PREPARAÇÃO E AVALIAÇÃO DO ÓLEO DE OLIVA NANOEMULSION USANDO

MONOESTER SUCROSE

Abstrata
Na visão farmacêutica, a nanoemulsão é uma das principais formas de dosagem na
entrega de ingredientes ativos para a área-alvo que tem atraído considerável atenção
nos últimos anos por sua aplicação em cuidados pessoais e produtos cosméticos
também devido à sua capacidade para melhorar a penetração e permeação de
ingredientes ativos através da pele. O objetivo deste estudo foi formular nanoemulsion
e avaliar o efeito de surfactantes e armazenamento sobre ele. Nanoemulsões foram
formuladas usando monoesters de sacarose como surfactantes, glicerol e azeite de oliva
por mistura simples, usando calor para dissolver monoester de sacarose no glicerol, em
seguida, adicionando óleo de oliva quente para a mistura surfactante. Três tipos
diferentes de monoester de sacarose (Laureate, Oleate e Palmitate) foram utilizados na
produção de nanoemulsão e investigaram sua influência na nanoemulsão. Os resultados
revelaram que, Sucrose Laureate produziu nanoemulsão com bom tamanho de gotícula,
índice de polidispersão e potencial zeta em comparação com Oleate e Palmitate.
Produziu nanoemulsão com tamanho de gotículas de óleo abaixo de 200 nm, baixa
polidispersão abaixo de 0,2 e potencial zeta inferior a -40 mV. O estudo de estabilidade
foi realizado para as formulações ideais de nanoemulsão em diferentes temperaturas (4
°C, 25 °C e 40 °C) por seis meses. Em conclusão, as formulações de nanoemulsão ideais
foram muito estáveis em 4 °C em comparação com 25 °C e 40 °C, enquanto na
nanoemulsão de 25 °C mostrou estabilidade moderada, mas era instável a 40 °C,
portanto, a condição de armazenamento ideal para nanoemulsão é de 4 °C.
Palavras-chave:Nanoemulsão; Monoester de sacarose; Azeite de oliva; Equilíbrio
lipofílico hidrofílico; Estabilidade
Introdução
As nanoemulsões são emulsões submicronas que estão investigação extensiva como
portadores de drogas para melhorar a entrega de agentes terapêuticos [1,2]. Os
tamanhos de pequenas gotículas (na faixa de 20-200 nm), alta capacidade de
solubilização, alta área interfacial, baixa viscosidade, aparência transparente ou
translúcida e alta estabilidade cinética, fazem nanoemulsões usadas para várias
aplicações [3-6]. Também as nanoemulsões mostram uma grande promessa para o
futuro dos cosméticos, diagnósticos de terapias medicamentosas e biotecnologias [7].
As nanoemulsões foram produzidas por métodos de emulsificação de alta energia ou
métodos de emulsificação de baixa energia. Os métodos de emulsificação de alta
energia envolvem alta mistura de cisalhamento, homogeneização de alta pressão ou
ultrassonificação. Enquanto os métodos de emulsificação de baixa energia utilizaram a
vantagem das propriedades filoquímicasdo sistema que explora as transições de fase para
produzir nanoemulsão.
No campo farmacêutico, as nanoemulsões têm sido utilizadas como sistema de entrega
de medicamentos através de várias rotas sistêmicas, principalmente: nutrição oral,
tópica e parenteral [9,10]. A principal vantagem de usar nanoemulsões para a pele é a
sua capacidade de melhorar a penetração e permeação de ingredientes ativos através
da pele sem a necessidade de incorporar a penetração enhancer na formulação. A
azeitona é o fruto da Oliveira (Olea europaea) e pertence à família Oleaceae. Consiste
em ácidos graxos saturados, ácidos graxos poliinsaturados, ácidos graxos
monoinsaturados, oleicos, ácido sáptico e ácido palmítico [14]. Também consiste em
compostos fenólicos, como hidroxitirosol, oleuropeina e tirosol e exerce forte atividade
antioxidante e catadores radicais na prevenção do câncer. Devido ao seu alto teor de
ácidos graxos monoinsaturados e poliinsaturados, o azeite é usado em cosméticos e
produtos farmacêuticos. Também tem sido usado no tratamento de doenças crônicas
como diabetes, aterosclerose, câncer de cólon, artrite, asma e hipertensão. Os
monoesters da sacarose são emulsionantes do baixo peso molecular. Eles consistem em
ambas as partes hidrofílicas de grupos de cabeça hidroxil de substituitório de açúcar
(sacarose) e partes lipofílicas das caudas de aci gordurosod. Eles têm propriedade
emulsificação única que tolera quaisquer variações de temperatura, também eles
identificados como nonionic, biodegradable e surfactantes não tóxicos. O objetivo desta
pesquisa foi determinar o impacto de diferentes surfactantes na preparação da
nanoemulsão de azeite e sua estabilidade em relação às diferentes
condiçõesdearmazenamento.
Materiais e métodos
Materiais
Sucrose Laureate 1695, Oleate 1570 e Palmitate 1570 foram fornecidos pela Juhalim
Biotech SDN BHD (Kuala Lumpur, Malásia). Virgin Azeite, glicerol foram fornecidos pela
Sigma-Aldrich (EUA).
Métodos
Formulação de nanoemulsão
Série de formulações contendo várias combinações de azeite como uma fase de óleo
com surfactante e glicerol como uma fase líquida foram usadas para produzir
nanoemulsiona. Um diagrama pseudo-ternary da fase foi construído baseado em três
tipos diferentes de combinação dos surfactants com o glycerol e o óleo separada em
uma temperatura constante. O diagrama de fase ternary (A) consiste em misturas de
óleo, sacarose Laureate e glicerol enquanto diagrama de fase ternary (B) consiste em
óleo, sacarose Oleate e glicerol e diagrama de fase ternary (C) consiste em combinações
de óleo, sacarose palmitato e glicerol. As misturas foram então usadas para distinguir o
efeito da monoester de sacarose na emulsificação e na produção de nanoemulsão para
azeite de oliva. As formulações foram pesadas com base no diagrama de fase ternary
usando o equilíbrio analítico (Meller Tolledo). Ambas as fases, óleo e glicerol, foram
aquecidos separadamente em cerca de 75 °C ± 2 ° C usando placa quente, em seguida,
o surfactante foi misturado com o glicerol quente usando haste de vidro e mexido
continuamente até que o surfactante foi dissolvido no glicerol depois que o óleo quente
foi adicionar ed para a mistura lentamente e agitado por cerca de 10 minutos para
garantir o seu desaparecimento total e a formação de uma emulsão. Uma amostra da
emulsão foi dissolvida em água destilada para formar uma emulsão diluída, as
formulações foram observadas após a diluição com água e o tamanho das gotículas de
emulsão foi medido para encontrar a região eficiente de emulsificação. Todos os
experimentos foram realizados à temperatura ambiente de cerca de 25 °C. As
formulações que formaram fases nonemulsified não foram mostradas nos diagramas de
fase porque estão fora do escopo do estudo. De acordo com os diagramas de fase
ternary, a região da nanoemulsão (NE) foi marcada pelas gotículas nano transparentes
e finas, enquanto a região de macroetarion (ME) foi marcada devido a soluções mais
clareadas e isotrópicas que poderiam conter soluções de micela e grosseiras A emulsão
(CE) foi a região de dispersões visivelmente turvas, mesmo por observação visual.
Tamanho da gota e análise potencial zeta
Droplets tamanho e tamanho de distribuição do sistema de emulsão foram
determinados usando Malvern Mastersizer 2000 analisador de partículas de difração a
laser (instrumentos Malvern, Reino Unido). Espectroscopia de correlação de fótons ou
dispersão dinâmica de luz, especializada na análise do tamanho das partículas de
submicron, é uma técnica valiosa que analisa as mudanças nas flutuações de intensidade
da luz iniciadas pelo movimento browniano. A temperatura precisa ser estável de outra
forma correntes de convecção na amostra irá causar movimentos não-aleatórios que irá
arruinar a interpretação de tamanho correto.
Para observar a distribuição de tamanho e tamanho das gotículas, 250 μl de uma
emulsão foram adicionados a 300 ml de água destilada em um copo de 500 ml. Uma
haste de vidro foi usada para induzir a agitação delicada na mistura. A distribuição de
tamanho e tamanho das gotículas da emulsão resultante foi examinada usando o
analisador de partículas de difração a laser Malvern Mastersizer 2000. Esta etapa foi
conduzida para o estudo da seleção do diagrama ternary da fase. As medições médias
de distribuição de tamanho e tamanho foram realizadas em triplicados. O potencial Zeta
das formulações selecionadas de nanoemulsão também foram atuados usando Malvern
Nano Zetasizer.

Estabilidade das formulações de nanoemulsão durante o armazenamento

O tamanho das gotículas, a distribuição de tamanho e o potencial zeta estão entre as
características mais importantes para a avaliação da estabilidade da emulsão. Portanto,
os efeitos da temperatura e do tempo de armazenamento foram estudados nas
formulações ideais de nanoemulsão. O tamanho das gotículas, a distribuição de
tamanho e o potencial zeta foram avaliados imediatamente após a produção da
nanoemulsão e também após 1, 2, 4 e 6 meses de armazenamento diferentes
temperaturas 4, 25 e 40 °C.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Efeito da combinação diferente dos surfactantes na formulação da nanoemulsão.
Várias formulações consistem em azeite, surfactantes e glicerol foram estudados por
sua potencial capacidade de preparar nanoemulsion mexendo método. Os diagramas
de fase ternary de tais formulações foram mostrados nas figuras (1-3). As misturas de
azeite, surfactante e glicerol foram divididas em três sistemas diferentes. Sistema A
(Petróleo, Sacarose Laureado e Glicerol), sistema B (óleo, sacarose palmitato e glicerol)
e sistema C (óleo, sacarose oleato e glicerol).
Os três sistemas diferentes mostraram o comportamento diferente em produzir a
nanoemulsion. Como comparação entre eles, o sistema (A) mostrado na figura 1, que
compreendia a sacarose Laureate como surfactante não iônico, produziu maior região
de nanoemulsão em comparação com outros sistemas devido às suas boas propriedades
de emulsificação. Por outro lado, a figura 2 mostrou o diagrama de fase ternary do
sistema (B) contendo sacarose Palmitato com propriedades de nanoemulsão ruim
produzindo pequena região de nanoemulsão em comparação com outros sistemas e
propriedades menos emulsificação em comparação com sacarose Laureate. No entanto,
os diagramas de fase ternary do sistema (C) contendo sacarose Oleate mostrado nos
números 3 tem melhor região de nanoemulsão em comparação com o sistema (B) com
propriedades moderadas de emulsificação. O laureado com sacarose apresentou as
melhores propriedades de emulsificação em comparação com a sacarose Palmitate e o
oleate, que podem ser devido às suas boas propriedades de desciabilidade. Os mesmos
resultados foram indicados por Szuts et al. , que mencionou que a sacarose Laureate foi
bom na preparação de dispersão sólida devido às suas boas propriedades de
desciabilidade na água em comparação com a sacarose Palmitate e sacarose Stearate.
Em geral, todos os surfactantes produziram formulações de nanoemulsão com simples
agitação. A capacidade de produzir nanoemulsão foi devido à temperatura usada para
dissolver o sacarose sacarose no glicerol. O tratamento térmico das formulações pode
levar a mudanças nas características moleculares do surfactante. Portanto, sacarose
torna-se progressivamente desidratado durante o aquecimento, porque é surfactante
não-iônico com um grupo de cabeça hidrofílica. Por essa razão, as moléculas
surfactantes terão alterações na tensão interfacial, embalagem e solubilidade óleo/água
durante o aquecimento. Os mesmos resultados foram mostrados em estudos anteriores
sobre surfactantes não iônicos que produziram microemulsões e formulações de
nanoemulsões pela ajuda dessas mudanças facilitamd em temperaturas mais altas.
Além disso, uma barreira energética cinética no sistema de óleo-glicerol-surfactante
impede que ele se mova de uma emulsão para nanoemulsão à temperatura ambiente.
Mas como a temperatura foi levantada esta barreira de energia cinética foi reduzida, o
que ajudou a mudar de um estado para outro. Os mesmos resultados foram
introduzidospor Rao e McClements,que usaramóleo-watersurfactant para produzir
micro-emulsão e nanoemulsão.
O efeito de vários valores de HLB na formulação e na capacidade de alcançar a
nanoemulsão também foram estudados. À medida que o grau de esterificação de
sacarose aumentou e/ou o comprimento da cadeia de ácidos graxos aumentou, o valor
de Sacarose é sacarose hlb será reduzido. Óleo na dispersão de água necessária valor
HLB entre 9 a 18, de modo que a seleção do valor hlb ideal de agente emulsionante
depends em sua hidrofilia . Sistema (A) contendo sacarose Laureate com alto valor HLB
(HLB 16) foi escolhido como um surfactante não-iônico para produzir grande região de
formulações de nanoemulsão com óleo menor em gotículas de água e boa estabilidade.
A capacidade da sacarose Laureate de formar nanoemulsão com pequeno tamanho de
gotículas e boa estabilidade deveu-se às suas boas eritas de aprisionamento e eficácias
de estabilização, o que é explicado pelas baixas quantidades de di-, tri-, e polilaureates
(20%) e maior quantidade de monoLaureate (80%) bem como o ácido láurico
comprimento de cadeia curto. Enquanto no sistema (B) e sistema (C) sacarose Oleate
(HLB 15) e sacarose Palmitate (HLB 15) foram utilizados, respectivamente, ambos os
surfactantes apresentaram região de nanoemulsão menor em comparação com o
sistema A, que é devido ao seu baixo valor HLB em comparação com sacarose Laureate
e menos quantidade de monoesters (70%). Leong e outros. , afirmou que a sacarose
Laureate foi melhor do que a sacarose Palmitate, Stearate e Oleate na preparação de
nanodispersões phytosterol com pequenas partículas de tamanho abaixo de 100 nm.
Portanto, pode-se concluir que a sacarose Laureate como surfactante não iônica com
alto valor hlb (HLB 16) é bom na formação de nanoemulsões com pequenas gotículas
com alta estabilidade.
Influência das proporções de petróleo e surfactantes na distribuição de tamanho e
tamanho das gotículas
A distribuição de tamanho e tamanho das gotículas (uniformidade) foi estudada para
todas as formulações na investigação preliminar por meio do Instrumento Mastersizer
Malvern. Os números (1-3) mostraram diferentes regiões de nanoemulsão quando
diferentes surfactantes foram usados. Suas distribuições de tamanho e tamanho das
gotículas eram variadas. Sistema (A) contendo sacarose Laureate como surfactante
levou à formação de gotículas de óleo com a menor distribuição de tamanho e tamanho
em comparação com outros sistemas (B) e (C). Para o azeite no sistema (A), o menor
tamanho de gotícula foi de 129 nm com 0,189 uniformidade. Mas o sistema (B) contendo
sacarose Palmitate mostrou significativa maior gotículas tamanho 319 nm e distribuição
de tamanho 0,394 em comparação com o sistema (A). Enquanto o sistema (C) consiste
em sacarose Oleate mostrou melhores resultados em comparação com o sistema (B),
mas ainda não tão bom quanto o sistema (A). Seu tamanho de gotícula foi de 241 nm
e 0,348 uniformidade.
As formulações de nanoemulsão ideais para azeite de oliva do sistema (A) com gotículas
de tamanho abaixo de 200 nm foram mostradas na tabela 1. Além disso, a sacarose
Laureate levou à produção de formulações de nanoemulsão com várias concentrações
de petróleo entre 36 e 50%. A partir do diagrama de fase ternary pode-se observar que
quando a concentração de óleo na formulação aumentou de 20% para 50%, o tamanho
das gotículas foi diminuído e forma formulações mais estáveis. Isso atribuiu ao fato de
que o sacarose será limitado às superfícies das gotículas de óleo quando a viscosidade
das formulações foi aumentada e, portanto, estará menos disponível para participar da
formação da emulsão. Os mesmos resultados foram relatados por Murakami et al. e Rao
e McClements, que afirmaram que a viscosidade tem uma influência na formação de
formulação de dispersão coloidal estável com pequeno tamanho de gotículas usando
sacarose sacarose como surfactante não iônico. Mas como a concentração de petróleo
sobe mais de 50% o tamanho das gotículas foram aumentados e separação aconteceu
devido a menos quantidade de surfactante para formar dispersão coloidal e estabilizar
o sistema.

Em geral, as formulações B, D e F que contêm 50% de concentração de óleo

apresentaram menor tamanho de gotículas com boa uniformidade em comparação com
as formulações A, C e E que contêm 36% de concentrações de óleo. Também em uma
comparação entre as formulações com 50% de óleo verificou-se que a formulação B
contêm 15% surfactante tem maior tamanho de gotícula e uniformidade em
comparação com as formulações D com 20% surfactante e F com 25% surfactante. A alta
uniformidade para a formulação B, que foi superior a 0,3 torna instável devido ao
amadurete De Ostwald quando comparado com outras formulações que têm
uniformidade abaixo de 0,3. Por outro lado, tanto a formulação D quanto a F mostraram
tamanho e uniformidade de gotículas quase semelhantes. No entanto, a formulação D
será melhor do que F, porque tem menos quantidade de surfactante. Portanto, pode-se
concluir que a formulação de nanoemulsão que contém 20% de sacarose Laureate 1695
e 50% de petróleo produzirá uma nanoemulsão estável com pequeno tamanho de
gotícula euniformidade.
Tamanho da gota, índice de polidispersão e análise potencial zeta
Diferentes formulações de nanoemulsão otimizadas pelo diagrama de fase ternary são
apresentadas na tabela 2, medida por Malvern Zetasizer para determinar seu tamanho
de gotículas, índice de polidispersão (PdI) e potencial zeta. No geral, todas as
formulações mostraram pequeno tamanho médio gotículas entre 111 a 163 nm,
também foi observado a partir da tabela que o tamanho das gotículas foram diminuir
com um aumento na concentração de óleo a razão, conforme mencionado na seção
anterior, também todas as formulações mostraram PdI baixo em uma faixa entre 0,157-
0,422. Além o potencial zeta estava entre -28.5 a -40.2 mV.
Em geral, todas as formulações têm alto valor negativo de carga potencial zeta acima de
-30 mV, o que indica que as formulações de nanoemulsion são estáveis [29]. Formulação
B mostrou ligeiramente baixa carga potencial zeta e PdI alta. O PdI elevado pode
conduzir à instabilidade da formulação em cima do armazenamento porque esta
formulação tem a baixa quantidade de surfactante que não é bastante para fazê-la
estabilizada. Em resumo, as formulações contendo 50% de óleo mostraram menor
tamanho de gotículas e potencial zeta em comparação com formulações contendo 36%
de petróleo. Também em uma comparação entre as formulações contendo 50% de óleo,
a formulação D com a quantidade ideal de surfactante mostrou o menor tamanho de
gotículas, pdi mais baixo e o melhor potencial zeta. Também se sabe que grande
quantidade de surfactantes pode causar irritação da pele, portanto, a formulação D foi
escolhida como uma formulação ideal em comparação com outras formulações de
nanoemulsiona.
Influência de diferentes temperaturas de armazenamento no tamanho das gotículas,
índice de polidispersão e potencial zeta
Uma das características mais importantes utilizadas para a avaliação da estabilidade de
um sistema de emulsão são o tamanho das gotículas, distribuição de tamanho e
potencial zeta. Portanto, os parâmetros de tamanho das gotículas e a carga elétrica de
superfície (potencial zeta) foram avaliados imediatamente após a produção de
nanoemulsão e ao longo de seis meses (1, 2, 3, 4, 5 e 6 meses) de armazenamento em
três temperaturas diferentes (4, 25 e 40 °C), a avaliação foi realizada para as formulações
que têm gotículas de tamanho inferior a 200 nm e quando a separação não era visível.
A medição do tamanho das gotículas inicialmente e durante o armazenamento dá uma
indicação sobre a estabilidade dosistema.
As formulações de nanoemulsão foram armazenadas em três temperaturas diferentes
para testar o sistema condição de ansiedade. Em geral, as formulações de nanoemulsão
para azeite de oliva, como mostrado em números (4-6), permaneceu em sua faixa de
nano tamanho abaixo de 200 nm quando armazenados em 4 °C. Também o índice de
polidispersão permanecem na mesma magnitude que os valores obtidos imediatamente
após a produção e as gotículas ainda mostrando carga negativa em sua superfície < -30.
Uma exceção foi na formulação B, que mostrou um incremento no tamanho acima de
200 nm e instabilidade, pois a leitura inicial para essa formulação apresentou alto índice
de polidispersão acima de 0,3, e baixo potencial de zeta negativo, abaixo de -30 mV,
portanto, instável durante o armazenamento. No entanto, quando as formulações de
nanoemulsão foram armazenadas a 25 °C (Figuras 7-9), houve um aumento ligeiramente
significativo no tamanho das gotículas acima de 200 nm. Também em 40 °C (Números
10-12), todas as formulações mostraram uma precipitação significativa com aumento
no tamanho das gotículas, índice de polidispersão e diminuição do seu potencial zeta
negativo.
É postulado que quando a temperatura foi aumentada, o movimento das gotículas de
óleo na emulsão também foi aumentado. Em seguida, as gotículas serão forçadas a fazer
contato físico e, devido ao seu baixo potencial zeta negativo, sua repulsão mútua é
superada, o que causa maior tendência àculação e à coalescência. Além disso, a
diferença significativa entre a estabilidade das formulações armazenada a 25 °C e as
armazenadas a 40 °C, pode ser devido à mudança na curvatura ideal da monocamada
surfactante e ao tipo de estrutura de emulsão formada por causa da desidratação do
grupo surfactante hidrofílico em altas temperaturas. Os mesmos resultados foram
reported por Rao e McClements, que estudou a influência da temperatura de
armazenamento sobre as dispersões coloidais de óleo de limão usando sacarose
Palmitate como surfactante não-iônico.
As diferenças entre os parâmetros avaliados não foram significativas em 4 °C de
armazenamento por seis meses, o que significa que os sistemas estavam fisicamente
estáveis nessas condições de armazenamento. Durante o período de seis meses, o
tamanho médio das gotículas permaneceu inferior a 200 nm para todas as formulações,
exceto a formulação B, como mencionado acima. A distribuição relativamente pequena
de gotículas do tamanho de nanoidade sindicou uma estabilidade satisfatória a longo
prazo (PdI<-30 mV), mas seu tamanho era mais de 200 nm. Em uma conclusão, a fim de
manter as formulações de nanoemulsão estáveis, elas precisam ser armazenadas a 4 °C.
Conclusão
Em conclusão, nanoemulsão foi preparada usando monoester de sacarose como
surfactante misturado com glicerol e azeite de oliva. As propriedades da nanoemulsão
foram afetadas pela natureza e pela concentração do surfactante do monoester da
sacarose. Sucrose Laureate surfactant mostrou melhores propriedades de nanoemulsão
com tamanho de pequenas gotículas, baixo índice de polidispersão e alto valor potencial
zeta negativo em comparação com sacarose Oleate e Palmitate. Além disso, as
propriedades da nanoemulsão foram afetadas por diferentes condições de
armazenamento. A nanoemulsão armazenada por seis meses temperaturas diferentes,
mostrou boa estabilidade quando armazenada a 4 °C em comparação com 25 °C e 40 °C.