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Biotecnologia Farmacêutica Atual, 2011, 12, 275-284 275

Esteróide anabolizante - e exercício - citocinas cardio-depressivas induzidas e

miocárdicas 1 Expressão do receptor em camundongos CD1

Irene Riezzo1, Marco Di Paolo2, Margherita Neri1, Stefania Bello1, Santina Cantatore1, Stefano
D'Errico1, Dinuccio Dinucci3, Ruggero Parente1, Cristoforo Pomara1, Roberto Rabozzi1, Emanuela
Turillazzi1 e Vittorio Fineschi1, *

1Departamento de Patologia Forense, Universidade de Foggia, Foggia, Itália; 2Departamento de Patologia Forense, Universidade de Pisa,

Pisa, Itália; 3Departamento de Neurociência, Seção de Farmacologia, Universidade de Pisa, Pisa, Itália

Resumo: Poucos estudos em modelos animais foram conduzidos para avaliar o impacto de doses suprafisiológicas de esteróides anabolizantes
androgênicos (AAS) no sistema cardiovascular e na lesão miocárdica. Vinte e cinco camundongos CD1 machos (8-10 semanas de idade; 35g de
peso corporal inicial) foram randomizados em três grupos tratados com AAS e dois grupos de controle. Os camundongos AAS receberam
decanoato de nandrolona intramuscular (DECA-DURABOLIN), veiculado em óleo de araquidis, por 42 dias, duas vezes
por semana, com diferentes dosagens, estudando análise de lipídios plasmáticos, características histopatológicas cardíacas, 1
expressão do receptor adrenérgico, e os efeitos da expressão miocárdica de mediadores inflamatórios (IL-1, TNF-) no induc-
ção da apoptose de cardiomiócitos (HSP70, TUNEL), por meio de análise proteômica e imunohistoquímica. Os
ratos realizaram movimentos livres em suas salas de animais (dois grupos) ou exercitaram-se correndo em
uma esteira motorizada os outros três grupos. A administração recorrente de altas doses de AAS e o
treinamento físico em camundongos produzem aumento significativo no peso corporal e no colesterol total.
Um aumento moderado do peso do coração, hipertrofia cardíaca e ampla miocitólise coliquativa foram
observados na administração de altas doses de AAS e no grupo de treinamento físico. A expressão de HSP70 e
citocina inflamatória IL-1 aumentou nos três grupos tratados com AAS. O TNF- mostrou uma expressão mais
extensa no grupo AAS-dose alta. Um processo apoptótico significativo aleatoriamente esparso no miocárdio
foi descrito.
Palavras-chave: Toxicidade de AAS, apoptose, 1 receptor adrenérgico, dano cardíaco, citocinas, interleucinas.

INTRODUÇÃO esses efeitos são reversíveis após a interrupção da

ingestão desses agentes e o grau em que eles deixam o
Os esteróides anabolizantes androgênicos (AAS) são
comprometimento permanente ainda são questões
derivados sintéticos da testosterona usados em dosagens
controversas [4]. O mecanismo de ação de todos os AAS é
terapêuticas na prática médica. Além disso, os AAS são
semelhante a todos os outros hormônios esteróides, pois
usados em todo o mundo para ajudar os atletas a ganhar
eles se ligam, nos tecidos-alvo, a uma proteína
massa e força muscular. No entanto, havia pouca evidência
intracelular, conhecida como receptor de andrógeno, nos
científica para sugerir que o AAS tinha um efeito de melhoria
tecidos-alvo para formar um complexo receptor de
de desempenho. Estudos recentes que foram rigorosamente
andrógeno no núcleo da célula. Este complexo esteróide-
controlados mostraram que o uso de certos AAS, a saber,
receptor se liga a sequências de DNA palindrômicas e,
decanoato de nandrolona e enantato de testosterona,
especificamente, a elementos de resposta hormonal
aumenta o desempenho atlético ao construir massa
(HRE). Ele inicia a transcrição gênica e a consequente
muscular e força [1]. Quando combinado com o exercício [2],
síntese de mRNA a partir do DNA no núcleo da célula e a
o uso de esteróides anabolizantes demonstrou alterar a
síntese de proteínas chaperonas. Além disso,em vitro.
hipertrofia cardíaca fisiológica induzida pelo exercício para
Poucos estudos em modelos animais foram conduzidos
hipertrofia cardíaca fisiopatológica [3]. Complicações
para avaliar o impacto das doses suprafisiológicas de AAS
cardíacas graves, como insuficiência cardíaca, fibrilação
[5] no sistema cardiovascular, e estudos em humanos
ventricular, tromboses ventriculares, infarto do miocárdio,
ainda falham em estabelecer claramente uma relação
causa-efeito direta entre o abuso de AAS e lesão
Em quase todos os estudos, os efeitos colaterais agudos foram miocárdica [6].
examinados apenas durante a ingestão de AAS ou dentro de semanas a
Tentamos esclarecer os mecanismos de toxicidade de AAS
alguns meses desde a sua interrupção. No entanto, até que ponto
no coração de camundongo, administrando decanoato de nandrolona a camundongos
CD1 machos treinados com força, estudando os lipídeos plasmáticos
* Endereço de correspondência para este autor no Departamento de análise, características histopatológicas cardíacas, cardíacas 1
Patologia Forense da Universidade de Foggia. Hospital “Colonnello expressão do receptor adrenérgico e os efeitos da ex
D'Avanzo”, Viale degli Aviatori 1, 71100 Foggia, Itália; Tel: 0039 0881
pressão de mediadores inflamatórios (IL-1, TNF-) no
733193; Fax: 0039 0881 736903; Email: vfinesc@tin.it

1389-2010 / 11 $ 58,00 + 0,00 © 2011 Bentham Science Publishers Ltd.

276 Biotecnologia Farmacêutica Atual, 2011, Vol. 12, No. 2
indução de apoptose de cardiomiócitos (HSP70, TUNEL),
usando análise proteômica e imunohistoquímica [7].
MATERIAIS E MÉTODOS
O protocolo experimental foi aprovado pelo Comitê de
Ética em Experimentação Animal da Universidade (University
of Foggia) de acordo com o Guia para o Cuidado e Uso de
Animais de Laboratório publicado pelos Institutos Nacionais
de Saúde dos EUA (publicação NIH nº 85-23, revisada 1996).
Modelo Animal e Protocolo Experimental
Vinte e cinco camundongos CD1 machos (8-10 semanas de idade; 35g
de peso corporal inicial) foram randomizados em três grupos tratados
com AAS e dois grupos de controle. Os camundongos foram alojados em
uma sala com temperatura controlada (22 ± 1 ° C), umidade de 55-65%,
ciclo claro-escuro de 12/12 horas (luz acesa às 7:00 da manhã) e tiveram
livre acesso a água e alimentos padrão chow.
o Ratos AAS receberam Decanoato de Nandrolona (DECA-
DURABOLIN) intramuscular, veiculado em óleo de araquidis, por 42
dias, duas vezes por semana.
Os ratos de grupo A (cinco animais) receberam 3,75 mg de decanoato
de nandrolona por quilograma por semana (1,875 mg por quilograma
duas vezes por semana). Eles tinham movimentos livres em suas salas de
animais.
Os ratos de grupo B (cinco animais) receberam 3,75 mg de
decanoato de nandrolona por quilograma por semana (1,875 mg por
quilograma duas vezes por semana). Eles se exercitavam correndo
em uma esteira motorizada (tapìs ròulant).
Os ratos de grupo C (cinco animais) receberam 10 mg de decanoato
de nandrolona por quilograma por semana (5 mg por quilograma duas
vezes por semana). Eles se exercitavam correndo em uma esteira movida
a motor (tapìs ròulant).
o ratos de controle receberam óleo de araquidis
intramuscular, por 42 dias, duas vezes por semana (segunda e
quinta-feira). Os ratos degrupo D (cinco animais) receberam óleo
de araquidis intramuscular e se exercitaram em esteira
motorizada (tapìs ròulant). Os ratos degrupo E (cinco animais)
receberam óleo de araquidis intramuscular e tiveram
movimentos livres em suas salas de animais.
Exame Morfológico
Os camundongos foram sacrificados por decapitação após 42 dias de
programas terapêuticos e de exercícios. Os corações dos animais tratados
e controle foram imediatamente removidos, pesados e fixados em
formalina tamponada a 10% por 48hs, sendo então incluídos em parafina.
Amostras de tecido de coração embebidas em parafina foram seccionadas
a 4μm e, em seguida, a investigação imunohistoquímica das amostras de
coração foi realizada com anticorpos anti-TNF- (Santa Cruz, CA, EUA), anti-
IL-1 (Santa Cruz, CA, EUA), anti-HSP70 (Novocastra, Newcastle upon Tyne,
Reino Unido),
Anti- 1 Receptor Adrenérgico (Abcam, Cambridge, Reino Unido) e
ensaio TUNEL (Chemicon, Temecula, CA, EUA). Por esta
estudo, usamos seções de parafina de 4μm de espessura montadas
em lâminas cobertas com 3, aminopropiltrietoxissilano (Fluka, Buchs,
Suíça). O pré-tratamento foi necessário para facilitar a recuperação
do antígeno e para aumentar a permeabilidade da membrana aos
anticorpos anti-TNF- fervendo em tampão de ácido cítrico 0,1 M,
Riezzo et al.
para anti-IL-1, HSP70 e 1 Receptor em ebulição tampão EDTA 0,25M.
O anticorpo primário foi aplicado na proporção de 1: 600 para
TNF-, na proporção de 1: 4000 para IL-1, na proporção de 1: 100 1
para o receptor adrenérgico e incubado por 120 min a 20 ° C;
para o anticorpo primário anti-HSP70, as seções foram incubadas
na proporção de 1: 100 durante a noite a 20 ° C. O sistema de
detecção utilizado foi o kit LSAB + (Dako, Copenhagen,
Dinamarca), uma técnica de avidina-biotina refinada em que um
anticorpo secundário biotinilado reage com várias moléculas de
estreptavidina conjugadas com peroxidase. Para o ensaio TUNEL
(Kit de Detecção de Apoptose In Situ de Peroxidase Apotag Plus,
Chemicon, Tamecula, CA, EUA), as seções foram pré-tratadas
com Proteinase K (Sigma-Aldrich, Buchs, Suíça) (20 g / ml) por 15
min, a 20 ° C; coberto e incubado com a enzima TdT, diluída na
proporção de 30% em tampão de reação por 60 min, a 38 ° C;
colocado em um frasco de acoplamento contendo tampão de
parada / lavagem de força de trabalho, agitado por 15 segundos,
e incubado durante 10 minutos a 20 ° C; coberto e incubado com
conjugado anti-digoxigenina por 30 minutos, a 20 ° C. A reação
positiva foi visualizada por peroxidação de 3,3-diaminobenzidina
de acordo com métodos padrão. As seções foram contrastadas
com hematoxilina de Mayer, desidratadas, a cobertura foi
removida e observada em um microscópio óptico Leica DM4000B
(Leica, Cambridge, UK).
Para análise semiquantitativa, as lâminas foram pontuadas em um
maneira cega por dois observadores (MN, IR). A intensidade da
expressão imunopositiva foi avaliada semiquantitativamente na
escala 0-4 da seguinte forma: 0 = sem imunorreatividade, 1 =
imunopositividade leve em células dispersas, 2 =
imunopositividade em até um terço das células, 3 =
imunopositividade em até metade das células e 4 = forte
imunopositividade na maioria ou em todas as células. Nos casos
de pontuação divergente, um terceiro observador (VF) decidia a
categoria final. As amostras também foram examinadas em
microscópio confocal e uma reconstrução tridimensional foi
realizada (True Confocal Scanner, Leica TCS SPE).
Western Blot
A análise de Western blot foi realizada. Aproximadamente 100 mg de
tecido cardíaco congelado foi dissecado e imediatamente transferido para
tampão RIPA com coquetel de inibidor de protease e homogeneizado em
gelo utilizando o homogeneizador Silent Crusher. O homogenato foi
centrifugado (12000 RPM durante 10 min a 4 ° C). O sobrenadante foi
coletado, estimado pelo método de Bradford, e fervido por 5min, a 95 ° C.
Extratos de proteína cardíaca total (aproximadamente 40 μg / via) foram
executados em 12 por cento SDS PAGE a 130 V por cerca de 2,5 horas.
Para Western blot, proteínas de géis de SDS foram eletroforeticamente
transferidas para membranas de nitrocelulose em aparelho de mini trans
blot (1h a 250mA). A ligação não específica foi bloqueada incubando
membranas em solução de bloqueador Western por 1h em temperatura
ambiente. As membranas foram incubadas com anticorpos primários TNF-
diluídos em solução de bloqueador Western, na proporção de 1: 1000
TNF-, durante a noite a 4 ° C. Os blots foram lavados com PBS / Tween-20 e
então incubados por 1h em temperatura ambiente com anticorpos
secundários conjugados a HRP diluídos em solução de bloqueador
Western, na proporção de 1: 2000. As membranas foram lavadas com
PBS / Tween-20 e a reação imune foi desenvolvida no kit IMMUNOSTAR
Western C e então visualizada por métodos de detecção
quimioluminescente. A luz foi então detectada por filme fotográfico. A
imagem era A luz foi então detectada por filme fotográfico. A imagem era
A luz foi então detectada por filme fotográfico. A imagem era
Lesão miocárdica devido a AAS
analisado por Versadoc, que detecta os blots quimioluminescentes
de coloração de proteína (TNF-).
Análise de Plasma Lipídico
Os níveis de colesterol total (TC), triglicerídeos (TG) e
lipoproteína de alta densidade (HDL) no plasma foram
determinados por ensaios enzimáticos usando kits
comercialmente disponíveis (Roche, Basel, Schweiz) de acordo
com as instruções fornecidas pelo protocolo do fabricante.
Análise Estatística
Variáveis contínuas foram verificadas quanto à distribuição
normal com inspeção visual de gráficos de barras, histogramas e o
teste de Shapiro-Wilk. Os dados não paramétricos foram expressos
como mediana (percentis 25-75) e analisados usando o teste de
Mann-Whitney para comparação de duas variáveis e com o teste de
Kruskal-Wallis e o teste post hoc de Dunn para comparação de
múltiplas variáveis. O teste de Friedman e o teste ANOVA não
paramétrico de uma via foram usados para analisar as diferenças
dentro ou entre os sujeitos. Os dados foram analisados usando SPSS
ver. 16.01 para Windows e Software R para Computação Estatística
ver. 2.80 (R Development Core Team, Viena, Áustria). A análise de
variância para dados não paramétricos foi realizada usando o teste U
de Mann-Whitney para comparação entre não mais do que dois
grupos, ou Kruskal-Wallistest para comparação entre três ou mais
grupos. Quando as diferenças foram consideradas significativas, a
análise entre os grupos foi elucidada com um teste post hoc de
Comparação Múltipla de Dunn. O nível de significância foi definido
para 5% (SPSS versão 16.01 para Windows
- SPSS Inc., Chicago, EUA).
Figura 1). Box Plot para mudanças de peso corporal entre os grupos durante o tratamento. Diferença significativa (valor de p <0,05) foi observada entre os grupos e
delineamos o valor de p significativo em camundongos treinados.
Biotecnologia Farmacêutica Atual, 2011, Vol. 12, No. 2 277
RESULTADOS
Níveis de lipídios no plasma
Os estudos dentro de sujeitos e entre sujeitos demonstraram
uma diferença significativa (p-valor <0,05) para o colesterol total:
Grupo A: 0,116; Grupo B: 0,027; Grupo C: 0,0079; Grupo D:
0,3383; Grupo E: 0,9133, enquanto não verificamos diferença
significativa entre os diversos grupos para HDL (valor p> 0,05):
Grupo A: 0,9163; Grupo B: 0,8335; Grupo C:
0,9163; Grupo D: 0,8335; Grupo E: 0,9155). LDL não variou
significativamente entre os grupos (p-valor> 0,05): Grupo A:
0,924; Grupo B: 0,2017; Grupo C: 0,0927; Grupo D: 0,9145;
Grupo E: 0,9133). Não verificamos diferença significativa
entre os vários grupos para os triglicerídeos (p-valor> 0,05):
Grupo A: 0,0317; Grupo B: 0,1425; Grupo C: 0,1425; Grupo D:
0,5497; Grupo E: 0,9133).
Achados Morfológicos
Peso do rato
O número de valores e o gráfico de Box & Whisker para mudanças de
peso corporal entre os grupos durante o tratamento são relatados na
Fig. (1) Diferença significativa (valor de p <0,05) foi observada entre
os grupos e delineamos o valor de p significativo em camundongos
treinados.
Peso do Coração
A variação entre os grupos treinados e sedentários não foi
significativa (p-valor> 0,05). Os resultados numéricos e o gráfico de
Box & Whisker para as mudanças de peso do coração entre os
grupos durante o tratamento são relatados na Fig. (2), onde a
diferença significativa (p-valor <0,05) é delineada.
278 Biotecnologia Farmacêutica Atual, 2011, Vol. 12, No. 2
Figura 2). Gráfico para mudanças de peso do coração entre grupos durante o tratamento. A variação entre os grupos treinados e sedentários resultou não
significativo (valor de p> 0,05).
Resultados Histopatológicos
Grupo A: miócitos hipertróficos com formas bizarras,
caracterizados por núcleos que exibem aumento nuclear,
pleomorfismo e hipercromasia; ocasionais ou pequenos grupos
de desaparecimento de miofibrilas com edema intramiocárdico
resultando em tubo sarcolemal vazio e com qualquer tipo de
reação (miocitólise coliquativa grau 1). Focos esparsos de
necrose da banda de contração estavam presentes na região
subendocárdica.
Grupo B: feixes mais extensos de miócitos hipertrofiados;
desaparecimento progressivo das miofibrilas resultando em
células vazias. Menos de 50% das miocélulas da metade
subendocárdica da parede cardíaca apresentavam esse padrão
(miocitólise coliquativa grau 2). Observou-se necrose da banda
de contração nas camadas profundas do miocárdio. Fibrose
manchada foi evidente nas amostras obtidas do ventrículo
esquerdo.
Grupo C: amplos campos de desordem com disposição
em estrela de miócitos adjacentes, alinhados obliquamente
ou perpendicularmente uns aos outros, e unidos por
miobridges curtas, geralmente hipertróficas, com miofibrilas
interconectadas. A fibrose intermiocelular plurifocal e
intersticial devido à substituição do colágeno foi evidente.
Núcleos aparentemente normais com desaparecimento
miofibrilar produzindo uma vacuolização crescente das
células miocárdicas até um padrão histológico de tubos
sarcolemais vazios sem qualquer reação celular ou sinais de
resultados de cicatrização. A miocitólise coliquativa foi
significativamente mais estendida do que a encontrada no
grupo B, interessando mais de 50% das miocélulas
(miocitólise coliquativa grau 3) e era proeminente na metade
subendocárdica da parede cardíaca.
Riezzo et al.
de todo o aparelho contrátil com linhas Z marcadamente
espessadas e sarcômeros extremamente curtos foram
observados. Esta desagregação varia de bandas cruzadas
irregulares, patológicas e eosinofílicas consistindo em
segmentos de sarcômeros hipercontratados ou coagulados, a
uma ruptura total de miofibrilas, a célula inteira assumindo um
aspecto granular sem bandas patológicas nítidas visíveis.
Os achados patológicos estavam ausentes nos camundongos de
controle (Grupo D e E)
Os achados imunohistoquímicos e a gradação da
imunorreatividade foram descritos em escala ordinal e o valor
mediano relatado. O estudo imunohistoquímico das amostras de
coração mostrou os seguintes resultados (Tabela1):
TNF-
Demonstrou reação positiva maciça e difusa nas células
miocárdicas do grupo C, principalmente na camada
subendocárdica da parede cardíaca; no grupo A e no grupo B
uma reação positiva moderada foi observada difusamente nas
áreas perivasais do miocárdio apenas. Esses dados foram
confirmados por análise de western blot, que detecta os blots
quimioluminescentes da coloração da proteína TNF-.
Quantitativamente, TNF- / - actina 0,69 combinou perfeitamente
com os resultados da imunohistoquímica (Fig. (3)).
IL-1
Revelou reação positiva moderada, em focos dispersos e
esparsos na camada subendocárdica do miocárdio no grupo
A; uma reação positiva difusa moderada e esparsa foi
observada no grupo B e uma reação fraca foi observada no
grupo C (Figs. (4A-B)).
Lesão miocárdica devido a AAS Biotecnologia Farmacêutica Atual, 2011, Vol. 12, No. 2 279

Tabela 1. Análise estatística dos achados imunohistoquímicos e gradação das reações imunohistoquímicas

Anticorpo grupo A Grupo B Grupo C Grupo D Grupo E Valor estatístico

A vs E NS
B vs C NS
Anti-TNF- ++ ++ ++++ - -
B vs D NS
C vs D ***

A vs E **
B vs C NS
Anti-IL-1 ++ ++ + - -
B vs D **
C vs D NS

A vs E NS
B vs C NS
Anti-HSP70 ++ ++ +++ - -
B vs D NS
C vs D ***

A vs E NS
B vs C NS
Anti- 1 Receptor + ++ ++++ - -
B vs D *
C vs D ***

NS = p> 0,05, * = p <0,05, ** = p <0,01, *** = p <0,001. - = sem imunorreatividade, + = imunopositividade leve em células dispersas, ++ = imunopositividade em até um terço das células, +++ =
imunopositividade em até metade das células e ++++ = forte imunopositividade na maioria ou em todas as células.

Fig. (3). (PARA)A análise de imunoblot demonstrou a presença de TNF-, com peso molecular de aproximadamente 17kDa, obtido do tecido cardíaco. (B)
Microscópio de varredura confocal a laser. Focos de necrose miocárdica caracterizados por reação TNF- perinuclear difusa (em azul) em camundongos do
grupo C.(C) Grupo B: reação TNF- moderada observada difusamente em áreas perivasais do miocárdio (reações vermelhas). A fibrose intermiocelular
plurifocal e intersticial devido à substituição do colágeno foi evidente como grandes campos não reativos (seta amarela).(D)
Grupo A: focos esparsos de resposta TNF- positiva (reações verdes).
280 Biotecnologia Farmacêutica Atual, 2011, Vol. 12, No. 2
Fig. (4). (PARA)Microscópio de varredura confocal a laser. Reação positiva para IL-1 (reações roxas) em camundongos do Grupo A.(B) Grupo B: resultados
esparsos de IL-1 (reações verdes) em campos miocárdicos com desaparecimento miofibrilar (cinza) produzindo vacuolização de células miocárdicas. (C)
Numerosos e esparsos focos de reação positiva de HSP70 (em verde) foram observados no Grupo A e em áreas perivasais (reações em verde) do Grupo B
camundongos (D).
HSP70
Revelou uma reação difusa em todos os grupos; numerosos e
esparsos focos de reação positiva foram observados nos grupos A e
B; uma reação positiva intensa e maciça foi encontrada nas áreas
perivasais das camadas profundas do miocárdio e na camada
subendocárdica no grupo C (Figs. (Figs.)4C-D)).
1 Receptor Adrenérgico
Mostrou uma reação positiva fraca em focos dispersos e
esparsos na camada subendocárdica do miocárdio no grupo
A; uma reação positiva difusa moderada foi observada no
grupo B. No grupo C, uma reação positiva intensa e maciça
foi encontrada nas camadas profundas do miocárdio e na
camada subendocárdica (Fig. (5)).
Apoptose
Os núcleos de miócitos marcados pelo ensaio TUNEL mostraram
uma reação intensa, ampla e positiva no grupo C, uma reação
dispersa moderada no grupo B e núcleos de miócitos positivos
manchados no grupo A. Para obter a determinação da fração de
núcleos de miócitos marcados pelo TUNEL , o número de núcleos de
miócitos por unidade de área de tecido foi determinado contando
uma média de 10 campos, 1,4 mm2 cada um, com uma ampliação de
x10 em cada área de amostra do miocárdio
Riezzo et al.
pled. A porcentagem de núcleos de miócitos apoptóticos foi
determinada. O estudo imuno-histoquímico revelou um
resultado positivo intensivo para o ensaio TUNEL (Fig. (6)):
aproximadamente 3 ± 1 Grupo D; 3 ± 2 Grupo E; 38 ± 18 Grupo A;
54 ± 16 Grupo B; e no Grupo C 70 ± 18% de células apoptóticas
foram observadas.
DISCUSSÃO
Nosso estudo experimental mostrou que a administração
recorrente de altas doses de AAS e treinamento físico em
camundongos produzem aumento significativo no peso corporal
(valor p <0,05) e no colesterol total (valor p <0,05).
Um aumento moderado do peso do coração, hipertrofia
cardíaca morfologicamente extensa e ampla miocitólise
coliquativa que pode resultar em insuficiência cardíaca
significativa, foram observados no grupo de administração de
AAS de alta dose e treinamento físico. Curiosamente, os corações
aumentam de peso, sugerindo que o coração aumentou a
síntese de proteínas para resposta à administração de AAS. Em
concordância com a literatura, a expressão do inibidor da
apoptose HSP70 e da citocina inflamatória IL-1 aumentou nos
três grupos. O TNF- apresentou maior expressão positiva nos
grupos A e B e intensa reação positiva no grupo C, pois neste
grupo observamos um dano miocárdico mais extenso. Foi
sugerido que as diferentes mudanças no -
Lesão miocárdica devido a AAS Biotecnologia Farmacêutica Atual, 2011, Vol. 12, No. 2 281

Fig. (5). (PARA)Microscópio de varredura a laser confocal: maciço 1 A reação do receptor adrenérgico em camadas profundas do miocárdio é destacada em
vermelho por técnicas de laser. (B) Expressão intensa e massiva (reações marrons) de 1 Receptor adrenérgico em camadas profundas do miocárdio (mesma imagem
que em A com campo de feixe de laser diferente).

Fig. (6). (PARA)Os núcleos de miócitos marcados pelo ensaio TUNEL (apoptose) revelaram uma reação intensa, ampla e positiva (núcleos escuros) em camundongos do Grupo C. (B)
Microscópio de varredura a laser confocal: reação intensa, ampla e positiva (em azul) no Grupo C. (C) Reação dispersa moderada no grupo B (em núcleos apoptóticos marrons). (D)A
microscopia confocal de varredura a laser mostra uma reação nuclear pontilhada positiva (em núcleos apoptóticos verdes) em camundongos do Grupo A.
282 Biotecnologia Farmacêutica Atual, 2011, Vol. 12, No. 2
O mecanismo mediado por adrenoceptores no coração com insuficiência
pode ser devido a diferenças no tipo e estágio da hipertrofia
[8], uma vez que a insuficiência cardíaca está ligada à hipertrofia
cardíaca [9]. No estágio inicial da hipertrofia devido à sobrecarga de
pressão, um número inalterado [8] ou aumentado de 1-
adrenoceptores foi mostrado [10, 11]; no entanto, a densidade do 1-
adrenoceptor foi aumentada em corações hipertrofiados devido à
sobrecarga de volume [8]. No entanto, na fase tardia de ambos os
tipos de hipertrofia, o número de 1-adrenoceptores foi reduzido.
Nossos resultados experimentais são consistentes com o pro
proposto modelo de lesão direta. O downregulation de
adrenoceptores já foi bem estabelecido para ocorrer no
coração humano falhando [12-14]. Na verdade, coração 1-receptores
seria diretamente influenciado em algum grau pela AAS [15].
O presente estudo demonstra uma forte reação de citocinas em
espécimes de coração com curso de tempo diferente [16]. Ao
examinar o efeito de AAS na produção de citocinas, foi
determinado que as doses suprafisiológicas de decanoato de
nandrolona aumentam a produção de citocinas inflamatórias
interleucina-1 beta (IL-1) e fator de necrose tumoral- (TNF-) em
culturas de linfócitos de sangue periférico humanoem vitro [1].
Um relatório anterior fornece evidências experimentais de que o
decanoato de nandrolona regula para cima os níveis de HSPs
[17]. O exercício também é um tipo de estressor que aumenta o conteúdo
de HSPs no músculo cardíaco de mamíferos, e algumas evidências indicam
que as HSPs induzidas por exercício desempenham um papel protetor no
coração de mamíferos contra o estresse [18]. Essa falta de acúmulo de
HSPs poderia explicar, pelo menos em parte, os efeitos deletérios da
administração de nandrolona no miocárdio observados pelos Autores [17,
18], visto que a proteção das células cardíacas pelas HSPs pode não ter
ocorrido [18]. Novamente, nossos dados sugerem que o TNF-
desempenha um papel na determinação da gravidade da lesão miocárdica
em nosso modelo de camundongo. Expressões de TNF- foram
proeminentes em animais tratados com esteróides anabolizantes. O uso
crônico de concentrações suprafisiológicas de esteróides anabolizantes,
seja tomado durante um programa de treinamento físico ou em condições
sedentárias, aumenta a suscetibilidade miocárdica ao decanoato de
nandrolona. A lesão pode estar relacionada a aumentos induzidos por
esteróides anabolizantes nas concentrações de TNF- nesses corações [3].
Descrevemos um processo apoptótico aleatório e esparso
significativo no miocárdio danificado e o efeito intensificado da
produção de TNF-, HSP70 e IL-1 [19]. O aumento das citocinas
cardioinibitórias pode ser interpretado como a resposta
adaptativa do miocárdio comprometido com relação à disfunção
cardíaca resultante da injeção de decanoato de nandrolona [16,
19]. Recentemente, foi descrito que o efeito combinado de
exercícios e esteróides anabolizantes causa uma
superestimulação seguida por uma desestabilização funcional e
estrutural transitória dos terminais dos axônios simpáticos; a
desestabilização transitória dos terminais dos axônios simpáticos
pode ser sugerida como uma razão para o aumento da
vulnerabilidade à fibrilação ventricular [20].
Os núcleos de miócitos marcados pelo ensaio TUNEL mostraram
uma reação intensa, ampla e positiva no grupo de administração de
AAS de alta dose e treinamento físico. Dados da literatura mostram
claramente que o AAS induz a morte celular por apoptose de maneira
dependente da dose [21]. Foi descoberto que a exposição à
testosterona rapidamente (1-7 min) levou a um aumento do Ca
intracelular2+ em miócitos cardíacos, um efeito que persistiu no
Riezzo et al.
ausência de Ca externo2+. A hipertrofia cardíaca é o principal
preditor de doença cardíaca progressiva, que freqüentemente
leva à insuficiência cardíaca e à perda do desempenho contrátil
cardíaco associada a profundas alterações no manuseio do cálcio
intracelular. Esses resultados sugerem que este efeito não
genômico de AAS pode contribuir para a cardiotoxicidade
mediada por receptor de andrógeno documentada observada no
abuso de AAS [22]. O papel das concentrações elevadas de cálcio
intracelular na indução da apoptose é apoiado por muitos
estudos. Na verdade, concentrações elevadas de cálcio citosólico
alteram a permeabilidade das membranas mitocondriais, o que
-
resulta na liberação de fatores pró-apoptóticos [23]. Os radicais
livres de oxigênio da apoptose podem regular a produção de
TNF- e atuar como iniciadores a montante da apoptose induzida
por AAS, independentemente da modulação dos adrenoceptores
-adrenoceptores [24].
pode ser independente de sua interação com o -
sistema de transdução de sinal adrenoceptor. No camundongo, a
hipertrofia miocárdica foi associada à vascularização inadequada do
miocárdio hipertrófico e, em miócitos ventriculares isolados de rato,
foi associada ao aumento da apoptose. Estudos recentes
demonstraram que as citocinas circulantes, como o TNF-, podem
desempenhar um papel na remodelação cardíaca e que os esteróides
anabolizantes estimulam fortemente a produção de TNF em
leucócitos [3].
Nossos resultados e a literatura disponível examinando os
efeitos cardiovasculares do AAS compartilham algumas
características comuns. São descritos os mecanismos
fisiopatológicos relacionados aos esteróides que podem ter
desempenhado um papel na causa da patologia cardíaca
observada aqui. Quatro modelos hipotéticos de como o abuso de
AAS pode induzir efeitos cardiovasculares adversos
(aterogênese, trombose, vasoespasmo da artéria coronária e
modelos de lesão direta) foram propostos [15]. O abuso crônico
de AAS resulta em diferentes padrões de alterações patológicas
que dependem da dose, frequência e modo de uso. A latência de
efeitos subagudos ou crônicos (tratamentos de doses múltiplas)
pode ser o resultado do acúmulo de drogas ou a soma de efeitos
subtóxicos que ao longo do tempo podem se tornar evidentes
em sintomas clínicos claros não relacionados à cinética da
substância em questão . Não confirmamos que o abuso de AAS
pode induzir alterações no metabolismo das lipoproteínas que
podem predispor ao infarto do miocárdio [25]. Aumentos no
colesterol total ocorrem com esteróides anabolizantes, e foi
demonstrado que isso aumenta a resposta da artéria coronária
às catecolaminas. Lesões em qualquer parte do sistema
coronariano estiveram ausentes em nosso experimento, como
na maioria dos relatados na literatura médica [15]. No entanto,
concorda-se que, quando o abuso de AAS é associado a um
treinamento físico intenso, pode ocorrer hipertrofia concêntrica
da parede ventricular esquerda e comprometimento da função
diastólica [26]. O treinamento com pesos vigorosos sem drogas
também aumentará a espessura e a massa da parede do
ventrículo esquerdo, mas não prejudicará a função cardíaca. No
entanto, quando combinada com esteróides anabolizantes, a
hipertrofia cardíaca pode se tornar patológica [27]. Desordem
miofibrilar,
Dado este pano de fundo experimental, a nossa descoberta de myo-
O desarranjo cardíaco associado à necrose da banda de contração, presente em
todas as formas, desde os estágios iniciais até os estágios de cicatrização tardia
e da fibrose miocárdica focal, é altamente significativo. Pode pro
Lesão miocárdica devido a AAS Biotecnologia Farmacêutica Atual, 2011, Vol. 12, No. 2 283

vide um substrato para a ocorrência de arritmias potencialmente [6] Pereira-Junior, PP; Chaves, EA; Costa-E-Sousa, RH; Masuda,
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letais e morte cardíaca súbita e inesperada [29]. Usamos o termo
em ratos tratados cronicamente com esteroide anabolizante.Eur. J.
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[30]. Esse processo inicia-se em torno de núcleos aparentemente Turillazzi, E.; Fineschi, V. Expressão miocárdica de TNF-, IL-1, IL-6, IL-8,
normais com desaparecimento miofibrilar, produzindo uma IL-10 e MCP-1 após uma única dose de MDMA administrada em um
modelo de rato.Curr. Pharm. Biotechnol.,2010,
vacuolização crescente das células miocárdicas até um padrão
11, 413-420.
histológico de tubos sarcolemais vazios sem qualquer reação celular [8] Sethi, R.; Saini, HK; Guo, X.; Wang, X.; Elimban, V.; Dhalla,
ou sinais de resultados de cicatrização. Essa lesão geralmente está NS Dependência das mudanças na transdução do sinal -adrenoceptor
presente na metade subendocárdica da parede cardíaca. no tipo e estágio da hipertrofia cardíaca. J. Appl. Physiol.,2007,
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Em conclusão, nossos dados experimentais suportam a [9] Hannan, RD; Jenkins, A.; Jenkins, AK; Brandenburger, Y.
hipótese de que os efeitos combinados de treinamento de peso Hipertrofia cardíaca: uma questão de tradução.Clin. Exp.
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