Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA

Secretaria de Defesa Agropecuária – SDA

Coordenação Geral de Apoio Laboratorial - CGAL
Manual de Métodos de Análises de Bebidas e Vinagres
Destilados DIACETIL Método 26

1 - MÉTODO
Espectrofotométrico.

2 - PRINCÍPIO
Formação do dimetiglioxima apartir do diacetil e medida colorimétrica da dimetilglioxima
ferrosa formada.

3 MATERIAL
3.1 EQUIPAMENTO
a) Espectrofotômetro.
b) Balança analítica.

3.2 REAGENTES E SOLUÇÕES

a) Solução aquosa de cloridrato de hidroxilamina a 4,4%.
b) Solução acetônica de fosfato de dipotássio (preparada anteriormente): 19 g de fosfato de
dipotássio trihidratado juntamente com 20 mL de acetona completando o volume para 100 mL
com água destilada.
c) Solução de tartarato de potássio e de sódio amoniacal (preparada anteriormente): misturar 22
volumes de uma solução saturada de tartarato de potássio e de sódio com 3 volumes de amoníaco
concentrado (cerca de 120 g por 150 mL de água destilada).
d) Solução de sulfato ferroso a 5g/100 mL em ácido sulfúrico a 1% renovada periodicamente.
e) Etanol de alta pureza (96% V/V).
f) Etanol de alta pureza (50% V/V).
g) Solução de diacetil 1%: pesar 1 g de diacetil (de alta pureza e fabricação recente) dentro de um
balão volumétrico de 100 mL e avolumar com etanol 96%.
h) Solução de diacetil 10 mg/100 mL a 100% em volume: dilui-se a solução anterior na razão de
1:200 em etanol 50 %vol.

Nota: Estas soluções devem ser conservadas em frascos âmbar ao abrigo da luz e do frio.

3.3 - VIDRARIA
a) Tubos de ensaio de 20 mL com boca esmerilhada.
b) Balão volumétrico de 100 mL.
c) Pipetas de 1, 2, 3 e 4.
d) Pipeta graduada de 1 mL.
e) Cubeta de 5 cm de caminho ótico.

4 - PROCEDIMENTO
4.1 CURVA ANALÍTICA
Dentro dos tubos de 20 mL, colocar volumes variados da solução de diacetil (h), por exemplo: 0;
0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5 e 4,0 mL. Completar a 4 mL todos os frascos com álcool 50 %vol.
Adicionar 2,4 mL da solução (a), agitar e colocar os tubos em banho-maria a 80 °C durante 10
minutos e deixar resfriar. Adicionar em cada tubo 2 mL da solução (b), agitar; adicionar 6 mL da

Edição: 1 Revisão: 0 Página 1 de 2

Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA
Secretaria de Defesa Agropecuária – SDA
Coordenação Geral de Apoio Laboratorial - CGAL
Manual de Métodos de Análises de Bebidas e Vinagres
Destilados DIACETIL Método 26

solução (c), agitar e adicionar 0,4 mL da solução (d) e agitar. Após cinco minutos medir a
absorvância.
Seguindo as instruções do manual do equipamento, ajustar o zero com o branco e fazer as leituras
a 530 nm em cubetas de 5 cm. Traçar a curva das absorvâncias contra a concentração de diacetil
em mg em 100 %vol.

4.2 AMOSTRA
Pipetar 4 mL da amostra em tubo de ensaio de 20 mL e procedendo conforme o tópico 4.1
obtêm-se o valor da absorvância da amostra.

5 - CÁLCULOS E EXPRESSÃO DO RESULTADO

Obtêm-se na curva a correspondência entre a absorvância da amostra e a concentração de
diacetil. O resultado é expresso em miligramas por litro (mg/L) da amostra.

REFERENCIA
Recueil des méthodes internationales d’analyse des boissons spiritueuses, des alcools et de la
fraction aromatique des boisssons., OIV, Juin. 1994, Paris, 311p.

Edição: 1 Revisão: 0 Página 2 de 2