Gua de preparacin de fases mviles

Fase Mvil Denominacin Qumica cido Actico Hidrxido Amnico Hidrxido Amnico Hidrxido Amnico Hidrxido Amnico cido Frmico cido Frmico cido Frmico cido Frmico cido Frmico cido Frmico cido Frmico cido Fosfrico cido Heptafluorobutrico cido Nonafluoropentanoico cido Trifluroactico (TFA) cido Trifluroactico (TFA) cido Trifluroactico (TFA) cido Trifluroactico (TFA) cido Actico2 Trietilamina (TEA)2 EDTA cido Actico2 2 Trietilamina (TEA) Bicarbonato Amnico Bicarbonato Amnico Bicarbonato Amnico Bicarbonato Amnico Formiato Amnico Formiato Amnico Formiato Amnico Formiato Amnico Acetato Amnico Acetato Amnico Frmula CH3COOH NH4OH NH4OH NH4OH NH4OH HCOOH HCOOH HCOOH HCOOH HCOOH HCOOH HCOOH H3PO4 CF3CF2CF2COOH CF3CF2CF2CF2COOH CF3COOH CF3COOH CF3COOH CF3COOH CH3COOH (CH3CH2)3N C10H14N2Na2O82H2O CH3COOH (CH3CH2)3N NH4HCO3 NH4HCO3 NH4HCO3 NH4HCO3 NH4COOH NH4COOH NH4COOH HCOONH4 CH3COONH4 CH3COONH4 Concentracin 0,1% 0,1% 0,2% 1,0% 100 mM 0,05% 0,1% 0,2% 0,5% 1,0% 50 mM 100 mM 0,1% 0,5%, 0,2%, 10 mM 0,016% 0,1% 0,1% 50 mM CH3COOH 50 mM TEA 2 mM EDTA 100 mM CH3COOH 100 mM TEA 5 mM 10 mM 20 mM 100 mM 10 mM 15 mM 100 mM 200 mM 6,5 mM 10 mM Volumen o Peso (para 1 L) 1.0 mL 1.0 mL 2.0 mL 10.0 ml 6.9 mL 0.5 mL 1.0 mL 2.0 mL 5.0 mL 10,0 mL 2.1 mL 4.2 mL 1.0 mL 5,0 mL 2,0mL 0.8 ml 0,16 mL 1.0 mL 1.0 mL 2.8 ml 6.9 mL 0.75 g 5.6 mL 13.9 mL 0.40 g 0.79 g 1.58 g 7.91 g 0.63 g 0.95 g 6.31 g 12,62 g 0,50 g 0.77 g Preparacin Procedimiento Nmero 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1. 1 1 1 1 2 3 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 pH Ajuste cido/Base CH3COOH (CH3CH2)3N CH3COOH (CH3CH2)3N HCOOH NH40H HCOOH NH4OH HCOOH NH4OH HCOOH NH4OH HCOOH HCOOH HCOOH HCOOH CH3COOH CH3COOH MS Compatible? Si Si Si Si Si Si Si Si Si S Si Si No S3 S3 Si3 Si3 S3 Si3 No Si Si Si Si Si Si Si Si S S Si

Gua de preparacin de fases mviles (Continuacin)

Fase Mvil Denominacin Qumica Acetato Amnico Acetato Amnico Acetato Amnico Hexafluoroisopropanol (HFIP) Trietilamina (TEA) Fosfato sdico dibsico Fosfato sdico monobsico cido Ctrico EDTA cido Octanosulfnico Cloruro Sdico
(1) (2) (3)

Frmula CH3COONH4 CH3COONH4 CH3COONH4 C2F6CHOH (CH3CH2)3N Na2HPO4 Na2HPO4 HOC(COOH)(CH2COOH)2 C10H14N2Na2O82H2O C8H17O3SNa NaCl

Concentracin 20 mM 100 mM 200 mM 0.4 M HFIP 16.3 mM TEA 20 mM 20 mM 54,7 mM 0,054 mM 0,092 mM 2,31 mM

Volumen o Peso (para 1 L) 1.54 g 7.71 g 15.42 g 41.5 mL 2.3 mL 2.84 g 2.40 g 10,5 g 0,020 g 0,020 g 0,135 g

Preparacin Procedimiento Nmero 2 2 2 4 2 2 2.

pH Adjuste cido/Base CH3COOH CH3COOH CH3COOH TEA H3PO4 H3PO4 NaOH

MS Compatible? Si Si S Si No No No

Ver especificaciones del procedimiento de preparacin en la pgina siguiente. Acetato de trietilamonio = (cido actico + trietilamina Acetato de trietilamonio) A concentraciones altas puede suprimir la seal MS

Procedimientos de preparacin
Preparacin, Procedimiento 1 (1) Aadir la cantidad o cantidades indicadas de aditivos de fase mvil a 950ml de agua. (2) Mezcle la solucin completamente. (3) Mida, ajuste y anote el pH de la fase mvil. (4) Aadir agua hasta un volumen final de 1 litro, desgasificar y transferir al recipiente de fase mvil. Preparacin, Procedimiento 2 (1) Aadir las cantidades indicadas de tampones a 400mL de agua y mezclar hasta que las sales se disuelvan completamente. (2) Filtrar la solucin a travs de un filtro de Nylon de 0.2 m certificado para HPLC (por ejemplo WAT200533) (3) Aadir agua hasta 950mL y comprobar el pH. (4) Ajustar el pH al valor deseado. (5) Aadir agua hasta un volumen final de 1L, desgasificar y transferir al recipiente de fase mvil. Preparacin, Procedimiento 3* (1) Aadir las cantidades indicadas de fase mvil tamponada a 950 mL de agua. (2) Mezclar la solucin tampn TEAA completamente, medir el pH y ajustarlo subindolo con ((CH3CH2)3N) o bajndolo con (CH3COOH) hasta el valor deseado. (3) Aadir agua hasta un volumen final de 1 litro. Usar este tampn 100mM de TEAA para la preparacin de la fase mvil que se describe en el paso (4). (4) Combinar el tampn 100mM de TEAA preparado previamente en el paso anterior (3) con modificador orgnico (p.e. para un 95% 100mM TEAA/5% ACN fase mvil (v:v), mezclar 950 mL de 100mM TEAA tampn con 50 mL ACN). (5) Desgasificar y transferir al recipiente de la fase mvil. Preparacin, Procedimiento 4* (1) Aadir las cantidades indicadas de fases mviles tamponadas a 950 mL de agua. (2) Mezclar la solucin tampn completamente, medir el pH y ajustarlo si es necesario con TEA. (3) Aadir agua hasta un volumen final de 1L. Usar este tampn para la preparacin de la fase mvil que se describe en el paso (4). (4) Combinar el tampn preparado previamente en el paso (3) con modificador orgnico (p.e. para un 95% 0.4M HFIP, 16.3mM TEA/5% MeOH fase mvil (v:v), mezclar 950 mL de tampn con 50 mL MeOH). (5) Desgasificar y transferir al recipiente de la fase mvil.

*Los procedimientos de preparacin (3) y (4) suponen premezclar las porciones acuosas y orgnicas de las fases mviles. Estas fases mviles son mezcladas volumen:volumen (v:v) y a diferencia de otros procedimientos de preparacin descritos aqu, no son diluidos hasta el volumen final.