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Processo de encapsulação de extrato aquoso liofilizado e não liofilizado de

mangaba em vesículas lipídicas

Encapsulation process of lyophilized and non-lyophilized aqueous extract of

mangaba in lipid vesicles
DOI:10.34117/bjdv6n1-158

Recebimento dos originais: 30/11/2019

Aceitação para publicação: 15/01/2020

Lorrane Soares dos Santos

Estudante de Iniciação Científica Bolsista IF Goiano
Instituto Federal Goiano – Campus Rio Verde – GO
lorrane.soare.santos@gmail.com

Jéssica Silva Medeiros

Colaboradora
Instituto Federal Goiano
Campus Rio Verde – GO
jessicasilva.medeiros.sm@gmail.com

Antonio Mathias Navarrete Toledo

Colaborador
Universidade estadual de Campinas (UNICAMP) – SP
matiasnavarrete@yahoo.com.br

Letícia Fleury Viana

Colaboradora
Instituto Federal Goiano – Campus Rio Verde – GO
leticia.viana@ifgoiano.edu.br

Maria Inês Rodrigues Machado

Colaboradora
Universidade Federal do Cariri. -UFCA, Campus Crato-CE
ines.machado@ufca.edu.br

Adriana Rodrigues Machado

Orientadora
Instituto Federal Goiano – Campus Rio Verde – GO
adririso@hotmail.com

RESUMO
O objetivo desse trabalho foi encapsular o extrato aquoso presente no fruto da mangaba, comparando
e caracterizando os liofilizados e os não liofilizados. A preparação de lipossomas, utilizando lecitina
como material de parede, se deu através da evaporação em fase reversa com o emprego de sonicação,
com posteriores medições para obtenção do tamanho de partícula, índice de polidispersão e potencial
zeta. Constatou-se que os lipossomas oriundos do extrato aquoso liofilizado de mangaba obtiveram-
se tamanhos maiores, devido à agregação das partículas provocadas neste processo, sendo ineficiente
a adição do método sob as vesículas lipídicas quando não há a utilização de crio protetores. No
entanto, para os lipossomas contendo extrato aquoso não liofilizado de mangaba obtiveram-se nano

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vesículas lipídicas com baixa polidispersão e tamanhos adequados, resultando grande potencial de
aplicação em alimentos.

Palavras-chave: Fenólicos, Nanovesículas, Lipídios, Caracterização.

ABSTRACT
The objective of this work was to encapsulate the aqueous extract present in the mangaba fruit,
comparing and characterizing the lyophilized and non-lyophilized fruits.The preparation of liposomes
using lecithin as a wall material was carried out through reverse phase evaporation using sonication,
with subsequent measurements to obtain particle size, polydispersion index and zeta potential. It was
found that the liposomes from the lyophilized aqueous extract of mangaba obtained larger sizes, due
to the aggregation of the particles caused in this process, being inefficient the addition of the method
under the lipid vesicles when there is no use of cryoprotective. However, for liposomes containing
non-lyophilized aqueous extract of mangaba, low polydispersion lipid nesicles with adequate sizes
were obtained, resulting in a great potential for food application.

Keywords: Phenolics, Nanovesicles, Lipids, Description.

1 INTRODUÇÃO
No Brasil, em toda a cadeia produtiva das frutas, incluindo colheita, transporte e
armazenamento, as perdas são ainda bastante elevadas. As frutas tropicais apresentam, em geral,
elevadas perecibilidade, e ainda são considerados escassos os dados que impulsionem de fato a
aplicação de novas técnicas de pós-colheita que venham a diminuir efetivamente estas perdas
(MACHADO, 2014b).
Desse modo, com a ampla biodiversidade presente no país, são indispensáveis à pesquisa
científica no que se diz respeito à detecção, quantificação, extração, aplicação e utilização de
substâncias de interesse para aplicação industrial que tragam benefícios à população, como os
compostos bioativos (SILVA, 2014). Como forma de proteção destes compostos pode-se citar os
lipossomas que são estruturas esféricas capazes de encapsular ambas as substâncias hidrofílicas e
hidrofóbicas, como por exemplo, os carotenoides, fenólicos, vitaminas entre outros (CARVALHO et
al, 2015; TONIAZZO et al, 2014; MACHADO, 2016; ZHOU et al., 2014), portanto, os compostos
bioativos incorporados nos lipossomas, podem ser preservados contra a degradação, melhorando a
estabilidade e a solubilidade (MACHADO et al., 2019).
Uma das principais vantagens dos lipossomas quando comparados com outros sistemas
portadores é a sua alta biocompatibilidade, especialmente quando consiste em lipídios que ocorrem
naturalmente (FREZARD, 1999).
O processo de liofilização consiste na separação por sublimação, onde a água ou a substância
aquosa é retirada como vapor do produto congelado passando da fase sólida para a fase gasosa
(BOSS, 2004). A liofilização possui várias vantagens ligadas à estrutura do produto, como a
característica esponjosa que permite a reconstituição rápida, realce do sabor e aparência fiel do

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produto original. (EVANGELISTA, 2005). No entanto, a desvantagem da liofilização se deve a alta
tendência à auto agregação, assim como confirmado nos estudos de Del Pozo-Rodríguez e
colaboradores (2008).
Com este trabalho objetivou-se realizar a encapsulação dos extratos aquoso presentes no fruto
da mangaba após liofilização e sem o uso de liofilização, caracterizando os encapsulados em relação
ao tamanho de partícula, índice de polidispersão e potencial zeta.

2 MATERIAL E MÉTODOS
2.1 MATÉRIA-PRIMA E OBTENÇÃO DOS EXTRATOS FENÓLICOS
Os frutos mangaba (Hancorniaspeciosa) foram provenientes de uma vegetação natural sem
plantio organizado na região de Montes Claros de Goiás (16º06’20” S e 51º17’11” W), colhidos
manualmente no período de Setembro a Outubro de 2017 e imediatamente transportadas para o
Laboratório de Cultura e Tecidos Vegetais (LCTV), onde foram preparadas, armazenadas e avaliadas.
As frutas foram lavadas, sanitizadas com hipoclorito de sódio, em seguida despolpadas,
homogeneizadas, pasteurizadas a 80 °C por 20 minutos, envasada, congeladas à -26ºC em freezer,
até análises posteriores. A lecitina de soja pura foi adquirida no mercado local de Rio Verde, Goiás,
sob a forma de pó.
Para o preparo dos extratos oriundos da polpa de mangaba iniciou-se pesando 100 mg da
amostra em frasco com tampa de rosca com posterior adição de 10 mL de metanol:etanol e/ou água
e deixado sob agitação por uma hora em agitador mecânico. Após, filtrou-se em papel filtro, uma
alíquota de 0,1 mL do filtrado obtido e coloca-se em tubo de ensaio com rosca, e adicionado de 7,9
mL de água deionizada e 0,5 mL de reagente de Folin-Ciocalteu 2 N (diluído 1:10), posteriormente
agitou-se em agitador. Logo após manteve-se durante 5 min no escuro, adicionou-se 1,5 mL de
solução de carbonato de sódio a 20% (Na2CO3 foi adicionado à solução), agitou-se novamente em
agitador. Após incubação a 25 °C durante 2 h mediu-se a absorbância da solução a 765 nm utilizando
espectrofotômetro (BEL/Spectro S-2.000). Uma curva padrão foi realizada utilizando ácido gálico
-1
em concentrações de 0 a 500 mg L , para construir uma curva de calibração. Todas as etapas desta
análise foram realizadas ao abrigo da luz (MACHADO, 2014b).
2.2 PURIFICAÇÃO DE LECITINA DE SOJA
A lecitina de soja foi submetida ao processo de purificação, de acordo com Mertins et al.
(2008). Seguindo os processos de solubilização em diferentes solventes como acetato de etila e
acetona obtendo precipitado. O precipitado foi filtrado sob vácuo e seco numa estufa a cerca de 60
°C após o qual foi arrefecido em um dessecador obtendo-se assim a fosfatidilcolina purificada com
uma massa final de 9,3838 gramas (MACHADO et al., 2014a).

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2.3 PREPARO DAS NANO VESÍCULAS LIPÍDICAS (LIPOSSOMAS)
A preparação de lipossomas foi realizada através da evaporação em fase reversa, Figura
1,segundo Szoka e Papahadjopoulos, 1978, com modificações, com o emprego da sonicação,
constitui um processo em etapas, onde os diferentes estágios levam à formação de três sistemas
vesiculares de distintas organizações estruturais: micelas reversas, organogel e lipossomas
(MERTINS, 2008). Durante o processo de obtenção das nanovesiculas lipídicas, Figura 2, adicionou-
se o composto bioativo (MACHADO et al., 2014).

Figura 1: Ilustração do processo de encapsulação.Fonte : Machado, 2016.

1)lecitina e solvente; 2) porção aquosa; 3)sonicação; 4)solubilização, e evaporação total do

solvente; 5)filme de lipidios; 6)porção aquosa;7) composto bioativo; 8)repetibilidade dos ciclos de
agitação e aquecimento; 9)repetibilidade dos ciclos, banho ultrasônico.

Figura 2 – Mecanismo de formação das nano vesiculas lipidicas.

Fonte: Machado 2016, com modificações.

2.3.1 Liofilização de material encapsulado

A liofilização foi realizada através do método de desidratação por sublimação do produto
congelado a -80ºC por 12 horas, por meio do Liofilizador Enterprise II (Terroni), utilizando pressão
de 500 μHg por 24 h, a -50°C.

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2.3.2 Tamanho de partícula, índice de polidispersão e potencial zeta
Todas as medições foram realizadas a 25ºC, em equipamento Malvern Zeta sizer Nano Zs, no
departamento da FEA (Faculdade de Engenharia de Alimentos), Laboratório de Engenharia de
processos, Universidade estadual de Campinas (UNICAMP). Cada medição de tamanho da partícula
e polidispersão foram medidas com um ângulo de detecção de 173º e medidas de potencial zeta em
um ângulo de 17º, sendo valores de potencial zeta calculados pelo modelo Smoluchowski
(MALVERN, 2014).
2.4 ANÁLISE ESTATÍSTICA
Todas as determinações foram realizadas em triplicado e os resultados foram analisados com
ANOVA e Teste de Tukey no nível de significância de 5%, com o auxílio do software Statistica®
(2004), versão 7.0.

3 RESULTADOS E DISCUSSÃO
Os lipossomas produzidos foram caracterizados, através de medidas de tamanho médio, índice de
polidispersão e potencial zeta (Tabela 1).

Tabela 1 - Caracterização física das nano vesículas lipossômicas contendo extrato aquoso de
mangaba elaborado com Lecitina de soja.

2
Caracterização física LLEM LEM

Diâmetro da partícula (nm) 426,67±0,42a 198,53±0,68b

Polidispersão 0,524±0,00a 0,270±0,01b
Potencial zeta(mV) -46,4±0,29a -38,43±1,15b
*Obs.: Valores obtidos: Média ±desvio padrão. LLEM: Lipossomas liofilizados com extrato aquoso de
mangaba; LEM: Lipossoma com extrato aquoso de mangaba. Letras diferentes na mesma linha indicam
diferença significativa pelo teste de Tukey (α <0,05).

Os lipossomas preparadas com lecitina de soja liofilizados (LLEM) obtiveram tamanhos

grandes, devido ao processo de liofilização, ao qual ocorreu agregação das partículas, já lipossomas
sem liofilização (LEM) apresentaram tamanho ótimo, Tabela 1, de acordo com Frézard, et al. (2005),
que afirma que o diâmetro médio dos lipossomas varia de 20 a 5000 nm.

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Os resultados estão de acordo, Tabela 1, com outros trabalhos, onde foi relatada uma
distribuição de tamanho semelhante a 200 nm para lipossomas utilizados no encapsulamento de
extratos fenólico (Assis et al., 2014), Machado et al. (2014a) avaliou o tamanho médio e índice de
polidispersão dos lipossomas que passaram pelo processo de homogeneização e sonicação, e
verificou que a aplicação do homogeneizador ou de ultra-sons não apresentou diferenças na obtenção
de lipossomas de tamanho nanométrica, no entanto, verificaram que lipossomas produzidos através
do processo de sonicação, têm um tamanho médio menor (279,53 nm) em comparação com
lipossomas que foram submetidos a homogeneização (303,97 nm).
Com relação ao índice de polidispersão, que fornece informações sobre a homogeneidade da
distribuição de tamanho, de acordo com a Tabela 1, foi elevado (> 0,3) para lipossomas liofilizados
indicando a formação de sistemas polidispersos, porém dentro do padrão para lipossoma sem
liofilização (NEMEN, SENNA, 2011).
Observou-se conforme a Tabela 1, que a lecitina promoveu a diminuição do potencial zeta,
ou seja, carga superficial das partículas, quando adicionada em sua forma líquida e sem liofilização,
sendo que este parâmetro deve possuir um valor, em módulo, maior que 30 mV (MALVERN, 2014).
Os valores estão em conformidade com outros trabalhos, com formação de cargas negativas
devido à presença de lecitina (Assis et al., 2014). ζ-potencial pode ser alterado de acordo com a
composição de fosfolipídios de cada lecitina. Neste estudo, foi utilizada fosfatidilcolina (PC), que é
considerado fosfolipídeo zwitteriônico ou carga zero, com (colina) e um grupo negativo (fosfato)
(Machado et al., 2019).
Em comparação aos estudos de Machado et al. (2019), onde verificaram que os lipossomas
apresentam valores de ζ-potencial de −18,40 e - 46,73 mV para lipossomas de arroz e lecitina de soja,
respectivamente. Os valores negativos do potencial zeta podem ser explicados pela presença do ácido
fosfatídico na soja usada na produção de lipossomas.

4 CONCLUSÃO
Constatou-se que os lipossomas oriundos do extrato aquoso liofilizado de mangaba
obtiveram- se tamanhos maiores em relação aos não liofilizados, devido à agregação das partículas
provocadas neste processo, sendo ineficiente a adição do método sob as vesículas lipídicas quando
não há a utilização de crio protetores. No entanto, para os lipossomas contendo extrato aquoso não
liofilizado de mangaba obtiveram-se nano vesículas lipídicas resultando grande potencial de
aplicação em alimentos.

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AGRADECIMENTOS

Ao Laboratório de Engenharia de processos, Universidade estadual de Campinas (UNICAMP) e ao

Instituto Federal Goiano Campus Rio Verde que tornou possível a realização da pesquisa.

FINANCIADORES
CAPES, IF Goiano.

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