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RESUMO - O objetivo desse trabalho foi avaliar os processos de imobilização e secagem de lipase
produzida pelo fungo endofítico Cercospora kikuchii através do uso de suportes não convencionais
(subprodutos agroindustriais) e do leito de jorro como equipamento de secagem dos derivados
imobilizados obtidos. Nos ensaios de imobilização o melhor agente ligante foi o glutaraldeído,
sendo os melhores resultados obtidos foram para a celulose microcristalina com retenção da
atividade enzimática de 179,1%, seguido da casca de arroz 173,9% e palha de milho 169,8%.
Alguns parâmetros bioquímicos e cinéticos da lipase na forma livre foram diferentes da lipase
imobilizada. A alteração mais evidente foi a afinidade ao substrato (KM), que para os derivados
imobilizados produzidos apresentou valores menores quando comparados aquele obtido para lipase
livre. Os valores de pH e temperatura ótimos também foram modificados após os processos de
imobilização e secagem, ampliando a faixa de atuação catalítica da enzima. Este trabalho
demonstrou que suportes de baixo custo permitiram a obtenção de derivados imobilizados com
características semelhantes àqueles obtidos com o uso de polímeros sintéticos, e que o leito de jorro
demonstrou viabilidade para a secagem de produtos termo sensíveis, como as enzimas.
modificações na estrutura dos suportes após a nos suportes. Por exemplo, o glutraldeído
ativação com os agentes ligantes. O causou modificações visíveis em quase todos
surgimento de novas bandas ou supressão de os suportes ativados. O aparecimento de
bandas originais pode ser atribuído à novas bandas (C=O) pode ser devido a
deformação axial dos grupos carbonilas e formação de grupos aldeídos sobre efetiva
hidroxilas, sugerindo que os grupos funcionais oxidação de grupos diols presentes no suporte
do agente ligante foi efetivamente inseridos puro por esse agente oxidante.
C=O
0,04
Absorbância
C=O
0,03
0,02
0,0
1800 1750 1700 1650 1600 1550 1500 1500
Número de onda (cm-1) Número de onda (cm-1)
0,2 p de milho.CSV
bagaco puro.CSV
pm-ep.CSV
bc-ep.CSV 0,2 pm-ga.CSV
bc-ga.CSV
pm-mp.CSV
bc-mp.CSV
Absorbância
1713cm-1 para o GA
0,1
0,1
Figura 1: Espectrometria de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR) dos suportes puros
e pré-ativados: cmc: celulose microcristalina; pa: casca de arroz; bc: bagaço de cana; pm: palha de
milho; ga: glutaraldeído; mp: metaperiodato de sódio; ep: epicloridrina.
Tabela 2: Resumo do processo final de purificação de uma lipase produzida pelo fungo C. kikuchii.
Amostra U/Total Ativ. Específica Proteína Total (mg) Ip Rendimento %
Extrato bruto 360,5 45,1 8,00 1 100,0
Interação
295,0 196,6 1,50 4,4 82,0
Hidrofóbica
Absorbância
0,09
0,08
1359 1318
0,07
0,06
1372
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
1400 1380 1360 1340 1320 1300
-1
Numero de onda (cm )
Figura 2: FTIR para lipase livre, suporte pré-tivado com glutaraldeído e derivado imobilizado
obtido: celulose microcristalina.
Tabela 4: Resultado da análise elemental realizada para os suportes puros, suportes ativados com
glutaraldeído e derivados imobilizados obtidos.
Carbono Hidrogênio Nitrogênio
Amostra
(% m/m) (% m/m) (% m/m)
puro 45,4 ± 0,1 5,6 ± 0,1 0,3 ± 0,1
Bagaço de cana ativado 46,4 ± 0,1 5,8 ± 0,3 0,3 ± 0,1
+ lipase 47,0 ± 0,3 6,1 ± 0,2 0,5 ± 0,2
puro 32,3 ± 0,2 4,4 ± 0,1 0,5 ± 0,2
Casca de arroz ativado 33,4 ± 0,1 4,9 ± 0,2 0,5 ± 0,1
+ lipase 35,7 ± 0,3 5,3 ± 0,2 0,8 ± 0,1
puro 41,9 ± 0,1 6,3 ± 0,1 0,5 ± 0,2
Celulose Microcristalina ativado 42,5 ± 0,1 6,9 ± 0,1 0,5 ± 0,1
+ lipase 43,0 ± 0,2 7,4 ± 0,2 0,8 ± 0,2
puro 43,8 ± 0,1 5,4 ± 0,2 0,5 ± 0,1
Palha de milho ativado 45,9 ± 0,2 7,4 ± 0,1 0,8 ± 0,1
+ lipase 46,1 ± 0,1 7,9 ± 0,2 1,3 ± 0,1
Figura 2: Fotomicrografias dos derivados imobilizados: (A) casca de arroz; (B) palha de milho; (C)
celulose microcristalina.