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THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY VOL. 284, NO. 52, pp. 36367–36376, 25 de dezembro de
2009 © 2009 pela Sociedade Americana de Bioquímica e Biologia Molecular, Inc. Impresso nos EUA

Identificação de moduladores seletivos anabólicos do receptor de

andrógeno com atividades reduzidas em tecidos reprodutivos e
□
glândulas sebáceas
S

Recebido para publicação em 28 de julho de 2009, e na forma revisada, em 21 de outubro de 2009 publicado, JBC Papers in Press, 21 de outubro de 2009, DOI 10.1074 / jbc.M109.049734

Azriel Schmidt‡ 1, Shun-Ichi Harada‡ †, Donald B. Kimmel‡, Chang Bai‡ 2, Fang Chen‡ 3, Su Jane Rutledge‡ 4, Robert
L. Vogel‡, Angela Scafonas‡, Michael A. Gentile‡, Pascale V. Nantermet‡, Sheila McElwee-Witmer‡, Brenda
Pennypacker‡, Patricia Masarachia‡, Soumya P. Sahoo§, Yuntae Kim¶, Robert S. Meissner¶, George D. Hartman¶,
Mark E. Duggan¶5, Gideon A. Rodan‡ †, Dwight A. Towler‡ 6e William J. Ray‡
Dos Departamentos de ‡Endocrinologia Molecular / Biologia Óssea e ¶Química Medicinal, Laboratórios de Pesquisa Merck, West Point,
Pensilvânia 19486 e o §Department ofMedicinal Chemistry, MerckResearchLaboratories, Rahway, NewJersey 07065

Andrógenos,
A terapia de reposição androgênica é uma estratégia promissora para o tratamento principalmente
da fragilidade; no entanto,testosterona (T)7 e é mais
os andrógenos representam
riscos paraderivado potente, 5-di-hidrotestosterona (DHT), induz
efeitos indesejados, incluindo virilização e hipertrofia de fisiologia reprodutiva masculina e traços sexuais secundários
órgãos reprodutores. Módulos seletivos do receptor de andrógeno -como pelos faciais e voz grave. Além disso, em ambos
tors (SARMs) retêm as propriedades anabólicas dos andrógenos em os andrógenos dos gêneros regulam o anabolismo ósseo e muscular, adi-

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osso e músculo, embora tenha efeitos reduzidos em outros tecidos representam a massa, o metabolismo das lipoproteínas e o comportamento (1–3).
processa. Nós descrevemos dois 4-aza-esteróides estruturalmente semelhantesOs andrógenos diminuem com a idade em homens e mulheres (4),
ligantes do receptor de andrógeno (AR), Cl-4AS-1, um agonista completo e que contribui para a perda óssea e muscular relacionada à idade e
TFM-4AS-1, que é um SARM. TFM-4AS-1 é um potente ARaumenta na massa gorda (5). Vários estudos relatam baixos níveis de testos-
ligando (IC50, 38 nM) que ativa parcialmente um dependente de AR terona como fator de risco para doenças relacionadas à idade, incluindo
Promotor MMTV (55% da resposta máxima) enquanto antago- osteoporose (6), sarcopenia (7), aterosclerose (8), tipo II
nizing a interação N-terminal / C-terminal dentro de AR que diabetes / síndrome metabólica e obesidade (9), distúrbio cognitivo
é necessário para a ativação completa do receptor. Análises de microarray depareamento (10) e depressão (11). Restaurando andrógenos para
As células MDA-MB-453 mostram que enquanto o Cl-4AS-1 se comporta como níveis juvenis podem, portanto, retardar mudanças desfavoráveis no corpo
5-dihidrotestosterona (DHT), TFM-4AS-1 atua como um gene composição e melhorar o humor, motivação e geral
agonista seletivo, induzindo alguns genes tão eficazmente quanto DHT saúde. Infelizmente, os andrógenos atuais induzem secções masculinas
e outros em menor grau ou não. Este gene seletivotraços sexuais secundários, como acne e hirsutismo, um efeito
agonismo se manifesta como seletividade de tecido: em ovariectomizados conhecido como virilização, (12) e representam preocupações relacionadas a
ratos, Cl-4AS-1 imita DHT enquanto TFM-4AS-1 promove o efeitos indesejáveis na próstata e outros efeitos reprodutivos
acúmulo de massa óssea e muscular, tendo efeitos reduzidos órgãos (13-15). Portanto, os andrógenos são limitados por con
em órgãos reprodutivos e glândulas sebáceas. Além disso,preocupações com segurança e tolerabilidade.
TFM-4AS-1 não promove o crescimento da próstata e antago- Os andrógenos exercem seus efeitos fisiológicos ativando o
nizes DHT nas vesículas seminais. Para confirmar que o bioquímicoreceptor de andrógeno (AR), um receptor nuclear expresso em repro-
propriedades físicas do TFM-4AS-1 conferem seletividade ao tecido, nós tecidos produtivos e outros órgãos. Uma vez ligado pelo ligante, AR
identificou um composto estruturalmente não relacionado, FTBU-1, com dissocia-se de chaperones no citoplasma e transloca
atividade agonista parcial juntamente com o antagonismo do N-ter- para o núcleo onde induz genes alvo por ligação ao DNA
interação minal / C-terminal e descobri que também se comporta sequências chamadas de elementos de resposta de andrógeno (AREs) presentes
como um SARM. TFM-4AS-1 e FTBU-1 representam dois novosem regiões promotoras / intensificadoras de genes responsivos (16, 17). AR
classes de SARMs e permitirá estudos comparativos também reprime a transcrição pela ligação e inibição de certas
com o objetivo de compreender a base biofísica e fisiológica fatores de transcrição (18-21). Com base no precedente com o receptor
dos efeitos seletivos dos ligantes do receptor nuclear. de estrogênio (ER), para o qual moduladores de receptor de estrogênio
seletivos de tecido (SERMs) foram desenvolvidos em medicamentos
□ eficazes, tem havido um esforço para descobrir moduladores de
S A versão online deste artigo (disponível em http://www.jbc.org) contém
Tabela suplementar S1. receptor de androgênio seletivos de tecido (SARMs). Idealmente, os
† Esses autores faleceram. SARMs produziriam anabolismo nos ossos e músculos com efeitos
1 Para quem a correspondência deve ser endereçada: Dept. of Molecular Endo-
limitados no útero, pele e próstata (22, 23). As propriedades de vários
crinology, Merck Research Laboratories, PO Box 4, West Point, PA 19486. Tel .:
215-652-3498; Cell: 610-246-8123; E-mail: azriel_schmidt@merck.com ou SARMs experimentais, como BMS-565929, S-40503,
azriel.schmidt@gmail.com.
2 Endereço atual: Pharmaron, Inc., Irvine, CA 92618.
3 Endereço atual: 3409 Carriage Ct South, North Wales, PA 19454. 7 As abreviaturas utilizadas são: T, testosterona; SARM, andrógeno seletivo
4 Endereço atual: Wyeth Pharmaceutical, Collegeville, PA 19426. modulador de receptor; SERM, modulador seletivo do receptor de estrogênio;
5 Endereço atual: Link Medicine Corporation, Cambridge, MA 02142. AR, receptor de andrógeno; DHT, 5-di-hidrotestosterona; GST, glutationa
6 Endereço atual: Departamento de Medicina, Washington University, St. Louis, MO S-transferase; LBD, domínio de ligação ao ligando; ANOVA, análise de variância; BFR,
63110. taxa de formação óssea; ORX, orquidectomia; sc, por via subcutânea.

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S-1, S-4, Ostarine, LGD-2226 e LGD-2941, foram pontos de inflexão das curvas de resposta à dose sigmoidal. o
revisado (23). Todos estes compostos exibem diferentes dosesEmax os valores foram calculados como porcentagem da atividade máxima nas curvas de
resposta em tecidos responsivos a andrógenos em relação a uma dose total mais alta testada em relação a um agonista completo (100 nM R1881
agonista, eles variam em seus em vitro e na Vivo propriedades e ele ou DHT). A transrepressão foi avaliada usando os restos de
lucifer pGL2 a serem determinados, que serão adequados para uso terapêutico como repórter contendo a metaloprotease-1 de
matriz humana. Além disso, os mecanismos moleculares pelos quais o tecido (MMP-1) do promotor fragmento (-179 a 63) (37). A
seletividade do repórter ocorre não são conhecidos, prejudicando o design racional de foi transfectado com rhesus AR (rhAR) em
SARMs melhorados da próstata 22RV1. células cancerosas (33, 35), e ativadas por pré-tratamento com 100 nM
Nossa hipótese é que todos os ligantes de AR são capazes de 12-O-tetradecanoilforbol-13-acetato. A repressão era a avaliação da atividade de
neutralização que produziria anabolismo, mas os SARMs seriam eliminados medindo a atividade da luciferase. criar uma conformação de receptor
única que poderia ser detectada Interação N / C—A interação N / C de rhAR foi avaliada-
em outros experimentos bioquímicos. AR tem uma característica única introduzida por um ensaio de dois híbridos de mamíferos em células CV1.
O Gal4, cuja ativação completa requer interação física entre seu domínio de ligação ao DNA, foi fundido com os domínios N-terminal e C-terminal
de ligação ao ligante (interação N / C). Domínio humano (LBD) de rhAR (aminoácidos 637-895); uma conmutação VP16 associada com estrutura de
redução de insensibilidade androgênica parcial foi fundida com os aminoácidos 1-513 de rhAR. Ambas as interações plásticas (24–31). Como esses
indivíduos são frequentemente medianos foram co-transfectados com um repórter de luciferase sob o virilizado incompletamente, formulamos a
hipótese de que esses ligantes AR controlam de vários locais de ligação Gal4-DBD. A interação N / C que não promove a conformação necessária
para a ação N / C foi detectada, pois um aumento da interação da luciferase mediado pelo ligante teria reduzido os efeitos de virilização. Usando
esta atividade.
abordagem, identificamos dois novos SARMs anabólicos distintos, Estudos Animais—Os procedimentos com animais foram realizados como

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TFM-4AS-1 e FTBU-1, que apresentam agonismo no osso e descritos (38–40). Resumidamente, ossos, composição corporal e músculo uterino,
embora tenham efeitos reduzidos nos órgãos reprodutivos, em estudos foram realizados em glândulas sebáceas ovariectomizadas (OVX) ou
shamand. Nós fornecemos evidências sugerindo que os ratos operados com idade de 6–9 meses, 3 meses após a cirurgia. Ani-
A base molecular dessas respostas diferenciais é o agonismo seletivo os machos também foram tratados com o inibidor de reabsorção óssea
do gene. alendronato a menos que indicado (5,6 g / kg / semana). Os animais
foram randomizados em grupos de pesos iguais (n 10-16) e com
MATERIAIS E MÉTODOS libras em álcool benzílico a 3% em óleo de gergelim (veículo) foram administradas
Reagentes e Animais—Todos os reagentes eram da Sigma por injeção subcutânea (sc) durante 24 dias. Uteri foram dissecados
a menos que indicado. Os ratos foram Sprague-Dawley da Taconic no colo do útero e pesados úmidos. A área da glândula sebácea em
dorsal Farms (Tarrytown, NY) e foram alojados individualmente com seções de pele foi medida usando BioQuant. Femures eram ana-
AD Libitum acesso a alimentos e água. Todos os procedimentos foram lisados conforme descrito (38-41). A medição primária,
de acordo com a taxa de formação do Comitê de Uso e Cuidado Institucional (BFR), foi avaliada por análise histológica de
orientação. Os compostos TFM-4AS-1 [(4aR, 6aS, 7S, 11aR) - fluorocromo dupla marcação na superfície periosteal do
1,4a, 6a-trimetil-2-oxo-N- [2- (trifluorometil) fenil] - fêmur distal. Calceína (10 mg / kg, SC) foi administrada 12 e
2,4a, 4b, 5,6,6a, 7,8,9,9a, 9b, 10,11,11a-tetradecaidro-1H- 3 dias antes do término do estudo. Indeno de gordura e corpo magro
[5,4-f] quinolina-7-carboxamida], Cl-4AS-1 [(4aR, alterações na composição de massa foram avaliadas por raio-x de energia dupla
6aS, 7S, 11aR) -N- (2 -clorofenil) -1,4a, 6a-trimetil-2-oxoabsortiometria (DEXA). A análise estatística foi realizada por
2,4a, 4b, 5,6,6a, 7,8,9,9a, 9b, 10,11,11a-tetradecahidro-1H- Kruskal-Wallis ANOVA não paramétrica seguida por Studentindeno [5,4-f]
quinolina -7-carboxamida] e FTBU-1 [1- [2- Neuman-Keuls teste post-hoc para diferenças entre grupos. (3-fluorofenil) etil] -3- [2- (1,3-
tiazol-4-il) -1H-benzimidazol- Próstata e vesículas seminais foram estudadas em 5-il] ureia com 3-4 meses de idade] foram sintetizadas
em casa. As linhagens celulares eram de ratos de 250–300 g após orquidectomia (ORX) ou operação simulada. American Type Culture
Collection (ATCC), Manassas, VA. Nove dias após a cirurgia, os animais foram injetados (sc) diariamente
Ensaios de ligação e transcrição—Ligação e transactiva- com compostos de teste durante 7 ou 14 dias. Nos horários indicados,
ensaios de reação foram realizados com animais de células de carcinoma de mama humano foram sacrificados por CO2e as próstatas ventrais
eram da linha MDA-MB-453, que expressa AR endógeno (32–34). pesado. Os dados foram analisados por Fisher's PLSD e ANOVA
Os ensaios de ligação de AR foram conduzidos com lisados de MDA- (Statview, versão 5.0). Células
MB-453 ou para o domínio de ligação do ligante de rhesusmonkey Análises de microarray e RNA—Estudos de microarray de próstata
(rhARLBD) fundido in-frame à glutationa S-transferase (GST) foram realizadas conforme descrito (38). Para estudos de cultura de células,
total e expresso em levedura (35). O RNA de ligação de competição do radioligando foi extraído usando TRIzol (Invitrogen, Grand Island,
ensaios com 0,5 nM A [3H] metiltrienolona (R1881, um não aroma-NY) de placas de 10 cm duplicadas de células MDA-MB-453 tratadas
com agonista de AR ajustável) foram conforme descrito (35). Transativação 18 h. A análise de microarranjo foi realizada em 5 g de
ensaios de RNA total em placas de 96 poços usadas para transfecção transitória de um modi- (38, 41). Os dados foram normalizados para
atingir a intensidade de resistência de repetição terminal longa do vírus do tumor mamário fluofied mediano idêntico de cada matriz.
Para que um transcrito seja considerado a montante da luciferase (MMTV-LUC) (35). Este MMTV ered DHT-regulado, a sonda deve ter
correspondido a tem duas cópias diretas repetidas de um consenso do gene glucocorticóide anotado no gene Entrez, e o elemento de
resposta do receptor de sinais de hibridização (GR) entre as posições 88 e deve ter testado diferente do controle de veículo (p 0,05,
190; essas sequências também são reconhecidas por AR (33, 36). O modelo de erro de Rosetta (42) e diferiu dos controles de veículo
por potências de compostos foram determinadas calculando 1,5 vezes em ambos os duplicados 200 nMAmostras DHT. Gene expres-

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FIGURA 1. Estruturas e afinidades vinculantes de Cl-4AS-1 e TFM-4AS-1. UMA, estrutura e 5-redutase tipo I, tipo II e IC de ligação AR50 valores (43). B, ensaios de
deslocamento de ligante com AR nativo (apo-AR) e rhARLBD truncado do fermento (AR-LBD) Atividades de ligação de reações na ausência de ligante não marcado
competição foram identificados como ligação máxima. A ligação não específica foi determinada na presença de ligando não marcado em excesso de 500 vezes (35).

os dados de impressão são o tema das duplicatas SD Para quantitativo mostrado). Portanto, ao contrário do DHT, o TFM-4AS-1 requer um RT-PCR

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maduro, o RNA total foi coletado e analisado como o complexo de aporreceptor AR descrito para ligação de alta afinidade. após 18 h de
tratamento (41). Para estudos envolvendo ensaios de transativação de ciclohexi-In usando o promotor MMTV,
mida, as células MDA-MB-453 em placas de 10 cm foram pré-tratadas para Cl-4AS-1, a estimulação de dobra máxima foi semelhante à anterior completa.
30 min com 10 g / ml de cicloheximida, e o ligante AR foi nist R1881 (Fig. 2UMA) Sua transativação máxima em relação a 100
adicionado nas concentrações indicadas por mais 6 h. nM R1881 atingiu uma atividade agonística de 135 23% (média de
n 7 SE) com um valor de ponto de inflexão (IP) de 2,8 em 2,1 nM
RESULTADOS comparação com 0,3 nM para R1881. Em contraste, TFM-4AS-1
TFM-4AS-1 Exibe Agonismo Parcial na Transcrição produziu apenas estimulação parcial do promotor MMTV que foi
Ensaios—Para identificar ligantes AR com transcrição distinta mantida por concentrações de log 2–3 a 50% (Fig. 2UMA)
propriedades, extraímos a biblioteca química da Merck para com- Relativo a 100 nM R1881, sua transativação máxima foi de 55
libras com afinidades de ligação inferiores a 300 nM para AR e 11% com um valor IP de 28,4 19,9 nM (média de n 244).
contra-rastreados para a ligação de glucocorticóides, progester- TFM-4AS-1 antagoniza 1 nMR1881 assim como o anti-andrógeno,
mineralocorticoide (GR, PR, MR), e ambos ERs. Com-bicalutamida, mas ao contrário da bicalutamida, antagopounds TFM-4AS-1
seletivos para AR foram testados para a atividade do promotor MMTV nist não excedeu 50% até 1M (Figura 2UMA) Essa
transativação mediada por AR endógeno nos dados do MDA-MB-453 estabeleceram a ativação parcial dos procells do MMTV.
Esta linha celular foi selecionada porque agonistas (DHT, testosmotor por TFM-4AS-1 representa um verdadeiro efeito
submáximo que terona, R1881, mibolerona e danazol) e antagonistas derivam da atividade funcional do ligante no receptor e
(acetato de ciproterona , hidroxiflutamida e bicalutamida) confirma que TFM-4AS-1 é um ligante AR com agonista misto exibiu
atividades que combinaram suas ações em atividades humanas e antagonistas.
estudos em animais. A tela do promotor MMTV produziu dois. Em seguida, examinamos a repressão dependente de AR do forbol
hits que selecionamos para um estudo mais aprofundado. O promotor MMP-1 ativado por com éster estruturalmente relacionado em 22Rv1 libras da
próstata humana Cl-4AS-1 e TFM-4AS-1 tinha potentes células cancerígenas de ligação a AR. Cl-4AS-1 suprimiu a atividade do promotor muito parecido com
atividades em ensaios de ligação de radioligando com IC50 valores de 12 DHT (Fig. 2B) Em contraste, TFM-4AS-1 se comportou como AR antag-
e 30 nM, respectivamente (43); IC50 os valores para GR, PR, MR ou ER onistas, como hidroxiflutamida e não diminuíram MMP-1 foram maiores do
que 5000 nM. Ambas as moléculas foram sintetizadas com atividade promotora. Assim, em contraste com MMTVpromoter trans-
durante o desenvolvimento da finasterida, um inibidor da 5 redutase, ativação, TFM-4AS-1 não suprimiu o promotor MMP-1
então, além disso, eles também são inibidores da 5-redutase de rato onde a transrepressão é mediada através da ligação de AP-1.
enzimas tipo I (6 e 2 nM, respectivamente) e tipo 2 (10 e 3 nM, Para comparar a capacidade desses compostos de induzir a interação AR
respectivamente) (Ref. 43 e Fig. 1UMA) N / C, um ensaio de dois híbridos de mamífero em células CV1
Em estudos de ligação, DHT exibiu afinidade aparente semelhante estava empregado. O domínio de ligação Gal4-DNA (DBD) foi
(Kd valores de 0,3–0,46 nM) para AR que é nativamente expresso em fundido com o LBD de rhAR e transfectado com células VP16
con-MDA-MB 453 e para o LBD rhAR que foi expresso como estrutura contendo o NTD rhAR e uma luciferase Gal4-DBD
Proteína de fusão GST em levedura (Fig. 1B) Em contraste, repórter TFM-4AS-1. Após a ligação do agonista ao LBD, um conformacional
teve uma redução de 40 vezes na afinidade para o rhAR LBD, a mudança relativa ocorre e a proteína de fusão NTD / VP16 é recrutada,
para o aporeceptor AR nativamente expresso em MDA-MB-453 resultando em luciferase transcrição. Cl-4AS-1 (10M) effeccells. Esta
mudança na potência não foi relacionada às espécies diferentemente promoveu a interação ARN / C (Fig. 2C), com médias porque
TFM-4AS-1 tinha a afinidade de ligação esperada de idade (n 184) atividade máxima de 35,3% 5,3% em relação a 1 nM
30 nM para rhAR de comprimento total transfectado em células (dados não R1881. Em contraste, TFM-4AS-1 (10 M) mostrou uma atividade que

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FIGURA 2. Em vitro atividades de CL-4AS-1 e TFM-4AS-1. UMA, TFM-4AS-1 é um agonista parcial no ensaio de transativação MMTV-luciferase em células AR MDA-MB-453. Deixou, as
curvas de resposta à dose de R1881, TFM-4AS-1 e Cl-4AS-1 revelam o agonismo parcial de TFM-4AS-1. Direito, TFM-4AS-1 antagoniza parcialmente o efeito de 1 nMR1881 em relação ao
antagonista bicalutamida. B, Ensaio de repressão do promotor MMP-1 em células 22RV1. DHT e Cl-4AS-1 reprimem a atividade do promotor, enquanto a hidroxiflutamida e TFM-4AS-1
não.C, Ensaio de dois híbridos de mamífero de domínio ARN-terminal / domínio C-terminal em células CV1. Deixou, em um modo agonista, o gráfico mostra as atividades máximas de
hidroxiflutamida, bicalutamidaCl-4AS-1 e TFM-4AS-1 em doses de 1 M em relação a 1 nMR1881; direito, ação antagonista de TFM-4AS-1, o gráfico expressa a indução de dobra máxima
em relação ao DMSO. Observe que TFM-4AS-1 antagoniza os efeitos de Cl-4AS-1. TudoBarras de erro
representam o DP de 3 medições; os dados são representativos de 3 experimentos.

foi apenas ligeiramente superior ao da hidroxiflutamida ou fixado no y-eixo, e os genes são agrupados no x-eixo por
bicalutamida (Fig. 2C) Em média, sua atividade máxima foi de coeficiente de correlação (Fig. 3UMA) Em seguida, para cada gene, o efeito
apenas 5,7 1,9% (n 179) de 1 nM R1881. Além disso, 1M de 200 nM O DHT foi definido como 100% e todas as outras condições foram
TFM-4AS-1 antagonizou a interação N-C induzida por 10 nM normalizadas para este valor para calcular a potência e permitir comparações
CL-4AS-1 (Fig. 2C) Esses dados sugerem que o Cl-4AS-1 ativa estatísticas. O DHT alterou de forma dependente da dose a expressão
a interação NC muito parecido com um agonista (embora para um menor seção de genes com um EC médio50 de 0,97 nM (Fig. 3B)
grau), mas que TFM-4AS-1 não. Cl-4AS-1 (1 M) se comportou como DHT (Fig. 3, UMA e B), com tran-
TFM-4AS-1 modula diferencialmente a expressão de mudanças de script em média igualando 90,6 37,1% de 200 nM
Genes responsivos a andrógenos nativos—Então examinamos os nativos DHT. TFM-4AS-1 também regulou muitos genes de forma semelhante ao DHT
regulação gênica por TFM-4AS-1 em células MDA-MB-453. Células(Fig. 3UMA) com um EC50 de 10,85 nM, perto de sua metade do máximo
foram tratados por 18 he usando microarrays, 294 DHT-respon- efeitos em ensaios de ligação e transativação MMTV (Fig. 3B)
sive genes foram identificados (Tabela suplementar S1) Os resultados No entanto, em 1M, 100 vezes maior que seu EC50, TFM-4AS-1 foram
exibidos em um mapa de calor, onde a ordem dos experimentos é transcrito, as alterações foram em média 74,6 45,5% o efeito de

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FIGURA 3. Análises de microarray dos efeitos da transcrição do gene TFM-4AS-1 em células MDA-MB-453. UMA, mapa unidimensional de aglomerado de cores falsas de valores de
expressão de RNA para genes significativamente responsivos a 200 nM DHT (ver “Materiais e Métodos”) após 18 h de tratamento. Magenta indica up-reg-
ulação e ciano regulação negativa em relação aos controles apenas de DMSO com intensidade de cor proporcional à mudança de dobra; registro10 Barra de escala canto superior
direito. B, valores de expressão gênica para todos os 294 RNAs significativamente regulados por 200 nM DHT, expresso como uma porcentagem de 200 nM Valores DHT e média (SD).
CE50 os valores foram calculados e fornecidos para DHT e TFM-4AS-1. Emax para TFM-4AS-1 é significativamente diferente de DHT e Cl-4AS-1 (p 1 10 13 e 1 10 6,
respectivamente, ANOVA). C, histograma evidenciando a distribuição dos valores de expressão de RNA que variam de themean para 20 nMDHT expresso por SD D, dados
de microarray para osRNAs que codificamUGT2B7 e FGF18 ilustram a responsividade diferencial de genes individuais para o tratamento DHT e SARM. E, dados
quantitativos de RT-PCR mostrando a indução de UGT2B7 e FGF18 por 200 nM DHT, 200 nM DHT e bicalutamida (10 M), 200 nM DHT (tratamento de 6 h), ou 200 nM DHT e o
inibidor da tradução 10 g / ml cicloheximida (6 h de tratamento).

200 nM DHT, que foi significativamente menor do que 20 nM M Cl-4AS-1 a 20 nM DHT (20 nM foi usado porque 200 nM
DHT ou 1 M Cl-4AS-1 (p 1 10 13 e 1 10 6 respec- os valores foram definidos para 100%, impossibilitando a análise de variação).
ativamente, ANOVA). 49% dos valores de expressão gênica estavam dentro de um DP da média para
Esta análise indicou que TFM-4AS-1 foi menos eficaz 20 nM DHT (Fig. 3C, quer dizer 96,2 17,4%) e apenas 9% de
do que DHT e Cl-4AS-1 na indução deste conjunto de genes. Para avaliar os genes regulados por Cl-4AS-1, os valores de DP foram 3 abaixo da
média. se esta resposta subeficaz foi devido a todos os genes estarem. Em contraste, 25% dos valores de expressão do gene TFM-4AS-1 foram
induzidos de forma ineficiente, ou melhor, a alguns genes respondendo totalmente dentro de 1 DP dos valores médios de DHT, e 26% foram 3 DP
valores e outros não respondendo, comparamos a variação no gene menor do que DHT. Esta análise sugere que, na presença de resposta entre
os tratamentos. Primeiro comparamos o efeito de 1 TFM-4AS-1 25% dos genes responsivos a AR respondem como se DHT

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TFM-4AS-1 é um novo modulador seletivo de receptor de andrógeno

gens, eliminando qualquer formação óssea

periosteal que ocorra secundária a
aumentos catabólicos na reabsorção óssea
à medida que esses processos são
acoplados. As medições de BFR nos
fémures revelaram efeitos estimuladores
dependentes da dose de ambos os
compostos no periósteo. TFM-4AS-1
dosado sc por 24 dias a 10 mg / kg / dia
aumentou a superfície periosteal
duplamente marcada, a taxa de aposição
mineral e a taxa de formação óssea para
níveis semelhantes a 3 mg / kg / dia sc de
DHT, a menor dose de DHT totalmente
eficaz como determinado em experimentos
piloto (Fig. 4,A – C)
Em ratos, o DHT tem um efeito trófico
pronunciado no útero. Enquanto o DHT
aumentou o peso uterino, o TFM-4AS-1
produziu pouco ou nenhum efeito em

Baixado de http://www.jbc.org/ por convidado em 3 de março de 2015

doses que induziram totalmente a
formação óssea (Fig. 4D) Em contraste, o
Cl-4AS-1 produziu aumentos
significativos no peso uterino em todas
as doses que estimularam a formação
óssea, indicando que TFM-4AS-1 tem
efeitos seletivos de tecidona Vivo.
Efeitos do TFM-4AS-1 na composição
corporal—Então comparamos os efeitos do
TFM-4AS-1 ao DHT na massa corporal
FIGURA 4. TFM-4AS-1, mas não Cl-4AS-1, apresenta atividades SARM em ratos OVX. Ratos OVX foram tratados com ligantes
AR nas doses indicadas (mpk) mais alendronato (5,6 g / semana) e submetidos a dupla marcação com calceína. magra (MMC) e na massa gorda (FM) em
UMA, formação óssea periosteal medida como taxa de formação óssea (porcentagem de superfície com marcação dupla / superfície óssea ratos OVX. Os tratamentos por 6 semanas
total. B, taxa de aposição de minerais, taxa de medição de crescimento ósseo em regiões duplamente marcadas (mícrons por dia).
C, taxa de formação óssea anual calculada (mm2/ mm / ano). D, peso úmido uterino como uma medida do efeito do andrógeno
com 3 mg / kg / dia DHT sc ou 10 mg / kg /
sobre os órgãos reprodutivos. E, efeitos anabolizantes de DHT e TFM-4AS-1 no músculo. F, efeitos de DHR e TFM-4AS-1 na dia sc TFM-4AS-1 aumentaram
adiposidade. A massa magra e gorda foi medida em ratos OVX. Os animais foram examinados por absortometria de raio-x
significativamente a LBM em 16,5 gramas
duplo antes e depois de 6 semanas de dosagem com 3 mpkDHT ou 10 mpkTFM-4AS-1. Valores para massa magra (E) e gordura (
F) são expressos como alteração média da linha de base. O peso úmido uterino foi determinado no final do experimento. Todos (118%) e 11,4 gramas (81%) acima do
os valores são SE,n 10–16. *, diferente da ovariectomia (OVX) sozinha (p 0,05, Kruskal-Wallis). observado em ratos tratados com veículo,
respectivamente (Fig. 4E)
foi o ligante, enquanto outros 25% são menos responsivos. Para que o aumento de LBM causado por TFM-4AS-1 foi significativamente
diferente para ilustrar esse resultado, selecionamos os genes UGT2B7 e FGF18 no grupo do veículo, mas não do grupo tratado com DHT.
DHT (Fig. 3D) Ambos os genes foram induzidos 10 vezes por DHT. Para FM diminuído significativamente, enquanto a redução por FGF18
TFM-4AS-1, a resposta aos três ligantes foi indistinguível. não foi significativo (Fig. 4F) DHT novamente causou um aumento de 4 vezes.
Em contraste para UGT2B7, TFM-4AS-1 apenas induz o RNA no peso do útero, enquanto TFM-4AS-1 não o fez. Assim, TFM-4AS-1
2,7 vezes a 1000 M. As respostas de UGT2B7 e FGF18 mostraram atividade anabólica sem atividade uterotrófica. DHT
eram insensíveis à cicloheximida, que bloqueia a transcrição Efeitos de TFM-4AS-1 na formação da glândula sebácea-Para
efeitos adicionais que requerem tradução de outro produto gênico (Fig. avaliar o potencial de TFM-4AS-1 para estimular o piloseba-3E),
mas foram bloqueados por bicalutamida, sugerindo unidade de AR direta, medidas histomorfométricas de envolvimento sebáceo (Fig. 3E
) A análise de sequência detectada área potencial da glândula de AREs na pele dorsal foi realizada em mulheres OVX idosas nas 5 regiões
de ambos os genes (dados não mostrados). Assim, FGF18 e ratos após 24 dias de tratamento com UGT2B7 anabólico máximo são ambos
alvos transcricionais diretos de AR, doses de 10 mg / kg / dia para TFM-4AS-1 e DHT de 3 mg / kg / dia. apoiando a hipótese de que
TFM-4AS-1 tem efeito seletivo Em experimentos piloto neste modelo de rato OVX, DHT aumentou genes alvo AR nativos dentro de um
contexto celular uniforme dependente da área da glândula sebácea com uma resposta máxima ocorrendo dentro
no contexto do promotor. 4 dias, enquanto o anti-andrógeno acetato de ciproterona produziu pouco
Efeitos distintos de TFM-4AS-1 e CL-4AS-1 na formação óssea e ou nenhum aumento no tamanho da glândula sebácea após 28 dias.8
peso do útero—Nós usamos a marcação dupla de calceína para
quantificar as alterações no BFR no periósteo, a superfície óssea
8 A.Schmidt, DB Kimmel, C. Bai, RL Vogel, S. Rutledge, A. Scafonas, PV
externa que em ratos é altamente sensível aos andrógenos. O Nantermet, GD Hartman, MA Gentile, B. Pennypacker, P. Masarachia, JJ
alendronato foi incluído para isolar o efeito anabólico do andro- Perkins, R. Meissner e WJ Ray, manuscrito em preparação.

36372 REVISTA DE QUÍMICA BIOLÓGICA VOLUME 284 • NÚMERO 52 •25 DE DEZEMBRO DE 2009
 TFM-4AS-1 é um novo modulador seletivo de receptor de andrógeno

TFM-4AS-1 ou Cl-4AS-1. Mulheres

sexualmente maduras foram castradas
(orquiectomizadas, ORX) ou operadas de
forma simulada no dia anterior ao
tratamento e administradas com
TFM-4AS-1 ou Cl-4AS-1 (10 mg / kg / dia
sc) por 7 dias. Em ratos shamoperados,
TFM-4AS-1 reduziu significativamente o
peso da próstata ventral em 50%,
demonstrando seu antagonismo de
andrógenos endógenos (Fig. 5D) Em
ratos castrados, TFM-4AS-1 causou um
pequeno (10%) mas significativo
aumento no peso da próstata ventral. O
tratamento por 17 dias não aumentou
ainda mais o peso da próstata (dados
não mostrados). Em contraste, o
Cl-4AS-1 não produziu redução
significativa no peso da próstata em
animais intactos e em ratos castrados

Baixado de http://www.jbc.org/ por convidado em 3 de março de 2015

causou um aumento significativo no
peso da próstata ventral para quase 70%
dos controles. Esses dados indicam que
Cl-4AS-1 se comporta como DHT na
estimulação da próstata, enquanto
TFM-4AS-1 tem efeitos reduzidos.
Em seguida, comparamos TFM-4AS-1 ao
potente antagonista AR bicalutamida no
peso da vesícula seminal em machos ORX
suplementados com pelotas de DHT. O DHT
é o produto da 5-redutase, portanto,
FIGURA 5. Doses anabólicas de TFM-4AS-1 têm efeitos reduzidos na formação das glândulas sebáceas na pele e no eliminando qualquer contribuição da
crescimento da próstata e das vesículas seminais. Ratos OVX foram administrados por 24 dias com DHT ou TFM-4AS-1 em
inibição da 5-redutase. Ratos ORXmale
exposições totalmente anabólicas: UMA, taxa de formação óssea determinada a partir de marcação com calceína dupla; B, área
média da glândula sebácea determinada por histomorfometria quantitativa da pele do dorso dorsal (n 3 campos por amostra, foram implantados com pellets de DHT e
10–16 por grupo); eC, peso úmido uterino. Todos os valores são SE,n 10–16. *, diferente do veículo (p tratados diariamente por 14 dias com as
0,05, Kruskal-Wallis). D, efeitos de Cl-4AS-1 e TFM-4AS-1 na próstata de rato. Ratos intactos ou castrados (ORX)
tratados durante 7 dias com o composto indicado (10 mpk) e os pesos húmidos da próstata foram medidos e expressos como
doses indicadas. A castração reduziu o
percentagem do peso corporal (média de 8 animais, SE). Observe que o Cl-4AS-1 é menos eficaz na redução do peso úmido da peso da vesícula seminal em 95% em
próstata e mais eficaz na restauração do peso da próstata em ratos ORX do que o TFM-4AS-1.E, TFM-4AS-1 e bicalutamida
comparação com ratos operados de forma
antagonizam os estímulos do crescimento de SV por DHT. Peso da vesícula seminal em ORX ou falsa castração (FARSA, FALSO)
animais tratados por 14 dias com um sedimento de DHT projetado para fornecer DHT em um nível constante, simulada (Fig. 5E) Em ratos ORX, o pellet de
independentemente das gonadotrofinas ou da inibição da 5-redutase. A bicalutamida inibiu totalmente os efeitos do DHT, 2,5 mg de DHT restaurou o peso da
enquanto o TFM-4AS-1 inibiu parcialmente o DHT na dose de 30 mg / kg / dia. Todos os valores são SE,n 9. *, indica diferente do
vesícula seminal para 96% do tratamento
controle (p 0,05, Kruskal-Wallis). O controle representa animais ORX tratados com veículo com apenas pelotas de DHT.
simulado
Semelhante ao experimento anterior (Fig. 4), DHT e TFM- machos intactos. O tratamento combinado de DHT com TFM-4AS-1
4AS-1 aumentou significativamente a taxa de formação óssea em 204 e resultou em uma inibição dependente da dose de 308%
induzido por DHT, respectivamente (Fig. 5UMA) Nos mesmos animais, o DHT aumentou no peso da vesícula seminal (redução de
55% em 30mg / kg / aumento da área média da glândula sebácea em 108% e dia do útero TFM-4AS-1). Doses mais altas de
TFM-4AS-1 não atingiram um peso de quase 400% (Fig. 5,B e C) Em contraste, 10 mpk TFM - concentrações plasmáticas maiores e
não foram testados. Em contraste, o 4AS-1 aumentou a área média da glândula em 33% e não aumentou o tratamento com o
antagonista bicalutamida a 10 mg / kg / dia de peso do útero. Esses dados indicam que TFM-4AS-1 resultou em uma redução de
97% do efeito DHT. Esses resultados reduziram os efeitos na unidade pilossebácea e no útero ao confirmar que o TFM-4AS-1 é
um agonista parcial das vesículas seminais. doses anabólicas. Seletividade do gene no tecido da próstata—Para entender a base
Efeitos diferenciais de TFM-4AS-1 e Cl-4AS-1 na próstata dos efeitos reduzidos de TFM-4AS-1 no aparelho reprodutor masculino
e crescimento da vesícula seminal—Os dados acima sugeriram que as análises de trato e microarranjo foram realizadas no TFM-4AS-1 ventral de
rato que atua como um SARM; no entanto, permaneceu possível que a próstata 6 e 24 horas após uma única injeção de 3mg / kg DHT ou 10 essa
propriedade resulte de distribuição limitada no tecido ou 5 -re-mg / kg TFM-4AS-1. Esses pontos de tempo foram escolhidos para enriquecer a
inibição da dutase. Portanto, comparamos próstata ou semi-para eventos transcricionais diretos (38). Peso unidimensional da vesícula final em
três grupos de ratos: sham castrado, aglomeração cas-aglomerativa dos RNAs regulados por DHT (38) tratados, ou castrados / suplementados
com DHT tratados com veículo, revelaram que TFM-4AS-1 geralmente não induzir ou reprimir

25 DE DEZEMBRO DE 2009 •VOLUME 284 • NÚMERO 52 REVISTA DE QUÍMICA BIOLÓGICA 36373

TFM-4AS-1 é um novo modulador seletivo de receptor de andrógeno

Identificação de um SARM não

esteroidal desprovido de atividade de 5-
redutase- Considerando que esses
dados suportam a hipótese de que a
atividade de transativação parcial
juntamente com a capacidade limitada
de induzir a interação N / C-terminal
seriam marcas registradas de SARMs,
TFM-4AS-1 é um composto esteroidal
que, em princípio, poderia estar
afetando qualquer um dos números de
proteínas que reconhecem a estrutura
esteroidal (além da 5-redutase). Assim,
queríamos confirmar as observações
com TFM-4AS-1 usando um SARM não
esteroidal sem inibição de 5-redutase.
Uma tela de alto rendimento identificou
uma classe de ligantes AR com atividade
agonista parcial; a otimização estrutural
rendeu FTBU-1 (Fig. 7UMA) FTBU-1 tem

Baixado de http://www.jbc.org/ por convidado em 3 de março de 2015

uma ligação AR
IC50 de 38 nM, não mostra nenhuma atividade
de ligação significativa para GR, PR, MR,
ou ER, e é desprovido de inibição da 5-
redutase. Este composto exibiu
atividade agonista parcial no ensaio
de transativação MMTV (81% da
atividade máxima) e não estimulou
totalmente a interação N / C (5% da
atividade máxima, Fig. 7B) Um estudo
separado de microarray em células
MDA-MB-453 foi conduzido
comparando FTBU-1 a DHT. Como
FIGURA 6. Análise de microarray de TFM-4AS-1 em tecido de próstata de rato. UMA, mapa de calor de cor falsa sugerido pelos efeitos agonistas
unidimensional aglomerativo (como na Fig. 2) mostrando os efeitos da expressão gênica de DHT e TFM-4AS-1 no tecido da parciais intermediários em ensaios de
próstata de mulheres castradas 6 e 24 h após uma única injeção. Observe que o TFM-4AS-1 altera a expressão de alguns, mas
não de todos os genes regulados por DHT. Os valores de expressão gênica são representados por três medidas, cada uma de
transcrição, 1M FTBU-1 regulou os 294
RNA agrupado de três amostras.B, as ações de DHT e TFM-AAS-1 na expressão gênica na próstata foram medidas por transcritos sensíveis a DHT
dados quantitativos de RT-PCR para quatro genes selecionados, uterocalina (lipocalina 2, Lcn2), FGFR4, IGF-1 e ciclinaD1. As atividades
previamente identificados em células
foram normalizadas para ciclofilina. Nove dias após a cirurgia, os ratos ORX foram tratados diariamente com veículo, 3 mg / kg de DHT ou
10 mg / kg de TFM-4AS-1 (n 6 / grupo). Amostras de próstata foram coletadas em 0,25, 1, 4 e 7 dias após a dosagem. Observe que, ao longo MDA-MB-453 para uma média de 83,2
do tempo, o TFM-4AS-1 alterou os RNAs da uterocalina e do FGFR4 de forma semelhante ao DHT, ao passo que não teve efeito sobre a 29,4% em relação a 200 nM DHT, uma
ciclina D1 e o IGF-1 em qualquer momento. Os valores são normalizados para os níveis de ciclofilina medidos dentro da mesma reação e
são a média de seis medições de animais individuais SD; *, diferente de veículo
0,0001, Student's
diferença significativa (p t teste)
valores de tratamento (p 0,05 ANOVA). e um valor intermediário entre
aqueles observados com TFM-4AS-1
essas transcrições na mesma medida que DHT. Porém, mais perto e Cl-4AS-1. Quase um terço de todos os RNAs eram 2 SD a menos
inspeção sugeriu que alguns genes são regulados de forma semelhante por meio do que a média para 20 nM DHT (Fig. 7C) Com base nesses
dados, ambos (Fig. 6UMA) Para explorar esta seletividade de gene em um FTBU-1 individual que foi considerado um agonista parcial como
TFM-4AS-1, nível de transcrição, selecionamos quatro transcritos responsivos a DHT, embora com atividade ligeiramente mais agonística e,
portanto, foi expresso na próstata, uterocalina (lipocalina 2, Lcn2), fibro- testada em ratas OVX. A dose mais baixa de FTBU-1 testada, 10 mg / kg /
receptor de fator de crescimento de blast 4 (Fgfr4), fator de crescimento semelhante à insulina sc por 24 dias, produziu uma resposta anabólica no
periostor-1 (IGF-1), e ciclina D1, e os analisou em um tempo teume equivalente ao de 3mg / kg / dia scDHT, mas não teve nenhum experimento
significativo (dias 0, 1, 4 e 7) onde os ratos ORX tiveram efeito significativo sobre o peso do útero (Fig. 7D) A 10 mg / kg / dia, o tratado uma vez ao
dia. O RNA total da próstata foi coletado em cada área de exposição sob a curva de 77M.h (0–24 h). Ponto de tempo de dosagem e analisado por
RT-PCR quantitativo. A uterocalina 9 vezes maior, 90 mg / kg / dia sc, produziu uma exposição de 8 vezes e Fgfr4 foram igualmente responsivos a
DHT e TFM- superior (600Mh) andalsoprovideda estímulo totalmente osteoanabólico, 4AS-1 ao longo deste estudo (Fig. 6B) Em contraste, o IGF-1,
mas aumentou significativamente o peso do útero em 233% (Fig. 7D), transcritos about e cyclin D1 foram induzidos apenas por DHT, sem metade
do efeito de DHT (477%). Portanto, em exposições que estavam em efeito de TFM-4AS-1 em qualquer ponto do tempo. Esses dados ilusoriamente -
pelo menos 8 vezes maior do que o necessário para o osteoanabolismo, FTBU-1 ainda tratam a atividade seletiva do gene de TFM-4AS-1 em
relação ao DHT. produziu menos efeitos uterotrópicos do que o DHT.

36374 REVISTA DE QUÍMICA BIOLÓGICA VOLUME 284 • NÚMERO 52 •25 DE DEZEMBRO DE 2009
 TFM-4AS-1 é um novo modulador seletivo de receptor de andrógeno

interação foram identificados em

indivíduos com virilização reduzida (24-
31). Por não apoiar a interação N / C,
TFM-4AS-1 imita essas mutações. Esses
dados sugerem que o mecanismo
molecular para a seletividade TFM-4AS-1,
pelo menos em parte, é devido à indução
de uma estrutura AR que não suporta a
interação N / C. A análise da regulação do
gene nativo em células MDA-MB-453,
que expressam AR endogenamente,
revelou que TFM-4AS-1 regula um conjunto
de genes semelhante ao DHT, mas difere
quantitativamente em termos de efeito
máximo. Por exemplo, TFM-4AS-1 afeta a
expressão de alguns genes, como UGT2B7,
bem como DHT. Em contraste, o FGF18 é
significativamente menos induzido por
TFM-4AS-1 do que DHT. Esses dados são
intrigantes porque muitos modelos de

Baixado de http://www.jbc.org/ por convidado em 3 de março de 2015

ações seletivas de tecido de ligantes de
receptor nuclear invocam a presença de
FIGURA 7. SARMproperties of anovel non-steroidal AR ligand, FTBU-1. UMA, estrutura química, 5-redutase cofatores transcricionais específicos de
inibição e IC de ligação a AR50 valores. B, porcentagem de atividade em relação a 1 nMR1881 no ensaio MMTV-luciferase em
células MDA-MB-453 e no ensaio de interação AR NTD / CTD em células CV1 (média de 3 medidas independentes
tecido. Nestes modelos, a atividade em um
mentos). C, resumo dos resultados do microarray comparando 1 M FTBU-1 a 200 nMDHT em células MDA-MB-453 como na Fig. tecido acompanhada pela falta de atividade
2. Observe que 35% dos RNAs regulados por FTBU-1 têm alterações nos valores de expressão gênica mais de 2 DP abaixo da
em outro é explicada pela expressão
média para 200 nM DHT. D, efeitos seletivos de tecido de FTBU-1 em ratas ovariectomizadas tratadas por 24 dias. O FTBU-1 foi
administrado nas doses dadas uma vez ao dia, e a taxa de formação óssea foi medida por marcação dupla com calceína. Os seletiva de cofatores permissivos. No
níveis de compostos no plasma foram medidos em três animais separados em 0,25, 1, 2, 4, 8 e 24 h, e a área sob a curva (AUC) entanto, TFM-4AS-1 atua como um SARM
foi determinado para permitir a comparação de exposições de 24 horas. São mostrados os valores médios de 10–16 animais SE;
dentro de um contexto celular uniforme.
*, significativamente diferente do veículo de ovariectomia sozinho (p 0,05,
Kruskal-Wallis). Dados semelhantes

DISCUSSÃO foram observados na próstata, onde o TFM-4AS-1 regulou a uterocalina e o

Para que a reposição de andrógenos seja amplamente utilizada, será FGFR4 de forma semelhante ao DHT, enquanto o DHT responsivo
necessário para identificar andrógenos com atividades anabólicas, mas os genes IGF-1 e ciclina D1 não foram afetados. Assim,
propomos que a propensão reduzida para induzir traços sexuais secundários masculinos e TFM-4AS-1 exibe seletividade de
tecido porque dentro de cada célula estimula os órgãos reprodutivos. Aqui nós descrevemos TFM-4AS-1, tipo que regula um
subconjunto de genes responsivos a AR: em alguns tecidos, um ligante AR anabólico com efeitos limitados nos tecidos
reprodutivos - este subconjunto é suficiente para gerar uma resposta fisiológica e em sues e glândulas sebáceas. Os ligantes AR
estruturalmente semelhantes, outros não. A este respeito, os SARMs devem fornecer valiosos Cl-4AS-1 e TFM-4AS-1, exibindo os
perfis de uma visão agonista dos requisitos moleculares para os efeitos androgênicos. e um agonista parcial, respectivamente.
O promotor MMTV e reprimiu a atividade de MMP1 pro 4AS-1 é um agonista parcial que antagoniza parcialmente ambos os endogmoter.
Em contraste, TFM-4AS-1 apenas parcialmente (50%) andrógenos transácenos e DHT co-dosado. No entanto, a baixa solubilidade ativou
o MMTVpromoter e antagonizou 50% do ativo - nos impediu de testar se ele mantém a seletividade do tecido de um agonista completo;
portanto, pode ser caracterizado como um ligante com idade em exposições mais altas. Identificamos um SARM não esteroidal, com
atividades agonistas e antagonistas mistas. Semelhante ao anAR antag-FTBU-1, que não tem atividade 5-redutase e solonista melhorado,
TFM-4AS-1 não reprime a capacidade de MMP-1 sensível a AP-1. Este composto imita de perto oem vitro transcripreporter ou induzir a
interação N / C. Essas diferenças no perfil tional de TFM-4AS-1, embora com maior atividade agonística ativtranscricional foram
correlacionadas com efeitos na natalidade (81%contra 55% de transativação de MMTV). Como TFM-4AS-1, a transcrição gênica em células
MDA-MB-453 e em modelos de rato FTBU-1 teve pouco efeito sobre o útero em doses anabólicas e em que Cl-4AS-1 se comportou como
DHT, enquanto TFM-4AS-1 exibe exposições 8 -uplicado acima do necessário para anabolismo gene e seletividade de tecido FFTBU-1.
exibiu 50% menos atividade uterotrófica do que DHT.
Cl-4AS-1 e TFM-4AS-1 são estruturas altamente semelhantes, mas em nossa experiência com compostos relacionados, suspeitamos que isso
causar diferenças significativas na função do receptor. Porque eles não efeito uterotrófico é causado pelo maior agonismo.9 Resta
promovem a interação N / C igualmente, eles provavelmente produzem
diferenças na conformação LBD; dados de cristalografia forneceriam uma
9 A.Schmidt, S. Harada, DB Kimmel, C. Bai, RL Vogel, S. Rutledge, A. Scafonas,
visão específica sobre as bases estruturais de suas diferenças bioquímicas.
FE Chen, PV Nantermet, ME Duggan, GD Hartman, T. Prueksaritanont, MA
Mutações agrupadas no AR LBD que influenciam a estrutura formada pelas Gentile, B. Pennypacker, P .Masarachia, R. Meissner, LP Freedman e WJ
hélices 3, 4, 5 e 12 e que inibem o N / C Ray, manuscrito em preparação.

25 DE DEZEMBRO DE 2009 •VOLUME 284 • NÚMERO 52 REVISTA DE QUÍMICA BIOLÓGICA 36375

TFM-4AS-1 é um novo modulador seletivo de receptor de andrógeno
possível que, em altas doses, os SARMs seletivos para tecidos possam causar
efeitos indesejáveis.
O perfil transcricional de nossos SARMs é distinto daquele dos
SERMs. Raloxifeno, um ligante ER osteoprotetor que não possui as
atividades agonísticas do estradiol na mama e útero (44-47), e é um
antagonista ER em ensaios de transativação, mas reprime os locais de
ligação AP-1 controlados por ER (46-48). Em contraste, TFM-4AS-1 é um
agonista em ensaios de transativação e não inibe a transcrição
mediada por AP-1 do repórter MMP-1. Ao contrário do conjunto
significativo de informações que descrevem as propriedades clínicas
dos SERMs, poucas informações clínicas estão disponíveis sobre as
ações dos SARMs. No entanto, em um estudo de 12 semanas em
indivíduos saudáveis na pós-menopausa, um ligante AR, MK-0773,
que foi selecionado com base na semelhança com TFM-4AS-1, exibiram
propriedades semelhantes às do SARM, aumentando o LBM sem afetar
os marcadores de virilização da pele ou proliferação endometrial (49).
Assim, as propriedades dos SARMs descritas aqui podem se traduzir
em pacientes e se aplicar amplamente à descoberta de novos
andrógenos terapêuticos.
Agradecimento — Agradecemos a Linda Rhodes, VMD, PhD pela ajuda com os
estudos da próstata.
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VOLUME 284 • NÚMERO 52 •25 DE DEZEMBRO DE 2009
Transcrição, cromatina e
epigenética:
Identificação de moduladores seletivos
anabólicos do receptor de andrógeno com
atividades reduzidas em tecidos reprodutivos e
glândulas sebáceas

Azriel Schmidt, Shun-Ichi Harada, Donald B.

Kimmel, Chang Bai, Fang Chen, Su Jane
Rutledge, Robert L. Vogel, Angela Scafonas,
Michael A. Gentile, Pascale V. Nantermet,
Sheila McElwee-Witmer, Brenda

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Pennypacker, Patricia Masarachia, Soumya P.
Sahoo, Yuntae Kim, Robert S. Meissner, George
D. Hartman, Mark E. Duggan, Gideon
A. Rodan, Dwight A. Towler e William J.
Ray
J. Biol. Chem. 2009, 284: 36367-36376.
doi: 10.1074 / jbc.M109.049734 publicado originalmente online em 21 de outubro de 2009

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