CENTRO UNIVERSITÁRIO FRANCISCANO – UNIFRA

CURSO DE FARMÁCIA
CONTROLE BIOLÓGICO DA QUALIDADE DE MEDICAMENTOS

A necessidade de confirmação da IDENTIDADE,

PUREZA, POTÊNCIA, INOCUIDADE e EFICÁCIA
terapêutica de medicamentos envolve vários aspectos
analíticos, principalmente quando o medicamento não
consiste de substância que possa ser completamente
caracterizada pelas propriedades químicas e físico-
físico-
químicas..
químicas

Prof. Marcos R. dos Santos

Diferem das demais drogas de baixo peso molecular (convencionais) São procedimentos destinados a avaliar a potência de
por apresentarem:
apresentarem: princípios ativos contidos nas matérias
matérias--primas e
- Estrutura geralmente complexa preparações farmacopéicas.
- Derivados de organismos vivos (hormônios,peptídeos, proteínas)
- Requerem procedimentos especiais de produção e controle de Através do uso de reagentes biológicos tais como:
como:
qualidade devido:
devido:
- Micro
Micro--organismos
organismos;;
- à natureza biológica do material de partida
- à bases biológicas do processo de produção - animais
animais;;
- necessidade de Métodos Biológicos para caracterização dos - fluidos e órgãos isolados de animais.
animais.
lotes.
lotes.

1
 Utilizados para detectar e medir a concentração de
substâncias, observando seus efeitos farmacológicos
sobre animais vivos, tecidos ou células
células..
Uma importante característica dos reativos biológicos é a
variabilidade enquanto os reativos físico-
físico-químicos podem
ser definidos e padronizados para fornecerem resultados
“idênticos” em todos os laboratórios.

Devido a esta variabilidade torna

torna--se imprescindível:
imprescindível:
1) O emprego de padrões de referência adequados para se obter
Em geral são mais complexos e menos potências relativas.
relativas.
precisos do que os ensaios físico-
físico-químicos
químicos.. 2) O emprego de métodos estatísticos para os delineamentos
experimentais e análise dos resultados.
resultados.

Possibilita assegurar a compatibilidade e equivalência de

potência de lotes de produtos farmacêuticos produzidos por Compreende::
Compreende
diferentes indústrias Nacionais e Internacionais. a) Seleção do conjunto de doses do padrão (P) e das
Importante também para padronizar a avaliação de:
amostras do desconhecido (A) que serão ensaiadas;
ensaiadas;

- Pureza b) Especificação das unidades experimentais (animais ,

- Impurezas relacionadas ao Produto e Processo
Processo..
micro--organismos, anti
micro anti--soros, sangue etc
etc..
..));
c) Regras pelas quais se distribuirão as doses para as
Padrão Internacional é uma preparação para a qual foi definida uma
unidade Internacional (UI) de atividade, geralmente com base em
unidades experimentais;
experimentais;
estudo colaborativo internacional. d) Especificações das medidas ou outros registros que
devam ser procedidos em cada unidade experimental.
experimental.

2
 É o procedimento matemático aplicado aos resultados
- Aleatório experimentais para estimar a potência da amostra e
Unidades experimentais homogêneas. avaliar a validade e precisão do ensaio.
- Blocos ao acaso Os métodos devem se relacionar com o delineamento
Segrega fonte de variação. experimental utilizado.
- Quadrado latino
Duas fontes de variação. Expressar os resultados de avaliação biológica como
- Cruzado estimativa da potência relativa (impossível de ser
O mesmo bloco recebe os dois tratamentos. calculada com certeza – variabilidade dos reativos
biológicos)..
biológicos)

Deve ser acompanhada por limites de confiança

As monografias estabelecem especificações para a
inferior e superior (Li, LS)
LS).. amplitude aceitável desses intervalos em relação à
Estes limites definem o intervalo de modo que seja pré-
pré- potência estimada.
estimada.
determinada a probabilidade (p) de a verdadeira potência
relativa (p) estar fora do intervalo.
intervalo.
Levam em conta a dificuldade dos métodos e a
Probabilidade de erros mais utilizadas:
utilizadas: necessidade prática de se estimar a verdadeira potência
p = 5% e p = 1%, também expressas como p = 0,05 e p = 0,01.
01.
com determinada precisão.
precisão.

3
 Página:: 204
Página

5.5.2 ENSAIOS BIOLÓGICOS – pág

pág:: 226
5.5.2.1 PIROGÊNIOS
5.5.2.2 ENDOTOXINAS BACTERIANAS
5.5.2.3 TOXICIDADE
5.5.2.4 SUBSTÂNCIAS VASOPRESSORAS
5.5.2.5 HISTAMINA
5.5.2.6 SUBSTÂNCIAS VASODEPRESSORAS

1- Qualitativos
2. QUANTITATIVOS
São testes realizados com a finalidade de identificar o produto e
DIRETO
avaliar as características de inocuidade ou toxicidade devido à
presença de contaminantes de diferentes origens
origens.. Mede--se diretamente as doses de cada preparação
Mede
Ex:
Ex: (padrão e amostra) necessárias para produzir respostas
pré-
pré-determinadas em cada unidade experimental de dois
- Esterilidade;
Esterilidade;
grupos equivalentes de animais ou outros reativos
- Pirogênios;
Pirogênios;
biológicos..
biológicos
- Toxicidade;
Toxicidade;
Ex.:
Ex.: Ensaio biológico de Digital
Digital..
- Substâncias vasopressoras;
vasopressoras;

- Pesquisa e identificação de patógenos.

patógenos.

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MÉTODO BIOLÓGICO QUANTITATIVO Os procedimentos de padronização biológica são geralmente
menos precisos, consomem mais tempo e são mais dispendiosos
INDIRETO de realizar que os métodos químicos.
químicos. São realizados quando:
quando:

Comparam-se níveis de resposta produzidas por doses do

Comparam- 1. A identidade química da substância ativa não foi totalmente
padrão, em escala quantitativa, com aquelas produzidas elucidada;;
elucidada

por uma ou mais doses da amostra

amostra.. 2. Não foi desenvolvido ensaio químico adequado para medir a
substância química, ainda que sua estrutura química seja
Ex.:
Ex.: Ensaio de potência da Oxitocina
Oxitocina.. estabelecida.. Ex.:
estabelecida Ex.: Insulina.
Insulina.

3. Se o fármaco compõe-
compõe-se de uma mistura complexa de substâncias
de estrutura variada.
variada. Ex.:
Ex.: Digital
Digital..

4. Se o ensaio químico não é uma indicação válida de atividade

farmacológica, devido, por exemplo a falta de diferenciação entre
isômeros ativos e inativos;
inativos;

Um ensaio biológico mede a atividade biológica real de uma

determinada amostra, que pode representar a soma algébrica da
interação de numerosos fatores químicos e físico-
físico-químicos
químicos..

http:
http://www.
//www.anvisa
anvisa..gov
gov..br/cosmeticos/guia/html/apresentacao.
br/cosmeticos/guia/html/apresentacao.htm

5

Os 3 R's
A idéia de ensaios alternativos é muito mais abrangente do que a
substituição do uso de animais, incluindo também a questão da redução e
refinamento na utilização dos mesmos.
Este princípio está baseado no conceito dos 3R's (Three
R's), o qual foi definido por William Russell e Rex Burch, em
1959, no livro Principles of Human Experimental Technique.
Os 3 R's que representam o refinamento, redução e
substituição (Refine, Reduction e Replacement).
Toxicidade: Capacidade de certas substâncias
Toxicidade:
causarem danos a seres vivos.
Materiais a serem testados:
testados:
• Matérias-primas de fonte natural: devido a complexidade e
processos de purificação, como no caso de antibióticos e
hormônios.
• Produtos terminados: aqueles contendo matérias-primas
de fonte natural, ou nos demais casos como mecanismo
de verificação de pureza do processo de produção.
3 R’s
Refinamento
O Termo refinamento significa a modificação de algum procedimento operacional
com animais, objetivando minimizar a diminuição da dor e o estresse. A experiência
da dor e do estresse tem, como resultado, mudanças psicológicas que aumentam a
variabilidade experimental dos resultados.
Redução
A concepção de redução como alternativa estratégica, resulta em menor número
de animais sendo utilizados para obter a mesma informação, ou maximização da
informação obtida por animal. Existem várias possibilidades para redução do uso
de animais.
Substituição
Um sistema experimental que esteja vinculado à totalidade da condição de vida
animal, pode ser considerado como substituto alternativo. Pode-se citar a proposta
de obtenção de células, tecidos ou organismos para subseqüentes estudos in vitro
ao invés da matança de animais.
Materiais a serem testados:
testados:
• Material plástico de correlatos e de acondicionamento
de produtos parenterais: devido a presença de
monômeros e oligômeros ou de aditivos incorporados
em seu processamento (plastificantes, antioxidantes,
lubrificantes) entre outros.
Emprego de espécies de animais para avaliar o risco
toxicológico no ser humano.
humano.
Problemas: extrapolar resultados obtidos em animais a
Problemas:
humanos (diferentes dosagens, espécies de animais).
animais).
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- estudar a natureza dos efeitos tóxicos ao nível celular, tecidos e de
Testes com produtos da área da saúde:
saúde:
órgãos;;
órgãos
- Obter dados para estimar o potencial de dano ao usuário (DL50);
- avaliar a variação da resposta , por diferentes espécies, durante
exposição repetitiva ao agente
agente;; - Obter informações sobre o mecanismo pelo qual se manifesta a
toxicidade;;
toxicidade
- identificar doses nas quais possam ocorrer alterações fisiológicas,
bioquímicas e morfológicas;
morfológicas; - Estabelecer dose para testes subseqüentes de toxicidade a longo
prazo, caso se façam necessários;
necessários;
- conhecer possíveis efeitos cumulativos do agente e de seus produtos
de biotransformação
biotransformação;; - Garantir a segurança do consumidor, em ensaios lote
lote--a-lote ou
periódicos..
periódicos
- Predizer efeitos adversos à saúde decorrentes de exposição
intermitente, repetida ou crônica ao agente em questão

Aplicações tópicas , ocular (mais comuns para produtos cosméticos), Irritação em pele de coelhos - Avaliada através de escalas e
injeção intradérmica ou subcutânea, aplicações intra-
intra-vaginal e intra-
intra-
nasal, assim como direta a superfícies internas da cavidade oral são por fórmulas de cálculo de acordo com as respostas da
vezes requeridas para os medicamentos, correlatos e pele (eritema, edema).
edema).

cosméticos.
Teste de sensibilização da pele
pele:: Primeira exposição a
Tipos de testes:
testes: uma substância química provoca pequena reação,
tornando-se severa e persistente após exposições
Teste de irritação primária de pele:
pele: PRODUTOS DE subsequentes (semanas ou anos).
HIGIENE, COSMÉTICOS, E PERFUMES, além de certos
correlatos (FDA).
(FDA).

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 Teste de irritação ocular:
ocular: Inicialmente avaliações Outros tipos de testes:
fisiológicas observadas na córnea, conjuntiva e íris de - Fototoxicidade;
coelhos albinos. A partir de 1962, inclusão de parâmetros
- Teste de implante intramuscular;
como eritema, espessura das pálpebras e membranas,
- Avaliação de toxidade aguda com efeito sistêmico;
abrangendo edema, lacrimejamento, opacidade, danos
capilares e neovascularização (pannus) da córnea. - Teste de administração oral;
- Teste de aplicação dérmica ou percutânea;
Avaliação através de valores de graduação para lesões oculares
oculares..
- Teste com inalação.
Aplicações: sabonetes levemente ácidos ou básicos, xampus,
Aplicações:
soluções de limpeza, cremes e loções, delineadores, máscaras,
desinfetantes, líquidos de enxágüe bucal entre outros
outros..

Ensaios em que animais são tratados com material teste Estudos de longo prazo ou tempo de vida (meses, anos),
de 5 – 7 dias por semana num período mínimo de 20 dias são planejados para durar durante a maior parte da vida
e máximo de 1 ano. dos animais.

Adição de outros testes (ex

(ex:: bioquímicos, hematológicos) Estudos de oncogenicidade, teratogenicidade
para avaliação dos efeitos sobre as cobaias, além das (anormalidades ou deformidades no desenvolvimento
observações listadas para estudos agudos, servindo para fetal), toxicidade sobre a reprodução (interferem com
estudo crônico subseqüente.
subseqüente. acasalamento, gestação, nascimento e desenvolvimento
do feto)
feto)..

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 Alternativas cientificamente comprovadas, evitando o uso
de animais.
animais.

Uso de órgãos isolados, culturas de células e de tecidos,

ensaios químicos e físicos, tecidos simulados e fluídos Para medicamentos (hormônios, soros e vacinas de uso
corpóreos, modelos mecânicos, matemáticos e humano), nos quais haja exigências sob toxicidade na
simulações em computador.
computador. monografia da Farmacopéia Brasileira 5º edição
edição..

TESTE PARA PRODUTOS BIOLÓGICOS, SOROS E VACINAS

Procedimento: Utilizar 5 camundongos com peso entre 17 g e 22 g e,
Procedimento:
pelo menos, dois cobaios sadios com peso entre 250 g e 350 g.
Vias de administração
administração:: Ver método ou monografia específica
Intravenosa, intraperitoneal
intraperitoneal,, Subcutânea ou Oral.
Oral.
Interpretação::
Interpretação
Por um período de, no mínimo, 7 dias, observar os animais quanto a
sinais de enfermidade, perda de peso, anormalidades ou morte
morte..
Se,
Se, durante o período de observação
observação,, todos os animais sobrevivem, não
manifestam respostas que não são específicas ou esperadas para o
produto e não sofrem redução de peso, a preparação cumpre o teste
teste..

Caso contrário, realizar novo teste e reteste (dobro de animais)

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Registro de Produtos Biológicos e Hemoterápicos

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