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Exames coprológicos: Considerações para um diagnóstico correcto

Article · February 2016

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Sérgio Ramalho Sousa Luis Manuel Madeira de Carvalho

Escola Universitária Vasco da Gama University of Lisbon
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Exames coprológicos: Considerações para

um diagnóstico correcto
Dr. Sérgio Sousa; Prof. Doutor Adolfo Paz Silva; Prof. Doutor Luís Madeira de Carvalho

O exame fecal permite evidenciar e identificar os parasitas que
utilizam as fezes como veículo das suas formas de dissemi-
nação no exterior. Os parasitas do aparelho digestivo e seus
órgãos anexos, como fígado, assim como do aparelho respira-
tório produzem ovos ou larvas que abandonam o hospedeiro
através das fezes.1
Para se proceder a um correcto exame coprológico é ne-
cessário considerar os procedimentos básicos de colheita da
amostra fecal, assim como da sua conservação, envio ao labo-
Dr. Sérgio Sousa
Estudante de Doutoramento em Ciências Veterinárias da Fa-
culdade de Medicina Veterinária (FMV), Universidade de Lisboa
(UL).
Bolseiro da Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT),
Bolsa de Doutoramento SFRH/BD/65407/2009.
Docente de Parasitologia e Patologia e Clínica das Doenças
Parasitárias da Escola Universitária Vasco da Gama (EUVG).
Escola Universitária Vasco da Gama (EUVG), Av. José R.
Sousa Fernandes, Campus Universitário, Bloco B, Lordemão
3020-210 Coimbra, Portugal.
Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal
(CIISA), Faculdade de Medicina Veterinária (FMV), Universidade
de Lisboa (UL), Pólo Universitário do Alto da Ajuda, Avenida da
Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal.
Prof. Doutor Adolfo Paz Silva
Professor Titular do Departamento de Patologia Animal.
Faculdade de Veterinária de Lugo, Universidade de Santiago
de Compostela.
Faculdade de Veterinária, Departamento de Patoloxia Animal,
Campus Universitario, s/n, 27002 Lugo, España.
Prof. Doutor Luís Madeira de Carvalho
Professor Associado com Agregação de Parasitologia e Doen-
ças Parasitárias, Departamento de Sanidade Animal, Faculda-
de de Medicina Veterinária, Universidade de Lisboa.
Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal
(CIISA), Faculdade de Medicina Veterinária (FMV), Universidade
de Lisboa (UL), Pólo Universitário do Alto da Ajuda, Avenida da
Universidade Técnica, 1300-477 Lisboa, Portugal.
Financiado pela Fundação para a Ciência e a Tecnologia
(FCT), Bolsa de Doutoramento SFRH/BD/65407/2009
ratório e processamento laboratorial.2
As técnicas laboratoriais frequentemente utilizadas em copro-
logia parasitária são simples e fiáveis, permitindo um diagnósti-
co parasitológico qualitativo rápido assim como uma avaliação
quantitativa da infecção parasitária.3
COLHEITA DE FEZES
O procedimento de colheita da amostra fecal, a sua conserva-
ção e envio ao laboratório, assim como o seu processamento
laboratorial podem condicionar o diagnóstico coprológico.4
A colheita de fezes para exame parasitológico pode ser indi-
vidual ou em grupo e sempre que possível a partir da ampola
rectal do animal. É facilmente realizada por palpação digital nos
pequenos animais ou por palpação rectal nos grandes animais,
com o auxílio de luva obstétrica descartável ou saco de plástico,
com lubrificante para reduzir o desconforto do animal.5
A colheita da amostra fecal a partir do solo é menos recomen-
dada do que a anterior e deve ser realizada colhendo pequenas
porções da superfície e do interior da matéria fecal recentemen-
te emitida.1 A exposição e permanência da amostra fecal às
condições ambientais pode, não só alterar a sua composição
como, permitir a sua invasão por organismos coprófagos de
vida livre, que contaminam a amostra com ovos e larvas e ain-
da permitir o desenvolvimento dos organismos parasitas pre-
sentes, alterando a sua viabilidade e morfologia.6 As alterações
morfológicas das formas parasitárias presentes na amostra
fecal podem dificultar um correcto diagnóstico parasitológico.4
A colheita de fezes a um grupo de animais deve ser feita de
forma a se obter uma amostra representativa. Pelo que devem
ser colhidas amostras a cerca de 10% dos animais, alguns dos
quais doentes e outros saudáveis.1,6
A cada animal deve-se colher entre 50 a 100 gramas de fe-
zes. No entanto, sempre que possível deve-se respeitar a indi-
cação de 500 g de fezes para equídeos e bovinos, 100 a 50 g
para pequenos ruminantes, suínos e canídeos, e de 50 a 20 g
de fezes para gatos.6
CONSERVAÇÃO DAS FEZES
Quando o diagnóstico parasitológico não pode ser realizado
logo após a defecação, a amostra fecal deve ser acondiciona-
da e conservada.3
A amostra pode permanecer no interior da luva ou saco de
plástico, utilizados na recolha, ou pode ser transferida para
um frasco de vidro ou de plástico com tampa hermética. O
recipiente que acondiciona a amostra fecal deve ser estan-
que e impermeável, não deve ser nunca de material poroso
como cartão ou madeira, de forma a impedir a desidratação da

18 Veterinary Medicine janeiro ● feveiro 2016


amostra com consequente alteração das formas parasitárias.1
A amostra fecal deve permanecer sem ar, de forma a atrasar
o desenvolvimento das formas parasitárias.2
A conservação temporária da amostra fecal por refrigeração,
entre 4 a 5ºC, permite interromper o desenvolvimento das for-
mas parasitárias sem as inviabilizar, podendo ocorrer a retoma
o seu desenvolvimento em laboratório.1
Para atrasar ou mesmo interromper o desenvolvimento das
formas parasitárias presentes numa amostra fecal é neces-
sário acondicioná-la em recipiente hermético e refrigerá-la à
temperatura de 4 a 5ºC.4 Com este procedimento é possível
conservar as formas parasitárias durante uma semana sem se
observar alterações morfológicas consideráveis.7
A conservação definitiva das fezes com recurso a líquidos
fixadores, como etanol a 70% e formaldeido a 10%, não permi-
te o desenvolvimento posterior das formas parasitárias. Deste
modo quando se pretende identificar parasitas por coprocultu-
ra a conservação definitiva não deve ser utilizada.1,2
ENVIO DA AMOSTRA FECAL AO LABORATÓRIO
A amostra fecal deve ser enviada ao laboratório perfeitamente
acondicionada, conservada e correctamente identificada com
a data, número e origem da colheita.8
A amostra deve ser acompanhada por um relatório com to-
das as indicações importantes para um correcto diagnóstico
laboratorial.3 Os dados sobre o animal, o proprietário, o Médi-
co Veterinário assistente, a localidade, a doença ou parasitose
suspeita, assim como o número de animais afectados ou mor-
tos, sintomas e lesões, podem ser importantes para a realiza-
ção de um correcto diagnóstico coprológico.8
PROCEDIMENTO GERAL DOS EXAMES FECAIS
Independentemente do procedimento laboratorial a desen-
volver, é necessário respeitar as regras básicas de higiene de
forma a diminuir o risco de zoonoses parasitárias assim como
a disseminação de formas parasitárias para o meio ambiente.2
Em helmintologia, a coprologia recorre frequentemente à ob-
servação directa da amostra fecal assim como à identificação
morfológica das formas parasitárias como ovos, larvas e para-
sitas adultos. Deste modo o conhecimento da sua morfologia é
necessário para um correcto diagnóstico parasitológico directo.4
Exame macroscópico das fezes
O exame macroscópico das fezes pode auxiliar e orientar o diag-
nóstico parasitológico. A aparência geral das fezes, a sua con-
sistência e cor devem ser normais para o hospedeiro em causa.4
A alteração destas características pode indicar alguma infecção
parasitária.8 O exame macroscópico das fezes permite realizar o
diagnóstico parasitológico directo avaliando a presença de para-
sitas adultos ou fragmentos destes na amostra de fezes.2
Exame microscópico das fezes
A identificação das formas parasitárias cujas dimensões são inferio-
res ao limite de resolução do olho humano, como ovos e larvas de
helmintes, só é possível por observação microscópica das fezes.2
Exames coprológicos ●
Exame microscópico directo das fezes frescas
O exame microscópico directo das fezes frescas, em prepa-
rações lâmina-lamela, permite fazer um diagnóstico parasito-
lógico correcto, no entanto este exame coprológico apresenta
uma baixa sensibilidade pela ocorrência frequente de resulta-
dos falsos negativos. O facto de se observar uma pequena
amostra fecal numa preparação microscópica com muito re-
síduo, na qual se encontram diluídas as formas parasitárias,
dificulta o correcto diagnóstico parasitológico.8
Exames fecais de concentração ou enriquecimento
Os exames fecais de concentração ou enriquecimento são os
mais frequentemente utilizados em coprologia veterinária.8
Estes exames permitem separar as formas parasitárias dos
constituintes fecais e concentrá-las de modo a facilitar a sua
observação. Para suspender e separar os constituintes fecais
é necessária a utilização de uma solução que permita diluir a
amostra fecal. Após obter uma suspensão fecal é possível es-
tratificar os constituintes de acordo com as suas densidades
ou gravidade específica. Esta estratificação pode ser lenta,
devido apenas à acção da força da gravidade, ou rápida com
a aplicação de uma força centrífuga. A centrifugação permite
uma melhor separação entre as formas parasitárias e os res-
tantes constituintes fecais, aumentando a sensibilidade dos
métodos, sendo particularmente importante quando o número
de formas parasitárias é muito baixo ou quando se utilizam so-
luções viscosas que atrasem a separação dos vários consti-
tuintes fecais.4
Quando não é possível centrifugar e não se pretende uma
diminuição da sensibilidade do exame fecal, é frequente utilizar
uma maior amostra fecal ou um período de repouso mais longo.8
Os exames fecais de concentração mais frequentemente
utilizados baseiam-se na sedimentação ou na flutuação das
formas parasitárias.1,2
Métodos de sedimentação
Os métodos de sedimentação utilizam soluções diluidoras me-
nos densas do que as formas parasitárias e mais densas do que
os restantes constituintes fecais. A diluição da amostra fecal em
água, solução com gravidade específica de 1, permite a sedi-
mentação de formas parasitárias mais densas e a flutuação dos
restantes constituintes fecais, menos densos do que a água. As
formas parasitárias concentram-se no sedimento de onde são
facilmente recuperadas e observadas.8 Estes métodos de sedi-
mentação são frequentemente utilizados para pesquisa de ovos
de tremátodes, cuja densidade é superior a 1.4, sendo os ovos
de nemátodes e céstodes, de densidade inferior a 1.2, frequen-
temente observados em métodos de flutuação.3
Métodos de flutuação
Os métodos que se fundamentam na flutuação utilizam solu-
ções mais densas do que as formas parasitárias e menos den-
sas do que os restantes constituintes fecais de modo a estra-
tificá-los e separá-los de acordo com a gravidade específica.
Deste modo as formas parasitárias concentram-se à superfície
janeiro ● feveiro 2016 Veterinary Medicine 19
 ● Exames coprológicos
Detritos
Ovos
Ovos
Detritos
Ovos
Detritos
Muito baixa Ideal Muito elevada
FIGURA 1. Efeito da gravidade específica na flutuação dos ovos.5
da mistura fecal, de onde podem ser facilmente recuperadas
e observadas por microscopia, e os restantes constituintes fe-
cais sedimentam.8
As soluções de flutuação podem ser escolhidas de acordo
com a sua gravidade específica e composição. As soluções
mais frequentemente utilizadas em métodos de flutuação com-
preendem limites de gravidade específica entre 1.10 e 1.35, a
20ºC.1 Soluções de flutuação com gravidade específica entre
1.10 e 1.20 permitem a flutuação de uma grande variedade de
formas parasitárias, como ovos e larvas da maioria dos nemá-
todes e ovos de céstodes. A flutuação de ovos de tremátodes
só é possível com soluções muito densas, com 1.30 a 1.35
de gravidade específica.4 O aumento da gravidade específica
da solução promove a flutuação de mais constituintes fecais e
aumenta o risco de deformação das formas parasitárias, difi-
cultando a sua observação (Figura 1).5
As soluções de flutuação utilizadas em parasitologia vete-
rinária incluem solução de açúcar a 1.20 e 1.25 de gravidade
específica e várias soluções salinas como soluções de nitrato
de sódio (NaNO3) a 1.20 e 1.30, sulfato de zinco (ZnSO4) a
33% com 1.18 de densidade, cloreto de sódio (NaCl) a 1.20 e
sulfato de magnésio (MgSO4) a 1.32.8
A solução de flutuação de açúcar permite uma boa separa-
ção entre os constituintes fecais, cristaliza lentamente e man-
tém as formas parasitárias sem alterações morfológicas duran-
te alguns dias.7 No entanto as soluções salinas são preferíveis
à solução de açúcar devido à menor viscosidade e ao maior
período de conservação.3
UTILIZAÇÃO DO MICROSCÓPIO ÓPTICO
A correcta utilização do microscópio óptico é fundamental para
a observação de preparações assim como para o bom diag-
nóstico parasitológico microscópico.2
A maior parte das formas parasitárias dos helmintes são des-
coradas ou apresentam uma coloração que dificulta a sua dife-
renciação no meio em que encontram, pelo que é importante
20 Veterinary Medicine janeiro ● feveiro 2016
FIGURA 2. Preparação lâmina-lamela. As setas indicam que a prepa-
ração deve ser observada de forma sistemática.3
maximizar o contraste entre o parasita e o meio da preparação
microscópica a observar. A forma de aumentar o contraste é
pela utilização do condensador baixo, afastado da preparação
microscópica, pela redução da intensidade da luz ou ainda
pela diminuição da abertura da íris do diafragma.8
Quando há necessidade de tornar mais visíveis pequenas
estruturas das formas parasitárias é utilizado o parafuso micro-
métrico do microscópico óptico de forma a focar a imagem
que se pretende observar.7
Observação microscópica de preparações
A observação microscópica deve ser o mais completa e sis-
temática possível para que os resultados obtidos possam ser
correctos e comparáveis (Figura 2).
A preparação microscópica deve ser examinada com am-
pliações crescentes. A primeira observação deve ser rápida
mas cuidada de forma a percorrer a totalidade da preparação e
a identificar as formas parasitárias, apenas em caso de dúvida
de diagnóstico ou necessidade de se obter medidas rigorosas
deve-se utilizar ampliações maiores. Como exemplo de am-
pliações mais utilizadas na observação de preparações para
diagnóstico parasitológico directo pode-se referir as 40x, 60x,
100x, 200x, 400x resultantes da adição de objectivas de 4, 6,
10, 20, 40 a uma ocular de 10x, respectivamente.1,2
A ampliação de 1000x, com objectiva de 100x para óleo de
imersão, não deve ser utilizada na observação de preparações
a fresco, sem lamela ou de flutuação. O contacto da objectiva
com a preparação pode danificar a lente ou a preparação. A
pressão da objectiva sobre a preparação pode formar fluxos
dificultando a observação.8
Medir as formas parasitárias microscópicas
A mensuração das formas parasitárias é muito útil quando se
pretende identificar um parasita pouco comum ou quando di-
ferentes organismos são morfologicamente semelhantes mas
de diferentes tamanhos.3 Sendo que a maior parte das formas
parasitárias utilizadas para diagnóstico microscópico medem
entre 10 µm a 100 µm de comprimento.5
Calibrar a ocular micrométrica
Antes de medir é necessário calibrar a ocular micrométrica
com as diferentes objectivas do microscópio.7
A ocular micrométrica é uma ocular particular que apresenta
uma escala gravada na lente. As dimensões da escala e das
 Exames coprológicos ●

Escala

Lâmina micrométrica

Ocular micrométrica

FIGURA 3. Exemplo de lâmina e ocular micrométricas.5 FIGURA 4. Exemplo de calibração de uma ocular micrométrica com
uma objectiva de 4x e uma ocular de 10x. As 45 divisões da ocular
suas subdivisões dependem do fabricante e são diferentes de micrométrica correspondem a 0,76 mm (760 µm) da escala da lâmina
ocular para ocular. A lâmina micrométrica é uma lâmina de vi- micrométrica. Cada divisão da escala da ocular micrométrica corres-
ponde a 16,9 µm (760 µm/45).5
dro sobre a qual se encontra gravada uma escala de 1 mm
dividida em 100 partes iguais, sendo que cada divisão é igual
a 1 mm/100 = 10 µm (Figura 3).8
Para que possa ser utilizada a ocular micrométrica deve ser
calibrada individualmente com cada objectiva, sendo que a ca-
libração ocorre apenas para uma objectiva e um microscópio
particular1, visto que a ampliação real difere com o microscópio.5
A ocular micrométrica é inserida no tubo da ocular do mi-
croscópio óptico e a lâmina micrométrica é colocada na platina
do microscópio. A escala da lâmina micrométrica é focada e
ajustada com a escala da ocular micrométrica de forma que
ambas as escalas se sobreponham e se alinhem, com a linha
do zero. Contam-se as divisões na escala da ocular micromé-
trica e medem-se com a escala da lâmina micrométrica, como
exemplifica o esquema da Figura 4.8
A ocular micrométrica deve ser calibrada com objectivas em
ampliação crescente (4x, 10x ...) sendo que quanto maior for
a ampliação da objectiva mas largas serão as linhas da esca-
la da lâmina micrométrica (Figura 5) e mais rigorosa e precisa
será a medição.3

CALCULAR O ÍNDICE DE AMPLIAÇÃO

Para cada microscópio e para cada objectiva deve ser regista-
do o índice de ampliação que corresponde à medida, em µm,
de cada uma das 100 divisões da escala da ocular micrométri- FIGURA 5. Exemplo de calibração da ocular micrométrica de 10x com
uma objectiva de 100x. As 73 divisões da ocular micrométrica corres-
ca. Esta medida unitária deve ser calculada para as diferentes pondem a 0,07 mm (70 µm) da escala da lâmina micrométrica. Cada
ampliações ou objectivas utilizadas.7 As Figuras 4 e 5 ilustram divisão da escala da ocular micrométrica corresponde a 0,96 µm (70
dois exemplos de cálculo de diferentes índices de ampliação µm/73).5
para diferentes ampliações ou objectivas. Para uma mesma
ocular micrométrica, de ampliação 10x, o índice de ampliação

janeiro ● feveiro 2016 Veterinary Medicine 21

 ● Exames coprológicos

é de 16,9 µm para uma objectiva de 4x e de 0,96 µm para uma

objectiva de 100x.5

MEDIÇÃO DE UMA FORMA PARASITÁRIA

Em qualquer preparação microscópica as formas parasitárias
podem ser medidas se o microscópio (ocular) estiver calibra-
do. Para medir um objecto a ocular normal deve ser substituída
por uma ocular micrométrica de forma a sobrepor e alinhar a
escala da ocular micrométrica à forma parasitária a medir. O
número de divisões da escala da ocular micrométrica que se
sobrepõem ao parasita, são contadas e as divisões incom-
pletas são estimadas.5,7 Multiplicar o número total de divisões
sobrepostas da escala da ocular micrométrica com o parasita,
pelo índice de ampliação da objectiva e microscópio utilizados,
o que permite medir com rigor a forma parasitária. Como por
exemplo, uma forma parasitária ocupa 3 divisões completas da
escala da ocular micrométrica e 8/10 de uma divisão, quando
observada com uma objectiva de 10x cujo índice de amplia-
ção é 15 µm. O comprimento da forma parasitária é calculado
multiplicando 3,8 pelo índice de ampliação utilizado, 3,8 x 15
µm = 57 µm.3

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