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TR DPP® HIV-1/2 – Bio-Manguinhos / TR DPP® Sífilis
Pedro Paulo Ferreira Ribeiro

Diagnóstico HIV
ELISA Teste Rápido

Diagnóstico Sífilis
ELISA VDRL
Testes antigênicos não treponêmicos ou testes lipoídicos:

- VDRL (Venereal Disease Research Laboratory)
- RPR (Rapid Plasm Reagin)
Testes treponêmicos ou pesquisa de anticorpos verdadeiros:
- FTA-ABS (Fluorescent Treponema Antigen Absorvent)
- MHA-TP (Micro hemo-aglutinação para Treponema pallidum)
- EIA / ELISA (Enzimaimunoensaio para anticorpo anti-Treponema)
-PCR (Polimerase Chain Reaction)
Vantagens do teste rápido
Conveniência e Rentabilidade
• Desenho ideal
ideal para utilização em campo e ambulatórios;
• Volume de amostra mínimo - 10µL – punção digital (sangue total), soro ou plasma;
• Armazenamento em temperatura ambiente;
• Prazo de validade estendido (24 meses);
• Não necessita de equipamentos especiais de laboratório.
Poupa Tempo e Trabalho

• Reagentes prontos para uso;
• Procedimento simples;
• Tempo total do teste de 20 minutos;
• Não necessita de equipamentos e/ou infraestrutura laboratorial;
• Resultados de fácil interpretação.
Resultados Confiáveis
• Controle interno;
• Altamente sensível e específico.
Nova geração de testes rápidos
DPP® (Dual Path Platform)

Platform)
Plataforma de Duplo Percurso
Trata-se de uma inovadora tecnologia de imunoensaio cromatográfico para testes

Trata-
de diagnóstico rápido, podendo ser aplicada para uma grande variedade de
doenças. Esta tecnologia oferece importantes vantagens sobre os ensaios
convencionais de Lateral Flow (LF).
Dual Path Immunoassay Device

US Patent number: 7,189,522
Issue Date: 03/13/2007
Dual Path Immunoassay Device
(Esfandiari Javan: PCT/US 06099191,
1/17/2006)
Dispositivo De Via Dupla Para Imunoensaio
(Esfandiari Javan: Brazil, PI0600756-
PI0600756-7 03/10-
03/10-
2006)
Vantagens Técnicas do DPP® em relação ao

LF convencional
• Destaca-se a ampliação dos níveis de sensibilidade (10 a 50 vezes maior que o LF),
possibilidade de testes multiplex (até 5 linhas de teste por cassete), adaptável a diferentes tipos
de fluidos corporais (sangue, soro, plasma, saliva, urina, fezes, escarro, etc).
• Possibilidades de ensaios multiteste: Ex: HIV-1/2 + Sífilis;
• Capaz de fornecer resultados altamente sensíveis e específicos usando volumes de amostra

mínimos.
• Diversas aplicações potenciais para a DPP®: Diagnósticos médicos; Diagnósticos veterinários

e saúde animal; Segurança alimentar e triagem de patógenos; Triagem de amostras ambientais;
Bio-terrorismo; Detecção forense; Inúmeras outras aplicações na agricultura e indústria.
Por dentro do teste DPP®
Membrana
do Membrana
conjugado de absorção
Membrana de residual
Membrana
do tampão nitrocelulose
(Ag + ptnA)
Ponte
Membrana
da amostra
Por dentro do teste DPP®

PRINCÍPIO E PROCEDIMENTO DO TESTE DPP®
Os TR DPP® - Bio
Bio--Manguinhos são testes de triagem de uso único, para detectar anticorpos
específicos, em amostras de fluido oral, sangue total venoso, de punção digital, soro ou plasma
humano. O teste se baseia na tecnologia de imunocromatografia e utiliza plataforma de duplo
percurso. Resultados reativos são evidências de exposição ao agente infeccioso e podem ser
usados como suporte ao diagnóstico clínico. Os TR DPP® – BioBio--Manguinhos são indicados para
uso por profissionais de saúde de acordo com as instruções fornecidas.
Apresentação do produto
TR DPP® HIV-
HIV-1/2 - Bio
Bio--Manguinhos – SSP (sangue, soro e plasma)
TR DPP® Sífilis - Bio
Bio--Manguinhos
MATERIAL FORNECIDO:
• Suportes embalados individualmente - 20 suportes

• Tampão de corrida - 01 Fr. 6 mL
• Lancetas estéreis descartáveis - 20 lancetas
• Curativo Adesivo Estéril - 20 adesivos
• Manual de Instrução de Uso
• Alças coletoras descartáveis (10µL) - 20 alças
• Tampão de eluição - 20 Fr. 1 mL
Antígeno do teste DPP®
1 - gp36 / HIV2
2 - gp 120 / HIV1
3 - gp 41 / HIV1
C - Controle
Antígeno do teste DPP®
T – GST p17
C - Controle
Linha Teste Linha Controle
PA Princípio do teste DPP® PA
Conjugado de ouro e ptn A
Ac não específicos p/ HIV

PA PA PA
gold PA gold PA PA
PA = Proteína A
gold PA Gp120
Ac para HIV
PA PA gold
Ag de HIV-1/2
PA PA
PA
PA gold PA GP41 PA
gold PA PA
PA PA
PA gold PA
PA PA PA PA PA GP36 gold
gold gold PA PA
PA
PA PA
Fita S2
Linha Teste
GST p17
Fita S1
GST p17
GST p17
Ac da Amostra
Características de desempenho
Sensibilidade ao HIV-1
A capacidade do TR DPP® HIV – 1/2 –Bio-Manguinhos em detectar infecção por HIV-1 foi avaliada
usando 1.996 amostras de indivíduos sabidamente infectados com HIV -1 e de indivíduos de grupo
de risco de infecção com HIV-1. 1.128 amostras foram identificadas como positivas para infecção
por HIV-1 usando um ensaio imunoenzimático (EIA) licenciado pelo FDA, Western Blot (WB)
licenciado e/ou um ensaio NAT aprovado pelo FDA. Desses, 1.128 foram reativos com o TR DPP®
HIV-1/2 – Bio-Manguinhos resultando em uma sensibilidade de 100% (1.128/1.128 = 100% com
95% CI =99.7 – 100%)
Detecção de anticorpo para HIV-1 em amostras sabidamente infectadas com HIV-1 e de grupo de risco de infecção com HIV-1
Características de desempenho:
Sensibilidade ao HIV-1
A capacidade do TR DPP® HIV – 1/2 –Bio-Manguinhos em detectar infecção por HIV-1 foi avaliada
usando 99 amostras de fluido oral de indivíduos sabidamente infectados com HIV-1. 97 amostras
foram identificadas como positivas para infecção por HIV-1 usando um ensaio imunoenzimático
(EIA) licenciado pelo FDA, Western Blot (WB) licenciado. Desses, 97 foram reativos para no TR
DPP® HIV-1/2 – Bio- Manguinhos e se comparado ao Western Blot (WB) resulta em uma
sensibilidade de 100% (97/97).
Detecção de anticorpos para HIV-1 em amostras de fluido oral sabidamente infectadas com HIV-1
Detecção de anticorpos para HIV-1 em amostras de fluido oral sabidamente infectadas com HIV-1
¹Duas(2) amostras resultaram em padrões indeterminados no Western Blot.essas amostras foram excluídas do calculo de sensibilidade.
²Uma (1) amostra foi reativa no TR DPP e indeterminada no Western Blot
³Para confirmação foi utilizado Western Blot HIV-1 licenciado
Reatividade frente a Painéis de

Soroconversão
O TR DPP® HIV-1/2 foi testado

frente a 27 painéis de soroconversão.
Cada painel consiste de coletas
seqüenciais de um único individuo que
soroconverteu. As amostras foram
confirmadas usando Western blot e
dois EIA licenciados pela FDA. O TR
DPP® HIV-1/2 Bio-Manguinhos é
similar aos testes licenciados para
detecção de soroconversão. A tabela
apresenta a passagem dos dias desde
a data da coleta inicial até a primeira
amostra positiva.
Comparativo do TR DPP® HIV-1/2 Bio-Manguinhos a dois TR licenciados e Western blot na

detecção de soroconversão
Especificidade
A especificidade do TR DPP® HIV-1/2 – Bio-Manguinhos foi avaliada testando amostras

representativas de populações de baixo risco e alto risco de infecção com HIV-1. Baseado
nesses estudos, a especificidade do TR DPP® HIV-1/2 – Bio-Manguinhos pode ser calculada em
99.9% (1506/1507 = 100% com CI =99.6% - 99.9%).
Comparativo entre TR DPP® HIV-1/2 – Bio-Manguinhos dois EIA e um Western blot para soroconversão
Sensibilidade e Especificidade
®
Os índices de sensibilidade e especificidade do TR DPP Sífilis foram determinados
pela avaliação da habilidade do teste em detectar anticorpos para sífilis em amostras
®
clinicas. Comparando os resultados aos resultados obtidos pelo TPPA o TR DPP Sífilis
obteve sensibilidade de 98.3% (287/292) e especificidade de 98.0% (345/352).
Em estudos adicionais de especificidade foram utilizadas amostras

presumidamente negativas provenientes da África (95) e do Brasil (66). Todas as 95
amostras africanas e 64 das 66 amostras brasileiras apresentaram resultado não-
®
reativo. As amostras brasileiras com resultado positivo no TR DPP Sífilis não foram
confirmadas como negativas. A especificidade do teste neste caso foi de
aproximadamente 98.8% (159/161).
O TR DPP Sífilis foi testado

frente a 20 membros do painel
sorológico da Seracare/Boston
Biomedica Inc. (BBI) (PSS202).
O estudo mostrou que o TR
DPP® Sífilis é similar aos
testes licenciados na
detecção dos membros deste
painel.
Painel sorológico (CDC)
Para melhor avaliação do TR DPP®

Sífilis, um painel do CDC bem
caracterizado para sífilis composto de
espécimes que vão desde não
reativo a reativo fortes foi usado para
verificar o desempenho do teste. Os
resultados indicam que o TR DPP®
Sífilis foi capaz de detectar
anticorpos contra o T. pallidum
semelhantes aos ensaios
licenciados.
REAÇÃO CRUZADA E
INTERFERENTES
Para avaliar a influência de condições

médicas não relacionadas ou
substâncias interferentes na
sensibilidade e especificidade do TR
DPP® Sífilis, 160 amostras,
representando condições médicas não
relacionadas, e 100 amostras,
representando substâncias
potencialmente interferentes foram
testadas. As amostras foram
misturadas com solução salina (não
reativo) ou uma amostra de soro
treponêmicos positivos a um baixo
nível de reatividade.
Procedimento para a realização do teste
IMPORTANTE!
• ATENÇÃO: Utilizar somente micropipetas automáticas ajustadas e

calibradas.
• Certifique-se de que a amostra a ser testada esteja à temperatura ambiente

(15 a 30°C). Caso a amostra tenha sido refrigerada ou congelada, permitir
que a mesma alcance a temperatura ambiente antes de ser utilizada.
• Retirar o número necessário de componentes do kit necessários à

execução do ensaio e colocá-los sobre uma superfície plana. Certifique-se
de que os componentes do kit estejam à temperatura ambiente (15 a
30°C) no momento do uso.
• Certifique-se de que a amostra a ser testada esteja à temperatura ambiente. Caso a

amostra tenha sido refrigerada ou congelada, permitir que a mesma alcance a
temperatura ambiente ( 15 a 25ºC) antes de ser utilizada.
• Retirar o número necessário de componentes do kit TR DPP® - Bio-Manguinhos

necessários à execução do ensaio e colocá-los sobre uma superfície plana.
Certifique-se de que os componentes do kit estejam à temperatura ambiente no
momento do uso.
• Retirar o suporte de teste do envelope laminado e identificá-lo com o número de

registro do paciente ou número de identificação da amostra, além do número do lote
do kit de onde o teste foi retirado.
Poço 2 = Janelas de Teste com

TAMPÃO Linhas Azuis e Verde
Poço 1 = AMOSTRA + TAMPÃO

• Antes de coletar a amostra de

sangue, soro ou plasma, identificar o
frasco para eluição com o nome do
indivíduo ou número de identificação
e desenrosque o dosador (parte
branca) do frasco mantendo a tampa
azul rosqueada no dosador.
• Encostar a alça coletora de 10 µL na

amostra a ser testada permitindo
que a alça seja preenchida com a
amostra.
OBS: Em caso de coleta de sangue
da ponta do dedo, utilizar as
lancetas (inclusas no kit), de acordo
com as instruções de uso que as
acompanham.
 Inserir a alça coletora de 10µL com a

amostra no frasco de eluição identificado
de modo que toque no fundo do frasco
(alternativamente podem ser utilizadas
micropipetas calibradas).
 Dobre a haste da alça coletora no ponto

de quebra a fim de que a extremidade com
a amostra permaneça dentro do frasco de
eluição.
• Recolocar o dosador no frasco de eluição

certificando de que tanto o dosador quanto a
tampa azul estão bem fechados e agite
levemente por 10 segundos.
• Retirar somente a tampa azul do dosador e

girar o frasco de eluição mantendo na posição
vertical (sem inclinar) sobre o poço 1. Adicionar
duas gotas da solução, lentamente, ao poço 1.
 Aguardar cinco minutos. Após esse tempo, a

linha azul (TESTE) e verde (CONTROLE) da
janela devem ter desaparecido. Em caso
contrário, descartar o suporte de teste e
repetir o procedimento desde o início usando
um novo suporte.
 Verter o frasco de tampão de corrida e mantê-

lo na posição vertical (sem inclinar) sobre o
poço 2. Adicionar quatro gotas de tampão,
lentamente, ao poço 2.
 Deixar o teste correr por 10 minutos após a adição do tampão ao poço 2 a

temperatura entre 15 a 25°C. Caso não haja migração após 3 minutos da adição do
tampão no poço 2, descartar o teste.
IMPORTANTE!!!
Não leia os resultados após 25 minutos contados a partir da adição do tampão de

corrida ao poço 2.
Linha Controle – Sempre presente!
álidos
Invá
Inv álidos
Invá
Inv
Área Teste Área Controle
ReagenteReagente Não Reagente

Não Reagente
Linha Teste Linha Controle Ausência de Presença
Presen çade
deLinha
Linha
linha teste Controle
Acessórios:
Leitor de Testes DPP e Acessó
Reagente
Escala de Avaliação
- Adaptado para todos os tipos de teste DPP;
- Informações em português;
- Dispensa manutenção e calibração;
- Uso (leituras) ilimitado;
- Interfaces com cpu, impressora e leitor de código de barras;
- Possibilidade de registro e envio de dados/resultados;
- Pequenas dimensões, quase portátil.
Não Reagente
Precauções
• Para reduzir falhas no procedimento do teste, e na interpretação dos resultados, não

realizar mais de 5 testes por vez;
• Componentes de kits de lotes diferentes nunca devem ser misturados;
• Assegurar-se de que a embalagem dos suportes esteja intacta. Caso contrário,

separe o kit evitando que seja utilizado e entre em contato com o SAC de Bio-
Manguinhos;
• Não adicionar volumes de amostra superiores ao preconizado;
• Utilizar sempre a alça coletora fornecida no kit, segundo as orientações do manual

de instruções;
• Somente abra o envelope laminado contendo o suporte de teste no momento de sua

utilização;
• Não utilize kits ou componentes com a data de validade vencida.

TR DPP® HIV-1/2 – Bio-Manguinhos
TR DPP / TR DPP®/ TR
® HIV-1/2 – Bio-Manguinhos Sífilis
DPP® Sífilis
CIPBR
Obrigado!
pribeiro@bio.fiocruz.br

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Pedro Paulo Ferreira Ribeiro

ELISA Teste Rápido

Testes antigênicos não treponêmicos ou testes lipoídicos:

Vantagens do teste rápido

Poupa Tempo e Trabalho

Nova geração de testes rápidos

DPP® (Dual Path Platform)

Trata-se de uma inovadora tecnologia de imunoensaio cromatográfico para testes

Dual Path Immunoassay Device

Vantagens Técnicas do DPP® em relação ao

• Possibilidades de ensaios multiteste: Ex: HIV-1/2 + Sífilis;

• Capaz de fornecer resultados altamente sensíveis e específicos usando volumes de amostra

• Diversas aplicações potenciais para a DPP®: Diagnósticos médicos; Diagnósticos veterinários

Por dentro do teste DPP®

Por dentro do teste DPP®

PRINCÍPIO E PROCEDIMENTO DO TESTE DPP®

• Suportes embalados individualmente - 20 suportes

Antígeno do teste DPP®

Antígeno do teste DPP®

Ac não específicos p/ HIV

Reatividade frente a Painéis de

O TR DPP® HIV-1/2 foi testado

Comparativo do TR DPP® HIV-1/2 Bio-Manguinhos a dois TR licenciados e Western blot na

A especificidade do TR DPP® HIV-1/2 – Bio-Manguinhos foi avaliada testando amostras

Em estudos adicionais de especificidade foram utilizadas amostras

O TR DPP Sífilis foi testado

Painel sorológico (CDC)

Para melhor avaliação do TR DPP®

Para avaliar a influência de condições

Procedimento para a realização do teste

• ATENÇÃO: Utilizar somente micropipetas automáticas ajustadas e

• Certifique-se de que a amostra a ser testada esteja à temperatura ambiente

• Retirar o número necessário de componentes do kit necessários à

• Certifique-se de que a amostra a ser testada esteja à temperatura ambiente. Caso a

• Retirar o número necessário de componentes do kit TR DPP® - Bio-Manguinhos

• Retirar o suporte de teste do envelope laminado e identificá-lo com o número de

Poço 2 = Janelas de Teste com

Poço 1 = AMOSTRA + TAMPÃO

• Antes de coletar a amostra de

• Encostar a alça coletora de 10 µL na

 Inserir a alça coletora de 10µL com a

 Dobre a haste da alça coletora no ponto

• Recolocar o dosador no frasco de eluição

• Retirar somente a tampa azul do dosador e

 Aguardar cinco minutos. Após esse tempo, a

 Verter o frasco de tampão de corrida e mantê-

 Deixar o teste correr por 10 minutos após a adição do tampão ao poço 2 a

Não leia os resultados após 25 minutos contados a partir da adição do tampão de

Linha Controle – Sempre presente!

ReagenteReagente Não Reagente

• Para reduzir falhas no procedimento do teste, e na interpretação dos resultados, não

• Componentes de kits de lotes diferentes nunca devem ser misturados;

• Assegurar-se de que a embalagem dos suportes esteja intacta. Caso contrário,

• Não adicionar volumes de amostra superiores ao preconizado;

• Utilizar sempre a alça coletora fornecida no kit, segundo as orientações do manual

• Somente abra o envelope laminado contendo o suporte de teste no momento de sua

• Não utilize kits ou componentes com a data de validade vencida.

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