Técnicas Laboratoriais de Química

Textos de Apoio
Departamento de Química, Universidade de Coimbra

CAPÍTULO 5
Cromatografia em camada fina e em papel

A cromatografia é um processo de purificação/separação de componentes de uma mistura, por

acção do deslocamento de uma fase móvel relativamente a uma fase estacionária. Existem várias
técnicas cromatográficas. No entanto todas têm em comum a existência de duas fases: uma
estacionária (sólida ou líquida) e uma outra móvel (líquida ou gás) que contacta com a primeira e
que é designada de eluente. A separação dos componentes existentes na fase móvel verifica-se
dada a diferença de velocidade dos mesmos, como consequência das diferentes interacções
estabelecidas com a fase estacionária.
A fase estacionária ou adsorvente, visto que é nela que o soluto se vai ligar, é a sílica, no caso do
trabalho de cromatografia de camada fina que irá ser feito. A superfície desta fase porosa
apresenta grupos silanol (-Si-OH) e siloxano (Si-O-Si), podendo o primeiro estabelecer ligações
de hidrogénio com o soluto. A acção do adsorvente resulta pois, da interacção destes grupos com
as moléculas (ou grupos nas moléculas) polares dos solutos. Existem, assim, na superfície
adsorvente, grupos que formam ligações de forças diferentes: fracas (grupos siloxano) e mais
fortes (silanóis ).
No caso de solutos e eluentes apolares a actividade adsorvente é pequena, tendo como
consequência uma rápida e quase total mobilidade dos mesmos, logo baixos tempos de retenção.
No caso de solutos e solventes polares, verificam-se fortes interacções com o adsorvente,
resultando elevados tempos de retenção, bem como por vezes caudas nas bandas.
A capacidade de retenção de um componente pela fase estacionária permite a separação dos
diversos componentes, em virtude das suas diferentes velocidades de movimento na fase móvel.
Quando a fase móvel é um líquido, podemos exprimir esta capacidade de retenção por um factor
de retardação, o Rf. O Rf é uma característica do soluto, facto que permite muitas vezes a
identificação dos compostos.

Rf = distância percorrida pelo soluto/distância percorrida pelo eluente

O objectivo deste trabalho laboratorial é a separação e identificação dos compostos das folhas
verdes, recorrendo a dois tipos diferentes de cromatografia: cromatografia em camada fina e
cromatografia em papel.

As plantas verdes contêm pigmentos fortemente corados que são responsáveis pela absorção da
luz que precede os processos fotossintéticos. Podem-se distinguir dois tipos de pigmentos: as
clorofilas e os carotenóides (carotenos e xantófilas).

As clorofilas são directamente responsáveis pela conversão de energia solar em energia química,
pois estão envolvidas na reacção fofoquímica que inicia a fotossíntese. Os outros pigmentos têm
duas funções: a absorção de luz em comprimentos de onda onde as clorofilas não absorvem e
subsequente transferência de energia para as clorofilas, e protecção das clorofilas de reacções
iniciadas pela luz e que poderiam causar a sua degradação.

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Algumas estruturas dos componentes/pigmentos existentes nas plantas verdes.

Para caracterizar e estudar os pigmentos é necessário isolá-los. Várias técnicas de isolamento e

purificação são possíveis. Neste trabalho são utilizadas duas técnicas diferentes. Uma técnica é
baseada nas diferenças de coeficientes de partilha entre dois solventes imiscíveis, conduzindo a
separações imperfeitas, mas tendo a vantagem de se poder utilizar quantidades apreciáveis de
extracto. A segunda técnica consiste numa separação cromatográfica que é muito eficaz, mas tem
o inconveniente de apenas se poder utilizar com pequenas quantidades da amostra.

A separação com base em coeficientes de partilha é facilitada, no presente caso, por uma reacção
de saponificação, que permite diferenciar os graus de solubilidade dos diferentes componentes da
mistura. Esta reacção consiste numa hidrólise alcalina de um éster. Como as clorofilas contêm um
grupo éster, o que não acontece com os outros pigmentos, podem ser saponificadas originando
produtos mais solúveis em água e em solventes hidroxílicos.

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