MICRORGANISMOS E

BIOTECNOLOGIA
 1. Introdução

Microrganismos como elementos-chave

em processos biotecnológicos

Microbiologia industrial = otimização de certas

reações para produção de
compostos de interesse

Biotecnologia = microrganismos normalmente

geneticamente modificados visando a
produção de produtos que normalmente eles
não são capazes de produzir
 1. Introdução

Biotecnologia é apenas
transformação genética ?
 1. Introdução
Tratamento de
efluentes
Transformação
genética

Biocombustíveis
Biotecnologia
Biorremediação

Alimentos

Produção de compostos:
enzimas, antibióticos, aa,
hormônios, vacinas, etc.
 2. Microbiologia Industrial
2.1. Principais organismos

Fungos = leveduras e filamentosos

Actinobacterias = Streptomyces

2.2. Características dos microrganismos empregados em processos

biotecnológicos:

* Crescer in vitro
* Crescer em larga escala
* Não ser fastidioso
* Crescer mesmo em condições subótimas
* Ser de fácil manutenção
* Não ser patogênico
* Ser facilmente manipulável e geneticamente estável
2. Microbiologia Industrial
 2. Microbiologia Industrial

2.3. Produtos
❖ As próprias células microbianas: alimentos ou agentes
imunizantes (leveduras)

❖ Moléculas de alto PM: enzimas (glicose isomerase – xaropes)

❖ Produtos metabólitos primários (produzidos durante a fase

exponencial de crescimento): p. ex. vitaminas

❖ Produtos metabólitos secundários (produzidos durante a fase

final de crescimento): ex. antibióticos, esteróides, alcalóides, etc.

❖ Produção de químicos especiais: aspartame, etc.

❖ Compostos químicos de conveniência: etanol, ácido cítrico, etc.

 2. Microbiologia Industrial

Metabolismo secundário: penicilina por Metabolismo primário: álcool por leveduras

Penicillium chrysogenum
 2. Microbiologia Industrial

2.4. Processos
❖ Produção de fármacos: antibióticos, esteróides, insulina

❖ Produção de químicos valiosos: solventes, enzimas

❖ Produção de suplementos alimentares: probióticos, etc.

❖ Produção de bebidas alcoólicas: cerveja, vinho, destilados, etc.

❖ Produção de vacinas (principalmente antivirais)

❖ Controle biológico de pragas e doenças: B. thuringiensis, Beauveria, etc.

❖ Uso de microrganismos na mineração e na indústria do petróleo

❖ Biorremediação/fertilidade dos solos: micorrizas, FBN, etc.

3. Produtos para a indústria alimentícia

3.1. Leveduras como alimento e suplemento alimentar

A grande maioria Saccharomyces cerevisae

Produzidas em tanques de fermentação (40 a 200 mil litros)
Levedura ativa desidratada: fermentos
Levedura nutricional (morta e seca): rica em vitamina B e proteínas
3. Produtos para a indústria alimentícia
3. Produtos para a indústria alimentícia

3.2. Microrganismos na produção de vinhos

Leveduras selvagens e leveduras cultivadas (S. ellipsoideus)

Fermentadores de até 200 mil litros (carvalho, cimento, pedra, vidro)
Vinho branco, tinto e rose
Sulfitos (Na2S2O5) para eliminar leveduras selvagens que podem conferir
sabores indesejáveis ao produto
Fermentação malolática (ácido málico) com produção de ácido lático,
diacetil e acetoína que dão sabor amanteigado ao produto:
Lactobacillus
Pediococcus
Oenococcus
Enterococcus
 3. Produtos para a indústria alimentícia
3.3. Microrganismos na produção de cervejas

A partir de grãos maltados: grãos de cevada germinados (enzimas que

que digerem o amido convertendo-o em açúcar – Rhizopus ou germinação)
Maceração dos grãos
Cozimento: desativar enzimas, proteínas e aminoácidos (1 hora a 65-67 ºC)
Adição de lúpulo (aromatizante e antimicrobiano)
Fervura para liberar ação do lúpulo e término da coagulação de proteínas
Filtragem
Resfriamento
Fermentação:
alta fermentação: leveduras em todo o mosto (ales) – S. cerevisae
baixa fermentação: no fundo do tanque (cervejas claras) – S. carlsbergensis
Filtragem
3. Produtos para a indústria alimentícia
3. Produtos para a indústria alimentícia
3. Produtos para a indústria alimentícia
3.4. Microrganismos na produção de bebidas alcoólicas destiladas

Aquecimento de líquido fermentado com volatilização do álcool = álcool

condensado via destilação
Qualquer produto fermentado pode ser destilado, gerando produtos
distintos:
Uisque: destilado de bebidas maltadas
Conhaque: destilado de vinho
Rum: destilado de melaço
Vodca: destilado de grãos ou batata
Gim: destilado de grãos de junípero
Envelhecimento remove certos compostos da fermentação (sabores
indesejados) e confere colorações aos destilados
3. Produtos para a indústria alimentícia
3.5. Microrganismos na produção de vinagre

Álcool etílico ácido acético

Acetobacter e Gluconobacter
A partir de qualquer produto que tenha etanol: vinho, cerveja, arroz, maçã
Usado como conservante: carnes, picles, etc.
O processo é dependente de O2
Existem vários técnicas:
Tonel aberto: vinho exposto ao ar (camada limosa de bactérias na
superfície do substrato), pouco eficiente
Gotejamento: gotejamento do líquido alcoólico em substratos como
madeira
Borbulhamento: fermentação submersa com aeração
3. Produtos para a indústria alimentícia
3. Produtos para a indústria alimentícia
3.5. Microrganismos na produção de vinagre

Álcool etílico ácido acético

Acetobacter e Gluconobacter
A partir de qualquer produto que tenha etanol: vinho, cerveja, arroz, maçã
Usado como conservante: carnes, picles, etc.
O processo é dependente de O2
Existem vários processos:
Tonel aberto: vinho exposto ao ar (camada limosa de bactérias na
superfície do substrato). Pouco eficiente
Gotejamento: gotejamento do liquido alcoólico em substratos como
madeira
Borbulhamento: fermentação submersa com aeração
3. Produtos para a indústria alimentícia
 4. Produtos para a indústria
4.1. Microrganismos na produção de etanol

50 bilhões de litros produzidos anualmente

Milho, cana-de-açúcar, trigo, beterraba, cavacos de madeira, etc.

Celulose a glicose = fermentada a etanol

Saccharomyces, Kluyveromyces, Candida, etc.

Solvente industrial e suplemento de gasolina
Reduz a emissão de monóxido de carbono e óxidos de nitrogênio
Composto energeticamente caro: necessita-se de 25% a mais de E para
produzir um litro de etanol do que a energia contida no próprio etanol
 5. Fermentadores industriais
5.1. Fermentações em larga escala

Tamanhos variados: poucos litros até 3 milhões de litros

Divididos em:
Aeróbios: mais complexos, com equipamentos que garantam a
homogeneização e aeração adequadas
Anaeróbios: mais simples, somente com necessidade de equipamento
para dissipação do calor produzido

Fermentadores aeróbios:
Necessidade de difusão do oxigênio no líquido
Necessidade de controle de pH, concentração de O2, temperatura,
massa celular, níveis de nutrientes e concentração do produto
Automação do processo
 6. Outros produtos industriais

Produto
Produto Microrganismo
Microrganismo Uso Uso

Acetona e butanol C. acetobutylicum Solventes, fabricação de

e outros clostrídios produtos químicos
2,3-Butanediol Bacillus polymyxa; Solvente, hidratantes,
Enterobacter aerogenes intermediários químicos
Bactérias Ácido 2-cetoglucônico Pseudomonas spp. Intermediário na fabri-
cação de ácido isoascór-
bico (vitamina C)
Sorbose Gluconobacter oxydans Fabricação de ácido
ascórbico (vitamina C)
Ácido cítrico Aspergillus niger Alimentos e bebidas,
cosméticos, couro
Ácido glucônico Aspergillus niger Alimentos, clarificadores
Fungos Ácido itacônico Aspergillus terreus Fabricação de resinas acrílicas
Ácido fumárico Rhizopus nigricans Fabricação de resinas
 7. Produtos ligados a saúde

7.1. Antibióticos

1941 – nenhuma indústria de antibióticos

1951 – 344 milhões de U$ por ano
1980 – 100.000 toneladas com vendas superiores a
1 bilhão de U$/ano somente nos EUA
2011 – > 20 bilhões de U$/ano
2014 – alguns atingiram a marca de U$ 10 bilhões

Custo de produção de um antibiótico: 1,2 bilhões de U$

e cerca de 15 anos até a comercialização
Isolamento e
seleção de
microrganismos
produtores de
antibióticos
 7. Produtos ligados a saúde
7.1. Antibióticos

Isolamento das estirpes

Testes de eficácia e ausência de toxicidade
Seleção das estirpes mais produtivas
Modificação genética (algumas vezes necessária)
Produção em fermentadores
Extração dos compostos antimicrobianos:
Utilização de solventes orgânicos para extração
Adsorção em superfícies inócuas
Precipitação química
Purificação
Testes continuados para busca de estirpes cada vez mais eficientes
 Alguns antibióticos produzidos comercialmente
Antibiótico Microrganismo Produtor
Bacitracina Bacillus licheniformis (B)
Cefalosporina Acremonium sp. (F)
Cloranfenicol Síntese química: anteriormente produzido
via síntese microbiana por S. venezuelae (A)

Cicloheximida Streptomyces griseus (A)

Cicloserina Streptomyces orchidaceus (A)
Eritromicina Streptomyces erithreus (A)
Griseofulvina Penicillium griseofulvin (F)
Kanamicina Streptomyces kanamyceticus (A)
Neomicina Streptomyces fradiae (A)
Nistatina Streptomyces noursei (A)
Penicilina Penicillium chrysogenum (F)
Polimyxina B Bacillus polimyxa (B)
Estreptomicina Streptomyces griseus (A)
Tetraciclina Streptomyces rimosus (A)
 7. Produtos ligados a saúde

7.2. Enzimas

Catalisadores: aceleram atividades bioquímicas

Utilizadas como suplementos nutricionais
Produzidas por fungos e bactérias
Exemplos:

Amilases: adesivos, sucos, detergentes

Invertases (glicose a frutose): cremes, xaropes (refrigerantes)

Proteases: couro, seda, detergentes

Pectinases: sucos
 7. Produtos ligados a saúde
7.3. Vitaminas e aminoácidos

Na indústria farmacêutica
Como suplementos nutricionais
Na indústria alimentícia

7.3.1. Vitaminas

A maioria é produzida quimicamente, mas muitas são muito complexas e portanto

produzidas apenas por microrganismos
Principais:
B12:
Sintetizada exclusivamente por microrganismos
Essencial a todos os animais
Essencial no sangue (hemácias)
Não é produzida por plantas (vegetarianos)
Propionibacterium e Pseudomonas
Riboflavina: bactérias e fungos (Ashbya gossypii)
Vitamina B12
Riboflavina
 7. Produtos ligados a saúde
7.3. Vitaminas e aminoácidos

Na indústria farmacêutica
Como suplementos nutricionais
Na indústria alimentícia

7.3.1. Aminoácidos

Acido glutâmico: glutamato monossódico – intensificador de sabor

produzido por Corynebacterium glutamicum
Acido aspártico
aspartame
Fenilalanina
Fonte: Madigan et al., 2010. Microbiologia de Brock
 7. Produtos ligados a saúde
7.4. Esteróides e outras biotransformações

Hormônios animais
Utilizados como fármacos
Corticosteróides: reduzem inflamações, artrites, etc.
Estrógenos e androgênicos: usados na fertilidade humana e ganho de
massa muscular
Cortisona e hidrocortisona: usados no controle de pruridos
subcutâneos
Podem ser produzidos quimicamente, mas normalmente, pela dificuldade de
síntese, tem pelo menos uma etapa microbiana = biotransformação
 8. Transformação genética

Produtos produzidos por células geneticamente modificadas

* área da biotecnologia de maior crescimento

8.1. Insulina humana - 1º biofármaco produzido pela engenharia genética

1982 - produção nos EUA pela Eli Lilly & Co.

Microrganismo produtor: Escherichia coli com o gene humano para
produção de insulina

8.2. Vacina contra hepatite B (HBV) - 1982

Vírus não cultivável em laboratório
Proteína viral HBsAgs (antígeno)
Microrganismo: Saccharomyces cerevisiae com o gene para a
proteína

8.3. Hormônio do crescimento humano - somatotropina

1982 - E. coli recombinante com o gene
 8. Transformação genética
7.4. Vacinas

Vacinas de DNA:
porções especificas do genoma do patógeno ou genes que
codificam proteínas imunogênicas
Estes são clonadas em vetor plasmidial ou viral
Injeção destes no animal
A tradução leva à produção de proteínas de imunoresistência
Resposta imune pela proteína codificada

Exemplos:
Vacina de HIV
Vacina de hepatite B
Vacina contra cânceres
 9. Biocontrole
Bacillus thuringiensis
 10. Biomineração

* Redução das reservas mundiais

* Exploração de minérios de baixa qualidade
* Poluição causada pelos métodos tradicionais de extração

uso de microrganismos mineradores

Thiobacillus thioxidans e Thiobacillus ferroxidans

ácidos oxidação do minério precipitação

11. Perspectivas na biotecnologia

Soja, milho, algodão transgênicos resistentes a insetos e

herbicidas

Transgenia para aumentar o valor nutritivo de certos

alimentos

Transgenia para a produção de compostos de interesse

farmacêutico: interferon (proteínas de proteção),
anticorpos (planticorpos)

Vírus do tabaco e tomate modificado contendo

proteínas de superfície no controle do plasmódio
causador da malária = vacinas comestíveis