Neuropsiquiatria e neurocincias na prtica clnica

Parte I
Princpios bsicos de neurocincias

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Biologia celular e molecular do neurnio

A. Kimberley McAllister, Ph.D. W. Martin Usrey, Ph.D. Arnold R. Kriegstein, M.D., Ph.D. Stephen Rayport, M.D., Ph.D.

uitos transtornos neuropsiquitricos podem ser relacionados a aberraes em mecanismos do desenvolvimento neural. Nos estgios iniciais do desenvolvimento cerebral, interaes celulares representam a fora dominante no estabelecimento de conexes no crebro. medida que os circuitos se formam, os neurnios individuais, bem como suas conexes, so refinados de um modo dependente da atividade, direcionados por sua atividade intrnseca e pela competio por fatores trficos. Em um estgio mais maduro, a experincia torna-se a fora dominante ao dar forma s conexes neuronais e ao regular sua eficcia. No crebro maduro, esses mecanismos relacionados ao desenvolvimento neural so controlados de maneira diferente e medeiam a maioria dos processos plsticos (Black, 1995; Kandel e ODell, 1992). Os transtornos neuropsiquitricos originados de problemas no desenvolvimento cerebral inicial so provavelmente gerados intrnseca ou geneticamente, enquanto os surgidos durante estgios mais tardios so provavelmente relacionados experincia. Na senescncia, processos neurodegenerativos podem desconectar circuitos neurais por mecanismos de desenvolvimento neural empregados erroneamente. A experincia to importante no ajuste fino das conexes neurais, que experincias aberrantes particularmente durante os perodos crticos do desenvolvimento podem dar origem ou exacerbar transtornos neuropsiquitricos. Por exemplo, a ocluso monocular ou o estrabismo em animais jovens ocasiona uma conectividade patolgica permanente no sistema visual (Hubel et al., 1997). Em humanos, falhas na viso conjugada durante a infncia resultam em perda visual permanente. Alteraes similares, porm mais sutis, ocorrem na infncia, durante o aprendizado. A partir de trabalhos realizados em sistemas nervosos simples de animais, tais como a lesma marinha Aplysia (Kandel, 1989), sabe-se que alteraes em conexes sinpticas codificam a memria. Aqui, tambm, experincias anormais podem alterar permanentemente o padro da conectividade neuronal. No crebro humano, estudos de imagem comeam a revelar alteraes regionais na atividade cerebral que ocorrem aps o aprendizado, sugerindo alte-

raes na fora das conexes neuronais (Pantev et al., 1998; Sadato et al., 1996). Atualmente, pode-se demonstrar que alguns transtornos neuropsiquitricos funcionais apresentam um impacto direto sobre a estrutura cerebral; por exemplo, o transtorno de estresse ps-traumtico tem sido associado a alteraes no tamanho do hipocampo (Bremner et al., 1995). Neste captulo, focalizaremos primeiro a funo celular dos neurnios e, a seguir, o modo como se desenvolvem. O ritmo dos avanos recentes nos deixa confiantes de que, em um futuro no muito distante, ser possvel intervir durante os estgios iniciais do desenvolvimento para corrigir aberraes no crescimento e na diferenciao neuronais, ou mais tardiamente para corrigir a sinalizao neuronal, dessa forma conseguindo tratamentos revolucionrios para os transtornos neuropsiquitricos.

FUNO CELULAR DOS NEURNIOS

Cada neurnio no crebro recebe sinais de milhares de neurnios, os quais, por sua vez, enviam informaes a milhares de outros neurnios. Enquanto a atividade em neurnios sensoriais perifricos pode representar pequenos pedaos de informao, a atividade das redes dos neurnios no sistema nervoso central (SNC) representa a informao sensorial integrada e associativa. Os neurnios do SNC podem ser vistos como parte de uma associao celular dinmica que troca sua participao de uma rede para outra na medida em que a informao utilizada em tarefas variadas. A sofisticao dessas redes depende tanto das propriedades dos prprios neurnios quanto dos padres e da fora de suas conexes.

Composio celular do crebro

As clulas cerebrais compreendem dois tipos principais: os neurnios e a glia. Os neurnios so o substrato para a maior parte do processamento de informaes, enquanto se acredita classicamente que a glia desempenha o papel de suporte.

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Os neurnios so clulas altamente diferenciadas que apresentam considervel heterogeneidade de forma e tamanho; na verdade, existem mais tipos de neurnios do que tipos de clulas em qualquer outra parte do corpo. Alguns deles esto entre as maiores clulas do corpo, como no caso dos neurnios motores superiores, que se projetam medula espinal lombar e apresentam axnios de um metro ou mais de comprimento; outros esto entre as menores clulas do corpo, como no caso das clulas granulares do cerebelo. Os neurnios so extremamente numerosos, e suas interconexes, chamadas sinapses, so ainda mais numerosas. O crebro humano contm entre 1012 e 1013 neurnios. Se cada neurnio forma uma mdia de 103 conexes, o que uma estimativa mnima, ento o crebro possui pelo menos de 1015 a 1016 sinapses. As clulas gliais podem ser divididas em trs classes: 1) astrcitos, 2) oligodendrcitos e 3) microglia. Os astrcitos apresentam trs funes tradicionais: fornecem o assoalho de sustentao cerebral, formam a barreira hematenceflica e guiam a migrao neuronal durante o desenvolvimento. Entretanto, existe um nmero crescente de evidncias de que as clulas astrogliais so mais dinmicas do que se suspeitava anteriormente e de que so capazes de realizar sinalizao celular a longas distncias (Dani et al., 1992; Murphy et al., 1993). Alm disso, podem influenciar a atividade neuronal, facilitar a conectividade neuronal e desempenhar um papel crtico na regulao da excitabilidade neuronal durante processos normais, bem como em estados patolgicos (Araque et al., 1999; Mennerick e Zorumbski, 1994; Nedergaard, 1994; Pfrieger e Barres, 1997). Os oligodendrcitos produzem a bainha de mielina, a qual aumenta a velocidade da conduo de potenciais de ao ao longo dos axnios. Assim, em pacientes com esclerose mltipla, resultante de um ataque imunolgico principal protena da bainha de mielina (protena bsica da mielina), ocorre uma falha na conduo do potencial de ao. As microglias so os macrfagos do crebro; via de regra, permanecem quiescentes at serem ativadas por leses neuronais.

Forma neuronal
Os neurnios compartilham uma organizao comum, a qual ditada por sua funo receber, processar e transmitir informao. O grande neuroanatomista espanhol Santiago Ramn y Cajal chamou isso de polarizao dinmica (Craig e Banker, 1994). Embora os neurnios apresentem grande diversidade de tamanhos e formas, geralmente tm quatro regies bem-definidas (Figura 11): 1) dendritos, 2) corpo celular, 3) axnio e 4) especializaes sinpticas. Cada regio apresenta funes distintas. Os dendritos recebem sinais de outros neurnios, processam e modificam essa informao e ento conduzem esses sinais ao corpo celular. Como em todas as clulas, o corpo celular contm, em seu ncleo, a informao gentica que codifica para a fabricao dos elementos necessrios funo celular e o local onde esses elementos so sintetizados, processados e transportados. O axnio transmite informao a longas distncias e ento se ramifica para formar as sinapses. As especializaes sinpticas so diferenciadas por suas conexes altamente especficas, com dendritos ps-sinpticos; os elementos-chave so a zona ativa pr-sinptica, de onde o neurotransmissor liberado, e a densidade ps-sinptica, onde esto concentrados os receptores para os neurotransmissores na membrana do dendrito ps-sinptico. A forma de um neurnio determinada por seu citoesqueleto. Os componentes essenciais do citoesqueleto so trs

Figura 11 Organizao funcional do neurnio. Os neurnios apresentam regies celulares distintas que so responsveis pela entrada, integrao, conduo e sada de informaes: os dendritos, o corpo celular, o axnio e as especializaes sinpticas, respectivamente. Neurotransmissores excitatrios e inibitrios liberados por outros neurnios induzem correntes despolarizantes ou hiperpolarizantes nos dendritos. Essas correntes convergem ao corpo celular; se a polarizao resultante suficiente para fazer com que o segmento inicial do axnio atinja o limiar, um potencial de ao iniciado. O potencial de ao percorre todo o axnio, conduzido rapidamente devido mielinizao, para atingir os terminais sinpticos. Os terminais axonais formam sinapses com outros neurnios ou com clulas efetoras, reiniciando o ciclo de fluxo de informao nas clulas ps-sinpticas. Como em todas as clulas, o corpo celular (ou pericrio) tambm onde est localizada a informao gentica do neurnio (no ncleo), sendo o principal stio de sntese de macromolculas.
Fonte: Reeditada de Kandel ER, Schwartz JHS, Jessel TM: Principles of Neural Science, 3 edio. Stamford, CT, Appleton & Lange, 1991. Utilizada com permisso.

protenas filamentosas: 1) os microtbulos, 2) a actina e 3) os neurofilamentos (Schwartz e Westbrook, 2000). Os microtbulos so compostos de subunidades de tubulina e formam feixes que se estendem ao longo dos principais processos neu-

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ronais; so estabilizados por protenas associadas aos microtbulos. Os microtbulos so os principais componentes do citoesqueleto do dendrito, enquanto os neurofilamentos so os principais componentes do citoesqueleto axonal. Os neurofilamentos so muito mais estveis do que os microtbulos. Os neurofilamentos agregam-se patologicamente na doena de Alzheimer, formando os emaranhados neurofibrilares. Os filamentos de actina, juntamente com vrias protenas que se ligam actina, formam uma densa rede concentrada logo abaixo da membrana celular, a qual fornece a fora motora para a plasticidade da estrutura axnica e dendrtica. Alm de seu essencial papel estrutural, o citoesqueleto medeia o trfego intracelular de protenas e de organelas ao axnio e aos dendritos (Burack et al., 2000). Assim, defeitos no citoesqueleto causam devastadores danos neuronais; prejuzos no transporte axonal e dendrtico no apenas interferem na sinalizao neuronal, como freqentemente resultam em morte celular.

Excitabilidade neuronal
Os neurnios so capazes de transmitir informao porque so eltrica e quimicamente excitveis. Essa excitabilidade conferida por vrias famlias de canais inicos que so seletivamente permeveis a ons especficos e regulados por voltagem (canais ativados por voltagem), por ligao com o neurotransmissor (canais ativados por ligantes) ou por presso ou estiramento (canais ativados mecanicamente) (Hille, 1992). Em geral, os canais inicos neuronais conduzem ons atravs da membrana citoplasmtica de forma extremamente rpida 100 milhes de ons podem passar atravs de um nico canal inico em um segundo. Esse intenso fluxo de corrente provoca rpidas alteraes no potencial de membrana e a base para o potencial de ao, o mecanismo biofsico para passagem de informao dentro dos neurnios, e para respostas sinpticas rpidas, o substrato para transferncia de informao entre os neurnios. Como seria esperado, diversas doenas devastadoras resultam de defeitos nos canais inicos. Por exemplo, na paralisia peridica hipercalmica, a rigidez e a fraqueza muscular que se seguem ao exerccio so causadas por uma mutao pontual nos canais inicos de Na+ ativados por voltagem; a ataxia episdica resulta de vrias mutaes pontuais em um canal de K+ ativado por voltagem retificador tardio, e a miastenia grave resulta de um ataque imunolgico aos receptores de acetilcolina nicotnicos (Koester e Siegelbaum, 2000). Canais ativados por ligantes costumam ser alvo de drogas psiquitricas e anestsicos, bem como de neurotoxinas. Os neurotransmissores liberados por um neurnio (a clula pr-sinptica) em uma sinapse ativam receptores (canais ativados por ligantes) em dendritos de um outro neurnio (a clula ps-sinptica) e induzem o fluxo inico atravs da membrana. Os sinais eltricos resultantes espalham-se passivamente por certa distncia, freqentemente atingindo o corpo celular dessa maneira. Alm das condutncias passivas, mecanismos regenerativos localizados, similares queles que do origem ao potencial de ao (discutido mais adiante nesta seo), amplificam os sinais que entram no dendrito, potencializando-os de modo que atinjam o corpo celular (Eilers e Konnerth, 1997; Yuste e Tank, 1996). No corpo celular, esses sinais sinpticos combinam-se e, se forem suficientes, despolarizam o segmento inicial do axnio, ou o hilo axonal, parte do axnio mais prxima ao corpo celular e que apresenta o menor limiar para ativao. Quando o nvel do limiar de despolarizao atingi-

do, o potencial de ao iniciado. O potencial de ao uma onda eltrica que se propaga ao longo do axnio. Nos terminais axonais, essa onda desencadeia um influxo de clcio (Ca2+), o que leva exocitose dos neurotransmissores das vesculas sinpticas em reas especializadas, chamadas de zonas ativas. O neurotransmissor liberado atravessa a fenda sinptica e ativa receptores na densidade ps-sinptica nos dendritos da clula ps-sinptica. Por fim, esse fluxo de informao atinge clulas efetoras, principalmente fibras motoras que medeiam o movimento e que, portanto, geram comportamentos. A habilidade dos neurnios de gerar um potencial de ao deriva da presena de fortes gradientes inicos ao longo da membrana; o sdio (Na+) e o cloreto (Cl) so altamente concentrados do lado de fora da membrana, enquanto o potssio (K+) altamente concentrado do lado de dentro. Esses gradientes so gerados por uma ao contnua das bombas da membrana, as quais obtm energia da hidrlise de adenosina trifosfato (ATP). Tambm na membrana esto os canais inicos ativados por voltagem, que regulam o fluxo dos ons Na+, K+ e Ca2+ atravs da membrana. Em repouso, os canais de K+ e Cl esto abertos, de modo que os gradientes de K+ e Cl determinam o potencial de membrana, fazendo com que a clula seja negativa do lado de dentro, com valores que variam entre 50 e 75 mV. Entretanto, se a membrana despolarizada, ultrapassando o potencial limiar para a gerao de um potencial de ao, os canais de Na+ ativados por voltagem abrem-se rapidamente. Devido ao fato de que o influxo de Na+ despolariza a membrana, isso confere uma propriedade regenerativa uma vez que o potencial limiar atingido, o aumento no influxo de Na+ leva despolarizao, o que abre mais canais de Na+, aumentando, por sua vez, ainda mais o influxo de Na+, e assim consecutivamente. Portanto, uma vez que o limiar atingido, o potencial de membrana sobe muito rapidamente para +50 mV. O potencial de membrana permanece despolarizado apenas por um tempo de cerca de um milissegundo, j que os canais de Na+ apresentam uma inativao dependente de tempo (Figura 12). Ao mesmo tempo, canais de K+ dependentes de voltagem, os quais tambm so ativados pela despolarizao, mas em uma velocidade mais baixa, aumentam sua permeabilidade (Figura 12). Devido ao fato de o on K+ fluir a favor do seu gradiente de concentrao para fora da clula, juntamente com a reduo na corrente de Na+, ocorrer a repolarizao da membrana. Dessa forma, o potencial de membrana atinge seu pico a um nvel de despolarizao determinado pelo gradiente de Na+ e ento rapidamente retorna ao potencial de repouso, determinado pelo gradiente de K+. Uma vez repolarizada, a inativao do Na+ termina (o tempo que isso leva para acontecer indica o perodo refratrio do neurnio um breve perodo no qual o limiar para disparar um potencial de ao elevado ))e ento a clu elevado e la pode disparar novamente. novamente. A propriedade regenerativa do potencial de ao no apenas serve para amplificar os potenciais limiares (sua principal funo nos dendritos), mas tambm para dar capacidade de sinalizao a longas distncias ao axnio (Figura 13). Quando o potencial de membrana atinge seu pico, sob o comando do aumento da permeabilidade ao Na+, regies adjacentes do axnio tornam-se suficientemente despolarizadas, de maneira que so levadas, por sua vez, ao limiar, e geram um potencial de ao. medida que segmentos axonais sucessivos so despolarizados, o potencial de ao conduzido com grande velocidade ao longo do axnio. Isso potencializado pela mielinizao, que aumenta vrias vezes a velocidade de conduo, pois restringe o fluxo de corrente necessrio para a conduo

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segundos-mensageiros tambm podem afetar profundamente a atividade ou a propriedade de resposta dos neurnios, levando a um repertrio ainda maior de funcionamento de neurnios individuais. Portanto, estmulos sinpticos podem no apenas evocar uma resposta em um neurnio ps-sinptico, mas tambm dar forma a padres de disparo intrnsecos, fazendo com que a clula altere de um modo de atividade a outro, ou modulando respostas a outros estmulos sinpticos.

Sinalizao entre neurnios

Os neurnios comunicam-se uns com os outros em locais especializados de grande proximidade de aposio da membrana chamados sinapses. O prottipo de sinapse axodendrtica conecta um terminal axnico pr-sinptico a um dendrito pssinptico. Esse arranjo tpico para neurnios de projeo que transmitem informao de uma regio a outra do crebro. Em contrapartida, interneurnios de circuitaria local interagem com neurnios vizinhos. Enquanto os interneurnios podem apresentar conexes axodendrticas e axossomticas, eles tambm podem formar vrios outros tipos de contatos sinpticos que aumentam de forma significativa sua sofisticao funcional (Figura 15). Em alguns casos, dendritos podem fazer contatos sinpticos com dendritos (conexes dendrodendrticas), ou corpos celulares com corpos celulares (conexes somatossomticas), formando circuitos neurais locais que transmitem informao sem disparar o potencial de ao. Axnios podem formar sinapse em terminais axnicos de outros axnios (conexes axoaxnicas) e modular a liberao de neurotransmissores mediante a inibio ou a facilitao pr-sinptica. Alguns neurnios podem funcionar como interneurnios e como neurnios de projeo, sendo o exemplo mais importante os neurnios GABArgicos (cido -aminobutrico, GABA) mediais espinhosos do estriado, os quais constituem aproximadamente 95% dos neurnios dessa regio (A.D. Smith e Bolam, 1990). Uma minoria das conexes locais mediada por sinapses eltricas, que no requerem neurotransmissores qumicos. As sinapses eltricas so formadas por canais compostos de multissubunidades, chamados de junes comunicantes, os quais ligam o citoplasma de clulas adjacentes (Bennett et al., 1991), permitindo que pequenas molculas e ons carregando sinais eltricos fluam diretamente de uma clula a outra. Sinapses eltricas conectam dendritos ou corpos celulares de clulas adjacentes do mesmo tipo, tipicamente dendritos a dendritos ou corpos celulares a corpos celulares. A capacidade de passagem de pequenas molculas entre as clulas, incluindo segundos-mensageiros, importante durante o desenvolvimento embrionrio para estabelecer gradientes morfognicos (Dealy et al., 1994) e durante o desenvolvimento inicial do crebro para regular a proliferao celular e estabelecer padres de conectividade (Kandler e Katz, 1995). No SNC maduro, sinapses eltricas agem para sincronizar a atividade eltrica de grupos de neurnios e mediar a transmisso de alta freqncia de sinais (Bennett, 1977; Brivanlou et al., 1998; Tamas et al., 2000). As clulas gliais tambm so conectadas por junes comunicantes que ligam essas clulas, formando um grande sinccio e fornecendo avenidas para propagao intercelular de sinais qumicos mediados por pequenas molculas e por ons, tais como o Ca2+ (S.J. Smith, 1994). A importncia das junes comunicantes para a funo das clulas gliais enfatizada pelo fato de que a forma ligada ao X da doena de Charcot-MarieTooth causada por uma simples mutao no gene da conexina necessrio para a formao das junes comunicantes

Figura 12 A abertura de canais inicos d origem ao potencial de ao. O potencial de ao composto primariamente de duas correntes: a de sdio (Na+) e a de potssio (K+). Uma vez que o neurnio atinge o limiar para o disparo do potencial de ao, canais de sdio dependentes de voltagem abrem-se, dando incio rpida corrente de entrada de Na+ e rpida fase de aumento no potencial de ao. Em seguida, os canais de Na+, que so rapidamente inativados em potenciais despolarizados, encurtam a durao da corrente de Na+ e, portanto, contribuem para a fase de queda no potencial de ao. A corrente de sada de K+ tambm contribui para a fase de queda do potencial de ao, j que os canais de K+ so lentos para abrir, mas permanecem abertos por mais tempo do que os de Na+. Abreviaes: ENa e EK = potenciais reversos para Na+ e K+, respectivamente.
Fonte: Reeditada de Kandel ER, Schwartz JH, Jessel TM: Principles of Neural Science, 4 edio. New York, Mcgraw-Hill, 2000, p.158. Utilizada com permisso.

do potencial de ao aos espaos localizados entre os segmentos da mielina aos ndulos de Ranvier (Figura 13). Devido s suas caractersticas de tudo-ou-nada e sua habilidade em ser conduzido por longas distncias, o potencial de ao confere ao neurnio um mecanismo de sinalizao digital de alta qualidade. Embora a informao integrada por um neurnio venha da entrada sinptica, a maneira como o neurnio processar essa informao depende de suas propriedades intrnsecas (Llins, 1988). Muitos neurnios no SNC possuem a capacidade de gerar seus prprios padres de atividade na ausncia de entrada de informao sinptica, disparando a uma taxa regular (disparo marca-passo) ou em grupamentos de picos (disparo em rajada) (McCormick e Bal, 1997). Essa atividade endgena comandada por canais inicos especializados, os quais apresentam dependncia de voltagem e tempo prprios, periodicamente levando o segmento inicial do axnio ao seu limiar. Esses canais podem ser modulados pelo potencial de membrana da clula ou por sistemas de segundos-mensageiros. Alm disso, neurnios do SNC podem ser alterados profundamente na maneira como respondem a um dado estmulo sinptico em funo de pequenas alteraes no potencial de repouso (Llins e Jahnsen, 1982; Sherman, 1996) (Figura 14). Por exemplo, um neurnio talmico dispara como marca-passo quando estimulado a partir de nveis levemente despolarizados, enquanto dispara em rajadas de pontecial de ao quando estimulado a partir de nveis hiperpolarizados. Alteraes nos nveis de

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Figura 13 Conduo do potencial de ao. Painel A. Representao esquemtica de um axnio mielinizado. Os oligodendrcitos produzem a bainha de mielina que reveste os axnios. A mielina previne o vazamento de corrente entre os ndulos de Ranvier (local onde h concentrao de canais de Na+), aumentando, portanto, a velocidade de conduo do potencial de ao. Painel B. Devido ao fato de os canais de Na+ serem ativados pela despolarizao da membrana e tambm induzirem despolarizao, eles tm propriedades regenerativas. Isso no responsvel apenas pelas propriedades de tudo-ou-nada do potencial de ao, mas tambm explica a rpida propagao do potencial de ao ao longo do axnio. O potencial de ao uma onda eltrica, como mostrado nesta figura. medida que cada segmento do axnio despolarizado, despolariza o segmento subseqente, levando a alteraes na corrente local produzida pela iniciao do potencial de ao em stios especficos, como mostrado em detalhe no Painel C. Painel C. O fluxo de ons Na+, responsvel pelo potencial de ao, mostrado em trs imagens sucessivas a intervalos de 0,5 milissegundos (ms) e corresponde aos traos de correntes observados no Painel B. medida que o potencial de ao propagado para a direita, os canais de Na+ fechados vo sendo abertos e, em seguida, inativados e fechados novamente. Dessa forma, um potencial de ao iniciado no segmento inicial do axnio conduzido at o terminal axonal. Devido inativao dos canais de Na+ e ativao dos canais de K+, h um perodo refratrio aps o potencial de ao, razo pela qual a conduo procede em apenas uma direo.
Fonte: Reeditada de Purves D, Augustine GJ, Fitzpatrick D et al., (eds): Neuroscience. Sunderland, MA, Sinauer Associates, 1997, p.67. Utilizada com permisso.

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Figura 14 Propriedades intrnsecas determinam as respostas neuronais. Muitos neurnios do SNC respondem de formas diferentes aos mesmos estmulos, dependendo do seu nvel de despolarizao. Painel A. Neurnios talmicos geram espontaneamente disparos de potencial de ao, resultantes da interao entre uma corrente marca-passo e uma corrente de Ca2+. A despolarizao desses neurnios altera seu disparo para um modo tnico. Painel B. Disparos de potenciais de ao a uma maior resoluo de tempo a partir do traado do Painel A. Painel C. Maior resoluo de tempo das correntes do modo tnico do painel A. Abreviaes: Ih e IT = as correntes atravs de canais ativados pela hiperpolarizao e por canais de clcio do tipo T, respectivamente.
Fonte: Reeditada de McCormick DA: Membrane Potential and Action Potential, em Fundamental Neuroscience. Editado por Zigmond MJ, Bloom FE, Landis SC, et al., San Diego, CA, Academic Press, 1999, p.150. Utilizada com permisso.

entre as clulas de Schwann (revisado em Schenone e Mancardi, 1999). A maioria das conexes sinpticas no SNC mediada por neurotransmissores qumicos. Embora as sinapses qumicas sejam mais lentas do que as eltricas, permitem a amplificao do sinal, podem ser inibitrias ou excitatrias, so suscetveis a uma ampla faixa de modulao e podem modular as atividades de outras clulas atravs da liberao de transmissores que ativam cascatas de segundos-mensageiros. Existem duas classes principais de neurotransmissores no sistema nervoso: pequenas molculas transmissoras e neuropeptdeos. Em geral, as pequenas molculas transmissoras medeiam a transmisso sinptica rpida, so armazenadas em vesculas sinpticas pequenas e claras e incluem o glutamato, o GABA, a glicina, a acetilcolina, a serotonina, a dopamina, a norepinefrina, a epinefrina e a histamina. Os mecanismos celulares e moleculares de liberao dessas vesculas sinpticas sero descritos em seguida. Em contrapartida, os neuropeptdeos representam uma grande famlia de neurotransmissores que modulam a transmisso sinptica, so armazenados em grandes vesculas den-

sas e incluem a somatostatina, os hormnios liberadores hipotalmicos, as endorfinas, as encefalinas e os opiides. interessante notar que as pequenas molculas transmissoras e os neuropeptdeos so freqentemente liberados pelo mesmo neurnio e podem agir em conjunto sobre o mesmo alvo (Hkfelt et al., 1984). As pequenas molculas transmissoras so armazenadas em grnulos claros e pequenos delimitados por membrana, denominados de vesculas sinpticas (Figura 16). Cada vesculas sinptica contm vrios milhares de molculas de neurotransmissores. Quando um potencial de ao pr-sinptico invade a regio terminal, canais de Ca2+ dependentes de voltagem so ativados (Figuras 16 e 17). O subseqente influxo de Ca2+ provoca um grande aumento na concentrao de Ca2+ prximo zona ativa, o que promove a fuso da vescula sinptica e a liberao do neurotransmissor, a qual chamada de exocitose. O neurotransmissor ento se difunde em uma curta distncia pela fenda sinptica e se liga aos receptores ps-sinpticos. A dinmica e a modulao da transmisso sinptica so fundamentais para alteraes nas conexes sinp-

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Figura 15 Modos de intercomunicao neuronal. Painel A. Diferentes padres de conexo ditam como a informao flui entre os neurnios. Na divergncia sinptica, um neurnio (a) pode disseminar informao a vrias clulas ps-sinpticas (b-f) ao mesmo tempo. Alternativamente, no caso da convergncia sinptica, um nico neurnio (d) pode receber estmulos de vrios neurnios prsinpticos (a-c). Na inibio pr-sinptica, um neurnio (b) pode modular o fluxo de informao entre dois outros neurnios (de a para c) por influenciar a liberao de neurotransmissores pelos terminais do neurnio pr-sinptico, de maneira inibitria (como mostrado) ou facilitatria. Painel B. Os neurnios podem modular suas prprias aes. Em uma inibio por pr-alimentao, a clula pr-sinptica (a) pode ativar diretamente a clula ps-sinptica (b) e, ao mesmo tempo, modular seus efeitos atravs da ativao de uma clula inibitria (c), a qual, por sua vez, inibe a clula b. Na inibio recorrente (a informao flui de acordo com a indicao das setas), uma clula pr-sinptica (a) ativa uma clula inibitria (b), que faz um contato sinptico de volta com a mesma clula, limitando a durao de sua atividade. Abreviaes: pa = potencial de ao; il = inibio lateral; ir = inibio recorrente.
Fonte: Adaptada de Shepherd GM, Koch C: Introduction to Synaptic Circuits, em The Synaptic Organization of the Brain. Editado por Shepherd GM. New York, Oxford University Press, 1990, p.3-31. Utilizada com permisso.

Figura 16 Micrografias eletrnicas de sinapses qumicas. Junes neuromusculares do msculo sartrio de r foram rapidamente congeladas milissegundos aps tratamento com potssio para aumentar a transmisso sinptica. Painel A. As vesculas sinpticas esto agrupadas em duas zonas ativas (setas), as quais so os stios onde as vesculas podem fundir-se com a membrana plasmtica e liberar o neurotransmissor. Painel B. Aps a estimulao, padres mega de vesculas em processo de liberao do neurotransmissor so visveis.
Fonte: Reeditada de Zucker RS, Kullmann DM, Bennett M: Release of Neurotransmitters em Fundamental Neuroscience. Editado por Zigmond MJ, Bloom FE, Landis SC et al., San Diego, CA, Academic Press, 1999, p.156. Utilizada com permisso.

3. ticas responsveis pelo aprendizado e pela memria tanto em situaes normais quanto patolgicas. A maquinaria molecular (Figura 18) da transmisso sinptica est agora sendo compreendida (Scheller, 1995; Sudhof, 1995). interessante notar que vrias neurotoxinas potentes agem diretamente nessa maquinaria (ver a seguir). A transmisso sinptica compreende uma seqncia complexa de eventos pr e ps-sinpticos. Seis eventos principais esto envolvidos no ciclo da vescula sinptica (Figura 17): 1. As vesculas ficam ancoradas em zonas ativas antes de sua liberao por exocitose. 2. Ocorre a preparao ou priming quando as vesculas ficam prontas para responder ao aumento do Ca2+ intrace-

4. 5.

6.

lular (as potentes neurotoxinas botulnica e tetnica bloqueiam a transmisso sinptica ao causar protelise de molculas-chave envolvidas na preparao). Desencadeada pelo influxo de Ca+2, ocorre ento a fuso/ exocitose em menos de 1 milissegundo, liberando o neurotransmissor na fenda sinptica. O processo de endocitose recupera a membrana das vesculas sinpticas. As vesculas sinpticas so novamente preenchidas com neurotransmissor, um processo direcionado por um gradiente cido intravesicular ou por um gradiente de voltagem. As vesculas sinpticas preenchidas so transportadas de volta zona ativa, completando o ciclo.

A durao da atividade do neurotransmissor em geral limitada por vrios mecanismos que rapidamente removem o neurotransmissor liberado da fenda sinptica. Em primeiro

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Figura 17 Passos na transmisso sinptica em uma sinapse qumica. Os passos essenciais na transmisso sinptica esto numerados.
Fonte: Reeditada de Purves D, Augustine GJ, Fitzpatrick D et al. (eds): Neuroscience. Sunderland, MA, Sinauer Associates, 1997, p.88. Utilizada com permisso.

lugar, em alguma proporo, todos os neurotransmissores se difundem para fora da fenda. Em segundo, os neurotransmissores podem ser enzimaticamente degradados; por exemplo, a acetilcolina hidrolisada pela acetilcolinesterase, a qual encontra-se ligada membrana ps-sinptica adjacente aos receptores. E, em terceiro, embora as monoaminas e os aminocidos neurotransmissores sejam tambm sujeitos degradao enzimtica, so principalmente removidos da fenda sinptica por um mecanismo de recaptao rpida e, subseqentemen-

te, reempacotados em vesculas sinpticas ou metabolizados (Amara e Kuhar, 1993). Os transportadores de neurotransmissores monoaminrgicos (Figura 19), os quais medeiam esse rpido processo de recaptao, so stios de ao de um grande nmero de drogas e neurotoxinas. Entre eles, podemos destacar os antidepressivos tricclicos, os inibidores seletivos da recaptao de serotonina (ISRSs), os psicoestimulantes e a neurotoxina 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP) (Giros e Caron, 1993;

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Figura 18 Eventos moleculares na ancoragem e fuso das vesculas sinpticas. Um conjunto coordenado de protenas est envolvido no posicionamento das vesculas na membrana pr-sinptica e no controle da liberao pela fuso com a membrana. Painel A. Muitas das protenas das vesculas sinpticas que foram recentemente clonadas integram esse processo. Algumas dessas protenas interagem com o citoesqueleto para posicionar as vesculas no terminal, enquanto outras so protenas integrais ao processo de fuso. Alm disso, vrias dessas protenas das vesculas sinpticas so alvos para neurotoxinas que funcionam influenciando a liberao de neurotransmissores. Painel B. A teoria atual de como as vesculas sinpticas fundem-se com a membrana e liberam neurotransmissores chamada de hiptese SNARE. Tanto as vesculas sinpticas quanto a membrana plasmtica expressam protenas especficas que medeiam a ancoragem e a fuso: v-SNAREs (vesculas sinpticas) e t-SNAREs (membrana plasmtica). As vesculas so trazidas para prximo da membrana por meio de interaes entre a VAMP (sinaptobrevina), a sintaxina e a SNAP-25. A protena de fuso sensvel N-etilmaleimida (FSN) liga-se ao complexo, facilitando a fuso. O influxo de clcio necessrio para estimular a fuso, mas o stio preciso de ligao para o clcio e os eventos exatos que levam fuso permanecem indefinidos. Painel C. A estrutura cristalizada do complexo de fuso, mostrada aqui, consistente com a hiptese SNARE. Abreviaes: BoNT = toxina botulnica; TeNT = toxina tetnica.
Fonte: Adaptada de Kandel ER, Schwartz JH, Jessel TM: Principles of Neural Science, 4 edio. New York, Mcgraw-Hill, 2000, p.271-273. Utilizada com permisso.

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Jaber et al., 1997). Os tricclicos bloqueiam a recaptao de serotonina e noradrenalina, enquanto os ISRSs, como seu nome sugere, bloqueiam seletivamente a recaptao de serotonina. Outros antidepressivos mais novos bloqueiam o mecanismo de inibio por retroalimentao da liberao, aumentando, assim, os nveis sinpticos de serotonina. A cocana previne a recaptao de dopamina e serotonina, enquanto a anfetamina retarda a recaptao de dopamina e serotonina, alm de tambm induzir a liberao de dopamina (Ramamoorthy e Blakely, 1999; Saunders et al., 2000). Estudos moleculares tambm tm sugerido que a ligao da cocana e a recaptao da dopamina ocorrem em stios distintos do transportador, indicando a possibilidade de que a ao da cocana poderia ser bloqueada com sucesso, sem impedir o processo de recaptao normal (Kitayama et al., 1992). Camundongos modificados geneticamente nos quais o transportador de dopamina est ausente apresentam uma importante persistncia da dopamina sinptica, como se estivessem permanentemente sob o efeito de psicoestimulantes; os psicoestimulantes no tm efeito sobre esses animais, confirmando que o transportador de dopamina essencial para a ao dessas drogas (Giros et al., 1996). O MPTP captado seletivamente pelo transportador de dopamina (Javitch e Snyder, 1984) e ento provoca um aumento no estresse oxidativo, levando morte dos neurnios dopaminrgicos e doena de Parkinson induzida pela droga (Przedborski e Jackson-Lewis, 1998).

regra, canais rpidos ativados por ligante medeiam o fluxo de informao, representando padres de informao sensorial e associaes entre modalidades sensoriais, responsveis por representaes centrais que, em ltima anlise, daro origem a respostas motoras. No SNC, receptores glutamatrgicos medeiam a maioria das transmisses excitatrias rpidas; o GABA e a glicina so os neurotransmissores inibitrios mais comuns.

Receptores glutamatrgicos
Os receptores glutamatrgicos so divididos em trs tipos gerais: receptores N-metil-D-aspartato (NMDA), receptores ionotrpicos no-NMDA, e receptores glutamatrgicos metabotrpicos (Dingledine et al., 1999; Hollmann e Heinemann, 1994). Os receptores glutamatrgicos so todos protenas multimricas, em geral compostas de quatro subunidades. Os receptores NMDA so formados de combinaes das subunidades NR1 e NR2; a subunidade NR1 universalmente expressa em neurnios, enquanto a subunidade NR2, a qual pode ser de vrios subtipos, expressa heterogeneamente durante o desenvolvimento e tambm entre os diferentes tipos de neurnios, dando origem a diferentes propriedades de resposta (Schoepfer et al., 1994). Os receptores NMDA despolarizam a clula pela abertura de canais que permitem principalmente a entrada de Ca2+ na clula (MacDermott et al., 1996). A propriedade mais fascinante dos receptores NMDA que seu canal inico costuma estar bloqueado pelo on Mg2+ em potenciais de membrana mais negativos do que 40 mV (Mayer et al., 1994). Como resultado, no potencial de repouso da maioria dos neurnios, o canal do receptor NMDA encontra-se obstrudo. Para a corrente fluir pelos canais NMDA, o glutamato deve ligar-se ao receptor e a membrana deve ser despolarizada simultaneamente para deslocar o Mg2+. Esse duplo requerimento representa o papel nico dos receptores NMDA em processos to variados como a sinaptognese, o aprendizado e a memria e at mesmo a morte celular. provvel que os receptores NMDA sejam essenciais para o desempenho adequado de funes psiquitricas; camundongos transgnicos com a expresso reduzida dos receptores NMDA apresentam comportamentos similares queles vistos em pacientes com esquizofrenia (Mohn et al., 1999). Os receptores glutamatrgicos no-NMDA so divididos em: receptores cido -amino-3-hidrxi-5-metilisoxazol-4-propinico (AMPA) e receptores kainato, com base em suas afinidades por esses anlogos glutamatrgicos. Os receptores AMPA so formados a partir de combinaes de subunidades GluR1 a GluR4, e os receptores kainato, por combinaes de subunidades GluR5 a GluR7, alm das subunidades KA1 e KA2. A complexidade dos tipos dos possveis receptores glutamatrgicos aumenta ainda mais pela existncia de conformaes flip e flop das subunidades de GluR1 a GluR4 e das modificaes ps-transducionais do RNAm do receptor glutamatrgico (Puchalski et al., 1994; Seeburg, 1996; Sommer et al., 1990). Receptores no-NMDA geralmente esto acoplados a canais inicos que permitem a entrada de Na+ e no de Ca2+ atravs da membrana. A subunidade GluR2 do canal inico do receptor AMPA responsvel pelo bloqueio da passagem de Ca+2. Recentemente, foram identificados neurnios que expressam receptores AMPA, nos quais a subunidade GluR2 est ausente, permitindo, dessa forma, a passagem do Ca+2, bem como do Na+, pelo canal (Geiger et al., 1995). Neurnios que expressam tais receptores AMPA

Respostas ps-sinpticas rpidas

A ao de um neurotransmissor depende das propriedades dos receptores ps-sinpticos ao qual ele se liga. Os receptores ps-sinpticos ativados por neurotransmissores dividem-se em duas classes: receptores ionotrpicos e metabotrpicos (discutidos na seo a seguir). Os receptores ionotrpicos so diretamente acoplados a um canal inico; esses receptores sofrem uma mudana conformacional que abre o canal quando h a ligao do neurotransmissor. Isso resulta em despolarizao, dando origem a um potencial excitatrio ps-sinptico, ou em hiperpolarizao, dando origem a um potencial inibitrio ps-sinptico. A juno neuromuscular o prottipo de uma sinapse excitatria; a ligao simultnea de duas molculas de acetilcolina abre um canal no receptor que permevel a Na+ e a K+ (Karlin e Akabas, 1995). Isso resulta em uma forte despolarizao da membrana ps-sinptica mediada pelo influxo de Na+ (e modulada pelo efluxo de K+), levando a um potencial de ao que evoca a contrao na fibra motora. Canais ativados por ligantes so encontrados em sinapses, tais como a juno neuromuscular, onde a ativao rpida e confivel da clula ps-sinptica necessria. Na juno neuromuscular, a resposta ps-sinptica suficientemente forte, de maneira que existe uma traduo de um-para-um das variaes de voltagem do neurnio motor para as variaes de voltagem da fibra muscular, assegurando, portanto, uma contrao muscular confivel. Diferentemente da juno neuromuscular, os neurnios do SNC funcionam em redes dinmicas, nas quais geralmente nenhuma clula individual possui uma conexo sinptica to forte com outra clula, de forma que possa atingir sozinha o seu limiar. Em vez disso, grupos de neurnios ativados em conjunto convergem em um neurnio ps-sinptico para gerar mltiplos potenciais ps-sinpticos. Esses potenciais podem somar-se em regies do neurnio ps-sinptico (somao espacial), caso ocorram suficientemente prximos, a tempo de provocar o disparo do neurnio ps-sinptico. Como

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Figura 19 Transportadores de neurotransmissores. A transmisso sinptica no SNC terminada, na maioria dos casos, mediante a recaptao dos neurotransmissores por transportadores especficos, os quais apresentam constituies moleculares comuns. Esses transportadores carreiam neurotransmissores atravs da membrana contra seus gradientes de concentrao e, portanto, necessitam de energia metablica. Freqentemente, essa energia fornecida pelo co-transporte de um on a favor do seu gradiente de concentrao. Painel A. Uma famlia de transportadores localizados nas vesculas sinpticas tem a funo de preencher a vescula sinptica com neurotransmissores ou precursores de neurotransmissores. Painel B. Uma segunda famlia de transportadores localizados na membrana plasmtica com oito domnios transmembrana responsvel pelo transporte de neurotransmissores aminocidos, tais como o glutamato e o GABA. Painel C. Uma terceira famlia de transportadores localizados na membrana plasmtica com 12 domnios transmembrana responsvel pelo transporte das monoaminas dopamina, norepinefrina e serotonina.
Fonte: Reeditada de Kandel ER, Schwartz JH, Jessel TM: Principles of Neural Science, 4 edio. New York, Mcgraw-Hill, 2000, p.287. Utilizada com permisso.

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permeveis ao Ca2+ podem ser particularmente vulnerveis morte celular por excitoxicidade em certos estados patolgicos.

tambm aos receptores da glicina) (Mascia et al., 2000; Mihic et al., 1997).

Receptores metabotrpicos Receptores GABArgicos

Potenciais inibitrios ps-sinpticos no crebro so mediados principalmente por receptores GABArgicos. Vrias classes de receptores GABArgicos foram identificadas. Receptores do tipo GABAA so ionotrpicos e formam canais seletivos ao Cl que medeiam a inibio sinptica rpida no crebro. Receptores do tipo GABAB so metabotrpicos, tendem a ser de ao mais lenta e desempenham um papel modulatrio; costumam ser encontrados em terminais pr-sinpticos, onde inibem a liberao de transmissores. Os receptores GABAA so membros da superfamlia do receptor nicotnico da acetilcolina (DeLorey e Olsen, 1992; Schofield et al., 1990). O complexo receptor-canal GABAA composto de uma mistura de cinco subunidades das famlias , , e . Isso d origem a receptores com propriedades variadas, dependendo da composio especfica de subunidades do receptor. J que a maioria das famlias de subunidades apresenta mltiplos subtipos, alguns dos quais podem sofrer fuso no RNA, existe um potencial para uma extraordinria diversidade na funo do receptor GABAA. As seqncias de RNAm para subunidades mltiplas ou individuais dos receptores podem ser injetadas em ocitos ou em clulas de mamferos sob cultura, e as propriedades das combinaes de subunidades do receptor expressas subseqentemente podem ser definidas. Essa tcnica tem demonstrado como as propriedades de um receptor GABAA particular depende da composio de subunidades, bem como das interaes entre estas. Mutaes direcionadas a stios especficos tm sido aplicadas no sentido de localizar os stios de ligao de ligantes especficos nas subunidades do receptor. A subunidade , por exemplo, possui um stio de ligao para benzodiazepnicos (Pritchett et al., 1989). As aes clnicas dos benzodiazepnicos, como tambm de outras duas classes de drogas depressoras do SNC, os barbitricos e os esterides anestsicos, parecem estar relacionadas com sua habilidade de ligarem-se aos receptores GABAA, aumentando o fluxo de ons atravs do receptor (Callachan et al., 1987; Choi et al., 1981; MacDonald e Barker, 1978; Majewska et al., 1986). Os canais individuais GABAA no permanecem continuamente abertos na presena de GABA; em vez disso, abrem-se e fecham-se. Os benzodiazepnicos aumentam a corrente GABArgica por aumentarem a freqncia das aberturas do canal, sem alterar o tempo de abertura ou a condutncia (Study e Barker, 1981). Os barbitricos prolongam o tempo de abertura do canal sem alterar a freqncia de aberturas ou a condutncia (MacDonald et al., 1989; Mathers e Baker, 1981). Os esterides, tais como a androsterona e a pregnenolona, aumentam o tempo e a freqncia das aberturas (Twyman e MacDonald, 1992). Independentemente dos diferentes mecanismos de ao, cada uma dessas drogas aumenta a transmisso GABArgica, a qual responsvel pelas propriedades anticonvulsivantes compartilhadas pelas trs. Na verdade, eles podem diretamente contrabalanar uma deficincia de GABA originada pela reduo no nmero de transportadores de GABA no crtex epileptognico, o que pode ser a etiologia da epilepsia (During et al., 1995). Mais recentemente, foi demonstrado que anestsicos gerais, bem como o lcool, agem atravs da ligao ao receptor GABAA (e Efeitos modulatrios a longo prazo geralmente so mediados por receptores metabotrpicos. Esses receptores noconectados a canais regulam a funo celular atravs da ativao de protenas G, que se conectam a cascatas de segundos-mensageiros. Embora existam outros receptores no-conectados a canais que tambm so catalticos, no SNC apenas os receptores conectados protena G so encontrados. Na verdade, a maioria dos neurotransmissores e neuromoduladores exercem seus efeitos atravs da ligao a receptores conectados protena G. Estes receptores G so assim chamados porque so ligados intracelularmente a protenas regulatrias ligantes de guanosina trifosfato (GTP). As protenas G so formadas por um complexo de trs protenas ligadas membrana (G); quando o receptor ativado, a subunidade (G) liga-se GTP e dissocia-se do complexo de subunidades e (G). Tanto G quanto G podem desencadear eventos subseqentes. As protenas G ativadas apresentam um tempo de vida que vai de segundos a minutos; a G auto-inativada pela hidrlise da GTP ligada, aps o que reagregada com G, retornando ao estado de repouso. A continuao da ligao do neurotransmissor ao receptor pode reiniciar o ciclo. As protenas G so a primeira conexo nas cascatas sinalizadoras que podem ativar diretamente protenas quinases enzimas que fosforilam protenas celulares (Walaas e Greengard, 1991) ou aumentar o Ca2+ intracelular, ativando indiretamente as quinases (Figura 110) (Ghosh e Greenberg, 1995). As protenas sofrem alteraes conformacionais quando so fosforiladas, o que pode levar a sua ativao ou inativao. As protenas afetadas podem incluir canais da membrana, elementos do citoesqueleto e reguladores de transcrio da expresso gnica. Dessa forma, as aes modulatrias mediadas por segundos-mensageiros controlam a maioria dos processos celulares. O potencial para amplificao, combinado com a divergncia e a convergncia de sinais, fornece o mecanismo bsico para alteraes duradouras na funo neuronal, especialmente para mecanismos essenciais ao aprendizado e memria e ao desenvolvimento. As trs principais cascatas de segundos-mensageiros envolvendo protenas G e suas interaes com Ca2+ esto esquematizadas na Figura 110. Uma vez que esses receptores da protena G so alvos para muitas drogas teraputicas ou drogas de abuso, o entendimento de suas regulaes de extrema importncia clnica. Recentemente, avanos importantes tm sido feitos no sentido de definir os mecanismos que medeiam a sub-regulao de receptores conectados a protenas G (Tsao e Von Zastrow, 2000). A sub-regulao de receptores geralmente induzida por sua ativao prolongada, levando internalizao dos mesmos. Por exemplo, a ativao prolongada de receptores dopaminrgicos do tipo D1 em neurnios estriatais pela injeo de agonistas in vivo causa a rpida internalizao deles (Dumartin et al., 1998). A internalizao desses receptores mediada por mecanismos altamente especficos, tanto dependentes quanto independentes da dinamina (Vickery e Zastrow, 1999). A determinao dos mecanismos que acarretam a sub-regulao de receptores da protena G pode identificar alvos para o desenvolvimento de novas classes de drogas teis para a manipulao teraputica da sinalizao de tais receptores. Por exem-

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Figura 110 Principais vias de sinalizao intracelular em neurnios. A unio de ligantes com seus receptores ativa trs vias sinalizadoras principais atravs de protenas G. Painel A. No sistema adenosina monofosfato cclico (AMPc), uma protena G medeia o acoplamento de um ligante ativao da adenil ciclase. Isso, por sua vez, ir gerar AMPc, que se liga nas unidades regulatrias (R) da protena quinase dependente de AMPc (PKAc), liberando as subunidades catalticas (C). Essas, por sua vez, ativaro os elementos responsveis das protenas de ligao do AMPc (CRB), que se ligam aos elementos responsivos do AMPc (CRE) e regulam a expresso gnica depois de terem sido fosforiladas (P). Painel B. No sistema do fosfolipdeo inositol, a protena G ativa a fosfolipase C (PLC), que hidrolisa os fosfolipdeos de membrana para produzir dois segundos-mensageiros: o diacilglicerol (DAG) e o inositol trifosfato (IP3). O IP3 desencadeia a liberao de Ca2+ pelo retculo endoplasmtico (RE). O Ca2+, por sua vez, faz a translocao da protena quinase C (PKC) para a membrana celular, onde ela ativada pelo DAG. Por se conectar membrana com a ativao, a PKC pode ser especialmente importante na modulao dos canais de membrana. Tambm mostrada outra ao do Ca2+: a ativao da protena quinase dependente de Ca2+/calmodulina, que, quando ativada, fosforila outros conjuntos de protenas. O Ca2+ liberado dos estoques intracelulares pode agir de forma semelhante ao Ca2+, que entra a partir do lado de fora da clula (no-mostrado); entretanto, devido ao fato de as clulas regularem os nveis de Ca2+ de forma muito estrita, os aumentos na concentrao de Ca2+ costumam ser muito localizados. Painel C. No sistema do cido araquidnico, as protenas G podem acoplar-se fosfolipase A2 (PLA2), formando cido araquidnico pela hidrlise de fosfolipdeos de membrana. O cido araquidnico funciona como um segundo-mensageiro propriamente dito ou como um precursor da via da lipoxigenase, originando uma famlia de segundos-mensageiros permeveis membrana. A via da ciclooxigenase importante principalmente fora do crebro, na produo de prostaglandinas. Abreviaes: ATP = adenosina trifosfato; HPETE = cido Hidro-perxi-eicosa-tetraenico; PI = Fosfatidil-inositol.
Fonte: Painel A. Reeditado de Lodish H, Berck A, Zipursky L, et al.,: Molecular Cell Biology, 3 Edio. New York, Scientific American Books, 1995; Painis B e C adaptados de Kandel ER, Schwartz JH, Jessell TM: Principles of Neural Science, 4 Edio. New York, McGraw-Hill, 2000. Utilizada com permisso.

plo, camundongos mutantes nos quais a protena -arrestina 2 est ausente no desenvolvem tolerncia a opiides (Bohn et al., 1999). As aes mais lentas dos receptores metabotrpicos so responsveis pela alterao na excitabilidade neuronal e pelo fortalecimento das conexes sinpticas, freqentemente refor-

ando vias neurais envolvidas no aprendizado (Bailey et al., 2000). A ativao desses receptores em geral no altera o potencial de membrana. Em vez disso, a ligao ao receptor ativa cascatas de segundos-mensageiros que podem alterar de forma considervel as propriedades de resposta de outros receptores. Na retina, por exemplo, a dopamina parece mediar a

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adaptao luz (Djamgoz e Wagner, 1992; Doeling, 1987). A dopamina liberada pelas clulas interplexiformes age nas clulas horizontais via receptores dopaminrgicos do tipo D1 os quais, por sua vez, ativam a adenil ciclase, aumentando os nveis de adenosina monofosfato cclico (AMPc). Essa AMPc tem dois efeitos: 1) aumenta a sensibilidade das clulas horizontais a informaes provenientes dos cones e 2) diminui o acoplamento eltrico entre as clulas horizontais, reduzindo o tamanho do campo receptivo e aumentando, portanto, a acuidade. Esses dois efeitos alternam a retina de escotpica para viso em cores fotpica. No SNC, vrias aes modulatrias tm sido atribudas a projees dopaminrgicas. Em um nvel mais profundo, os segundos-mensageiros podem ser translocados ao ncleo, onde conseguem controlar a expresso gnica, exercendo alteraes mais prolongadas na funo celular (Lodish et al., 1995) atravs da ativao de genes em uma seqncia temporal (Charney et al., 1999).

abundantes na densidade ps-sinptica a PSD-95 (protena da densidade ps-sinptica de 95 kd). A PSD-95 uma protena citoplasmtica que contm trs domnios importantes para a ligao de protenas, chamados de domnios PDZ. Esses domnios da PSD-95 ligam-se ao receptor NMDA, ao canal de K+ Shaker e s protenas de adeso celular denominadas neuroliguinas. Em contrapartida, os receptores AMPA ligam-se a um domnio PDZ distinto, chamado GRIP, e os receptores glutamatrgicos metabotrpicos interagem com o HOMER. Acredita-se que essas protenas PDZ sejam importantes para agrupar os receptores de neurotransmissores e outros componentes importantes das sinapses na densidade ps-sinptica e para mediar a rpida insero ou remoo dos receptores da sinapse, como pode ocorrer durante a plasticidade sinptica (Kim e Huganir, 1999).

Gases como moduladores transcelulares

Surpreendentemente, foi demonstrado que o xido ntrico (NO), um gs, medeia sinalizao interneuronal, funcionando como um segundo-mensageiro com propriedades de neurotransmissor (Brenman e Bredt, 1997; Dawson e Snyder, 1994; Schulman, 1997). O NO apresenta uma vida extremamente curta e sintetizado de forma muito rpida quando necessrio, a partir da arginina, pela enzima xido ntrico sintase (NOS). A NOS ativada pelo aumento na concentrao de Ca2+ intracelular. Diferentemente dos mensageiros intracelulares convencionais, que so localizados na clula ps-si-

Organizao dos receptores ps-sinpticos nas sinapses

A maioria dos receptores para os neurotransmissores est agrupada em stios ps-sinpticos localizados prximos ao terminal pr-sinptico. Recentemente, vrios laboratrios tm realizado importantes progressos na identificao dos componentes moleculares da estrutura ps-sinptica que mantm os receptores sinpticos em seu lugar (Figura 111) (S. H. Lee e Sheng, 2000; Kim e Huganir, 1999). Uma das protenas mais

Figura 111 Alguns dos componentes moleculares de uma sinapse glutamatrgica tpica no SNC. Subunidades de receptores do tipo cido -amino-3-hidrxi-5-metilisoxazol-4-propinico (AMPA) so associadas ao GRIP atravs de interaes no domnio PDZ, e as subunidades dos receptores N-metil-D-aspartato (NMDA) so ligadas PSD-95. GRIP e PSD-95 tambm interagem com o citoesqueleto, fornecendo uma sustentao protica para os receptores glutamatrgicos na densidade ps-sinptica. Essa sustentao pode regular a dinmica de insero ou remoo, na dependncia da atividade, de receptores glutamatrgicos nas sinapses do SNC. Abreviaes: GIESVKI = os aminocidos crticos para ligao de GR2 a PDZ4 e PDZ5; nNOS = xido ntrico sintase neuronal.
Fonte: OBrien RJ; Lau L-F; Huganir RL: Molecular Mechanisms of Glutamate Receptor Clustering at Excitatory Synapses. Current Opinion in Neurobiology 8: 364-369, 1998. Utilizada com permisso.

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nptica, onde produzem seus efeitos, o NO difunde-se atravs da membrana a clulas adjacentes pr ou ps-sinpticas e ativa a guanilil ciclase, aumentando os nveis de guanosina 3,5monofosfato cclico (GMPc), que, por sua vez, desencadeia a produo de outros mensageiros intracelulares. O NO, bem como o monxido de carbono (CO) e o cido araquidnico, os quais apresentam papis similares, podem coordenar alteraes pr e ps-sinpticas na plasticidade sinptica (ODell et al., 1994). A excitoxicidade provocada pela ativao excessiva dos receptores glutamatrgicos do tipo NMDA parece ser mediada, em parte, pelo NO (Dawson et al., 1993).

Modulao sinptica no aprendizado e na memria

Segundos-mensageiros aumentam muito a gama de respostas que um neurnio pode apresentar a um estmulo sinptico. Eles ativam quinases que podem amplificar e prolongar sinais mediante a fosforilao de outras protenas. As protenas fosforiladas permanecem ativas freqentemente por um perodo muito mais longo do que um agonista permanece ligado ao receptor at que sejam defosforiladas por protenas fosfatases. J que os segundos-mensageiros desencadeiam grande nmero de funes celulares, a ativao de um nico receptor pode ativar uma resposta celular coordenada envolvendo vrios sistemas. Isso pode incluir a modulao da transcrio genmica dependente da atividade, levando a alteraes duradouras na funo celular. O aprendizado e a memria requerem alteraes a curto e a longo prazo em sinapses individuais entre neurnios.

Aprendizado simples em Aplysia

Investigaes utilizando o molusco marinho Aplysia californica tm sido fundamentais para o entendimento atual dos mecanismos celulares do aprendizado e da memria. O Prmio Nobel em Fisiologia e Medicina do ano de 2000 foi dado a Eric Kandel por esse trabalho. As alteraes no comportamento da Aplysia podem ser relacionadas a alteraes em conexes sinpticas individuais, uma vez que seu sistema nervoso composto de relativamente poucos neurnios que podem ser identificados de animal para animal (Kandel e Hawkins, 1992). A Aplysia exibe um comportamento defensivo simples o reflexo de retirada do sifo o qual mostra vrias formas elementares de aprendizado. A estimulao leve na pele do sifo que recobre as brnquias leva a seu reflexo de retirada. Se um choque aplicado em sua cauda, o reflexo mostra sensibilizao: a estimulao subseqente do sifo elicia um reflexo mais intenso. Se a estimulao do sifo emparelhada com o choque na cauda, o animal desenvolve um aprendizado associativo manifestado por um aumento na resposta reflexa a uma leve estimulao do sifo. A Aplysia aprende que uma leve estimulao no sifo prediz um choque em sua cauda. Estmulos sensibilizantes na cauda ativam neurnios serotonrgicos facilitadores que fazem sinapse com terminais de neurnios sensoriais. A serotonina liberada produz facilitao pr-sinptica pela ativao da adenil ciclase via ligao com a protena G; a AMPc liga-se s subunidades regulatrias da protena quinase dependente de AMPc, liberando suas subunidades catalticas, as quais fosforilam uma classe de canais de K+ dependentes de voltagem (canais S-K+), inativando-os. Devido ao fato de que uma menor corrente de K+ evocada, a membrana permanece despolarizada por um pouco mais de

tempo com dado potencial de ao, h maior influxo de Ca2+ e, portanto, mais transmissor liberado. O aprendizado associativo parece ser devido ativao de um neurnio facilitador logo aps a ativao do neurnio sensorial. O influxo de Ca2+ desencadeado pela alterao de voltagem no terminal do neurnio sensorial e os sistemas de segundos-mensageiros ativados pela serotonina, quando ativados ao mesmo tempo, produzem um aumento na atividade da quinase C (Braha et al., 1990). Isso chamado de aumento da facilitao pr-sinptica dependente da atividade e fornece a deteco de coincidncias inerentes ao aprendizado associativo (Figura 112). Em todas essas formas de aprendizado associativo, os mecanismos envolvem modificao covalente de protenas preexistentes, principalmente por fosforilao. Em contrapartida, a memria de longa durao requer alteraes na transcrio gnica. Os mesmos mecanismos que medeiam a sensibilizao de curta durao tambm iniciam a formao da memria de longa durao. Na sensibilizao de longa durao, assim como na de curta durao, a memria codificada por um fortalecimento das sinapses sensrio-motoras. Ocorre um aumento na liberao de transmissores, e canais S-K+ so fechados, levando a um aumento do influxo de Ca2+. A serotonina e a AMPc so o primeiro e o segundo mensageiros, e um conjunto caracterstico de protenas fosforilado (Sweatt and Kandel, 1989). Para a memria de longa durao, no entanto, existe uma necessidade absoluta de transcrio gnica e de sntese de novas protenas. A AMPc afeta a transcrio gnica por ligar-se protena de ligao do elemento responsivo da AMPc (CREB), a qual ento se liga a stios regulatrios no DNA conhecidos como elemento responsivo da AMPc. Dessa forma, a injeo de CREB exgeno bloqueia a sensibilizao de longa durao, mas no a de curta (Dash et al., 1990). O CREB, por sua vez, induz a transcrio de ubiquitina, a qual leva clivagem da subunidade regulatria da protena quinase dependente de AMPc, prolongando a ativao da quinase (Hedge et al., 1993). Finalmente, as alteraes desencadeadas por estimulaes repetidas na cauda, a ativao de interneurnios facilitatrios, a aplicao de serotonina ou a injeo de AMPc resultam em alteraes estruturais especficas (Glanzman et al., 1990), envolvendo o crescimento de novos processos e aumentando o nmero e o tamanho das sinapses. Essas alteraes morfolgicas so mediadas, em parte, por molculas de adeso celular similares quelas que desempenham papel crucial na formao do sistema nervoso (Bailey et al., 1992). Portanto, alteraes de curta durao na fora sinptica transformam-se em alteraes estruturais duradouras, orquestradas por interaes entre sistemas de segundos-mensageiros, que, por sua vez, induzem a transcrio gnica.

Potenciao de longa durao no SNC de mamferos

No SNC de mamferos, um aumento similar na fora sinptica ocorre no hipocampo quando certas sinapses so estimuladas brevemente a uma alta freqncia; esse aumento dura de dias a semanas no animal intacto (Bliss e Lomo, 1973). J que essa potenciao de longa durao (LTP) ocorre em regies cerebrais essenciais para a codificao da memria o hipocampo e o crtex cerebral acredita-se que a LTP seja um processo sinptico crucial para a formao da memria. Os trs principais circuitos sinpticos do hipocampo apresentam LTP, cada um com mecanismos distintos, embora similares. Nas sinapses mais estudadas, que ocorrem entre neurnios da

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Figura 112 Os detectores de coincidncia molecular. Painel A. No reflexo de retirada do sifo da Aplysia, o toque no sifo, que leva ao influxo de Ca2+, e o choque na cauda, que leva estimulao da adenilil ciclase, podem, juntos, induzir uma ativao da adenilil ciclase e uma liberao de neurotransmissor maiores, levando a uma facilitao da eficcia sinptica. Painel B. No hipocampo, a potenciao de longa durao resulta da ativao coincidente de receptores do tipo N-metil-D-aspartato (NMDA-R) e da despolarizao ps-sinptica. Abreviaes: AMPA-R = receptores do tipo cido amino-3-hidrxi-5-metilisoxazol-4-propinico; GTP = guanosina trifosfato; 5-HT = 5-hidrxi-triptamina; 5-HT-R = receptor de 5-HT; LTP = potenciao de longa durao, Cai2+ = clcio interno; Gs = protena G; s = subunidade .
Fonte: Reeditada de Bourne HR; Nicoll R: Molecular Machines Integrate Coincident Synaptic Signals. Neuron 10 (suppl.): 65-75, 1993. Utilizada com permisso.

regio CA3 e neurnios piramidais da regio CA1 (Figura 1 13), a LTP iniciada pelo influxo de Ca2+ no neurnio pssinptico (Figuras 112B e 113). O glutamato liberado pelos neurnios da regio CA3 age em receptores NMDA e noNMDA. Entretanto, apenas os disparos de alta freqncia (que desencadeiam a LTP) ativam um nmero suficiente de receptores AMPA para provocar uma despolarizao ps-sinptica significativa, capaz de liberar o bloqueio dependente da volta-

gem dos receptores NMDA pelo Mg2+. Os receptores NMDA facilitam o influxo de Ca2+ na espinha dendrtica ps-sinptica (Murphy et al., 1994; Petrozzino et al., 1995), o que inicia um aumento na fora sinptica. J que o Ca2+ no flui pelo canal do receptor NMDA, a menos que o neurotransmissor esteja ligado e que a membrana ps-sinptica esteja simultaneamente despolarizada, o receptor NMDA age como um detector de coincidncias (Figura 112). Os mecanismos celulares responsveis pela expresso da LTP tm sido foco de intensa investigao parecem envolver um aumento na liberao de neurotransmissores e/ou no nmero e/ou na sensibilidade dos receptores ps-sinpticos (Malenka e Nicoll, 1999). Embora haja um crescente apoio para a viso de que o locus da expresso da LTP seja ps-sinptico (descrito a seguir), tambm existem evidncias convincentes de que a LTP envolve um aumento na liberao de neurotransmissores pelos terminais pr-sinpticos (Stevens e Sullivan, 1998; Stevens e Wang, 1995). Nesse caso, surge a questo de como eventos ps-sinpticos desencadeados pela ativao de receptores NMDA poderiam levar a alteraes na liberao pr-sinptica de neurotransmissores. Um segundomensageiro retrgrado, que poderia se difundir atravs da sinapse e agir nos terminais pr-sinpticos, seria necessrio (ODell et al., 1994; Schuman e Madison, 1991; Zhuo et al., 1993). Vrios experimentos indicam que o NO ou o CO so capazes de conduzir tal sinal retrgrado, difundindo-se da pssinapse aos stios pr-sinpticos mais prximos, ativando a guanilil ciclase para induzir uma elevao no GMPc do terminal pr-sinptico. Tal aumento na transmisso sinptica dependente da LTP foi visualizado diretamente (Malgaroli et al., 1995). O aumento na liberao de neurotransmissores tambm dependente de Ca2+, implicando em um detector de coincidncia pr-sinptico (Zhuo et al., 1994). Alm desses gases difusveis, foi demonstrado recentemente que uma famlia de fatores de crescimento chamados neurotrofinas agem como sinais retrgrados que facilitam o fortalecimento sinptico de longa durao, incluindo a LTP (McAllister et al., 1999). Ao longo dos ltimos anos, grande nmero de evidncias tem dado suporte para o locus ps-sinptico para expresso da LTP (Malinow et al., 2000). Existem atualmente dois mecanismos que favorecem o aumento da eficcia sinptica pssinapticamente: 1) alterao na sensibilidade de receptores glutamatrgicos j existentes e 2) adio de receptores AMPA a sinapses funcionalmente silenciosas. A elevao nos nveis de Ca2+ ps-sinptico devido transmisso sinptica de alta freqncia ativa vrias quinases que so cruciais para a LTP e a memria: a quinase dependente de Ca2+/calmodulina II (CamKII), a protena quinase C (PKC) e a protena quinase A. Essas quinases fosforilam GluR1, uma subunidade do receptor AMPA, aumentando a sensibilidade desses receptores; o bloqueio dessa fosforilao inibe a expresso da LTP (H.K. Lee et al., 2000). Em concordncia com o papel crtico das quinases na LTP, camundongos deficientes em CamKII apresentam LTP reduzida, bem como dficits no aprendizado espacial (Bach et. al., 1995). Tcnicas utilizando knockout de genes, pelas quais animais mutantes so gerados com deficincia em determinado gene e ento acasalados com homozigotos para eliminar completamente dada protena, mostraram que outras quinases tambm so necessrias para a LTP (Mayford e Kandel, 1999). Por exemplo, camundongos knockout para a quinase Fyn apresentam deficincia de LTP em CA1. Ao testarem-se substratos para a quinase Fyn, foi demonstrado que h uma deficincia na fosforilao da tirosina quinase de ade-

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Figura 113 Potenciao de longa durao (LTP) no hipocampo. Painel A. Registro tpico para LTP em sinapses nas regies CA1-CA3 hipocampais. So utilizados cortes transversais do hipocampo de roedores. Aplicam-se dois estmulos no sobrepostos aos neurnios piramidais na regio CA1 com eletrodos de estimulao extracelular uma via estimulada com alta intensidade; a outra com uma intensidade mais baixa. As respostas ps-sinpticas so registradas intracelularmente a partir de neurnios piramidais de CA1 ou extracelularmente na regio CA1. Painel B. Aps a aplicao de estmulos de alta freqncia (tetania) na regio CA1 ou da estimulao pr-sinptica coincidente com a despolarizao pssinptica, a facilitao de longa durao das respostas dos neurnios da regio CA1 so registradas. Esse painel mostra a curva dos potenciais excitatrios ps-sinpticos antes e depois da estimulao. A resposta ps-sinptica extremamente aumentada aps a tetania em resposta a estmulos de mesma magnitude. Painel C. Esquema ilustrando os eventos moleculares necessrios para a LTP e para a depresso de longa durao (LTD). Esse diagrama mostra os efeitos do aumento de clcio em uma espinha dendrtica ps-sinptica em resposta a estmulos que induzem LTP ou LTD. Depois que a despolarizao remove o bloqueio por Mg2+, canais N-metil-Daspartato (NMDA) abrem-se e permitem o influxo de Ca2+. O clcio tambm entra pelos canais de Ca2+ ativados por voltagem (VGCCs) e por alguns receptores cido -amino-3-hidrxi-5-metilisoxazol-4propinico (AMPA). A ativao de receptores glutamatrgicos metabotrpicos tambm contribui para um aumento no clcio intracelular atravs da liberao de clcio de estoques intracelulares, a qual estimulada pela ativao da fosfolipase C (PLC) e por um aumento subseqente no inositol-trifosfato (IP3). A ativao de quinases especficas facilita a induo e a expresso da LTP, enquanto a ativao de fosfatases predispe a clula a expressar a LTD. Abreviaes: DAG = Diacilglicerol; EPSP = Potencial excitatrio ps-sinptico; G = Protena G; mGluR = Receptor glutamatrgico metabotrpico.
Fonte: Reeditada de Beggs JM, Brown TH, Byrne JH, et al.,: Learning and Memory: Basic Mechanisms, em Fundamental Neuroscience. Editado por Zigmond MJ et al. San Diego, CA, Academic Press, 1999, p.1439, 1444. Utilizada com permisso.

so focal (Grant et al., 1995). Esses resultados sugerem que os processos de adeso celular so importantes no desenvolvimento e necessrios consolidao desse processo de memria. H pouco tempo vrios laboratrios vm mostrando que sinapses silenciosas sinapses que contm apenas receptores NMDA antes da induo da LTP podem ser ativadas pela insero, dependente da estimulao, de novos receptores AMPA, fornecendo um mecanismo novo para a LTP (Malinow et al., 2000). O aumento na funo do receptor AMPA em sinapses anteriormente silenciosas aps o estmulo indutor de LTP tem sido observado por muitos laboratrios. O mais importante o fato de ser possvel visualisar esse processo diretamente por imagens da insero de receptores AMPA, marcados com a protena fluorescente verde, em sinapses silenciosas aps a induo da LTP (Shi et al., 1999). Pesquisas nessa rea esto agora se concentrando nos mecanismos intracelulares do trfego dos receptores AMPA e prometem desenvolver logo uma compreenso abrangente dos mecanismos moleculares das modificaes ps-sinpticas da LTP. A LTP composta de, pelo menos, duas fases: LTP inicial e LTP tardia. A LTP inicial estende-se pelas primeiras trs horas

aps a induo e no requer sntese protica. Em contrapartida, a LTP tardia dura vrias horas e necessita dos processos de novas transcries e tradues. Como descrito anteriormente para o fortalecimento sinptico de longa durao na Aplysia, a LTP envolve a ativao da CamKII, a produo de AMPc e a ativao da transcrio gnica atravs do processo dependente de CREB. Evidncias recentes indicam que a LTP tambm pode estimular o crescimento de novas conexes sinpticas, o que poderia mediar alteraes sinpticas mais permanentes responsveis pelo aprendizado e pela memria (Engert e Bonhoeffer, 1999; Toni et al., 1999). Como o fortalecimento das sinapses pela LTP mantido sob controle? As sinapses hipocampais tambm apresentam a depresso de longa durao (LTD), a qual envolve uma gama similar de mecanismos ativados por estimulao sinptica de baixa freqncia (Linden e Connor, 1995). A LTD resulta em uma diminuio na fora sinptica e pode ser mediada por uma diminuio na liberao de neurotransmissor e/ou na responsividade ps-sinptica pela reduo no nmero ou na sensibilidade dos receptores glutamatrgicos. Portanto, por meio de um equilbrio dinmico entre LTP e LTD (Zhuo et

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al., 1994), as memrias de informaes irrelevantes podem ser eliminadas, e as memrias duradouras podem ser finamente sintonizadas. A regulao da fora sinptica pode ser tambm relacionada ao ritmo teta predominante no hipocampo. A estimulao na freqncia teta produz LTP, enquanto estimulaes mais lentas associadas a aumentos mais moderados nos nveis de Ca2+ levam a LTD. A freqncia teta parece estar sob controle colinrgico, sugerindo um mecanismo atravs do qual a acetilcolina pode modular a memria (Huerta e Lisman, 1993). De maneira mais geral, Llins e colaboradores argumentaram que o ritmo teta medeia a integrao tlamo-cortical e que distrbios nesse ritmo estariam associados a prejuzos mentais em uma srie de transtornos neuropsiquitricos (Llins et al., 1999).

DESENVOLVIMENTO NEURONAL
Como os neurnios so capazes de modificar a fora de suas conexes de acordo com a experincia, refletem apenas uma frao dos mecanismos utilizados durante o desenvolvimento do SNC (Figura 114). Se as modificaes sinpticas no adulto se assemelham ou utilizam mecanismos que ocorrem durante o desenvolvimento, outras formas de plasticidade podem existir no adulto, que so vestgios dos processos ocorridos durante o desenvolvimento. Por exemplo, durante o desenvolvimento, certos neurnios sofrem a morte celular programada geneticamente, conhecida como apoptose, a qual parece desencadear um processo de competio por um ou mais fatores de sobrevivncia. Transtornos neuropsiquitricos podem resultar de ativaes aberrantes de tais mecanismos (Nijhawan et al., 2000). Em doenas neurodegenerativas adquiridas ou genticas, um programa de morte celular pode ser ativado inapropriadamente em uma populao celular especfica. Em doenas das mais variadas, tais como doena de Alzheimer, de Huntington, esclerose amiotrfica lateral, epilepsia e acidente vascular cerebral (AVC), neurnios especficos so seletivamente vulnerveis apoptose, reproduzindo, portanto, um mecanismo normalmente utilizado durante o desenvolvimento cerebral. Outros transtornos, como o autismo, podem ser explicados por uma falha, durante o desenvolvimento, no processo de morte celular programada (Piven et al., 1995). Vrios problemas inerentes ao desenvolvimento resultam de crescimento ou migrao aberrantes de neurnios ou de defeitos na formao sinptica. Por exemplo, a esquizofrenia pode resultar da falha dos neurnios dopaminrgicos mesocorticais ao realizarem conexes sinpticas apropriadas com neurnios do crtex frontal (Weinberger e Lipska, 1995) ou da migrao aberrante dos neurnios corticais (Akbarian et al., 1993). Esses dois defeitos podem ser relacionados pela observao de que a dopamina desempenha papel importante tanto na migrao quanto na diferenciao neuronal (Todd, 1992). Em conseqncia, o conhecimento dos mecanismos inerentes ao desenvolvimento fundamental para se conhecer a etiologia de doenas neuropsiquitricas.

Figura 114 Estgios do desenvolvimento neuronal e sua modulao. Em cada estgio, o neurodesenvolvimento regulado por fatores ambientais locais e, em fases mais tardias, tambm pela atividade. Essa forma de arranjo permite plasticidade acomodar as variaes individuais que so intrnsecas e as que dependem da experincia. Devido inter-relao de fatores intrnsecos e associados experincia, existem mltiplos pontos em que alteraes patolgicas podem alterar o resultado final de maneira sutil ou mais evidente.
Fonte: Rayport S, Kriegstein AR: Cellular and Molecular Biology of the Neuron, em The American Psychiatric Press Textbook of Neuropsychiatry, 3 edio. Editado por Yudofsky SC, Hales RE. Washington, DC, American Psychiatric Press, 1997, p. 19. Utilizada com permisso.

Nascimento e migrao
Os neurnios e a glia tm origem em zonas proliferativas que revestem o tubo neural embrionrio no estgio da dobradura dos segmentos da cabea e da expanso das cavidades ventriculares. Superficialmente, as clulas neuroepiteliais proliferativas nessas zonas parecem similares, mas, medida que

o desenvolvimento ocorre, elas geram o mais diverso nmero de tipos celulares distintos fenotpica, molecular e quimicamente de todos os rgos do animal adulto, todos organizados na mais complexa estrutura encontrada em organismos vivos. A posio precisa e a conectividade dessa mirade de tipos celulares so essenciais para o funcionamento do organismo como um todo. O modo como os neurnios chegam a suas localizaes corretas e formam conexes apropriadas ainda no est completamente entendido. Teoricamente, o destino especfico de cada clula poderia ser determinado de forma intrnseca apenas por sua linhagem histrica, conforme parece ser o caso de certos invertebrados, tais como o verme Caenorhabditis elegans (Kenyon, 1986). Entretanto, estudos de linhagens em vertebrados demonstraram que fatores ambientais locais influenciam de maneira significativa o fentipo, a localizao e a conectividade final de neurnios individuais (Lumsden e

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Krumlauf, 1996; Rubenstein et al., 1998). Os sinais moleculares que influenciam o destino celular so diversos e regulados pelo desenvolvimento, incluindo fatores difusveis e molculas de reconhecimento de superfcie celular.

delimitaes que restringem a mistura intersegmental das clulas neuroepiteliais e comprometem suas descendentes a um destino segmental particular.

Proliferao Determinao
Os estgios iniciais do desenvolvimento do SNC envolvem uma srie de passos indutivos nos quais fatores difusveis produzidos pelos tecidos vizinhos desencadeiam padres especficos de expresso gnica no tecido neural. O processo de desenvolvimento do SNC se inicia com a induo do ectoderme neural durante a gastrulao, desencadeada pela liberao de um fator indutor a partir da mesoderme adjacente (Hamburger, 1969). Uma vez que a placa neural esteja formada, um padro de diferenas regionais emerge sob o controle de fatores difusveis ou de fatores de induo mediados pelo contato, produzidos pelos tecidos adjacentes. Por exemplo, em embries de galinhas, a notocorda induz o desenvolvimento da lmina do assoalho atravs de um sinal dependente do contato celular e desencadeia a seguir a produo de neurnios motores pela liberao de um fator difusvel (Placzek et al., 1993; Yamada et al., 1993). A formao de um padro adequado da placa neural provavelmente envolve a interao de mltiplos fatores indutores de vrias fontes, os quais estabelecem diferenas regionais ao longo dos eixos ntero-posterior, mdiolateral e dorsoventral (Ruiz i Altaba, 1994). No desenvolvimento cerebral inicial, o eixo neural dividido em compartimentos. A segmentao um princpio de organizao antigo e amplamente distribudo, expresso em todos os embries e evidente no plano corporal de muitos invertebrados. Recentemente, foram identificados genes que governam o desenvolvimento de segmentos especficos do corpo. Por exemplo, a identidade dos segmentos do plano corporal de um inseto e do rombencfalo de mamferos controlada pela expresso de uma famlia de genes de identidade de segmentos, conhecidos coletivamente como homeobox ou genes Hox (Maconochie et al., 1996). Os genes Hox codificam fatores de transcrio que, por sua vez, regulam outros genes que determinam o desenvolvimento exclusivo de cada segmento. Alm disso, podem alterar a identidade de segmentos correspondentes em insetos e vertebrados e induzir o desenvolvimento de segmentos supranumerrios quando inseridos artificialmente em embries (Rijli et al., 1993). Em um exemplo notvel da conservao evolucionria, homlogos dos genes Hox de insetos foram encontrados em todos os vertebrados, inclusive em humanos (McGinnis e Krumlauf, 1992); foi ainda possvel substituir, com sucesso, um gene de polaridade de segmento da mosca-das-frutas por um gene homlogo, conhecido como sonic hedgehog, encontrado no peixe-zebra (Krauss et al., 1993). medida que o desenvolvimento continua, novos compartimentos so originados, e segmentos so progressivamente subdivididos. A segmentao no sistema nervoso de vertebrados claramente visvel na medula espinal e tambm nos padres segmentados dos rombmeros no rombencfalo em desenvolvimento (Lumsden e Krumlauf, 1996; Tanabe e Jessell, 1996). primeira vista, o prosencfalo no apresenta a aparncia segmentada das regies mais caudais do SNC, mas organizado de maneira segmentada, e, pelo menos, 30 genes Hox, expressos regionalmente, j foram identificados no prosencfalo de camundongos (Rubenstein et al., 1998). Esses estudos demonstram que o eixo neural embrionrio dividido em um padro preciso de segmentos, com medida que a neurognese ocorre, as clulas precursoras neuroepiteliais nas zonas proliferativas que revestem os ventrculos cerebrais dividem-se para produzir os neurnios corticais. Em uma dada regio do crtex, neurnios que compartilham a mesma data de nascimento geralmente seguem o mesmo padro de diferenciao e formam a populao celular da mesma camada cortical. Apesar disso, influncias epigenticas mltiplas esto envolvidas na determinao do destino final de cada neurnio individual. Estudos de linhagens com retrovrus de replicao incompetente tm sido usados para mapear os destinos de descendentes de clulas precursoras corticais individuais. Descendentes clonais marcados s vezes incluem clulas amplamente dispersas que formaro a populao de diferentes regies cerebrais e que ocupam mltiplas camadas corticais (Grove et al., 1993; Mione et al., 1994; C. Walsh e Cepko, 1993). De maneira similar, resultados de experimentos com camundongos quimricos contradizem os estritos mecanismos de dependncia da linhagem para especificao regional ou laminar (Crabdall e Herrup, 1990; Fishell et al., 1990; Goldowitz, 1989). Entretanto, clulas corticais realmente se destinam a uma disposio laminar no momento de sua diviso celular final, antes de migrarem para fora da zona proliferativa. Em experimentos com transplantes heterocrnicos, McConnell (1988) transplantou clulas da zona ventricular de um embrio, no qual as clulas destinadas para as camadas mais profundas estavam sendo geradas, a crebros de hospedeiros mais velhos, onde clulas destinadas para as camadas superficiais estavam sendo geradas, desafiando-as a alterarem seu destino laminar. As clulas conseguiam adotar um destino laminar apropriado ao hospedeiro se transplantadas antes, mas no depois, da ltima rodada de diviso celular. As clulas neuroepiteliais podem alterar sua atividade proliferativa em resposta a fatores de sinalizao local, inclusive a aminocidos neurotransmissores. Durante estgios iniciais do desenvolvimento cortical, clulas progenitoras na zona ventricular j expressam subtipos especficos de receptores para os neurotransmissores GABA e glutamato (LoTurco et al., 1991, 1995). Durante os estgios mais tardios da corticognese, a ativao desses receptores por neurotransmissores liberados endogenamente inibe a sntese de DNA e diminui o nmero de clulas precursoras que esto entrando na fase de sntese de DNA do ciclo celular (LoTurco et al., 1995). Algumas evidncias tambm sugerem que certos fatores de crescimento podem regular a neurognese. Por exemplo, receptores para o fator de crescimento bsico do fibroblasto so expressos em clulas neuroepiteliais embrionrias (Reid et al., 1990), e o fator de crescimento bsico do fibroblasto estimula a diviso celular de precursores neuronais (Gensburger et al., 1987). Os circuitos neuronais que regulam a atividade de populaes de clulas precursoras no SNC esto comeando a ser explorados.

Migrao
Aps terem completado suas divises celulares finais, os neurnios migram para posies definitivas, guiados por sinais fsicos e qumicos (Figura 115). No crtex, por exemplo,

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uma estrutura temporria de clulas gliais radiais estabelecida durante o desenvolvimento e parece ser fundamental para a organizao colunar do crtex (Rakic, 1988). Quando as clulas completam sua diviso final, so fixadas a essas guias gliais por molculas de adeso celular, como a astrotactina

(Hatten, 1993), e movem-se das zonas ventricular e subventricular para a rea superficial do crtex (Figura 115). O movimento de neurnios ao longo das fibras gliais parece ser regulado por sinais difusveis, tais como o glutamato agindo nos receptores NMDA de neurnios em migrao (Komuro e

Figura 115 A migrao neuronal e o desenvolvimento cortical. Painel A1. Uma seco do crtex cerebral em desenvolvimento ilustrando a zona ventricular (ZV) ao redor do ventrculo (VL) onde todos os neurnios corticais so originados. Painel A2. medida que o desenvolvimento prossegue (da esquerda para a direita), os neurnios gerados mais precocemente migram da ZV para formar a pr-placa (PP). Neurnios originados mais tardiamente, destinados a formar a placa cortical (PC), migram da zona ventricular pela zona intermediria (ZI) e dividem a prplaca em zona marginal (ZM) e subplaca (SP). A placa cortical vai desenvolver mltiplas camadas medida que novos neurnios so adicionados. A zona subventricular (ZSV) a fonte primria de clulas gliais no crtex. Painel B1. A maioria dos neurnios recm-nascidos migram ao longo das fibras gliais radiais. O neurnio migratrio caracterizado por um processo condutor com filopdios, um processo secundrio e um ncleo localizado na parte do corpo celular que est voltada para o processo secundrio. Os neurnios gerados a partir de uma nica clula precursora podem, s vezes, ficar dispersos tangencialmente no crtex, sugerindo que a migrao neuronal no-radial tambm ocorre durante o desenvolvimento cortical. Painel B2. Neurnios em desenvolvimento e glia recombinados em cultura, mostrando padres de migrao. Fotografias sucessivas de um neurnio hipocampal em migrao, obtidas a intervalos de aproximadamente 15 minutos. O neurnio (n) move-se segundo padres de paradas e continuaes ao longo da fibra glial radial (fg). Um processo condutor (pc) estende-se na poro superior da clula e apresenta numerosas extenses de filopdios altamente ativos. O processo secundrio e o ncleo localizado posteriormente tambm esto em evidncia. Os neurnios migram em glias provenientes de diferentes crebros, sugerindo a existncia de um sistema de reconhecimento molecular comum, utilizado para guiar a migrao ao longo de toda a extenso cerebral.
Fonte: Painel A1 e lado esquerdo do Painel B1 reeditados com permisso de Rakic P: Radial Unit Hypothesis of Cerebral Cortical Evolution. Experimental Brain Research 21 (suppl): 25-43, 1991; Painel A2 reeditado de Uylings HBM, Van Eden CG, Parnavelas JG, et al.: The Prenatal and Postnatal Development of the Rat Cerebral Cortex, em The Cerebral Cortex of the Rat. Editado por Kolb B, Tees RC. Cambridge, MA, MIT Press, 1990, p.35-76; lado direito do Painel B1 reeditado de Rakic P: Mode of Cell Migration to the Superficial Layers of Fetal Monkey Neocortex. Journal of Comparative Neurology 145: 61-83, 1972, direitos autorais de John Wiley and Sons; Painel B2 reeditado de Hatten ME: Riding the Glial Monorail: A Common Mechanism for Glial-Guided Neuronal Migration in Different Regions of the Developing Mammalian Brain. Trends in Neurosciences 13: 179-184, 1990. Utilizada com permisso.

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Rakic, 1993). Alm da migrao radial das zonas ventriculares superfcie pial, os neurnios podem tambm migrar tangencialmente em paralelo a ela. No crtex cerebral, os neurnios piramidais migram radialmente da zona ventricular sua camada especfica dentro da placa cortical (Rakic, 1978). Em contrapartida, uma grande poro de neurnios GABArgicos que nascem na eminncia ganglionar subcortical do telencfalo migram tangencialmente para a placa cortical (Anderson et al., 1997). O desenvolvimento cortical embrionrio ocorre em dois estgios (Marin-Padilla, 1992). Os neurnios gerados mais precocemente so uma populao transitria de clulas. Eles formam a primeira camada cortical, chamada de camada plexiforme primordial ou pr-placa. O segundo estgio de desenvolvimento cortical comea quando neurnios corticais originados na zona germinal periventricular migram em direo pr-placa, efetivamente dividindo essa camada em duas partes. Neurnios que chegam mais tardiamente ultrapassam os que chegaram antes, de modo que as camadas corticais desenvolvem-se de dentro para fora (Rakic, 1974). medida que o crtex aumenta sua espessura, os neurnios iniciais continuam a formar as camadas delimitantes acima e abaixo da placa cortical em desenvolvimento, conhecidas como zona marginal e subplaca, respectivamente. As maiores clulas da zona marginal embrionria so as clulas de Cajal-Retzius. Assim como muitos outros tipos de clulas da zona marginal e da subplaca, as clulas de Cajal-Retzius parecem sofrer morte celular programada em estgios ps-natais precoces, aps a laminao cortical ter-se estabelecido (Mienville, 1999). Vrios achados recentes apiam a importncia da zona marginal e das clulas da subplaca no auxlio da organizao da corticognese. As primeiras sinapses a se formarem durante o desenvolvimento cortical so localizadas na zona marginal e na subplaca. No crtex visual, clulas da subplaca enviam os primeiros axnios do crtex ao ncleo geniculado lateral do tlamo. Eles, por sua vez, recebem contatos sinpticos dos axnios do ncleo geniculado lateral antes que esses axnios atinjam seus alvos corticais na camada 4 (Allendoerfer e Shatz, 1994). Devido ao fato de que a remoo cirrgica inicial das clulas da subplaca previne os axnios do ncleo geniculado lateral de entrarem no crtex (Ghosh et al., 1990) e de que sua remoo mais tardia previne a formao das colunas de dominncia ocular (Ghosh e Shatz, 1992), essas clulas parecem ser crticas para a formao das conexes tlamo-corticais. Uma importante informao a respeito da importncia das clulas da zona marginal na regulao da migrao em estruturas laminares cerebrais foi obtida por estudos do camundongo mutante reeler. Nestes camundongos, um erro nos mecanismos moleculares que controlam a migrao resulta em formao anormal das camadas corticais (Caviness, 1982). O primeiro estgio da corticognese ocorre normalmente, e uma pr-placa de aparncia normal formada. Entretanto, quando os neurnios em migrao atingem a placa cortical, eles no conseguem ultrapassar os neurnios que chegaram anteriormente, e o crtex desenvolve-se de fora para dentro, ou seja, em um padro invertido. O gene selvagem do locus reeler j foi identificado. Esse gene codifica uma protena, a reelina (DArcangelo et al., 1995), que no possui domnios transmembrana e provavelmente uma protena extracelular; estudos histolgicos localizaram a reelina na superfcie externa das clulas de Cajal-Retzius (Ogawa et al., 1995). Esses achados enfatizam a importncia das clulas transitrias da cama-

da plexiforme primordial no estabelecimento da laminao cortical. Alm da reelina, vrios outros genes tm sido recentemente relacionados com a migrao neuronal, inclusive em camundongos com genes incapacitados (mdab1), os receptores VLDL e ApoE2, a quinase dependente de ciclina 5 (cdk5), a p35, a astrotactina, a integrina 1, a integrina 3 e a neuregulina (revisado em C.A.Walsh, 2000). A deleo de alguns desses genes est associada a uma srie de distrbios do neurodesenvolvimento em humanos, sutis ou devastadores (C.A. Walsh, 2000; C.A. Walsh e Goffinet, 2000). Mutaes no gene que codifica a filamina provocam a heterotopia periventricular ligada ao X, a qual resulta na formao de ilhotas de neurnios ectpicos prximo aos ventrculos e em um leve prejuzo cognitivo. A filamina uma fosfoprotena do tipo actina, com ligaes cruzadas, necessria para a locomoo de muitos tipos de clulas. A mutao de LIS1 est associada lissencefalia tipo 1 em humanos e provoca desorganizao no crtex, no hipocampo e no bulbo olfatrio de camundongos (C.A. Walsh e Goffinet, 2000), com graves conseqncias cognitivas. Esses distrbios enfatizam o processo de migrao neuronal como sendo o primeiro substrato patolgico para transtornos relacionados ao desenvolvimento cortical.

Diferenciao neuronal
Aps terem migrado para suas posies definitivas, os neurnios comeam a elaborar seus processos. Durante vrios dias a semanas, cada neurnio elabora uma rvore dendrtica caracterstica e um padro de projeo axonal altamente especfico. A diferenciao neuronal essencial para o funcionamento cerebral adequado, j que a estrutura do neurnio determina o nmero e os tipos de informaes que a clula receber, bem como o nmero e os tipos de clulas com as quais ela far contato. O crescimento do neurito mediado por estruturas especializadas: os cones de crescimento, que se formam nas extremidades dos processos. Esses cones controlam a insero de novos elementos de membrana na membrana celular, liberam enzimas proteolticas para a abertura de vias pela matriz extracelular e estendem processos mais finos (filopodia), que guiam o processo de crescimento na direo apropriada (Purves e Lichtman, 1985; Suter e Forscher, 2000). Os cones de crescimento axonal podem mover-se at 1 mm por dia. medida que avanam, um citoesqueleto de microtbulos e de neurofilamentos forma-se no processo de elongao. Alm da manuteno da estrutura do processo em crescimento, esses elementos do citoesqueleto tambm conduzem a membrana e as protenas estruturais necessrias dos locais de sntese no corpo celular aos processos recm-gerados e conduzem substncias trficas ao corpo celular. A orientao axonal controlada por um grande nmero de sinais, divididos em quatro categorias principais: quimioatrao ou quimiorrepulso e atrao ou repulso de contato (Figura 116). A princpio, os cones de crescimento dependem da adesividade intrnseca das clulas adjacentes. Mais tarde, so guiados por seus alvos ou por clulas intermedirias de orientao. Os alvos apropriados podem expressar molculas de adeso ou liberar fatores quimioatrativos difusveis, enquanto os alvos inapropriados podem fornecer sinais repulsivos mediados pelo contato ou difusveis. O alvo valida as clulas conectadas de forma correta, pois fornece substncias trficas que sustentam a sobrevivncia dos neurnios em inervao. As clulas que falham na realizao de conexes apropriadas

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Figura 116 Foras envolvidas no direcionamento axonnico. O direcionamento apropriado dos axnios em direo a seus alvos envolve a ao coordenada de quatro tipos de sinais de orientao: atrao de contato, repulso de contato, quimioatrao e quimiorrepulso. Existem sinais de curto alcance (contato) e de longo alcance (qumicos) que podem agir para inibir/repelir ou atrair os cones de crescimento neuronal.
Fonte: Goodman CS, Tessier-Lavigne M: Molecular Mechanisms of Axon Guidance and Target Recognition, em Molecular and Cellular Approaches to Neural Development. Editado por Cowan WM, Jessel TM, Zipursky SL. New York, Oxford University Press, 1997, p.114. Utilizada com permisso.

sofrem apoptose (morte celular programada) devido falta de tais substncias. A formao de conexes especficas tem sido extensivamente estudada em neurnios sensoriais dos membros do gafanhoto. Essas clulas so originadas na periferia e, em seguida, enviam axnios ao SNC em desenvolvimento (Goodman e Shatz, 1993). Os primeiros neurnios a enviar seus processos formam as fibras pioneiras. Os neurnios que se desenvolvem mais tarde so guiados por interaes adesivas com as fibras pioneiras. Clulas especficas no epitlio, chamadas de clulas guias, servem como alvos intermedirios. Os cones de crescimento das fibras pioneiras estendem filopdios, que fazem contatos transitrios atravs de junes comunicantes com as clulas guias, provavelmente realizando trocas de pequenas molculas que agem como reguladores intracelulares. Se esses filopdios so bloqueados farmacologicamente, o crescimento continua, mas de maneira no-direcionada (Bentley e Toroian-Raymond, 1986). As fibras pioneiras prosseguem de uma clula-guia prxima, e assim sucessivamente, at que atinjam seus alvos finais. Mais tarde, as prprias clulas guias daro origem a neurnios, que enviam seus processos ao SNC, seguindo as fibras pioneiras que elas orientaram. Trabalhos recentes tm mostrado que mecanismos de desenvolvimento similares operam na formao do SNC de mamferos. Na medula espinal em desenvolvimento, os neurnios comissurais na medula espinal dorsolateral so orientados quimiotaticamente lmina-assoalho da medula ventral. Ao atingirem a lmina-assoalho, os processos usam-na como clulas guia, alterando sua direo e crescendo para formar o trato espinotalmico contralateral. Molculas quimioa-

trativas, tais como as netrinas (Cook et al., 1998; Kennedy et al., 1994; Tear, 1999), controlam esse processo. De maneira similar, no tronco cerebral em desenvolvimento, aps as fibras pioneiras corticoespinais terem se estendido em direo medula espinal, processos secundrios que inervaro a ponte originam-se sob o controle de um fator difusvel quimioatrativo derivado da ponte (Sato et al., 1994). Na medida em que os cones de crescimento navegam pelo crebro, dependem da adeso diferencial a axnios que eles contatam para orientar-se. Vrias famlias de molculas de adeso celular neuronal foram descobertas, juntamente com diversas famlias de receptores para molculas da matriz extracelular (Reichardt e Tomaselli, 1991; F.S. Walsh e Doherty, 1997). Formas particulares de molculas de adeso so expressas por subconjuntos de axnios em desenvolvimento que se agrupam uns aos outros para formar feixes de fibras axonais. Os neurnios podem expressar seletivamente molculas de adeso e receptores em certas regies do axnio e tambm alternar entre express-los ou no em tempos apropriados. Por exemplo, na medula espinal em desenvolvimento, os axnios comissurais expressam certas glicoprotenas em seus processos medida que crescem e cruzam a linha mdia. Esses axnios ento passam a expressar diferentes glicoprotenas quando passam a seguir os tratos longitudinais no lado contralateral (Dodd et al., 1988; Tear, 1999). Os neurnios em desenvolvimento podem depender de sinais atrativos e repulsivos para atingir seus alvos. Recentemente, um grande nmero dessas molculas foi caracterizado (Goodman, 1996). Por exemplo, na lmina ventral do tubo neural em desenvolvimento de vertebrados e no quiasma ptico de mamferos com viso binocular, os axnios destinados a cruzar a linha mdia assim o fazem. Aqueles no destinados a cruzar comportam-se como se tivessem encontrado um sinal repulsivo; os cones de crescimento colapsam ao atingirem a linha mdia e ento mudam de direo (Godement et al., 1990; Sretavan, 1990). Um candidato possvel para tal repulso uma famlia de molculas que orientam axnios, as efrinas (Flanagan e Vanderhaeghen, 1998; Nakagawa et al., 2000). Outra famlia de fatores repulsivos a das semaforinas (Raper, 2000); axnios sensoriais do gnglio da raiz dorsal deixam de crescer devido a sinais repulsivos mediados pelas semaforinas (Messersmith et al., 1995). Alm disso, na mosca-das-frutas em desenvolvimento, alguns axnios de interneurnios em cada neurmero atingem a linha mdia e cruzam-na, enquanto outros mudam sua direo e permanecem sem cruzar; essas interaes na linha mdia parecem ser mediadas por interaes entre protenas codificadas pelas famlias de genes robo e slit (Brose e Tessier-Lavigne, 2000; Seeger, 1994). Para adicionar ainda mais complexidade, foi recm-demonstrado que uma mesma molcula orientadora de axnios pode agir atraindo ou repelindo o mesmo axnio, dependendo da concentrao intracelular local de AMPc ou GMPc no cone de crescimento (Song e Poo, 1999).

Formao da sinapse
Quando o cone de crescimento axonal atinge uma clula-alvo, uma srie complexa de interaes se inicia, resultando na formao de uma sinapse. Embora ainda haja muito para ser aprendido sobre a formao de sinapses no SNC, o processo bsico da sinaptognese na juno neuromuscular (a sinapse entre um neurnio motor e uma clula muscular) j foi bem descrito (Figura 117). Tanto o neurnio motor quanto a fibra muscular possuem a maquinaria molecular necess-

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Figura 117 Formao de uma sinapse na juno neuromuscular (JNM). Painel A. Esquema dos componentes moleculares de uma juno neuromuscular tpica. Em uma JNM madura, o terminal pr-sinptico separado da clula muscular ps-sinptica pela fenda sinptica. As vesculas sinpticas preenchidas com acetilcolina esto agrupadas nas zonas ativas, onde podem fundir-se com a membrana plasmtica em decorrncia da despolarizao para liberar o transmissor na fenda sinptica. Os receptores da acetilcolina localizam-se ps-sinapticamente, e clulas gliais chamadas de clulas de Schwann recobrem o terminal sinptico. Painel B. Estgios da formao da JNM. (1) Um cone de crescimento isolado de um neurnio motor guiado em direo ao msculo pelos sinais de orientao axonnica. (2) O primeiro contato fsico e no-especializado. (3) Entretanto, as vesculas sinpticas agrupam-se rapidamente no terminal axnico, os receptores de acetilcolina comeam a agrupar-se na sinapse em formao e a lmina basal deposita-se na fenda sinptica. (4) medida que o desenvolvimento continua, mltiplos neurnios motores inervam cada msculo. (5) Entretanto, ao longo do tempo, todos os axnios, exceto um, so eliminados por um processo que depende da atividade, e o terminal remanescente continua sua diferenciao.
Fonte: Reeditada de Kandel Er, Schwartz JH, Jessel TM: Principles of Neural Science, 4 edio. New York, McGraw-Hill, 2000, p.1088. Utilizada com permisso.

ria pr-fabricada antes da formao da sinapse (J.R. Sanes e Lichtman, 1999). O cone de crescimento do neurnio motor funciona como uma proto-sinapse, apresentando liberao de neurotransmissor regulada pela atividade, e as clulas ps-sinpticas no-inervadas apresentam receptores para os transmissores distribudos em grande parte da sua superfcie. Em questo de minutos aps o contato inicial, uma forma rudimentar de transmisso sinptica comea a existir. No decorrer dos dias subseqentes, as conexes comeam a fortalecer-se e estabilizar-se, e o cone de crescimento vai maturando e dando origem ao terminal pr-sinptico, reunindo os elementos ce-

lulares necessrios para liberao localizada de neurotransmissor nas zonas ativas. Paralelamente, a clula ps-sinptica concentra receptores no local de contato, removendo-os de outras regies, e, ao longo de dias, desenvolve as especializaes ps-sinpticas (J.R. Sanes e Lichtman, 1999). Embora essa srie bsica de eventos seja provavelmente o modelo de formao de sinapses entre neurnios do SNC, certamente existiro substanciais diferenas devido grande diversidade das sinapses do SNC. Para que as sinapses no SNC se formem, os principais componentes da sinapse devem ser recrutados para os stios de contato fsico entre axnios e den-

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dritos. Por exemplo, neurnios hipocampais pr e ps-sinpticos contm alguns componentes da maquinaria sinptica antes da formao da sinapse. Os receptores AMPA e NMDA esto presentes nos dendritos, e as protenas das vesculas sinpticas esto presentes em axnios distais antes do contato (Craig et al., 1993; Fletcher et al., 1991; Kraszewski et al., 1995). O contato entre neurnios pr e ps-sinpticos seguido pelo recrutamento de vesculas sinpticas para as novas sinapses dentro de horas aps o contato (Ahmari et al., 2000). Atravs de mecanismos desconhecidos, o contato entre axnio e dendrito resulta no agrupamento de receptores glutamatrgicos nos stios sinpticos da clula ps-sinptica (Craig et al., 1993). Em culturas de baixa densidade de neurnios hipocampais, receptores NMDA, AMPA e protenas estruturais ps-sinpticas acumulam-se nas sinapses a intervalos de tempo distintos, sugerindo que eles so direcionados sinapse por diferentes mecanismos (Friedman et al., 2000; Rao et al., 1998). Vrios grupos de pesquisa independentes tm demonstrado que receptores NMDA so expressos antes dos receptores AMPA nas sinapses hipocampais recm-formadas e que, medida que o desenvolvimento continua, os receptores AMPA se acumulam gradualmente nessas sinapses (Isaac et al., 1997; Liao et al., 1999; Petralia et al., 1999; Wu et al., 1996). Entretanto, outros investigadores demonstraram o resultado oposto que os receptores AMPA so os primeiros a agrupar-se nas sinapses hipocampais, seguidos pelos receptores NMDA e pelas protenas estruturais (Friedman et al., 2000; Rao et al., 1998). O tempo preciso da insero de receptores AMPA e NMDA tem implicaes significativas para os mecanismos de fortalecimento sinptico durante o desenvolvimento cortical, j que os dois receptores medeiam formas muito diferentes de plasticidade sinptica (Kim e Huganir, 1999).

Maturao e sobrevivncia neuronais

A maturao das clulas ps-sinpticas requer sntese protica de novo, assim como as alteraes duradouras dependentes do aprendizado no SNC adulto. Os genes de expresso imediata (IEGs) (Morgan e Curran, 1989) esto entre os primeiros genes a serem ativados pela despolarizao ps-sinptica, estimulados pelas elevaes no Ca2+, na AMPc, no GMPc, no inositoltrifosfato (IP3) ou no diacilglicerol (DAG). O prottipo dessa famlia de proto-oncogenes o c-fos. A transcrio dos IEGs leva sntese de protenas (p. ex., c-fos) que modulam ou induzem a transcrio de outros genes que, direta ou indiretamente, provocam alteraes estruturais na clula. Por exemplo, a sntese do fator de crescimento nervoso (NGF) pode ser controlada pela transcrio de c-fos; leses no nervo isquitico levam a um rpido aumento nos nveis de fos, o qual se liga ao stio de iniciao de transcrio para NGF, estimulando sua produo (Hengerer et al., 1990). A sensibilizao de longa durao na Aplysia (Barzilai et al., 1989), a LTP hipocampal (Cole et al., 1989; Wisden et al., 1990) e a plasticidade estrutural nos dendritos (Lyford et al., 1995) esto associadas ativao especfica de IEGs. Interaes entre neurnios pr e ps-sinpticos podem potencializar e modular sua diferenciao. Por exemplo, a secreo de fatores trficos por clulas ps-sinpticas capaz de determinar se os neurnios pr-sinpticos que as inervam sobrevivero ou sofrero apoptose. Regulaes mais refinadas da diferenciao de clulas pr-sinpticas tambm ocorrem. No sistema nervoso simptico em desenvolvimento, neurnios jovens so exclusivamente noradrenrgicos antes da for-

mao das sinapses. Dependendo do tecido-alvo, eles podem ser induzidos a tornar-se colinrgicos, mantendo apenas traos do fentipo noradrenrgico (Landis, 1990). Esse efeito dependente do alvo mediado pela liberao de um fator solvel de diferenciao colinrgica pelas clulas ps-sinpticas. Uma vez que o contato sinptico estabelecido, a ativao colinrgica da clula ps-sinptica pelas terminaes pr-sinpticas suprime a liberao do fator de diferenciao colinrgica. Portanto, a formao de uma sinapse pode atingir alteraes de longo alcance, tanto pr quanto ps-sinpticas, que podem incluir a escolha de um neurotransmissor de um neurnio pr-sinptico. Em muitas reas do sistema nervoso de vertebrados, os neurnios so inicialmente produzidos em excesso. Para sobreviver, muitos neurnios precisam receber um suprimento adequado de um ou mais fatores trficos produzidos por seus neurnios-alvo. A competio por suprimentos limitados desses fatores assegura que os neurnios sobreviventes sero corretamente conectados e que o nmero de neurnios ser adequado ao tamanho do alvo. Em geral, clulas privadas de fatores neurotrficos sofrem apoptose, uma forma de morte celular programada geneticamente, caracterizada pela retrao citoplasmtica, pela condensao da cromatina e pela degradao do DNA em fragmentos oligonucleossomais (Edwards et al., 1991). Diferentemente da necrose, esse processo no estimula respostas inflamatrias. A apoptose um processo ativo que requer sntese de RNA e sntese protica (Oppenheim et al., 1991; Scott e Davies, 1990). Existe um nmero crescente de dados que sustentam a extraordinria hiptese de que a apoptose um programa-padro para a maioria das clulas e de que o suicdio celular disseminado prevenido apenas pela presena contnua de sinais de sobrevivncia que suprimem o programa intrnseco de morte celular (Raff, 1992). O exemplo neuronal melhor estudado a dependncia de neurnios simpticos e sensoriais em relao ao NGF produzido pelo tecido-alvo. Embora quase a metade dos neurnios simpticos normalmente sofra apoptose, a aplicao de NGF exgeno impede a maioria das clulas de morrer; em contrapartida, a neutralizao do NGF mediante anticorpos produz morte generalizada dos neurnios simpticos (Raff et al., 1993). Vrias famlias de fatores de crescimento e de seus receptores foram identificadas (Figura 118), inclusive as neurotrofinas que se ligam a membros da famlia dos receptores TrK de tirosina-quinases (Bothwell, 1991; Chao, 1992; Glass e Yancopoulos, 1993). Elas abrangem o NGF, o fator neurotrfico derivado do crebro, e as neurotrofinas 3, 4/5 e 6. Outra famlia inclui o fator neurotrfico ciliar, a atividade promotora de crescimento e o fator inibidor da leucemia. Fatores neurotrficos adicionais incluem o fator de crescimento de fibroblasto bsico e o fator neurotrfico derivado da linhagem celular glial. Camundongos transgnicos, com mutaes nos genes neurotrficos ou nos seus receptores apresentam anormalidades em determinadas populaes de neurnios (Davies, 1994). Os fatores de sobrevivncia neuronal no so exclusivamente derivados dos alvos; suas fontes tambm incluem neurnios de inervaes, clulas gliais e hormnios circulantes. A habilidade dos fatores trficos em promover a sobrevivncia neuronal tem sido atribuda cascata da fosfatidilinositdeo 3-OH quinase/c-Akt quinase, agindo por meio de, pelo menos, dois componentes intracelulares da via de morte celular, BAD e caspase-9 e o fator de transcrio NF-B (Datta et al., 1999). Os mecanismos celulares da apoptose parecem envolver uma inter-relao complexa de vrias cascatas de sinalizao

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Figura 118 As neurotrofinas exercem seus efeitos pela ligao a dois tipos de receptores: o receptor para o fator de crescimento nervoso de baixa afinidade, tambm chamado de p75, e o receptor de tirosina quinase de alta afinidade, os receptores Trk. O fator de crescimento nervoso (NGF) liga-se principalmente ao TrkA, e o fator neurotrfico derivado do crebro (BDNF) e a neurotrofina-4 (NT-4) ligam-se principalmente ao TrkB. A especificidade da neurotrofina-3 (NT-3) menos precisa. Embora ela se ligue principalmente ao TrkC, tambm pode ligar-se a TrkA e TrkB sob algumas condies celulares. Alm disso, todas as neurotrofinas ligam-se a p75.
Fonte: Adaptada de Kandel ER, Schwartz JH, Jessel TM: Principles of Neural Science, 4 edio. New York, McGraw-Hill, 2000, p.1057. Utilizada com permisso.

mas vrias caractersticas em comum esto sendo identificadas. H evidncias de que espcies reativas de oxignio podem desencadear a apoptose em neurnios (Greenlund et al., 1995) e de que o Bcl-2 pode prevenir a apoptose pela inibio da produo de radicais livres (Hockenbery et al., 1993; Kane et al., 1993). Essa hiptese tem levado a tentativas do uso de antioxidantes e inibidores da produo de radicais livres como agentes teraputicos em vrias doenas neurodegenerativas, traumas e acidentes vasculares cerebrais (AVCs). Por exemplo, a superxido dismutase (uma defesa contra radicais livres) protege os neurnios contra dano isqumico. Camundongos transgnicos que superexpressam a superxido dismutase apresentam infartos menores aps a ocluso arterial (Kinouchi et al., 1991). Mutaes no gene da Cu/Zn superxido dismutase esto associadas a certas formas familiares da esclerose amiotrfica lateral, sugerindo que radicais de oxignio podem ser responsveis pela degenerao dos neurnios motores em pacientes com essa doena (Rosen et al., 1993).

Refinamento sinptico dependente da experincia

A experincia sensorial normal essencial para a maturao das conexes neurais tanto no sistema nervoso perifrico como no central. A experincia sensorial modela o desenvolvimento de diversas regies cerebrais durante uma janela temporal especfica, chamada de perodo crtico. O processo do refinamento sinptico assume significncia clnica e continua a ser importante ao longo da vida, fornecendo mecanismos para a modificao da estrutura e da conectividade neuronal dependente da atividade. O papel integral da atividade sensorial no desenvolvimento cerebral e a habilidade da experincia em alterar a percepo tm sido mais extensivamente documentadas no sistema visual. Nesse sistema, os estmulos visuais sobrepostos dos dois olhos devem ser combinados de maneira ordenada para maximizar a acuidade e a estereopse (Figura 119). Em animais com viso binocular, tais como humanos, gatos e macacos, os estmulos visuais de uma regio especfica do espao visual ativam neurnios no crtex visual contralateral. Os neurnios nas hemirretinas esquerdas dos olhos esquerdo e direito convergem sinais ao crtex esquerdo, e, similarmente, os neurnios das hemirretinas direitas convergem sinais ao crtex direito (Figura 119A). Portanto, as informaes visuais provenientes da mesma fonte externa so temporariamente separadas em vias especficas do olho direito e do esquerdo e ento reunidas no mesmo hemisfrio cortical. Como essas informaes visuais so recombinadas? A segregao especfica de cada olho, dos estmulos de cada retina, mantida no tlamo visual, ou ncleo geniculado lateral (NGL), e nas camadas de projeo do crtex visual, mas converge em outras camadas do crtex visual primrio (V1). Nas camadas do V1 que recebem estmulos do ncleo geniculado em adultos, estmulos dos dois olhos projetam-se em colunas de clulas separadas. As colunas de dominncia ocular (DO) formadas so arranjadas adjacentemente umas s outras em listas alternadas dominadas por um olho ou pelo outro (Figura 119) (Hubel e Wiesel, 1977). O padro de listas formadas na superfcie do crtex lembra as listas de uma zebra (Figura 119B, D). Os neurnios de sada das colunas de dominncia ocular projetam-se a outras camadas corticais, onde a informao visual derivada de estmulos de ambos os olhos recombinada e sinais estereoscpicos so extrados. O fato de sinais separados de cada olho serem trabalhados em paralelo,

(Sastry e Rao, 2000). No verme C. elegans, ced-3 e ced-4 so necessrios para a apoptose (Ellis et al., 1991). O produto do gene ced-3 uma cistena protease que possui um homlogo em mamferos chamado de enzima conversora da interleucina-1 (ECI). Grande nmero de cistena proteases foi recmdescoberto em muitas espcies, desempenhando diversos papis na morte celular; essas protenas so classificadas como membros da grande famlia de protenas caspase (sigla para aspartato protease dependente de cistena) (D.H. Sanes et al., 2000). Algumas caspases so consideradas as protenas efetoras finais na cascata de morte celular. Em contraste com os genes de morte celular ced-3 e ced-4, o ced-9 age prevenindo a apoptose em clulas que normalmente sobrevivem. Uma mutao em ced-9 leva apoptose disseminada e morte do embrio (Hengartner et al., 1992). O gene ced-9 encontrado em vermes homlogo ao oncogene humano Bcl-2, o qual se encontra superexpresso em clulas B de linfomas humanos (Tsujimoto et al., 1984). O gene humano pode bloquear a morte celular em vrios sistemas in vivo e in vitro, tendo sido transferido C. elegans, onde, notavelmente, pde substituir o ced-9 e prevenir a apoptose em suas clulas. Recentemente, a famlia de protenas semelhantes a Bcl-2 cresceu bastante. Embora algumas dessas protenas inibam a morte celular, outras podem promover a apoptose. Em geral, os resultados atuais sugerem a existncia de vrias vias apoptticas que talvez dependam do tipo de clula e do agente indutor; entretanto, a maioria dessas vias parece convergir ao passo ECI/caspase (D. H. Sanes et al., 2000). Ainda que os passos precisos nas vias de morte celular permaneam no totalmente esclarecidos, os mecanismos moleculares da apoptose foram claramente conservados em termos evolucionrios. Os eventos moleculares subjacentes apoptose em clulas neuronais e no-neuronais provavelmente incluem um grande nmero de iniciadores, de mediadores e de inibidores,

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Figura 119 Colunas de dominncia ocular no crtex visual. Painel A. Na via visual em humanos, as fibras pticas de cada olho dividem-se no quiasma ptico, sendo que cada metade das fibras vai para cada um dos lados do crebro. Na representao esquemtica, as fibras que convergem a informao visual proveniente dos lados esquerdos de cada retina so mostradas projetando-se ao ncleo geniculado lateral (NGL) esquerdo. Os neurnios do NGL (em diferentes camadas), por sua vez, projetam-se ao crtex visual ipsilateral (principalmente camada 4c). Nas camadas do crtex visual maduro que recebem fibras do ncleo geniculado, os estmulos dos olhos so segregados em colunas de dominncia ocular (DO). Painel B. Injees de prolina radioativa em um dos olhos de um gato com duas semanas de vida marcam uniformemente a camada 4 em seces coronais do crtex visual, indicando que aferentes provenientes daquele olho so igualmente distribudos no crtex nessa idade. Entretanto, ao longo das prximas semanas, tais injees mostram a segregao dos aferentes do ncleo geniculado em colunas de DO. Painel C. Diagrama esquemtico da formao de colunas de DO na camada 4 do crtex durante o desenvolvimento normal. Painel D. Um olho de um macaco normal foi injetado com um marcador radioativo, o qual foi transportado transinapticamente ao longo das vias visuais. As reas corticais que recebem estmulos do olho em que foi aplicada a injeo esto marcadas em branco, revelando um padro alternado de listas espaadas regularmente (seco de um corte tangencial atravs da camada 4). Painel E. A deprivao monocular altera o desenvolvimento das colunas de DO. Aqui, o marcador foi injetado no olho no-deprivado, revelando listas mais largas e, portanto, indicando a expanso da rea inervada pelo olho no-deprivado. Ou seja, a experincia normal pr-requisito para uma conectividade adequada do crtex.
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recombinados e separados novamente representativo de um padro mais geral no processamento da informao visual (Livingstone e Hubel, 1998). Durante o desenvolvimento, as colunas de DO so originadas por processos dependentes da atividade (Hubel et al., 1977). Inicialmente, axnios trazendo informao ao ncleo geniculado a partir dos dois olhos sobrepem-se. Entretanto, medida que o desenvolvimento continua, esses axnios lentamente comeam a se segregar em colunas de DO (Figura 1

19B,C). Durante esse perodo, o padro de listas distintas, igualmente distribudo entre os dois olhos, depende da atividade visual normal. Se a viso de um olho prejudicada ou se h estrabismo, o estmulo do olho normal ou dominante comea a controlar a maioria do crtex visual, e o outro olho torna-se funcionalmente cego (Figura 119E). No crtex, as colunas de dominncia ocular do olho normal ou dominante expandemse s custas do olho prejudicado. A segregao das fibras pticas em colunas dependente da atividade (Constantine-Paton

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et al., 1990; Shatz e Stryker, 1998). Ela depende dos estmulos discordantes dos dois olhos; a segregao falha se todo estmulo visual ao crtex bloqueado (com tetrodotoxina) ou artificialmente sincronizado em ambos os olhos (por estimulao eltrica simultnea) (Shatz, 1990). Padres diferenciados de atividade eltrica em cada radiao ptica, conforme ocorre normalmente, medeiam a segregao de DO. A segregao tambm requer a atividade das clulas corticais ps-sinpticas; a infuso da droga inibitria muscimol (um agonista de receptor GABAA) causa uma reverso na dominncia ocular, de modo que, paradoxalmente, o olho mais fraco, em vez do mais forte, assume a influncia cortical maior (Reiter e Stryker, 1988). Portanto, a segregao apropriada dos estmulos corticais requer a coordenao da atividade pr-sinptica normal e das respostas ps-sinpticas. Semelhante dependncia da atividade tambm encontrada em axnios da retina que influenciam as clulas do NGL (Goodman e Shatz, 1993). Realmente, a segregao dependente da atividade dos estmulos sensoriais em colunas funcionais parece ser uma propriedade inerente das projees topogrficas de sistemas sensoriais. Em sapos, que no apresentam viso binocular nem colunas de dominncia ocular, quando um olho extra transplantado em um girino, as fibras pticas do terceiro olho competem com o outro olho que inerva aquele lado do crebro e produzem colunas de dominncia ocular (Constantine-Paton e Law, 1978). Os mecanismos celulares e moleculares subjacentes ao refinamento sinptico dependente da atividade esto comeando a ser elucidados. Muitos deles so notavelmente similares aos mecanismos celulares nos quais se baseiam o aprendizado e a memria no crebro adulto. No sistema visual, acredita-se que os aferentes ao ncleo geniculado sofram segregao em colunas de DO baseados na regra do aprendizado Hebbiano (Hebb, 1949), pela qual neurnios que disparam juntos so seletivamente fortalecidos. A regra prediz que neurnios que disparam sincronicamente fortalecero suas sinapses, enquanto neurnios que o fazem assincronicamente enfraquecero suas sinapses. A LTP e a LTD so candidatos provveis para mediar o processo de formao das colunas de DO (Bear e Rittenhouse, 1999). Alm da atividade, outros fatores podem agir de forma seletiva, fortalecendo sinapses ativas ao mesmo tempo. Um dos mais provveis candidatos para tanto a famlia de fatores de crescimento das neurotrofinas. As neurotrofinas so produzidas em quantidades limitadas pelos neurnios corticais; sua expresso aumentada pela atividade, e elas podem aumentar a fora sinptica, bem como alterar as arborizaes dendrticas e axonais de neurnios corticais (McAlister et al., 1999). Em concordncia com essa hiptese, tanto a infuso de excesso de neurotrofinas quanto o bloqueio das neurotrofinas impedem a formao das colunas de DO (Cabelli et al., 1995, 1997). Assim, as neurotrofinas esto em primeiro lugar como candidatos para mediar o refinamento sinptico dependente da experincia que ocorre durante o desenvolvimento. Alm disso, devido ao seu papel na modulao da fora sinptica, acredita-se que as neurotrofinas estejam envolvidas em doenas neurodegenerativas.

Aes neurotrficas e neurotxicas dos neurotransmissores

Os prprios neurotransmissores podem ter funo trfica ou txica no modelamento dos neurnios e de suas inter-

conexes (Lipton e Kater, 1989). O progresso dos cones de crescimento regulado pelo nvel de Ca2+ intracelular local, o qual atua dentro de uma faixa estreita. Quando os nveis so baixos, os cones esto inativos; quando os nveis sobem, os cones de crescimento comeam a mover-se. Entretanto, acima de determinado nvel, a elevao dos nveis de Ca2+ impede o crescimento e causa retrao ou destruio dos processos neuronais (al-Mohanna et al., 1992). O glutamato capaz de regular o crescimento dos processos neuronais pelo controle do influxo de Ca2+. Esse efeito pode ser contrabalanado por neurotransmissores inibitrios, bem como por uma proviso de grandes quantidades dos fatores trficos (Mattson e Kater, 1989; Mattson et al., 1989). A dopamina, atuando sobre receptores D1, pode inibir a motilidade dos cones de crescimento mediante a ativao da adenilil ciclase, elevando a concentrao intracelular de AMPc (Lankford et al., 1988) ou, atuando sobre receptores D2, pode induzir o crescimento dos neuritos (Todd, 1992). Nveis elevados de glutamato produzem excitotoxicidade, talvez refletindo o funcionamento patolgico desses sistemas sinalizadores do desenvolvimento (Kater et al., 1989). Alternativamente, a excitotoxicidade pode ter uma funo normal na regulao do nmero de clulas e na da conectividade. A excitotoxicidade parece ser mediada pela entrada de Na+ atravs dos canais do tipo AMPA. Isso leva ao inchao neuronal (resultando em edema cerebral). A entrada continuada de Ca2+ pelos canais receptores NMDA resulta em um modo retardado de excitoxicidade, que mata os neurnios, provavelmente pela ativao de proteases intracelulares e/ou gerao de radicais livres, inclusive o NO (Choi, 1994; Dawson et al., 1994). Alm de mediarem o influxo de Na+ e o inchao, os receptores AMPA podem estar acoplados via IP3/DAG, levando tambm ao aumento nos nveis de Ca2+ intracelular e ativao da quinase C. A excitotoxicidade provavelmente responsvel pela perda neuronal em AVCs, no status epilptico, na hipoglicemia e no trauma enceflico (Choi e Rothman, 1990). Essas ocorrncias esto relacionadas, uma vez que todas levam despolarizao neuronal, o que resulta em atividade eltrica excessiva, evocando aumentos excessivos na liberao de glutamato. Os elevados nveis de glutamato extracelular esto presentes em modelos experimentais, e sua citopatologia pode ser mimetizada por injees intracerebrais de aminocidos excitatrios. Os neurnios poupados nesses estados patolgicos so tambm os menos afetados nos modelos experimentais, provavelmente porque possuem menos receptores para os aminocidos excitatrios. Os neurnios danificados apresentam nveis aumentados de Ca2+ intracelular e antagonistas dos aminocidos excitatrios, especialmente aqueles que bloqueiam os receptores NMDA, previnem ou reduzem consideravelmente a perda neuronal nessas condies. Evidncias que atribuem um papel toxicidade dos aminocidos excitatrios nas doenas neurodegenerativas so menos completas (Choi, 1988; Meldrum e Garthwaite, 1990). Uma rara doena neurolgica que fatal na infncia parece dever-se deficincia na sulfito oxidase, resultando em elevao na concentrao do aminocido excitatrio l-sulfocistena. Alm disso, uma forma recessiva da degenerao olivopontocerebelar, que fatal na vida adulta, est associada deficincia da glutamato desidrogenase. E, finalmente, duas doenas neurodegenerativas geograficamente localizadas tm sido associadas ingesto de excitotoxinas. O complexo esclerose lateral amiotrfica parkinsonismo-demncia de guam

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resulta da ingesto do aminocido excitatrio -n-metilamino-l-alanina, encontrado na planta cicadcea. O latirismo encontrado em regies da frica que sofrem com inanio ou fome apresenta uma relao causal com a ingesto da excitoxina -n-oxalilamino-l-alanina encontrada no gro-de-bico. Similaridades entre outros transtornos neuropsiquitricos e distrbios neurodegenerativos idiopticos sugerem um importante papel dos mecanismos de excitoxicidade. intrigante que um conjunto de dados implica os mecanismos de excitoxicidade na patologia da doena de Huntington. A neuropatologia dessa doena mimetizada pela injeo de aminocidos excitatrios e certas classes de neurnios estriatais so poupadas em ambos os casos (Wexler et al., 1991). Alm disso, medidas dos receptores NMDA estriatais em pacientes que faleceram pela doena de Huntington revelam perda seletiva de clulas que apresentam esses receptores, dando suporte possibilidade do papel da excitoxicidade mediada por receptores NMDA na sua patognese (Young et al., 1988).

PERSPECTIVAS
O desenvolvimento cerebral no determinado meramente por programas genticos celulares autnomos, mas, em vez disso, altamente interativo e depende de hierarquias complexas de fatores de sinalizao que operam para restringir de forma progressiva o destino celular. Uma vez que as clulas tenham atingido um fentipo especfico e chegado a uma localizao apropriada, a competio por fatores de sobrevivncia fornece outra oportunidade para influncias ambientais sobre o desenvolvimento resultante. O desenvolvimento celular cerebral no , portanto, estritamente dependente da linhagem, mas envolve um extraordinrio grau de sinalizao interativa. Em muitas reas cerebrais, o estabelecimento de contatos sinpticos dependente da atividade outro exemplo de mecanismos pelos quais a experincia pode refinar aspectos estruturais do desenvolvimento cerebral. Uma conseqncia desses mecanismos associados ao desenvolvimento que nunca ocorrero dois resultados exatamente iguais, mesmo no caso de gmeos com carga gentica idntica. Outra conseqncia o potencial para perturbaes do desenvolvimento normal por agentes fsicos, qumicos ou infecciosos no perodo fetal ou neonatal. Tem se tornado claro que o crebro adulto retm um grau significativo de plasticidade ao longo da vida e que alteraes na organizao cortical podem ser induzidas por estmulos sensoriais comportamentalmente importantes e temporalmente coincidentes (Buonomano e Merzenich, 1998). O treinamento comportamental de macacos-da-noite adultos na discriminao de caractersticas temporais de um estmulo ttil pode alterar as propriedades de resposta espaciais e temporais dos neurnios corticais (Recanzone et al., 1992b). Quando macacos-da-noite adultos so recompensados ao responder a uma estimulao ttil de 30 Hz em um nico dedo de uma das mos, h um aumento no nmero de reas corticais e na rea somatossensorial do crtex onde os neurnios mostram respostas na freqncia adequada depois do treinamento (Recanzone, 1992a). Em uma srie de experimentos, demonstrouse que a representao cortical da pele que recobre os mamilos aumenta quase duas vezes para ratas em perodo de amamentao, comparadas com ratas-controle virgens ou com ratas no ps-parto no-lactantes (Xerri et al., 1994). O comportamento materno de amamentao em ratas constitui uma alte-

rao que ocorre de forma natural, na qual estmulos sensoriais comportamentalmente significativos e regionalmente localizados esto associados reorganizao do crtex somatossensorial primrio. Esse tipo de alterao na organizao do crtex somatossensorial tambm ocorre no crtex auditivo primrio. Macacos-da-noite treinados por vrias semanas para discriminar pequenas diferenas na freqncia de tons apresentados em seqncia demonstraram melhora progressiva em seu desempenho ao longo do treinamento. Ao final do perodo de treinamento, a poro do crtex que respondia s freqncias relevantes estava aumentada (Recanzone et al., 1993). Em estudos-controle com procedimentos de estimulao equivalentes, em que os estmulos no eram relevantes, nenhuma alterao de representao significativa foi registrada (Recanzone et al., 1992b, 1993). Portanto, comportamentos realizados e recompensados em resposta a um estmulo podem induzir alteraes na organizao do crtex sensorial primrio que esto correlacionadas a uma melhora na acuidade da percepo (Merzenich e Sameshima, 1993). Esses experimentos comearam a sugerir maneiras pelas quais experincias da vida a psicoterapia inclusive podem potencialmente modificar a funo cortical e alterar a percepo e o comportamento. Essas alteraes plsticas parecem compartilhar uma linguagem molecular, expressa primeiro durante o desenvolvimento e que envolve os mecanismos dependentes da atividade. A atividade neural essencial para o refinamento sinptico dependente da atividade, para a LTP, para a LTD e para a excitoxicidade (Brown et al., 1990; Choi e Rothman, 1990; Constantine-Paton et al., 1990; Hawkins e Kandel, 1984; Lipton e Kater, 1989). A pea-chave o receptor NMDA, o qual requer, para sua ativao, a ligao do agonista e a despolarizao. Essa parece ser a exigncia essencial para o emparelhamento da especificidade, um tipo de plasticidade sinptica inicialmente postulado por Hebb (1949), em que a ativao simultnea de elementos pr e ps-sinpticos fortalece as conexes. Ao mesmo tempo, a correlao da atividade pr-sinptica com a inibio ps-sinptica pode seletivamente enfraquecer as conexes (Reiter e Stryker, 1988). O influxo de Ca2+ mediado pelo receptor NMDA desencadeia alteraes na fora das sinapses, que podem acabar levando a alteraes estruturais mais permanentes no nmero de sinapses. Em nveis mais elevados, o Ca2+ pode prejudicar o crescimento dos neuritos, causar sua retrao ou seletivamente lesionar uma clula suscetvel. Sem dvida, muitas doenas neuropsiquitricas encontram-se nesse contexto. Para considerar alguns exemplos, a maioria dos quais j foram mencionados, a degenerao estriatal na doena de Huntington parece ser devido a uma superproduo da protena associada vescula sinptica (DiFiglia et al., 1995; Sharp et al., 1995), capaz de provocar a excitoxicidade mediada pelo receptor NMDA (Wexler et al., 1991). Na doena de Parkinson, a perda seletiva de neurnios dopaminrgicos na substncia negra pode ser o resultado tardio de um processo viral, de uma leso por neurotoxinas dopaminrgicas, tais como o MPTP, ou pela deficincia de fatores neurotrficos, tais como o fator neurotrfico derivado do crebro ou o derivado da linhagem glial, os quais podem ser essenciais para a sobrevivncia dos neurnios dopaminrgicos. Na doena de Alzheimer, a perda dos neurnios colinrgicos talvez resulte de uma deficincia ou ainda de uma aberrao no controle do NGF, j que o mesmo captado por neurnios do

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prosencfalo basal. Claramente, o entendimento dos eventos celulares e moleculares que ocorrem durante o desenvolvimento cerebral normal (a maturao e o envelhecimento), bem como daqueles que esto por trs dos transtornos neuropsiquitricos, promover um avano nas estratgias para o tratamento e a preveno desses transtornos. Talvez a possvel interveno mais estimulante e revolucionria para o tratamento de doenas neuropsiquitricas seja o uso de clulas-tronco para reparar o crebro lesionado (S.H. Lee et al., 2000). Apesar do enorme esforo da comunidade de neurocientistas durante o ltimo sculo, no existem atualmente terapias exeqveis para o reparo do crebro humano adulto danificado. evidente que o tratamento de muitas doenas neuropsiquitricas poderia ser melhorado se novos neurnios pudessem ser adicionados a uma regio cerebral lesionada e se fossem estimulados a diferenciar-se no tipo neuronal apropriado e formar conexes apropriadas. Existem hoje duas abordagens para atingir esse objetivo. Na primeira, clulas-tronco pluripotentes esto sendo utilizadas, com sucesso crescente, para repovoar regies cerebrais danificadas. Por exemplo, ratos com sintomas semelhantes aos da doena de Parkinson podem readquirir funes aps a implantao de neurnios dopaminrgicos criados in vitro a partir de precursores neuronais fetais de rato (Studer et al., 1998). Na segunda, mecanismos de reparo intrnsecos recm-descobertos no crebro adulto esto sendo estudados quanto a seu potencial teraputico. Recentemente, a neurognese foi descoberta em vrias regies do crebro adulto, inclusive no giro dentado da formao hipocampal. Esses neurnios migram, diferenciam-se e formam conexes funcionais. Alm disso, a experincia, o aprendizado e o exerccio fsico aumentam a proliferao neuronal em adultos (Fuchs e Gould, 2000). A descoberta da neurognese no crebro adulto sugere a existncia de mecanismos intrnsecos de reparao que podem ser manipulados para o tratamento de doenas neurodegenerativas (Fuchs e Gould, 2000). medida que os mecanismos de doenas neuropsiquitricas vo sendo elucidados em mbito celular e molecular e que o enorme potencial da pesquisa com clulas-tronco encontre-se bem estabelecido, provvel que estejamos muito prximos de tratamentos revolucionrios para muitas doenas neuropsiquitricas.

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