Prática de Competências 08 - Imunoensaios com reagentes Marcados
ompreender o funcionamento dos ensaios imunológicos com reagentes marcados por meio da confecção de mapas conceituais ou
Primários ou marcados: detectam a interação direta entre antígeno e anticorpo:
Radioimunoensaio
Preparamos tubos contendo anticorpos primários para os
antígenos, adicionamos uma quantidade exata de antígenos
marcados radioativamente que irá se ligar especificamente Ah
esses anticorpos, ocupando os sítios de ligação.
Em seguida adicionamos antígenos não marcados de
concentração e não informada (idênticos aos antígenos
radioativos com exceção a radioatividade que eles não
possuem).Portanto torna-se uma competição pelo sítio de
ligação entre esses dois antígenos.
Após a separação fazemos as medidas de ambas frações por
meio de um equipamento que nos informa a relações de
intensidade de radiação na fração ligada e livre:
Quanto maior a radiação em fração ligada, maior será a
concentração de antígenos marcados e ligados anticorpos,
consequentemente indica que a concentração de antígenos não
marcados na amostra é baixa. Porém, quanto maior a radiação
da fração livre menor vai ser a concentração de antígenos
marcados ligados ao anticorpo, sendo assim indica que a
concentração de antígenos não marcados na amostra é alta.
diagramas de funcionamento dos testes.
Laryssa R Oliveira
RA004201902816
ELISA
Imunofluorescência
Utilizam-se anticorpos marcados com corantes fluorescentes para
revelar a formação de imunocomplexos vírus-anticorpo. Os
anticorpos marcados são chamados de conjugados. Em uma placa colocamos o antígeno, ao colocarmos
·DIRETA o reagente e houver a ligação de antígeno ?
O anticorpo específico marcado com Fluorocromos (Substância que anticorpo, vamos utilizar em seguida uma solução de
absorvem luz UV e emitem luz visível, ficam fluorescentes) é lavagem e retiramos os anticorpos que não se
adicionado e se liga ao antígeno, formando um imunocomplexo ligaram.
estável.Os anticorpos que não se liga são removidos por lavagens, Em seguida adicionamos um anticorpo conjugado
os demais são observados em microscópio. (anticorpo+enzima) para se ligar ao anticorpo do
Essa técnica tem uma alta especificidade e sensibilidade, permitindo paciente, repete-se a lavagem. Ao adicionarmos o
a detecção de proteínas intracelulares e sua localização. substrato convertido pela enzima obtivemos uma
Aplicado em pesquisa de microrganismos em secreções, coloração proporcional á quantidade de anticorpo.
fenotipagem de células tumorais. Essa reação analisamos no aparelho que lê a
·INDIRETA intensidade da cor que é proporcional a quantidade de
Prepara-se a célula ou tecido do antígeno que buscamos com o anticorpo do reagente do paciente.
anticorpo especifico obtido (usada para identificar antígeno ou
anticorpos), formando um imunocomplexo. Em seguida realizamos a
lavagem para a retirada de anticorpos não ligante, incubamos com
um conjugado de anti-imunoglobulina marcado com fluorocromo.
Observamos no microscópio o diagnóstico sorológico de várias
doenças infecciosas como hepatites, chagas como também é
utilizado na medicina veterinária.