• PROCESSOS BIOTECNOLÓGICOS – Produção de enzima por

fermentação sólida
•Fungo •Meio de crescimento
•Método de detecção do
metabólito produzido

•Nutrientes (micro e
macro)
•Indutores síntese
•Temperatura A espectrofotometria e uma técnica muito
utilizada para se determinar a
•pH concentração de uma substância em uma
amostra.
•Umidade
Esta técnica depende da propriedade de
absorção de luz da substância a ser
analisada.
É um método colorimétrico
Utilizam - se reagentes para formação de complexos
coloridos na amostra
•Produção de enzima

•Tanase
 Éster
Tanase (entre o grupo anel aromático e o
resíduo de glicose)
OH O O OH
• Tanases são caracterizadas OH C O O O C OH
por sua atividade em OH C O O
OH
OH
O O
complexos polifenólicos. OH O C OH
O O
C O
C OH
•Substratos: epicatequina galato, OH

epigalocatequina galato, ácido O O O

OH
OH
C
tânico . OH OH C O

OH

OH OH OH
OH OH Depsídica
(entre os anéis
aromáticos)
CH2OR1 COOH CH2OH
O Tanase O
OR2 9 1 OH
+
OR2 OR2 OH OH
OR2 OH OH OH
OH
Ácido tânico Àcido gálico Glicose

Fig 3. Hidrólise ác. tânico

 Atividade de
tanase
I ncubação ( 10mi n - 60º C )
E nzi ma + subst rat o
Definição da unidade:
Quantidade de ácido
tânico hidrolisado por mL
de enzima por minuto de P aral i sação B S A
reação

C ent ri f ugação ( 10000 rpm - 15 mi n)

OH O O OH

OH C O O O C OH

C O O
OH OH OH
O O
O C OH
OH
O O
C
OH
OH
S D S - t ri et anol ami na + FeC3l ( 15 mi n)
O O
C
OH OH

OH

OH OH

A bsorbânci a 530
nm
 Leitura em nanômetros (nm)

•c
Espectro leituras: 0 – 1 nm

•ABS Reação: 0,186 nm

•ABS Controle: 0,350 nm

•No espectro: Lei de Lambert-Beer

•relaciona a absorção de luz com as
propriedades do material atravessado por
esta.
 •Curva de calibração

Concentração ABS
(mg) (530nm)
0 0
1 0,16
2 0,4
3 0,53
4 0,56
5 0,89
6 0,8
7 1,13
•Correlação linear
•Coeficiente de
determinação (R²)
•R² varia entre 0 e 1
•Equação da reta ponto 1,2
 •Realizando o cálculo

Controle (nm) Teste (nm) ABS(final) Valor X

0,350 0,186 0,164 0,172287

1,2

y = 0,1568x
1
R² = 0,9863
0,8
ABS (530 nm)

0,6

0,4

0,2

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Ácido tânico (mg)