ECC CROMOGÊNICO ÁGAR

Finalidade:
Meio de cultura estéril para cultivo, contagem e identificação de Coliformes e Escherichia
coli.
Registro ANVISA:
10097010-134
Apresentação: LB 172121
540119 - ECC CROMOGENICO AGAR PL 90X15 10PL10PL Rev 03 – 03/2019

1. INTRODUÇÃO - O laboratório deve estabelecer critérios de coleta, rejeição e

O isolamento e identificação tradicional do gênero coliformes conservação das amostras, conforme sua política da qualidade.
envolve o uso de meios seletivos e diferenciais em processo que - Sempre considerar as necessidades específicas dos
pode durar até 72h em alguns casos. A proposta do uso do microrganismos alvos das análises, microrganismos com
cromogênico para o grupo coliformes e E. coli se fundamenta no necessidades especiais (suplementos específicos ou ambiente
uso de um meio seletivo e diferencial com base na modificação da controlados) podem não apresentar crescimento adequado se
coloração das colônias isoladas, conferindo ao processo rapidez e semeados em meio de cultura que não apresente os requisitos
especificidade. mínimos.
O ECC ágar é um meio de cultura cromogênico seletivo e diferencial
projetado para uso em laboratórios de microbiologia de alimentos.
Dentro de 24 horas, este meio permite a detecção, diferenciação e 4. INFORMAÇÕES GERAIS DO PRODUTO
contagem de coliformes e E. coli em matrizes de alimentos a- Armazenamento e estabilidade
processados. Para fins de transporte, o produto pode permanecer em temperatura
A quantificação é feita pelo método de contagem em placas, ambiente por até 72h. No laboratório as placas devem ser
utilizando o ECC como meio de cultivo. É uma formulação com armazenadas em temperatura de 2 a 12ºC, condições em que se
peptonas adicionadas ao piruvato, sorbitol e tampão fosfato que mantém estáveis até a data de vencimento expressa em rótulo,
garantem um crescimento rápido das colônias. O Tergitol® 7, age desde que isento de contaminação de qualquer natureza. O uso de
como um inibidor de bactérias Gram-positivas, e não tem nenhum refrigerador tipo frost-free não é recomendado para meios de cultura
efeito negativo sobre o crescimento de coliformes e E. coli. A devido ao efeito desidratante deste tipo de equipamento.
combinação de dois substratos cromogênicos permitem a
simultânea detecção de coliformes totais e E. coli. A enzima Considerando que este produto é gelatinoso e sua composição
característica para coliformes é a ß-D-galactosidase que cliva o pode apresentar até 80% de água, ao sofrer variações de
substrato Salmon-GAL resultando na coloração rósea a vermelha temperatura (quente-frio ou frio-quente) todo meio de cultura pode
das colônias de coliformes. O substrato X-glucuronide é usado para gerar condensação, de pouca a muita, acumulando água na placa.
a identificação da ß-D-glucuronidase que é característico de E. coli. Recomenda-se guardar as placas com os meios de cultura virados
A E.coli cliva ambos os substratos Salmon-GAL e X-glucuronide, de para cima e, quando necessário, desprezar a água acumulada e
modo que colônias positivas assumam uma cor azul escuro para deixar o meio de cultura estabilizar a temperatura antes de sua
violeta. Estes são facilmente distinguidos das outras colônias de utilização.
coliformes que tem cor rósea a vermelha. A inclusão de triptofano Conforme descrito em literatura, o laboratório deve retirar da
melhora a reação do indol, aumentando desse modo a refrigeração apenas a quantidade de produto que deverá ser
confiabilidade da detecção quando é usada em combinação com a utilizada em sua rotina e deixar estabilizar a temperatura, ou secar a
reação Salmon-GAL e X-glucuronide, como parte de uma água condensada, antes de sua utilização, em temperatura
confirmação adicional para E. coli. ambiente, podendo utilizar a incubação em estufa (± 37ºC) para
redução do tempo de secagem ou estabilização. A repetição do
processo de refrigeração/estabilização não é recomendada, a
2. COMPOSIÇÃO constante troca de temperatura pode levar a desidratação do meio,
Formulação Concentração/L expor o produto a contaminações ou gerar um acúmulo de água
excessivo.
Peptona 3,0g
A água acumulada por condensação, ocasionada por alguma
Cloreto de sódio 5,0g
variação de temperatura, não influência no desempenho do produto,
Fosfato dissódico 2,7g desde que este não apresente ressecamento ou diminuição de
Fosfato monossódico 2,2g espessura.
Piruvato de sódio 2,7g Devido a presença de substratos sensíveis, recomenda-se manter o
Triptofano 1,0g produto protegido de incidência direta de luz (natural ou artificial) e
Ágar 10,0 g evitar grandes variações de temperatura até a utilização.
Sorbitol 1g
Tergitol ® 7 0,15g b- Precauções e cuidados especiais
6-cloro-3-indoxil-beta- - O produto é destinado apenas para o uso in vitro;
0,2g
Dgalactopyranoside(Salmon-GAL) - Uso restrito por profissionais;
5-bromo-4-cloro-3-indoxil-beta-D-glucorónico 0,1g - Mesmo se tratando de produto livre de agentes infecciosos,
isopropil-beta-Dthiogalactopyranoside 0,1g recomenda-se tratar este produto como potencialmente infeccioso,
H2O ultra purificada 1L observando o uso de equipamentos de proteção individual e
pH 7,6± 0,2 a 25ºC coletivo;
- Não inalar ou ingerir;
A fórmula pode ser ajustada e/ou suplementada, conforme - Não utilizar placas com sinais de contaminação, ressecamento ou
necessário, para cumprir os critérios de desempenho. com alterações de cor ou espessura;
- Não usar materiais com o prazo de validade expirado, ou que
apresentem selo de qualidade rompido ou violado;
3. AMOSTRAS - Recomenda-se a leitura da diretriz aprovada para “Proteção de
a- Tipos de amostras Trabalhadores de Laboratório e Infecções Obtidas no Trabalho -
- Vários tipos de amostra de alimentos podem ser inoculadas no CLSI® M29-A” para o manuseio seguro;
ECC Ágar. - Para acondicionamento e descarte do material usado, autoclavar a
121ºC por 20 minutos. Recomendamos o uso dos sacos Detrilab.

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Rev. 03 – 03/2019

- Os procedimentos de manuseio referentes ao processamento e - Erro na conservação do produto pode ocasionar desidratação do
manuseio para o descarte deverá estar de acordo com a RDC 222, meio e alteração das propriedades dos componentes
DE 28 DE MARÇO DE 2018 que dispõe sobre o Regulamento
Técnico para o gerenciamento de resíduos de serviços de saúde.
8. CONTROLE DA QUALIDADE
- Materiais necessários
Cepas padrão: ATCC® (American Type Culture Collection) ou
5. MATERIAL NECESSÁRIO (porém não fornecido) derivadas).
- Estufa bacteriológica
- Bico de Bunsen - Controle de qualidade recomendado:
- Alças de Drigalski
- Alças bacteriológicas Parâmetro Resultado esperado
Produtividade semi-
6. PROCEDIMENTO TÉCNICO quantitativa 6 – 16 IC
a- Retirar o pacote da refrigeração, e em ambiente asséptico, E. coli ATCC 25922 Colônias roxas - azuladas
separar as placas a serem usadas, devolvendo o restante ao Produtividade semi-
refrigerador; quantitativa –
b- Colocar as placas em estufa bacteriológica a 35-37°C pelo tempo K. pneumoniae 6 – 16 IC
necessário para adquirirem esta temperatura, ou deixar ATCC13883 Colônias rosas
estabilizar/secar em temperatura ambiente; Seletividade qualitativa –
c- Semear o material de acordo com técnicas estabelecidas pelo S .aureus ATCC 25923 Inibição
laboratório referentes ao acondicionamento, preparo e diluições; Meio sólido, levemente
d- Incubar por período de tempo exigido pela técnica adotada. opaco, coloração bege a
e- Realizar leitura. Meio não inoculado levemente amarelada, livre
de precipitados ou
partículas visíveis.
7. RESULTADOS IC= Índice de crescimento
Contar as colônias características e expressar o resultado:
- Para Coliformes totais: somar todas as colônias róseas a - Periodicidade
vermelhas, com as colônias azuis escuras ou roxas. Testar a cada novo lote recebido ou em periodicidade estabelecida
Expressar resultado em UFC de Coliformes totais pelo volume pelo próprio laboratório.
inoculado.
- Para E. coli: contar todas as colônias azul escuras ou roxas. - Análise dos resultados
Expressar resultado em UFC de E. coli pelo volume inoculado. O ECC Cromogênico Ágar testado com cepas padrão deve
expressar os resultados esperados. Caso se constate algum
OBS: No caso de dúvida referente a coloração das colônias, as problema, os resultados não devem ser liberados até que as causas
mesmas podem ser identificadas através de provas bioquímicas, tenham sido apuradas devidamente e os problemas constatados
usando o Sistema Bactray. sanados

8. LIMITAÇÕES DO MÉTODO 9. GARANTIA DA QUALIDADE

(Riscos Residuais Identificados conforme RDC 36/2015)
Os resultados falsamente positivos ou negativos podem ocorrer,
com maior frequência, nas seguintes situações:
- Algumas cepas de E. coli (3-4%) são-ß-glucuronidase negativos e
aparecem como colônias de cor rosa a vermelho, por exemplo,
cepas de E. coli O157.
- Flora acompanhante aparece como colônias incolores, com
exceção de alguns organismos, que possuem atividade ß-D-
glucuronidase. Estas colônias aparecem na cor azul claro a
turquesa.
- Tempo longo entre a semeadura da amostra e análise. Ao utilizar
colônias isoladas em um período superior a 24 horas, o
metabolismo bacteriano pode ficar comprometido e a leitura de
alguns parâmetros podem consequentemente ficar defasados ou
até mesmo não ocorrer. Em colônias recentes (inferior ao período
de 18 horas) não se encontram com o metabolismo bem definido, e
algumas provas podem não ocorrer.
- Incubação em temperatura inadequada.
- Sobrecarga de inóculo ou falta de inóculo. Placas com inóculos
mais carregados fornecem resultados falsamente positivos e
inóculos em menor quantidade podem fornecer resultados
falsamente negativos.
- Interpretação equivocada de resultados.
- Técnica de assepsia inadequada.
- Tempo excessivo ou insuficiente de incubação. Tempo excessivo
de incubação fornece resultados falsamente positivos e tempo
insuficiente fornece resultados falsamente negativos.
- Utilização de material vencido, contaminado ou em condições
inadequadas.
- Contaminação cruzada por uso de acessórios não esterilizados
corretamente ou ambiente não asséptico.
- Utilização de meios de cultura com aparência alterada.
- Não aguardar para que os materiais atinjam a temperatura
ambiente no momento do uso.
A Laborclin obedece ao disposto na Lei 8.078/90 - Código de
Defesa do Consumidor. Para que o produto apresente seu melhor
desempenho, é necessário:
- que o usuário conheça e siga rigorosamente o presente
procedimento técnico;
- que os materiais estejam sendo armazenados nas condições
indicadas;
- que os equipamentos e demais acessórios necessários estejam
em boas condições de uso, manutenção e limpeza.
Antes de ser liberado para venda, cada lote do produto é submetido
a testes específicos, que são repetidos periodicamente conforme
calendário estabelecido pela empresa até a data de vencimento
expressa em rótulo. Os certificados de análise de cada lote podem
ser obtidos no site www.laborclin.com.br. Em caso de dúvidas ou
quaisquer problemas de origem técnica, entrar em contato com o
SAC - Serviço de Assessoria ao Cliente através do telefone 0800-
410027 ou pelo e-mail sac@laborclin.com.br. Quaisquer problemas
que inviabilizem uma boa resposta do produto, que tenham ocorrido
comprovadamente por falha da Laborclin serão resolvidos sem ônus
ao cliente, conforme o disposto em lei.
10. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. APHA. Compendium of Methods for the Microbiological
Examination of Foods. 5th ed. American Public Health Association,
Washington, D.C., 2015.
2. ISO 11133. Microbiology of food, animal feed and water –
Preparation, production, storage and performance testing of culture
media. 1rd ed. The International Organization for Standardization,
2014.
3. ISO 16649-2. Microbiology of food and animal feeding stuffs –
Horizontal method for the enumeration of ß-glucuronidase-positive
Escherichia coli - Part 2: colony-count technique at 44°C using 5-
bromo-4-chloro-3-indolyl ß-D-glucuronide, 1st ed., 2001.

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4. SILVA, de Neusely; et al. Manual de Métodos de Análise

Microbiológica de Alimentos e Água, 5ª ed. São Paulo: Blucher,
2017.

11. PRODUTOS ASSOCIADOS

510010 TUBO 0,5 MAC FARLAND-10mL-TB 16,5X92-1UN
570661 TIRA DE OXIDASE-FR 10 TIRAS
571004 KOVACS-REATIVO-FR 10mL
880108 BAC TRAY 1-BGN OXIDASE NEGATIVA-CX 10T
880104 OLEO MINERAL - FR 10mL
880102 CLORETO FERRICO 10% - FR 10mL
880101 ALFA NAFTOL - FR 10mL
880103 HIDROXIDO DE POTASSIO 40% - FR 10mL

Laborclin Produtos para Laboratórios Ltda

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ANEXO 1 – LISTA DE SÍMBOLOS UTILIZADOS NOS RÓTULOS

Fonte: ABNT NBR ISO 15223-1 – Segunda edição (28.07.2015)

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