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Atividade 1 
Para essa atividade utilize o artigo em anexo:

CAMPOS, V. F. et al. Clonagem e avaliação da expressão gênica do sbGnRH em

machos juvenis e adultos de linguado, ​Paralichthys orbignyanus.​ Arquivo Brasileiro
de Medicina Veterinária e Zootecnia, v. 63, n. 1, p. 239-246, 2011.

Responda às seguintes questões:

1) Elabore um pequeno texto do artigo em anexo, indicando os objetivos,

metodologia, resultados obtidos e conclusão do autor a respeito do trabalho.

RESPOSTAS
1- O artigo, ​Clonagem e avaliação da expressão gênica do sbGnRH em machos
juvenis e adultos de linguado, ​Paralichthys orbignyanus​, refere-se a uma pesquisa
realizada com o objetivo analisar as característica do cDNA do sbGnRH presente no
cérebro do linguado, analisando se a expressão desse gene pode ser identificada
em outros tecidos periféricos, além do cérebro e comparar as mudanças de
expressões desse gene nos períodos pré e pós-púberes, uma vez, que essa espécie
de linguado, demonstra uma grande viabilidade de cultivo.

Para alcançar os objetivos propostos, aplicou-se na metodologia a realização

da técnica de síntese de cDNA, que consistiu inicialmente na extração total do RNA
da espécie em estudo, que através da enzima de transcriptase reversa e de técnicas
específicas, obteve a formação da molécula de cDNA, com essa molécula foi
possível realizar a clonagem do sbGnRH, que com a utilização de primers
específicos e de técnicas de PCR e eletroforese realizou a construção do
sequenciamento genético de diferentes tecidos, favorecendo os cálculo de
expressão gênica para análise dos objetivos propostos.

A partir da clonagem da molécula de cDNA do sbGnRH, os resultados

demonstraram que a sequência de cDNA clonada é realmente a sequência
codificadora do sbGnRH (GQ220297) do linguado, esta análise foi observada a partir
da inserção de fragmentos de de cDNA do sbGnRH, em vetor de clonagem, onde
através da aplicação de técnicas de isolamento e análise de insertos do DNA
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clonado observou a expansão dos clones individuais dos diferentes tecidos

analisados das células portadoras de vetores recombinantes,tendo a confirmação
dos resultados afirmados, por meio de métodos de verificação de sequência de
DNA.

Dessa forma, a partir das práticas experimentais e dos resultados obtidos, foi
possível concluir a obtenção dos objetivos previstos, de forma que, por meio de
técnicas de TDR, foi obtido com êxito a clonagem do cDNA do sbGnRH do linguado
P. orbignyanus, permitindo ser analisada suas características, comprovando assim,
que a expressão do sbGnRH pode estar presente em tecidos periféricos deste
vertebrado e não apenas no cérebro apresentando porém com funções ainda
desconhecidas e que a maior expressão do sbGnRH nessa espécie, é observada na
fase adulta principalmente de machos, indicando que esta expressão gênica está
associada à puberdade da espécie.

2) Responda

1. Qual a importância da obtenção, clonagem e estudo de um cDNA?

RESPOSTA​: Por ser uma molécula originada de um mRNA, a obtenção de cDNA

por meio dessa molécula torna-se importante para diversos trabalhos de
investigação, uma vez que, sendo uma cópia da mensagem ela apresenta poucas
sequências que não codificam proteínas, além disso, ela é uma molécula importante
para a clonagem molecular, pois como o mRNA codifica expressões específicas
para a formação de determinadas proteínas, através do cDNA é possível realizar um
isolamento mais fácil de uma sequência da mensagem codificada e dedução
subsequente da sequência de aminoácidos da proteína por ela codificada, sendo
essa codificação, importante para a identificação de inúmeras proteínas, que permite
o estudo de diferentes característica que desejam ser investigadas em organismos
geneticamente modificados.
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2. Relacione as Ferramentas da TDR ministradas na disciplina, que foram usadas

pelos pesquisadores no trabalho científico.

RESPOSTA:

A) Transcriptase reversa – necessária para catalisar a formação de uma fita de

DNA (cDNA), a partir de um molde de mRNA fita simples e de um iniciador.
Essa enzima foi empregada para a obtenção de um cDNA;

B) Enzima de Restrição – DNase (Desoxirribonuclease ) - endonuclease

que degrada DNA fita simples ou dupla. Pode ter sido usada para a remoção de
DNA nas preparações de RNA.Aplicando se as técnicas de eletroforese e souther
blot.