngua; Pina de kelly;

Frasco estril;

Lmina;

lcool 70%; Algodo;

Kit para Colorao de Ziehl-Neelsen Newprov.

Para obter um resultado satisfatrio necessrio verificar os procedimentos da coleta, se


foi realizada de forma correta, em recipientes estril, e realizar a colorao corretamente
(OPLUSTIL et al., 2010).

2.3 Mtodo
Fixar o material no calor com auxlio do bico de Bunsen na cmera de fluxo laminar,
utilizando todos os EPIs para proteo.
Cobrir a lmina com fucsina fenicada de Ziehl;
Com uma chama fraca sob a lmina, aquecer suavemente at a emisso de vapores,
durante 5 minutos. Evitar ebulio e evaporao do corante.
Lavar rapidamente em gua corrente;
Inclinar a lmina e gotejar a soluo descorante sobre o esfregao, at que no escorra
mais o lquido vermelho;
Lavar em gua corrente novamente;
Cobrir a lmina com a soluo de azul de metileno e deixar agir por 40 segundos a 1
minuto;
Lavar em gua corrente e secar entre duas folhas de papel filtro;
Observar em microscopia em objetiva de 100x com uso de imerso
As micobactrias apareceram corada de vermelho em fundo azul.
A colorao de Ziehl-Neelsen se baseia-se na capacidade de algumas bactrias
resistirem aos mtodos comuns de colorao devido composio altamente lipdica da parede
celular. Aps o processo de colorao a quente, as bactrias uma vez coradas, no sofrem ao
de descorantes fortes, como a soluo de lcool-cido. Sendo assim, a fucsina de Ziehl cora
todas as bactrias de vermelho, e aps a descolorao com lcool-cido, somente os bacilos
lcool-cido resistentes (BAAR) conservao esta cor. Como mtodo para facilitar a
visualizao cora-se o fundo com azul de metileno, estabelecendo-se um contraste ntido entre
elemento celulares e outras bactrias (azuis) e os BARR (vermelhos) (SANTANNA;
CERQUEIRA, 2007).

2.4 resultados e Discusses

N Pacientes Idade Data Resultados


1 Srgio O. 43 11/05/2017 Ausncia de BAAR em cem campos microscpico.

As micobactrias so bacilos aerbicos cido-resistente, no se classificam como Gram-


positiva e nem Gram-negativas, isso se deve a capacidade deste organismo reter o corante
Carbolficsina em funo do elevado teor lipdico de sua parede celular. O M. tuberculosis e M.
leprae so os principais representantes desse grupo (LEVINSON, 2010).
Em relao ao diagnstico da Tuberculose Ferri et al (2014) ressalta que os diferentes
mtodos (baciloscopia, da cultura ou de mtodo moleculares) tem como nico objetivo a
identificao dos BK (bacilos de kock) de uma amostra biolgica.
A Hansenase uma doena infecciosa crnica causada pelo M. leprae. Segundo Arajo
(2003) o mtodo de diagnstico mais eficaz o mtodo de baciloscopia (por meio do raspado
de tecido drmico) que emprega a colorao de Ziehl-Neelsen devido sua fcil execuo e baixo
custo.
Para Tortora; Funke; Case (2012) o passo inicial no diagnstico de patologias causadas
por micobactrias o exame microscpico de esfregao, sendo o mais empregado a colorao
lcool-acidorresistentes.
Para Ferri et al (2012) apesar da tcnica mais empregada para diagnstico de TB ser o
Ziehl-Neelsen, no considerada o padro-ouro, sendo o mtodo cultural mais sensvel que a
baciloscopia (pois necessita de menor quantidade de microrganismo presente na amostra),
porm, as vantagens do mtodo de Ziehl so de baixo custo, facilidade operacional e rapidez
no diagnstico.

2.5 Concluso
O mtodo de colorao de Ziehl-Neelsen utilizado como porta de entrada para
deteco de doenas causadas por micobactrias. Apesar de no se tratar do padro-ouro para
o diagnstico de Tuberculose, serve como auxilio ao profissional por ser de fcil e rpido
deteco.
CAPTULO III
MEIOS DE CULTURA E AUTOCLAVE

Os meios de cultura tm como finalidade cultivar e manter os microrganismos viveis


no laboratrio, contendo assim, os nutrientes necessrios para que os organismos possam
crescer. Os microrganismos vivos em meio de cultura precisam de fontes de nutrientes
apropriados que no inibem seu crescimento. Alm de necessitarem dos nutrientes, os
microrganismos tambm precisam de oxignio (presena ou ausncia), pH e de presso
osmtica que sejam adequadas e que favorea o crescimento desses organismos (MARTINS,
2013; OLIVEIRA, 2013).
Geralmente os meios so contidos em tubos de ensaio ou placas de Petri. Os tubos de
ensaio so preparados com os tubos inclinados para o crescimento. As placas de Petri,
constitudas por placas rasas com uma tampa que as recobre at o fundo para evitar
contaminantes; e recebem o nome de culturas solidadas quando preenchidas. Aps a preparao
dos meios e manuteno das culturas necessrio observar as condies de assepsia, de modo
evitar contaminaes com outros microrganismos (OLIVEIRA, 2013; TORTORA, 2012).
A autoclave um aparelho utilizado para esterilizao por calor mido, que elimina
os microrganismos principalmente pela coagulao proteica (desnaturao), cuja causa
caracterizada pela ruptura das ligaes de hidrognio que mantm as protenas em sua estrutura
tridimensional. Esse tipo de esterilizao por calor mido e fervura, que mata as formas
vegetativas dos patgenos bacterianos, quase todos os vrus, e os fungos e seus esporos dentro
de cerca de 10 minutos, normalmente muito mais rpido (TORTORA, 2012).

3.1 Tipos de meios de cultivo


Os meios de cultivo se classificam em: meios sintticos (definidos quimicamente) e em
meios complexos. Os sintticos possuem uma composio qumica exata e conhecida. Os meios
complexos so aqueles que exibem algum componente que possuem uma composio variante.
Quando o meio complexo se encontra em sua forma lquida denominado de caldo nutriente e
quando est na forma solidificada chamado de gar nutriente. Esses meios so utilizados
normalmente para bactrias heterotrficas e fungos (TORTORA et al., 2006).
No caso de microrganismos anaerbios deve-se utilizar um meio especial denominado
meio redutor. Eles possuem reagentes como o tioglicolato de sdio que que favorece a
combinao com o O2 diludo, proporcionando a eliminao da cultura (TORTORA et al.,
2006).
Meios de enriquecimento: utilizado para enriquecer uma cultura, fornecem nutrientes e
condies ambientais que favorecem o crescimento de um microrganismo especfico e tambm
de no especifico. (Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina para cultivo de Salmonelas (lquidos),
Caldo Tioglicolato para Clostridium perfringens) (ANVISA, 2012).
Diferenciais: facilita a diferenciao das colnias de um microrganismo desejado em relao a
outras colnias crescendo na mesma placa. De maneira similar, cultivos puros de
microrganismos possuem reaes identificveis com meios diferenciais em tubos ou placas
(TORTORA, 2012).
Seletivos: so utilizados para impedir o crescimento dos microrganismos indesejveis e
proporcionar o crescimento dos de interesse. O gar sulfeto de bismuto consegue inibir as
bactrias Gram-positivas e uma maior parte das bactrias que habitam o intestino as Gram-
negativas (alm de S. typhi). O gar Sabouraud com pH de 5,6, utilizado para isolar os fungos
que dominam a maioria das bactrias neste pH (TORTORA, 2012).
Identificao: usados para a execuo de provas bioqumicas e averiguao de funes
fisiolgicas de organismos que so submetidos a identificao (TORTORA, 2012).
Contagem: agregados para a realizao da estimativa organismos microbianos (Agar de
Contagem em Placas, TSC, Agar Batata Dextrose, gar Baird-Parker, etc.) (ANVISA, 2012).
Estocagem ou manuteno: utilizados para preservao de microrganismos no laboratrio. O
que favorece a viabilidade de microrganismos (gar Sabouraud, Meios que contm leite ema
sua composio, gar suco de tomate, gar sangue, gar Simples, meio semi-slido)
(ANVISA, 2012).

3.2 Meios para Crescimento e Isolamento


gar sangue (AS): possuem finalidade para o isolamento de microrganismos no
fastidiosos e, verificao de hemlise dos o Streptococcus spp., e Staphylococcus spp., e
utilizado na prova de satelitismo para obteno da identificao presuntiva de Haemophilus spp
(ANVISA, 2004).
gar chocolate (CHOC): meio de cultivo rico em nutrientes, destinados ao isolamento
de microrganismos fastidiosos, tais como: Haemophilus influenzae, Neisseria gonorrhoeae,
N.meningitidis, Branhamella catarrhalis e Moraxella spp. essncia do meio, acrescido
sangue de cavalo, cordeiro ou coelho em temperatura elevada, o que proporciona que as
hemcias sofram lise celular, possibilitando a liberao de hemina e hematina, compostos
essenciais para o desenvolvimento dos microrganismos exigentes (ANVISA, 2004).
gar MacConkey (MC): possuem a finalidade de isolar Gram-negativos
(enterobactrias e no fermentadores) e examinar a fermentao ou no da lactose (ANVISA,
2004).
gar Salmonella-Shigella (SS): tem como Finalidade de distinguir e isolar espcies de
Salmonella e Shigella, em pores de fezes utilizadas em nas metodologias dos exames
parasitolgicos, alimentos e gua (ANVISA, 2004).
gar Cled: Isolar e estimar os microrganismos que caracterizam os Gram-positivos,
Gram-negativos e bem como as leveduras (ANVISA, 2004).

3.3 Objetivo
So utilizados para propiciar o crescimento de microrganismos in vitro ou como
meio de transporte, independentemente da situao, ele utilizado como fonte de crescimento
para que o mesmo possa ser isolado e identificado. Existem vrias classes de meios de cultura
devida variedade de microrganismos (BROOKS et al., 2012).

3.4 Materiais
o EPIs (luva, mscara, touca, jaleco); o Proveta;
o Placas de petri; o Amostra de sangue;
o Balana; o Fita 3M;
o Kit para gar (Cled, Macconkey, o Fita adesiva;
Sangue, Chocolate); o Autoclave;
o Bico de Bulsen; o Papel craft;
o gua destilada; o Gaze; algodo;
o Trip com placa de amianto; o Bico de Bunsen;
o Bquer; o Saco para autoclave;
o Basto de vidro; o Fita reativa Ph.
o Erlenmeyer;
3.5 Mtodos
Pesar a base do meio de cultura seguindo a bula do produto, com a esptula e o
Erlenmeyer na balana de preciso;
Medir gua destilada e colocar junto com a amostra pesada;
Colocar o trip e a tela de amianto em cima do bico de bulsen, e colocar o Erlenmeyer
em cima do trip, mexer at que o gar fique dissolvido;
Esperar esfriar, fechar com boneco e papel Kraft e levar para a autoclave;
Por ltimo verter o meio nas placas de petri, sem formar bolhas, espere gelificar e levar
para a geladeira.

3.6 Discusso
Os resultados obtidos durante os experimentos propostos na aula do estgio foram
devido aos protocolos dos procedimentos que so essenciais para o preparo de cada cultura,
citados no decorrer do relatrio. Aps isso, foi possvel observar que os meios se solidificam
rapidamente e que cada gar possui finalidades de isolamento e crescimento especficos para
cada tipo de microrganismos.
Segundo Tortora (2012) os fatores essenciais para que possa ocorrer o crescimento
microbiano se dividem em duas categorias principais: fsicas e qumicos. Os quais incluem
temperatura, pH, presso osmtica, fontes de carbono, nitrognio, enxofre, fsforo, oxignio e
fatores orgnicos de crescimento.
Para fazer o isolamento de um microrganismo, Prescott, Harley e Klein (2002)
ressaltam que se deve empregar o meio de cultura mais adequado para que possa ocorrer o seu
desenvolvimento e durante preparo do meio muitas vezes preciso empregar o ambiente natural
como modelo de composio, pois muitos dos microrganismos necessitam dos requerimentos
nutricionais os quais podem refletir o tipo de ambiente onde ele encontrado.
De acordo com Ogunseitan (2005) mesmo com toda a tecnologia disponvel, no
possvel obter uma informao concreta sobre os aglomerados microrganismos que
possivelmente possam estar presentes em amostras retirada do meio ambiente, devido
inadequao de alguns dos microrganismos s metodologias de recuperao, isolamento e
cultivo utilizadas hoje em dia.
Alm dos solos, Tortora et al., (2006) socializa que tambm podem ser isolados
microrganismos do ambiente areo e aqutico. Os microrganismos que so encontrados no
ambiente aqutico acabam sendo afetados pela disponibilidade de O2, nutrientes bem como a
luminosidade.
Segundo Ogunseitan (2005) os microrganismos que conseguem se desenvolvem em
ambientes que apresentam condies extremas de temperatura, salinidade, acidez ou
alcalinidade so chamados de extremfilos. E seu isolamento tem ficado muito importante
ultimamente devido possibilidade de cultiv-los sem que tenha contaminaes ou o uso de
suas enzimas em condies que desativam outras que no so de interesse, como no caso da
Taq polimerase utilizada no processo de PCR.
Para Lightfoot e Maier, (2003) importante a esterilizao dos meios e dos materiais
que utilizado, pois podem ser fonte de contaminao e consequentemente faz com que
ocorram alteraes na amostra ou pesquisa que est se realizando. Cuja finalidade tornar
inativos ou remover todos os microrganismos vivo.

3.7 Concluso
A aula de preparo de meio de cultura no estgio de microbiologia teve como o objetivo
principal contribuir para o ensino dos acadmicos referente s metodologias de esterilizao,
materiais e equipamentos utilizados em um laboratrio de microbiologia; como tambm o
preparo de diferentes meios de cultura. Creio eu, que este objetivo foi alando com sucesso.

CAPTULO IV
HEMOCULTURA
definida como hemocultura a cultura para bactrias e/ou fungos em amostra de sangue.
Bacteremia definida como presena de microrganismos na corrente sangunea e geralmente
ocorre pelos seguintes mecanismo sendo eles entrada direta na corrente sangunea, via agulhas,
infuses contaminadas ou outros equipamentos vasculares como cateteres (bacteremia
primaria) e outro mecanismo a drenagem de dos microrganismos a partir de um foco primrio
de infeco ou atravs de vasos linfticos e da at o sangue (bacteremia secundaria)
(OPLUSTIL et al., 2010).
Uma antissepsia mal realizada ou uso de antissptico inadequado poder comprometer
p exame de hemocultura. Vrios antisspticos, tais como o lcool a 70%, tintura de iodo,
povidine e clorexidina muito utilizado, o estudo tem demostrado que a tintura de iodo e a
clorexidina possuem atividade antissptica superior. Por isso a antissepsia da pele deve ser
rigorosa, evitando os contaminantes da pele. O ndice de contaminao deve ser mnimo < 3%
(ARAJO, 2012).
Os microrganismos mais frequentes em hemoculturas so: Staphylococcus aureus,
Staphylococcus coagulase-negativa, Enterococcus spp., Streptococcus spp., Escherichia
aeruginosa e Acinetobacter spp. O frasco de hemocultura deve ser incubado 35 mais ou menos
2C, aps 24 horas semear em gar sangue e fazer gram se positivo, realizar identificao e
antibiograma e emitir resultado parcial. Se for negativo incubar a 35 mais ou menos 2 em CO2,
aps 48 horas semear em gar sangue e fazer gram, se positivo novamente identificar e
antibiograma, emitir resultado, negativo realizar novamente o processo por at o7 dia, no
stimo dia semear em gar chocolate, positivo com presena de bactrias no gram, proceder
semeadura para anaerbios, negativo liberar o resultado e desprezar o frasco, fungos deve-se
incubar a 30 por mais 10 dias (OPLUSTIL et al., 2010).

4.1 Objetivo
Identificar microrganismos presentes no sangue, atravs de um meio de cultivo
especifico.
4.2 Materiais
o Frasco de hemocultura;
o Ala calibrada;
o Placa de petri;
o gar sangue e chocolate;
o Estufa.

4.3 Tcnica da coleta


o Lavar as mos com agua sabo;
o Preparar os frascos de hemocultura remover o lacre, limpar a tampa dos frascos com
lcool a 70%, deixando o algodo sobre o frasco at o momento da puno;
o Selecionar o brao no qual ser feita a puno;
o Colocar luvas;
o Garrotear o brao do paciente e selecionar uma veia adequada;
o Limpar o local da puno com algodo ou gaze esterilizada contendo lcool a 70%
friccionando vigorosamente o local da puno por 30 segundos;
o Afrouxar o garrote temporariamente;
o Limpar o local da puno em movimentos circulatrio de dentro para fora.
o Evitar tocar com os dedos a rea j selecionado;
o Colher a amostra com seringa e agulha e seringa descartveis e transferir para o frasco
ou tubo apropriado;
o Homogeneizar os frascos por inverses;
o Identificar o frasco com o nome do paciente, data e hora da coleta e nmero da amostra
(1,2 ou 3 amostra);
o Selecionar um sitio diferente para a prxima puno (por exemplo, brao direito e
depois esquerdo);
o Utilizar uma nova agulha quando no conseguir xito na primeira tentativa de uma
puno venosa;

4.4 Resultados e Discusso

N Pacientes Idade Data Resultados


1 Ana Paula L. 24 12/05/2017 Ausncia de crescimento bacteriano aps 24 horas de
incubao.
2 Andriele P. 25 12/05/2017 Ausncia de crescimento bacteriano aps 24 horas de
incubao.

A tcnica desenvolvida pela hemocultura relevante em quadros de sades


considerados graves onde h persistncia de sintomas como: febre relativamente alta, sinais
clnicos de uma possvel infeco, uma vez que a bactria est presente no sangue poder atingir
do os rgos e sistemas do organismo, produzindo quadros infecciosos, na maioria das vezes
severos, resultando quase sempre em bitos (ARAJO, 2012).
Muitas vezes os resultados podem se caracterizar como falsos positivos, em
decorrncia de contaminaes por microrganismos da microbiota normal da pele, ento para a
realizao desse procedimento carece de profissionais treinados e bem qualificados, para
garantia de que a coleta ser bem-sucedida e que no afetar no resultado final da metodologia,
assim como no tratamento dos pacientes (PAGANA; PAGANA, 2015).
A hemocultura quando positiva denota que existe a presena de microrganismos
(fungos e/ou bactrias) no sistema hematolgico, posterior constatao destes a teraputica
deve ser iniciada o mais rpido possvel, com antibiticos e/ou antifngicos, eficazes em grande
parte dos microrganismos, aps a identificao da bactria e/ou fungo existente na hemocultura,
o mdico poder alterar a teraputica com frmacos mais especficos contra o microrganismo
em questo, baseando-se pelo antibiograma (MARTINS et al., 2015).

4.5 Concluso
O estgio proporcionou a ns acadmicos do curso de Biomedicina da Faculdade
Fasipe a realizao de exames de extrema importncia mdica e, a hemocultura foi um destes
que nos possibilitou a entender sua metodologia e sua importncia, pois se esse exame for feito
sem um cuidado maior poder acarretar em resultados errneo e consequentemente em
teraputica errada, que muitas vezes poder levar os pacientes a bito, uma vez que o quadro
clnico evolui de forma rpida sem chances de resultados positivos.
CAPTULO V
UROCULTURA

Normalmente os rins e a bexiga so ambientes estreis e por isso a presena de


bactrias na cultura de urina onde so fortes indcios de infeco urinaria essas infeces podem
acometer indivduos de todas as idades e sexos, tendo uma prevalncia maior em mulheres
devido as caractersticas do sistema urinrio da mulher ser diferente em relao ao do homem,
mas isso no significa que sempre haver bactrias ter uma infeco urinaria j que algumas
bactrias podem colonizar a uretra ou a bexiga sem produzir sintomas ou serem oriundas de
contaminaes exteriores (OPLUSTIL et al., 2010).
O padro ouro para a identificao de ITU, a cultura de urina quantitativa para
bactrias especificas. Estudos de localizao so necessrios para a identificao da fonte da
infeco. A urina obtida atravs da mico, em casos de crianas que ainda no podem utilizar
o banheiro, realizada a coleta atravs de um saquinho plstico, as duas formas de coleta so
de fcil obteno, porm deve-se preconizar a ausncia de contaminao (TORTORA, 2008).
Os principais agentes etiolgicos encontrados que so os maiores causadores de
patologias aos indivduos so as enterobactrias, como Escherichia coli, Klebsiella
penumoniae, Proteus spp. e Enterobacter spp., entre as bactrias pertencente aos cocos gram-
positivos os mais frequentes so os estafilococos, como Staphylococcus saprophyticus e os
Enterococcus spp. As infeces causadas por Pseudomonas, so devido resistncia natural
aos antibiticos causando problemas maiores ao paciente (TORTORA, 2005).

5.1 Objetivo
A urocultura o exame mais indicado para apontar uma infeco urinria, seja da bexiga
ou dos rins, sendo realizada a cultura de uma amostra de urina que pode ser feita quando houver
ou no a suspeita de infeco do trato urinrio (ITU). Esse exame tambm ajuda quando o
primeiro curso de antibiticos no eliminou uma infeco conhecida, para indicar outros
antibiticos mais eficazes para trat-la (OPLUSTIL et al., 2010).

5.2 Materiais

Coletor Estril; Ala Calibrada;


EPIs; Bico de Bunsen;
Amostra de Urina; gar CLED;
Placas de Petri; Estufa;

5.3 Mtodos
A urocultura o exame mais solicitado em laboratrio de microbiologia, pelo simples
fato de que a infeco do trato urinrio uma doena frequente e a amostra de urina facilmente
coletada (OPLUSTIL et al., 2010)
Homogeneizar a urina sem centrifugar. Imergir a ala calibrada na urina de forma
vertical duas a trs vezes para neutralizar o efeito da tenso superficial, retirar a ala
certificando-se de que ela contm a amostra de urina. Semear em placa de gar MacConkey,
CLED ou meio cromognico. Incubar em estufa de 35 mais ou menos por 18 a 24 horas e na
sedimentoscopia foi observado a presena de microrganismo ou nmero elevado de leuccitos,
incubar por mais 18 a 24 horas e sempre correlacionar com a leitura de Gram. Se forem
observados coco gram-positivos, recomenda-se semear a amostra em gar sangue para
favorecer o isolamento de Streptococcus agalactiae. E observar a presena de hemlise, quando
presente. Leitura das placas interpretar o crescimento das colnias de acordo com a
quantidade de urina semeada nas placas (OPLUSTIL et al., 2010).

5.4 Resultado e Discusso

N Pacientes Idade Data Resultados


1 Bruna M. 28 12/05/2017 Ausncia de crescimento bacteriano aps 24 horas
de incubao.
2 Mateus A 18 12/05/2017 Ausncia de crescimento bacteriano aps 24 horas
de incubao.
3 Kau M 15 01/06/2017 Ausncia de crescimento bacteriano aps 24 horas
de incubao.
4 Maria F 47 01/06/2017 Ausncia de crescimento bacteriano aps 24 horas
de incubao.
Nos casos de infeco urinria comum encontrar um aumento de leuccitos nas
amostras, geralmente em pacientes acometidos por infeco como uretrite, cistite e pielonefrite,
este aumento possui relao com as anlises realizadas no laboratrio devendo estar
correlacionada com os resultados de cultura, contagem de leuccitos e presena de
microrganismo (bacteriria) (OPLUSTIL et al., 2010).
As infeces inicialmente so ocasionadas por uma inflamao na uretra conhecida
como cistite ou uretrite quando atinge ureteres. A cronicidade da infeco alarmante quando
as bactrias atingem os rins causando pielonefrite. A cistite uma infeco predominante no
sexo feminino acompanhadas de sintomas como disria (mico difcil ou dolorosa e urgente)
e piria. As mulheres a populao alvo mais acometida devido a uretra feminina ser menor
em mdia de 5 cm de comprimento, e ser localizada prxima a abertura anal e de bactrias
intestinais, fazendo com que os microrganismos atravessem facilmente (TORTORA, 2005)
A pielonefrite a infeco urinria que acomete o sistema coletor e medula renal. O
agente patolgico mais comumente encontrado a E. coli, porm outros agentes podem estar
envolvidos como o Klebsiella e Enterobacter, Enterococcus faecalis e S. aureus. Os sintomas
clnicos normalmente encontrados incluem: hipertermia, calafrio, nuseas/vmitos, dor lombar,
disria, urgncia miccional, urina turva/ftida (RORIZ-FILHO et al., 2010).

5.5 Concluso
Com essa metodologia que ns acadmicos tivemos a oportunidade de realizar durante
o estgio de microbiologia da Faculdade Fasipe possibilitou o conhecimento de que a urocultura
um exame considerado padro-ouro para o diagnstico de infeces do trato urinrio quando
realizado de forma correta, assim como devemos levar em considerao os sinais clnicos
aparentes dos pacientes.
CAPTULO VI
COPROCULTURA

A coprocultura um exame bacteriolgico do material fecal, sendo empregvel para


investigao de processos infecciosos com envolvimento intestinal. No intestino grosso vivem
bactrias habitualmente sem nos trazer danos, sua patogenicidade caracterizada conforme
sintomas especficos apresentados pelo indivduo (CALIXTO; REIS, 2012)
Em condies ideais, as amostras de fezes devem ser coletadas no laboratrio e
processadas imediatamente a fim de se evitar a queda da temperatura, o que permite a
diminuio do pH, causando a morte de muitas espcies de Shigella e Salmonella. A amostra
pode ser coletada em um recipiente com um preservativo que o mantenha o pH 7,0. Nas
infeces gastrintestinais, os patgenos normalmente suplantam a flora intestinal endgenas,
de modo que eles passam a ser os microrganismos predominantes observados em esfregaos e
culturas (PAGANA; PAGANA, 2015).
A combinao do exame microscpico direto, cultura, testes de bioqumicos e
imunolgicos pode ser realizada para se identificar bactrias gram-negativas e gram-positivas
(p.ex., Escherichia coli enteropatognica, salmonela spp., Shigella ssp., clostridium
perfringens, C.difficile, Vibrio cholerae, Campylobacter spp. E Staphylococcus spp.), fungos
(Candida), protozorios intestinais (Giardia, Entamoeba) e helmiltos intestinais (ENGELKIRK;
PAUL, 2012).
Para obter um bom resultado no exame de coprocultura ideal que siga corretamente
as indicaes de como coletar a amostra, tipos de conservantes indicado para isolamento de
cada bactria, amostra inadequadas como sem conservante que foram obtidas h mais de 48
horas sendo mantida a temperatura de 2 a 8 C ou em temperatura ambiente (BARBOSA et al.,
2015).
6.1 Objetivo
Possibilita o diagnstico de infeces intestinais, decorrentes das toxinas liberadas por
bactrias como a Salmonella spp, Shigella spp, Escherichia coli e Campylobacter spp, Yersinia
spp, entre outros. Alm dessas, podem causar infeces localizadas nas vias urinrias, pulmes,
pele, sistema nervoso central e infeces. (TRABULSI, 2008).

6.2 Materiais
Coletor estril;
EPIs;
Amostra de Fezes;
Ala bacteriolgica;
Bico de Bunsen;
Placa de Petri;
gar MacConkey;
Estufa.

6.3 Mtodos
A coprocultura consiste na realizao da semeadura das fezes nas placas de petri
previamente preparadas com meio de cultura especifico para a amostra em questo, como o
gar MacConkey (OPLUSTIL et al., 2010).
Semear e Incubar as placas de MC e SS a 35 mais ou menos 2C por 18 a 24 horas e
3 o caldo de enriquecimento a 35 mais ou menos 2C por 2 a 18 horas ou aps 6 a 8 horas (GN).
Aps 12 a 18 horas de incubao do caldo de enriquecimento, semear uma amostra da superfcie
do caldo em uma placa do meio seletivo. Se for caldo GN, semear aps 6 a 8 horas de incubao
(PAGANA; PAGANA, 2015).
As colnias suspeitas do primeiro plaqueamento so repicadas no meio de Rugai ou
(IAL modificado) ou EPM-MILi. Colnias suspeitas do MC e SS que devem ser identificadas:
MC- colnias lactose positiva e lactose negativa. SS- colnias incolores pequenas produtoras
ou no de H2S. Recomendamos repicar ao menos 3 a 5 colnias com morfologia diferente, de
cada placa, para o meio de identificao. Incubar a placa semeada do caldo de enriquecimento
e o meio de identificao a 35 mais ou menos 18 a 24 horas (OPLUSTIL et al., 2010).
6.4 Resultado e Discusso

N Pacientes Idade Data Resultados


1 Jeasiel A. 23 02/06/2017 Crescimento microbiota das fezes, ausncia de
Salmonella spp., e Shigella spp.
2 Jussane A. 22 02/06/2017 Crescimento microbiota das fezes, ausncia de
Salmonella spp., e Shigella spp.
3 Flabiele S. 24 08/06/2017 Crescimento microbiota das fezes, ausncia de
Salmonella spp., e Shigella spp.

Enterobactrias constituem o grupo mais comum de bacilos Gram-negativos, e esto


entre as bactrias mais comuns que causam doena. A famlia de enterobactrias apresentam
um grande grupo de diferentes gneros, no entanto os principais de importncia clnica inclui:
E. coli, Shigella, Salmonella, Klebsiella, Serratia, Enterobacter, Proteus e outros, lembrando
que fazem parte da flora normal, porm podem ocasionar doenas. So as principais causadoras
de infeces intestinais, como diarreias, infeces do trato urinrio, respiratrio, septicemia e
meningite (BROOKS, et al, 2012).
Os gneros e espcies de enterobactrias podem ser diferenciados com base em
caractersticas bioqumicas. Algumas destas caractersticas podem diferenciar biotipos em
cepas pertencentes a uma mesma espcie (PAGANA; PAGANA, 2015).

6.4.1 Mtodo de Rugai com Lisina


um mtodo utilizado para identificao presuntiva de enterobactrias, vbrio e
aeromonas. Este meio permite a leitura em um s tubo, das seguintes reaes: Motilidade,
Lisina descarboxilase, Fermentao de glicose e sacarose, Produo de gs-glicose, cido
sulfdrico, Indol, Urease e Ltriptofanodesaminase (OPLUSTIL et al., 2010).
Este meio possui vantagem de ser prtico para inoculao e baixo custo. Sua
desvantagem inclui a dificuldade de interpretao de tantas provas, exigindo muita experincia
prvia com o meio. Atravs desse meio possvel identificar os principais gneros de
enterobactrias, indicando presena de bactrias no fermentadoras e Vbrios (NEWPROV,
2015).
Para identificao correta de espcies de Enterobacter, do gnero Serratia, gnero e
espcies de Pseudomonas h necessidade de realizar provas complementares. No
recomendado utilizar apenas essa prova como opo de identificao de bactrias envolvidas
em infeces hospitalares, necessrio a utilizao de testes complementares como Citrato e a
fermentao da lactose verificada no crescimento em gar MacConkey (NEWPROV, 2015).
6.4.2 Tcnica
o Com o auxlio da agulha de platina retirar uma parte da amostra da colnia isolada;
o Introduzir a seguir no tubo realizando uma picada at atingir o fundo do tubo;
o Retornar no pice e semear em forma de estrias na parte inclinada do meio;
o Tampar o tubo, atentando-se a realizar apenas uma volta, devido a produo de gs;
o Encaminhar a estufa por 24 horas a 35 a 37 C.

6.5 Concluso
A metodologia empregada pela coprocultura, na qual ns acadmicos desempenhamos
durante o estgio e que possibilitou o entendimento e sua importncia mdica, foi possvel
concluir que os pacientes que cederam as amostras no eram portadores da Salmonella spp. e
Shigella spp., que desempenham quadros clnicos que muitas vezes podem ser fatais.
CAPTULO VII
ANTIBIOGRAMA

Os testes de sensibilidade a antimicrobianos iniciaram-se em 1956, com Kirby e Bauer,


consequentemente o antibiograma avalia o padro de sensibilidade de microrganismo frente
concentrao pr-estabelecidas de antibiticos ou quimioteraputicos, correlacionados com
nveis sricos atingidos aps doses usuais em paciente. Esse teste indicado para qualquer
microrganismo relacionado ao processo infeccioso, portanto tem microrganismo podem
demostram resistncia aos agentes antimicrobianos, o caso das enterobactrias, S. aureus,
bacilos Gram-negativos no fermentados, etc (RIBEIRO, 2011).
Alguns microrganismos possuem sensibilidade previsvel aos antibiticos como por
exemplo, Streptococcus pyogenes perante a penicilina, e outros indicam que pertencem a
microbiota normal como por exemplo Escherichia coli quando isolada em fezes. Os resultados
de testes de suscetibilidade antimicrobiana in vitro so valiosos para a seleo do agente
quimioteraputicos ativo contra o organismo infectante, os mtodos utilizados para os testes e
melhorar o valor preditivo clinico dos resultados (OPLUSTIL et al., 2010).
O mecanismo mais comum de atividade antibacteriana a interferncia na sntese da
parede celular bacteriana. A maioria dos antibiticos que atuam na parede celular classificada
como antibiticos -lactmicos (p. ex., penicilinas, cefalosporinas, cefamicinas, carbapenemas,
monobactmicos, inibidores de -lactamase). Outros antibiticos que interferem na construo
da parede celular bacteriana incluem a vancomicina, a bacitracina e os seguintes agentes
antimicobacterianos: isoniazada, etambutol, cicloserina e etionamida (MURRY, 2006).
A interpretao do teste de sensibilidade ao antimicrobianos (TSA), uma das tarefas
mais peculiares dentro do setor de microbiologia, pois o ltimo processo realizado para
finalizao da identificao da bactria (OPLUSTIL et al., 2010).
A metodologia de Kirby e Bauer para antibiograma a mais utilizada atualmente na rotina de
anlises clnicas, devido a sua praticidade de execuo, baixo custo e confiabilidade de seus
resultados. Essa tcnica exige que as instrues sejam seguidas rigorosamente de forma que os
resultados obtidos correspondam a realidade e possam ser comparados com as tabelas
internacionais (LABORCLIN, 2011).

7.1 Objetivo
O antibiograma um poderoso teste laboratorial que ir auxiliar o mdico a ter uma
melhor direo para saber qual o medicamento correto a prescrever para o paciente. Com este
teste, o mdico tem menos chances a erros de prescrio, de no prescrever um medicamento
em que a bactria j seja resistente a este, e obtendo assim um tratamento eficiente e rpido
(BRASIL, 2013).

7.2 Materiais
EPIs
Amostra de uma colnia bacteriana;
Antibiticos;
Bico de Bunsen;
Soluo salina estril;
Tubo com escala 0,5 de Mac Farland;
Swab estril
gar Mueller Hinton;
Estufa;
Rgua;
Pina.

7.3 Mtodos
Retirar uma colnia de bactrias com swab;
Suspender as colnias em soluo salina estril, at atingir a turvao conforme a escala
de Mac Farland;
Embebedar o swab estril na suspenso;
Semear no gar Mueller Hinton por esgotamento, at que fique totalmente semeado;
Flambar a pina, fazer induo de ESBL (Amoxicilina+ c. Clavulnico ao centro;
Sulfazotrim, Azetroanam, Ceftriaxona, Ceftazidima ao redor).
Espalhar 10 a 15 antibiticos, deixando espaos entre eles (2cm) e inocular cada um
deles na superfcie do gar, pressionar um pouco;
Incubar a placa na estufa a 35 mais ou menos 2 C por 24 horas;
Fazer a leitura dos halos com uma rgua em milmetros, consultar a tabela para
Determinar se a bactria sensvel ou resistente ao antibitico.

7.4 Discusso
O antibiograma realizado em gar Mueller Hilton, padronizado por Kirby e Bauer,
devido aos seus favorecimentos a condies para crescimento das principais bactrias. O
antibiograma pode ser realizado para diversos tipos de materiais biolgicos como urina, fezes,
lquor, sangue e secrees (BRASIL, 2004).
Os discos distribudos aps seu tempo determinado se classificam em halos podendo
ser classificados em sensvel e resistente. Sensvel quando formar um halo ao redor do
antibitico, indicando assim que o paciente pode ser tratado com aquele antibitico, e resistente
quando no forma halo ao redor do antibitico, no podendo indicar aquele antibitico para os
pacientes, pois no ter eficcia. Ainda possvel classificar em intermediria, forma halos
menores, e a droga dever ser administrada em doses maiores, para combater o microrganismo
(TRABULSI, 2008).

7.5 Concluso
O estgio de microbiologia do stimo semestre de Biomedicina da Faculdade Fasipe,
proporcionou tambm, a ns acadmicos, o entendimento e a metodologia empregada no teste
de antibiograma, assim como sua importncia mdica, a qual possibilita por meio de sua
metodologia uma melhor escolha teraputica para cessar os efeitos produzidos de cada tipo de
microrganismo patognico.
CAPTULO VIII
CONSIDERAES FINAIS

O estgio supervisionado de microbiologia do stimo semestre noturno de


Biomedicina da Faculdade Fasipe (Faculdade de Sinop) teve como objetivo habilitar os
acadmicos para um melhoramento das prticas no setor de microbiologia correlacionando com
a teoria que foram aplicadas em sala de aula durante o curso. O estgio proporcionou o
aprendizado e o entendimento de como funciona a rotina laboratorial no setor de microbiologia,
e que para trabalhar neste setor necessrio responsabilidade, seriedade, dedicao e total
ateno.
Foi possvel entender e aprender a importncia de todas as fases: pr-analtica,
analtica e ps-analtica. Sendo que com todo o conhecimento adquirido fica claro a
metodologia da microbiologia na sua prtica, nos oferecendo uma vasta noo do que ns
iremos nos deparar no futuro prximo no mercado de trabalho.
Os dias de estgio foram extremamente importante e vantajoso e os conhecimentos
que foram passados pelo professor supervisor Cezar Ernani, vo ser de suma importncia para
nossa carreira profissional. Enfim, os estgios oferecidos pela Faculdade Fasipe engrandecem
o nosso conhecimento terico correlacionando com a prtica, possibilitando cada vez mais o
crescimento profissional.
REFERNCIAS

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2004.

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ANEXOS
ASSINATURAS

__________________________________
ASSINATURA DO(A) ACADMICO(A)

__________________________________
ASSINATURA DO(A) PROFESSOR(A)

Sinop-MT 39 /06/2017