Aula 5 Micro Biana

Cintica de Processos Fermentativos
X=Microrganismo
X= Microrganismo
S= Substrato
P= Produto
X=X(t)
S= S(t) Limitante S= Substrato
P= P(t) Econmico
P= Produto
Bioprocessos
a analise dos valores de concentrao de

um ou mais componentes do sistema de
cultivo, em funo do tempo de cultivo.
cultivo.
Entende-se como componentes, o

Entende-
microrganismo (ou
(ou biomassa),
biomassa), os produtos
do metabolismo (metablitos
(metablitos)) e os
nutrientes ou substratos que compem o
meio de cultura.
Sem o conhecimento da cintica torna-

torna-se
invivel a transposio de escala do
laboratrio para a industria
industria..
Atravs da cintica possibilita uma

comparao quantitativa entre condies
de cultivo;
Ex: pH, temperatura, geralmente obtidos
em curvas de ajuste onde: X=X(t),
P=P(t), S=S(t) por variveis como
velocidade de transformao ou fatores de
converso
Parmetros de Transformao
Produtividade em biomassa:
biomassa:
Xm Xo
PX = ;
tf
Produtividade do Produto:
Produto:
Pm Po
Pp = ;
t fp
Velocidades instantneas de transformao:
transformao:
As velocidades instantneas de reproduo de
microrganismos, de consumo de substrato e de
formao de produto podem ser representadas
pelas seguintes expresses:
expresses:
Velocidades de crescimento:
dx
rx = ;
dt
Velocidade de consumo de substrato
ds
rs = );
dt
Velocidade de formao de produto:
produto:
dp
rp = ;
dt
Velocidades especficas de transformao:
transformao:
A concentrao X, aumenta durante o cultivo
descontnuo, aumentado o complexo enzimtico
da transformao de S em P. Por isso, preciso
especificar com relao a X.
Velocidades especfica de crescimento:
1 dx
x = ;
x dt
Velocidade especfica de consumo de substrato
1 ds
s = .( );
x dt
Velocidade especfica de formao de produto:
produto:
1 dp
p = . ;
x dt
Fatores de Converso:
Converso: Consideramos um
determinado tempo t de fermentao e
determinados os valores X, S e P:
Fator de converso de Substrato em clula:

X Xo
YX / S =
So S
Fator de converso de produto em clula
X Xo
YX / P = ;
P Po
Fator de Converso de substrato em produto
P Po
YP / S = ;
So S
Se os trs fatores permanecerem constantes
durante todo o cultivo, o que no ocorre com
frequncia,, as trs expresses anteriores pode
frequncia
ser aplicadas no final da fermentao com
(X=X
(X= Xm; P=P
P=Pm; S=
S=00)
Xm _ Xo
YX / S =
So
Fator de converso de produto em clula
Xm Xo
YX / P = ;
Pm Po
Fator de Converso de substrato em produto
Pm Po
YP / S = ;
So
Eliminando a grandeza Xo, pela combinao das
equaes::
equaes
X _ Xo e Xm _ Xo

Y = Y = X /S
So S
X /S
S
Xm _ X
YX / S =
S
O fator de converso agora pode ser obtido de
um forma mais precisa, porque Xo, apresenta
erros experimentais mais elevado que Xm,
Entretanto nem sempre a concentrao de
substrato se esgota completamente, quando o
valor de X mximo.
Isso ocorre porque a medida que o micro-
micro-
organismo cresce forma metablitos que podem
inibir o crescimento
Inicialmente o fator de converso Yx/s, foi definido por
Monod, e tem sido til na anlise de alguns processos
como o de produo de protena microbiana.
microbiana.
Desde que seja conhecido o valor de Yx/s, possvel
calcular o valor de X, a partir de valor conhecido de S
e vice-
vice-versa
versa..
Este fator til, na determinao do valor da
concentrao de substrato limitante.
limitante.
O valor de So, definir a concentrao mxima da
populao microbina (Xm);
X m = X 0 Yx / s .S 0
Em outras palavras, se em uma outra experincia, de
um cultivo descontnuo, se o valor de So, for inferior
ao precedente, porm com concentraes idnticas
dos demais componentes, inclusive, Xo proporcionar
um valor de Xm, proporcionalmente menor no final do
cultivo, ento vale a equao:
equao:
X = X m Yx / s .S
Durante um cultivo descontno,
descontno, sob condies especiais,
concentrao de S no muito elevada, agitao perfeita do
meio, possvel verificar a contncia de Yx/s, com o auxlio
da expresso
X = X m Yx / s .S
Representando os valores experimentais de X, em funo
de S, resultando em uma reta.
As mesmas consideraes podem ser aplicadas para os
demais fatores YX/P e YP/S
X Yx/s
Yx/s
Xm
S
Entretanto, se Yx/s, Yx/p ou Yp/s, no forem constantes,
devero ser levado apenas seus valores instantneos:
dX dX
YX / S = YX / P = YP / S =
dP
dS dP dS
Considerando as definies de velocidades e velocidades

especficas:
rX X
YX / S = =
rS S
rX X
YX / P = =
rP P YX / S = YX / P .YP / S
rP P
YP / S = =
rS S
Em fermentaes industriais, dificilmente so observados
valores constantes destes parmetros, devido alguns
fatores, como tempo de mistura, transferncia de oxignio,
sistema de agitao.
Alm destes fatores, h de se considerar que as celulas
utilizam parte do substrato, para sua manuteno:
Este conceito introduzido por Pirt,
Pirt, considera um consumo
especfico para a manuteno celular
(rs ) m
m= rX
X rS = + m. X
Y X / S
rS = (rs ) c + (rs ) m X
S = +m
rX Y X / S
Y X / S =
(rS ) C
Se YX/S e m, forem constantes a relao entre s e X deve
ser linear. Esta definio de fator de converso verdadeiro,
se aplica mais adequadamente aos processos
fermentativos.
Uma generalizao mais ampla pode ser aplicada,
considerando ainda o consumo de substrato para a
formao de produto (r (rS)p
X p
S =
+
+ mP
Y X /S Y P/S
Clculo das Velocidades
Os clculos das velocidades instantneas e

velocidades especficas de transformao
dependem em primeiro lugar dos traados das
curvas a partir de pontos experimentais.
Estes traados e ajustes podem ser feitos
manualmente, com programas de computador ou
ainda atravez de curvas representadas por
equaes.
O traado manual, exige um bom conhecimento
do processo em estudo.
Em geral para um grande nmero de casos, os
perfis das curvas de formao de microrganismos
(X) e de formao de produto em funo do
tempo, apresentam forma sigmoidal crescente,
enquanto o perfil de Substrato S, decrescente
1. Aps o ajuste das curvas, traar retas tangentes, em um

determinado instante t;
2. Calcular as velocidades instantneas rX, rS e rP;
3. Calcular as velocidades especfica X, S e P.
Clculo das Velocidades Instantneas
dX 42 2g / L
rX = = = = 0,45 g / L.h
dt 6,2 1,8 4,4h
dP 70 100 30 g / L
rS = = = = 7,9 g / L.h
dt 7,1 3,3 3,8h
dP 20 0 20 g / L
rP = = = = 4 g / L.h
dt 8,3 3,3 5h
Clculo das Velocidades Especficas
1 dX 1 42 1 2g / L
X = . = = . = 0,13.h 1
X dt 3,5 g / L 6,2 1,8 3,5 g / L 3,8h
1 dP 1 70 100 30 g / L
S = . = . = = 2,3.h 1
X dt 3,5 7,1 3,3 3,5 g / L3,8h
1 dP 1 20 0 1 20 g / L
P = . = . = . = 1,1h 1
X dt 3,5 8,3 3,3 3,5 g / L 5h
Clculo das velocidades
A curva de crescimento celular
1. Fase lag ou de latncia, segue a inoculao do meio nutritivo e
um perodo de adaptao;
Quando uma cultura microbiana mudada de um ambiente para
outro, necessrio reorganizar ambos os seus constituintes, micro e
macromoleculares;
Isto pode envolver a sntese ou represso de enzimas.
A fase lag, como conseqncia, pode ser muito curta ou muito
longa.
Pode haver uma aparente ou pseudo fase lag quando o inculo
pequeno ou tem baixa viabilidade, j que o crescimento somente
pode ser registrado acima do nvel de sensibilidade do mtodo de
anlise;
A durao da fase lag bastante difcil de estimar. O objetivo geral
de um bom processo seria minimizar a fase lag e maximizar a
velocidade (taxa) e a durao da fase exponencial;
A durao da fase lag depende:
Das mudanas em composio de nutrientes experimentados pela
clula; da idade e viabilidade celular; do tamanho do inculo
1. A fase log ou exponencial caracterizada por uma
linha reta em um grfico semi-log de lnX versus tempo;
Esse um perodo de crescimento balanceado ou
crescimento em estado estacionrio, durante o qual a
velocidade de crescimento especfica x, constante e
mxima m;
Durante a fermentao a composio qumica do caldo est
variando, j que nutrientes esto sendo consumidos e produtos
metablicos esto sendo produzidos;
Como uma conseqncia, o ambiente no est em estado
estacionrio.
Num intervalo de concentrao de nutrientes, a taxa de
crescimento independente da concentrao;
Tambm, durante a fase log, a composio macromolecular da
clula permanece constante.
Em algum momento, a velocidade de crescimento comea diminuir, ou devido
ao desaparecimento de um nutriente essencial ou devido ao acmulo de um
produto inibidor;
A clula passa por uma transio at que a velocidade de crescimento seja
zero.
Essa a fase estacionria ocorre quando todas as clulas pararam de
dividir ou quando todas as clulas viveis alcanaram equilbrio com
clulas mortas, mas ainda h metabolismo e acmulo de produtos na
clula ou no caldo;
A massa celular total, pode permanecer constante, mas o nmero de
clulas viveis provavelmente diminuir;
Como a viabilidade decresce, pode ocorrer lise celular, e a massa
diminuir; Isso leva criao de um meio complexo de produtos de lise, e
um perodo secundrio de crescimento, pode acontecer o chamado
crescimento crtico;
Freqentemente, metablitos secundrios no essenciais so formados
por sistemas enzimticos no presentes ou no funcionando previamente
na clula.
Fase de Morte: Poucos estudos tm sido feitos sobre a fase de morte
de culturas de clulas;
Talvez porque a maioria dos processos microbianos descontnuos
industriais so terminados antes da fase de morte comear.
Na fase exponencial a velocidade de crescimento

diretamente proporcional a concentrao de X,
Isto :
dX
= m .X
dt
X [ m ( t ti ) ]
ln = m .(t ti )
Xi
ou X = X i .l
Na fase exponencial a representao
semilogaritmica da concentrao celular com o
tempo de cultivo, resulta em uma reta, at tc:
ln X = ln X 0 + t
lnX
lnXo
tempo
A fase exponencial tambm caracterizada

frequentemente pelo tempo de gerao tg, tempo
necessrio para dobrar a concentrao de X
X2 = 2X1
X
ln = m .(t ti )
Xi
2.Xi
ln = m .(t g )
Xi
ln 2 0,693
m = =
tg tg
TEMPO DE GERAO
Crescimento de Bactrias por Diviso
tg= 15-25 min
Crescimento de Levedura
tg= 90-120 min
CLASSIFICAO DOS PROCESSOS
FERMENTATIVOS
Formao de produto metablito pode ser

relacionada a consumo de nutriente
nutriente;;
Alm do mais, formao de produto no
pode ocorrer sem a presena de clulas;
clulas;
Assim, esperado que crescimento e
formao de produto esto intimamente
relacionados utilizao de nutrientes que
dependendo dos controles metablitos
regulatrios;;
regulatrios
A formao de produto ser ligada ao
crescimento e/ou concentrao celular.
celular.
FERMENTATIVOS
A relao cintica entre crescimento e

formao de produto depende do papel do
produto no metabolismo celular;
As duas cinticas mais comuns so aquelas
que descrevem a sntese do produto durante
o crescimento e aps o crescimento ter
cessado;
Um exemplo menos comum aplica ao caso
onde o crescimento inicialmente ocorre sem
formao de produto, mas aps algum
perodo de tempo o produto comea a
aparecer enquanto o crescimento continua.
No grfico (a), a formao de produto associado ao crescimento
celular
No grfico (b), temos formao de produto associado ao
crescimento, de uma forma mais ou menos confusa, chamada de
formao de produto misto, ou, parcialmente associada ao
crescimento
No grfico (c), temos formao de produto no associada ao
crescimento.
Exemplos de Produtos Associado e Parcialmente
Associado ao Crescimento
1 1
FERMENTATIVOS
/max /max
Os grficos
p/pmax p/pmax
mostram:
(d) formao de
d) t (e) t
produto associada ao
crescimento;
(e) formao de
1 p/pmax produto parcialmente
/max associada ao
crescimento e
(f) formao de
produto no associada
ao crescimento.
(f) t
FERMENTATIVOS
Os comportamentos relativos as funes =(t), tambm

fornecem base para classificao dos processos fermentativos,
proposta por Gaden.
Produto associado ao crescimento
FERMENTATIVOS

proposta por Gaden.
Produto parcialmente associado ao crescimento
FERMENTATIVOS

proposta por Gaden.
Produto formado denominado como metablito secundrio,
porque no se enquadra em nenhum dos tres grupos
FERMENTATIVOS
Em uma fermentao, importante determinar se o

produto formado por em reaes necessrias ao crescimento
e manuteno celulares (produto primrio ou intermedirio) ou
se o produto formado em reaes que no so essenciais ao
crescimento (produto secundrio do metabolismo).
A correlao emprica mais utilizada para classificar a
formao de um produto foi proposta por Luedeking e Piret
(1959) para interpretar a formao de cido ltico por
Lactobacillus delbrueckii, e apresenta a forma:
p = .x +
e ...so parmetros do modelo e so constantes num

determinado sistema de produo a valores fixos de pH e
temperatura.
FERMENTATIVOS
Assim, no contesto cintico, pode-se classificar o produto como:
Associado ao crescimento: quando (=0 e 0)

No associado ao crescimento: quando ( 0 e = 0)(a sua sntese
inica-se depois de o crescimento ter cessado).
Parcialmente associado ao crescimento: quando ambos parmetros so

positivos. ( 0 e 0)
Este modelo simples tem-se revelado suficientemente verstil para

descrever a grande maioria das cinticas de formao do Produto.
Exemplos tpicos:
Antibiticos (produtos secundrios); Protenas Recombinantes (produtos

secundrios); cido ltico (produto intermedirio); cido Ctrico (produto
intermedirio); cido Glucnico (produto intermedirio).
FERMENTATIVOS
Outra classificao, baseada na associao entre formao do
produto com microrganismo em produo ou no devida a
classificao de KONO, ASAI, dividido em tres grupos:
Processos em que a formao do produto esta associada apenas

atividade de celulas em reproduo como, por exemplo, na
produo de sorbose;
Processos em que a formao de produto esta associada

atividade de todas as clulas, em reproduo ou no, como por
exemplo a produo de cido ltico;
Processos em que a formao de produto esta associada apenas

atividade das clulas que no se reproduzem, no caso da
produo de cido ctrico
INFLUNCIA DA CONCENTRAO DE NUTRIENTES
NA VELOCIDADE ESPECFICA DE CRESCIMENTO
Durante a maioria das fermentaes
descontnuas tpicas, a velocidade especfica
de crescimento constante e independente
da concentrao de nutrientes que est
variando;
A velocidade de crescimento, como uma
velocidade de reao qumica, uma funo
da concentrao de compostos qumicos;
Os compostos qumicos nesse caso so os
nutrientes essenciais para o crescimento;
A forma da relao entre velocidade de
crescimento e concentrao de nutriente foi
observada em 1949 por Monod,
O modelo de Monod tem a forma:
S
X = m .
Ks + S
S
= m .
Ks + S
= vel. especfica de crescimento;

max = vel. espec. de crescimento mximo;
S = concentrao de nutriente;
KS = constante de saturao e igual a S
quando = 0,5.max
O modelo de Monod tem a forma:
S
= m .
Ks + S
Linearizao da Equao de Monod

S
X = m .
Ks + S
1 Ks S Ks 1 1
= + = . +
X max .S max .S max S max Portanto:
1 KS 1 1
= . +
X max S max
O significado de Ks pode ser deduzido fazendo-se S = Ks

Ks.. Resultando
x = m/
m/22. Ks representa a [S] na qual x a metade de seu valor
mximo.
Representao da equao de Monod. Ex: para m = 0,14 h-1 e Ks = 0,60 mg/L

(valores hipotticos).
A equao de Monod representa uma simplificao de vrias situaes
reais:
*No prev fase LAG (x=

x=00) S >>> Ks
Ks..
*No prev fase estacionria (embora S no seja nulo, S 0; x=x=0
0.
*No prev nem um tipo de inibio.
*No se aplica a cultivos com limitao de outros nutrientes (apenas S
limitante).
Representao da equao de Monod. Ex: para m = 0,14 h-1 e Ks = 0,60 mg/L (curva
B), Ks = 0,030 mg/L (curva A).
A curva apresentada pela X em funo do tempo (condies
experimentais), apresenta um trecho mximo e constante (AB), aps a
fase LAG curta.
Variao da (x
x)) e do tempo de gerao (ttg), no cultivo descontnuo.
Representao da equao linearizada do modelo de MONOD:
1 KS 1 1
= . +
X max S max
1/x
Ks
Ks//mx
1/
1/mx
1/S
-Outros Modelos Matemticos:
Estes modelos, como o de Monod, tmbm no levam em conta o

fenmeno da inibio (pelo substrato ou pelo produto).
O fenmeno de inibio do crescimento celular (figura abaixo) somente
se aplica para valores de S relativamente baixos,menores ou iguais a
Ks
Ks.
S K i ,s
x = m . *
K s + S K i ,s + S
Cintica de inibio pelo substrato (curva A) e sem inibio (---).

Com o objetivo de explicar a reduo da velocidade
especfica de crescimento provocada pelos altos
valores iniciais de substrato, uma modificao foi
proposta para a Equao de Monod:
S K i,s
x = m . *
K s + S K i,s + S
Ks= Constante de saturao definida na Equao de Monod;

Ki,s=Constante de inibio pelo substrato;

Ki,s = Ks, quando: x = max , porm para um valor de S, que
2
provoque a inibio,
sendo assim superior ao correspondente S da equao de Monod.
Quanto a inibio pelo produto, um equacionamento
semelhante foi proposto por JERUSALIMSKY &
NERONOVA
S K i,P
x = m. *
K s + S K i,P + S
Ks= Constante de saturao definida na Equao de

Monod;
Ki,p=Constante de inibio pelo produto;

Exerccio:
4) Os dados obtidos de uma fermentao descontnua esto ilustrados na tabela

abaixo. Determine:
a) A forma linear do modelo matemtico de Monod, demonstrando graficamente
os coeficientes linear e angular.
b) Os parmetros cinticos Ks e m, utilizando a forma linear no modelo de
Monod encontrada no item (a).
T (h) X (g/L) S (g/L) dx/dt

0,00 15,50 74,00 12,24
0,52 22,50 61,00 15,90
0,86 28,60 49,00 19,63
1,18 35,30 37,00 22,29
1,43 41,10 26,00 23,92
1,74 48,20 11,00 20,20
2,06 53,00 3,00 9,12

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Cintica de Processos Fermentativos

Cintica de Processos Fermentativos

Cintica de Processos Fermentativos

a analise dos valores de concentrao de

Entende-se como componentes, o

Sem o conhecimento da cintica torna-

Atravs da cintica possibilita uma

Fator de converso de Substrato em clula:

Considerando as definies de velocidades e velocidades

Os clculos das velocidades instantneas e

1. Aps o ajuste das curvas, traar retas tangentes, em um

Na fase exponencial a velocidade de crescimento

A fase exponencial tambm caracterizada

Crescimento de Bactrias por Diviso

tg= 15-25 min

Formao de produto metablito pode ser

A relao cintica entre crescimento e

Os comportamentos relativos as funes =(t), tambm

Os comportamentos relativos as funes =(t), tambm

Os comportamentos relativos as funes =(t), tambm

Em uma fermentao, importante determinar se o

e ...so parmetros do modelo e so constantes num

Associado ao crescimento: quando (=0 e 0)

Parcialmente associado ao crescimento: quando ambos parmetros so

Este modelo simples tem-se revelado suficientemente verstil para

Antibiticos (produtos secundrios); Protenas Recombinantes (produtos

Processos em que a formao do produto esta associada apenas

Processos em que a formao de produto esta associada

Processos em que a formao de produto esta associada apenas

= vel. especfica de crescimento;

Linearizao da Equao de Monod

O significado de Ks pode ser deduzido fazendo-se S = Ks

Representao da equao de Monod. Ex: para m = 0,14 h-1 e Ks = 0,60 mg/L

*No prev fase LAG (x=

Estes modelos, como o de Monod, tmbm no levam em conta o

Cintica de inibio pelo substrato (curva A) e sem inibio (---).

Ks= Constante de saturao definida na Equao de Monod;

Ks= Constante de saturao definida na Equao de

Ki,p=Constante de inibio pelo produto;

4) Os dados obtidos de uma fermentao descontnua esto ilustrados na tabela

T (h) X (g/L) S (g/L) dx/dt

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