ENFERMAGEM

AMANDA FERNANDES DE ASSIS

ISADORA

JONATAS SANTOS MIRANDA

RELATÓRIO DAS AULAS PRÁTICAS DE MICROBIOLOGIA

Guanmbi – BA

2019
 SUMÁRIO

Prática 01 – Preparação dos meios de cultura.

1. Introdução.................................................................................................................03
2. Objetivos...................................................................................................................03
3. Matérias e métodos...................................................................................................03
4. Resultados.................................................................................................................04
5. Conclusão..................................................................................................................04

Prática 02 – Técnicas de semeadura.

6. Introdução.................................................................................................................05
7. Objetivos...................................................................................................................05
8. Matérias e métodos...................................................................................................05
9. Resultados.................................................................................................................05
10. Conclusão..................................................................................................................06
Pratica 03 – Coloração de gram.
11. Introdução.................................................................................................................0
12. Objetivos...................................................................................................................0
13. Matérias e métodos...................................................................................................0
14. Resultados.................................................................................................................0
15. Conclusão..................................................................................................................0
Prática 04 – Morfologia das bactérias.
16. Introdução.................................................................................................................0
17. Objetivos...................................................................................................................0
18. Matérias e métodos...................................................................................................0
19. Resultados.................................................................................................................0
20. Conclusão..................................................................................................................0
Prática 05 – Catalase e coagulasse
21. Introdução.................................................................................................................0
22. Objetivos...................................................................................................................0
23. Matérias e métodos...................................................................................................0
24. Resultados.................................................................................................................0
25. Conclusão..................................................................................................................00
Pratica 06 – Antibiograma.
26. Introdução.................................................................................................................00
27. Objetivos...................................................................................................................00
28. Matérias e métodos...................................................................................................00
29. Resultados.................................................................................................................00
30. Conclusão..................................................................................................................00
 Prática 01 - Preparação dos meios de cultura.

21 Introdução

Para análise e identificação de micro-organismos, é necessário isolá-los e cultivá-los

em condições adequadas, para tal finalidade, usam-se soluções e substâncias nutritivas
chamadas meios de cultura, que devem atender às exigências nutricionais das espécies a serem
cultivadas para que elas possam se multiplicar e aumentar a sua propagação para o seu
crescimento e sequente observação.

22 Objetivos

Preparar meio de cultura a ser utilizado pra cultivo de microrganismos.

23 Materiais e métodos
 Erlenmeyer
 Água destilada
 Agar sangue
 Balança
 Papel laminado
 Pipeta volumétrica
 Luvas térmicas
 Bico de Bunsen
 Estufa

Pesar a quantidade do ágar sangue indicado no rótulo do frasco; Medir a quantidade de

água destilada indicada no rótulo, na pipeta volumétrica; No erlenmeyer, dissolver o pó nos
100 ml de água destilada; usar papel laminado para tampar o erlenmeyer, em seguida aquecer
o meio, no bico de Bunsen sobre a tela de amianto, até que ocorra a total dissolução; O
aquecimento deverá ser associado com agitação constante, então é recomendado o uso de
luvas térmicas; Após isso distribuir o liquido ainda quente numa placa, antes de solidificar e
levar a autoclave para esterilizar o meio e após isso levado a estufa onde ira permanecer por
24h.

03
 24 Resultados

Após realizar todo o processo de preparação e a placa ter ido para a estufa, é notório
que o meio de cultura ficou mais enrijecido como uma gelatina. Pronto para receber a técnica
de semeação.

25 Conclusão

Diante de tudo que vimos e a experiência de realizar o método de preparação do ágar

sangue, ficou sabido que os meios de cultura após pronto permitem o crescimento de micro-
organismos, possibilitando a sua identificação e análise.

04
 Prática 02 – Técnica de semeadura
26 Introdução
A técnica de semeadura é método pelo qual se transfere inoculos bacterianos de um
meio de cultura para outro meio de cultura, para assegurar que apenas o microrganismo
tensionado seja semeado. Para a realização da prática de semeadura deve se escolher a técnica
para o cultivo de microrganismos que varia de acordo com o tipo de meio de cultura e a
finalidade do cultivo, porém deve-se tomar bastante cuidado para não haver contaminações nas
inoculações.

27 Objetivo

Cultivo de bactérias com a intenção de conseguir obter uma cultura pura, apenas com
bactérias que originam de uma única célula.

28 Materiais e métodos
 Cultura bacteriana
 Meio de cultura com ágar
 Alça platinada
 Bico de Bunsen
 Estufa

Esterilizamos a alça platinada por flambagem no bico de Bunsen antes de mergulhar

na cultura bacteriana, ter também o cuidado de esperar esfriar para não matar as bactérias; Os
recipientes devem ser manuseados próximos a chama do bico de Bunsen; Ao imergir a alça na
cultura bacteriana, foi utilizando a técnica por estrias e assim semeado em toda superfície do
meio de cultura MacConkey e CLED; Deve se ter o cuidado para não perfurar ou rasgar o ágar
e não haver acumulo de bactérias e nem alterar as condições do crescimento bacteriano; Após
este processo o meio de cultura deve ir para a estufa e permanecer de 24 a 48 horas.

29 Resultados

Após retirarmos a placa da estufa, foi notório o crescimento de bactérias tanto ágar
macConkey quanto no CLED.

05
 30 Conclusão

Diante de todo o procedimento realizado foi visto que desde o inicio da técnica de
semeadura deve ser feito com bastante cautela, pois qualquer falta de cuidado pode interferir
nos resultados, e foi evidente como é importante o isolamento bem feito no reconhecimento de
bactérias.

06
 Prática 05 – Catalase e coagulasse
21. Introdução

O teste da catalase é realizado com peróxido de hidrogênio (H2O2) sobre uma lâmina e consiste
na detecção da enzima catalase em bactérias. Esta enzima atua sobre a água oxigenada(peróxido
de hidrogênio 3 a 5%) desdobrando-a em oxigênio e água e conseqüentemente protege as
bactérias dos ataques com superoxidantes produzidos como defesa pelos leucócitos. A catalase
é produzida por muitos microrganismos e é usualmente empregada para diferenciar
Staphylococcus, que são catalase positivos e Streptococcus que são catalase negativos. A prova
é considerada positiva quando háborbulhamento ou efervescência devido à liberação do
oxigênio.
O teste da coagulase é utilizado para distinguir espécies patogênicas de Staphylococcus de
espécies não patogênicas, sendo um bom indicador da patogenicidade do S. aureus. As
coagulases são enzimas com capacidade para coagular o plasma sanguíneo através de um
mecanismo similar ao da coagulação normal e conseqüentemente, com a formação de coágulos
em volta das bactérias o seu reconhecimento e fagocitose pelas células do sistema imunitário
são dificultados e com isso elas ficam protegidas. A prova da coagulase em tubo consiste
emjuntar num tubo de ensaio contendo plasma sanguíneo e uma suspensão de microrganismos.
A formação de coágulos às 2 h, às 6 h ou às 24 h de incubação é interpretada como uma prova
positiva. A ausência decoagulação após 24 horas de incubação é uma prova negativa.

22. Objetivos

O objetivo da aula pratica, foi a possível aprendizagem das técnicas do teste de catalase e o
teste da coagulase, a pa
rtir das amostras contidas e diante disso distinguir a possível espécie de Staphylococcus.

23. Materiais e métodos

Foram Utilizados nos testes de Coagulase e Catalase os seguintes materiais:

 Tubo de ensaio.
 Plasma de Coelho
 Água destilada
 Peróxido de hidrogênio
  Lâmina de microscópio
 Caldo de cultura (Staphylococcus)

24. Resultados
COAGULASE
Fomos orientados a executar a prova rápida, na qual consiste em adicionar duas gotas da cultura
em extremos da lamina. Logo em seguida adicionados uma gota de água destilada e na outra,
uma gota de plasma. A solução foi homogeneizada por cerca de 3 minutos.

CATALASE

Para executar a prova da Catalase, colocamos uma gota de peróxido de hidrogênio 3% sobre
uma lamina agregamos a colônia na gota de peróxido de hidrogênio

25. Conclusão

Concluímos que os dois testes são importantíssimos para verificar se os microrganismos

estudados são patogênicas ou não, no caso da coagulase,produzindo a enzima capaz de
coagular o plasma.
Já no caso da Catalase, ela é de suma importância para a distinção entre Estafilococos e
estreptococos.

BIBLIOGRAFIA

ANVISA. Gram Positivos. Disponível em:

<www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm_cursos/boas_praticas/modulo4/id_stre2.htm.
Acesso em: 29/03/2019.
WIKIPÉDIA. Catalase. Disponível em: < https://pt.wikipedia.org/wiki/Catalase>. Acesso em :
29/03/2019
MICROBIOLOGIA BRASIL. Prova da Coagulase. Disponível em:
<http://microbiologiabrasil.blogspot.com.br/2009/01/teste-da-coagulase.html > Acesso em :
29/03/2018=9

Pratica 06 – Antibiograma.
26. Introdução
 Um antibiograma é um ensaio que mede a susceptibilidade ou resistência de uma bactéria aos
antibióticos através do espectro de sensibilidade identificados na placa de cultura. Ágar Müeller
Hinton é um meio de cultura em placas recomendado para a realização de antibiograma (teste
de sensibilidade), é rico proteínas e carboidratos que fornece o substrato ideal para o
desenvolvimento e crescimento de cepas bacterianas de interesse clínico. É recomendado pelo
U.S. Food and Drug Administration (FDA) e pela Organização Mundial da Saúde (OMS) para
o teste de sensibilidade/resistência a antibióticos de bactérias Gram positivas e Gram negativas,
aeróbicas ou anaeróbicas facultativas, comumente encontradas em alimentos e espécimes
clínicos. O teste é feito utilizando-se discos de difusão antibióticos depositados sobre a
superfície do meio onde se inoculou, por espalhamento, uma amostra de uma cultura bacteriana
previamente crescida em meio líquido.
27. Objetivos

Verificar a sensibilidade e a eficiênciadas bactérias aos antibióticos: Tetraciclina de 30

micrograma e Eritromicina de 15 micrograma frente ao crescimento da Escherichia Colli em
meio de cultura adequado.

28. Materiais e métodos

Materiais

 Placa de Petri;

 Ágar Müeller Hinton;

 Pipeta;

 Discos de difusão de antibióticos;

 Cultura bacteriana em Caldo Nutriente;

 Bico de Bunsen.

Antibióticos
1. Tetraciclina de 30 microgramas
2. Etromicina de 15 microgramas

Métodos
A cultura de escherichia colli previamente preparada em caldo nutriente. Devemos estar atentos
devemos estar atentos às técnicas para não haver contaminação da amostra ou do meio de
cultura, à ser preparado, por bactérias do meio ambiente. Abrimos o tubo do Swab, contendo o
caldo nutriente com as bactérias cultivadas, por trás do bico de Bunsen. Flambamos a abertura
do tubo antes e depois da coleta do material. Para espalhar a amostra pela placa com ágar
utilizamos a alça de Drigalski. Esta deve ser mergulhada no álcool e flambada antes do uso. E
logo após deve ser flambada, mergulhada no álcool e flambada novamente. Espalhadas as
bactérias pelo ágar, coletamos dos vidros contendo antibióticos com a pinça, que deve ser
flambada antes do manuseio, os discos de difusão de antibióticos, nada mais são que pequenos
discos de papel poroso embebidos em antibiótico. Devemos estar atentos para que os discos
fiquem bem aderidos ao ágar, para haver uma boa difusão e não descolarem durante o manuseio.
Terminados estes procedimentos, encaminhamos a placa de Petri para a estufa durante 42 horas.
No dia determinado conferimos as placas contendo as bactérias cultivadas.

29. Resultados

Foram obtidos bons resultados, como esperado os antibióticos tiveram ação contra as bactérias.
Formou-se um halo ao redor dos discos de cada antibiótico. Porém observamos uma diferença
na nitidez desses halos, provavelmente pela validade dos frascos de discos estarem fora da
validade, então a meia vida dos fármacos estão menores, pode ser que durante o tempo em
estufa o antibiótico tenha inibido, mas por estar fora da validade as bactérias cresceram
novamente pois em estavma em mio propicio para isso.A Tetraciclina de 30microgramas teve
uma maior nitidez no halo em contrapartida a eritromicina teve uma menor nitidez. Mas os
resultados foram satisfatórios.

30. Conclusão
O antibiograma facilita na investigação de antibióticos efetivos contra a proliferação de
bactérias no organismo. As bactérias demonstraram alto grau de sensibilidade aos dois
antibióticos utilizados, mas levando em conta o halo e a validade dos discos. Mas a tetraciclina
como antibiótico de maios espectro de inibição e a eritromicina de menos espectro. Porém, há
outros fatores a se levar em conta a toxicidade do medicamento .
 Referências Bibliográficas
1. ALTERTHUM, Flavio, GOMPERTZ, Olga Fischmam; TRABULSI, Luis Rachid. Et al.,3°

2. Edição, Ed Atheneu, 1999TORTORA, G. J; FUNKE, B. R.; CASE C. L. Microbiologia. Porto Alegre. 8º

Ed. 2005