UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS – UFAL

INSTITUTO DE HABILIDADES MULTIDISCIPLINAR EM MICROBIOTA INTESTINAL –

InHaMMI

Edmilson Rodrigues da Rocha Junior

RELATÓRIO: Metas e desenvolvimento da aplicação da metabolômica no estudo da

microbiota intestinal.

Maceió – 2020
INTRODUÇÃO

Dado às varias evidencias da influência da microbiota intestinal em diversos

sistemas do organismo, como no sistema imune, a absorção de nutrientes e a
mediação de diversos processos metabólicos, compreender o funcionamento da
interação da microbiota com seu hospedeiro apresenta grande importância no estudo
de diversos distúrbios e possíveis terapias como o transplante de microbiota intestinal,
tornando possível diagnosticar e tratar diversos problemas de saúde de forma
eficiente e barata, através da identificação e manipulação da constituição da
microbiota do individuo. Inserido neste contexto, o campo da metabolômica traz
ferramentas e métodos para o estudo dos metabolitos presentes em diferentes
materiais biológicos, que podem ser aplicados no estudo da microbiota intestinal, no
sentido de identificar as interações metabólicas entre microbiota e hospedeiro, bem
como identificar com de maneira eficiente alterações e desequilíbrios nessa interação
e servir como meio de monitorar terapias que envolvam a microbiota.

OBJETIVO GERAL

Compreender por meio da metabolômica as interações metabólicas entre

microbiota intestinal e hospedeiro, em pacientes de Doença de crohn e Retocolite
ulcerativa, bem como acompanhar voluntários submetidos ao transplante de
microbiota intestinal.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Realizar a metabolômica de amostras de fezes dos pacientes portadores de Doença de

crohn e Retocolite ulcerativa.

Identificar as alterações metabólicas provocadas por ambas às doenças.

Identificar possíveis biomarcadores para a avaliação do estagio de ambas disfunções.

Caracterizar o perfil metabólico de pacientes saudáveis e portadores de doenças

intestinais.

Avaliar a evolução no perfil metabólico provocado pelo transplante de microbiota

intestinal.
MATERIAIS E METODOS

Material utilizado no preparo das amostras: Micropipeta, Almofariz e pistilo,

proveta, béquer, tubos Eppendorf, Microcentrífuga refrigerada, nitrogênio liquido,
tampão fosfato + D2O, tubos de RMN.

O preparo das amostras fecais previamente conservadas em refrigeração é

feito através da adição de nitrogênio liquido e 10 ml de agua em um almofariz
juntamente com a amostra, sendo homogeneizado completamente, o produto então é
transferido a um tubo Eppendorf e centrifugado a 14000 RPM durante 15 minutos, o
sobrenadante é então coletado e transferido a um tubo de RMN sendo adicionado
então a solução contendo o tampão e D2O, a amostra então segue para a analise
metabolômica.

As analises metabolômica serão executadas através de um espectrômetro de

RMN operando a 600MHz e um espectrômetro de massas de quadrupolo simples
acoplado a cromatografia gasosa, sendo os resultados de ambas plataformas analíticas
analisados em conjunto. Os espectros então serão devidamente pre-processados e
normalizados, seguido pela identificação dos sinais apresentados, fazendo uso de
bibliotecas e bancos de dados para confirmar o padrão espectral de cada metabolito.
Os dados espectrais então serão convertidos no formato de planilha através de
softwares como Matlab e os dados organizados em grupos de acordo com os dados
patológicos de cada individuo, a fim de ser submetido a analise estatística de caráter
univariado e multivariado, fazendo uso de métodos como a analise de componentes
principais para discriminar o perfil metabólico de cada grupo e identificar os principais
metabolitos diferenciais.

CONCLUSÂO

Através da analise do metaboloma utilizando as plataformas analíticas

descritas e métodos estatísticos para extrair informações dos dados apresentados, é
esperado conseguir demonstrar o impacto metabólico da microbiota intestinal em
diferentes condições de saúde, bem como evidenciar como o conhecimento destas
alterações pode ser utilizado para diagnosticar de forma não invasiva diferentes
problemas envolvendo o sistema gastrointestinal e também outros sistemas
influenciados por este. Por fim, é esperado conseguir através da metabolômica dar
assistência ao transplante de microbiota intestinal, tanto no acompanhamento da
terapia como na seleção de doadores, de forma a maximizar os resultados e garantir
sua eficácia.